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Uso de Enzimas Termoestables en la Alimentacin Animal

Autor: Dr. Sergio R. Fernndez Ph.D., DSM Nutritional Products Mxico S.A. de C.V. Por medio de la seleccin gentica se ha incrementado la capacidad de produccin de carne y huevos de ave para alimentar a la creciente poblacin humana. Con respecto a la produccin de pollo de engorda, los parmetros productivos a los 42 das de edad se han aumentado en 4.6 veces el peso corporal, con un una mejora del 23% en la conversin alimenticia, as como un aumento del 72% en el rendimiento de la pechuga (Havenstein et al., 2003 a y b Cuadro 1.) En el caso de la gallina de postura, los avances logrados por medio de la gentica en la produccin han sido tambin asombrosos. Comparando los parmetros de produccin de la gentica antigua con la gallina moderna, esta produce alrededor de 100 huevos ms por ave, con un huevo 14% ms pesado y alcanzando la madurez sexual 5 semanas ms temprano, lo que se traduce en casi 9 kg ms de masa de huevo producido por gallina (Jones et al., 2001 y Bovans white, 2003 Cuadro 2.) Sin embargo, estas aves altas productoras siguen presentando la limitante de un bajo aprovechamiento de ciertos nutrientes de los ingredientes de origen vegetal, como es el caso del fsforo (P) presente en la molcula del fitato, as como de los carbohidratos presentes en el tejido estructural de los vegetales, mejor conocidos como carbohidratos no almidones (NSP). El cido ftico fitato, es una molcula orgnica formada por un anillo inositol y 6 molculas de fosfato (Figura 1), aproximadamente un 70% del P en los vegetales se encuentra en forma de fitato, y debido a que los animales no presentan una actividad de la enzima fitasa importante en el tracto digestivo, solamente pueden utilizar en promedio un 30% del P presente en la materia prima de origen vegetal y por tanto se debe agregar una fuente de fosfato de origen inorgnico para que el animal pueda obtener el P necesario para la formacin del esqueleto y el funcionamiento del metabolismo. Es importante recalcar que cada 0.1% de P liberado del fitato equivale a entre 4.7 a 5.5 kg de fuente de P inorgnico por cada tonelada mtrica de alimento, dependiendo del tipo de la fuente de P. En el caso de los NSP, estos se localizan principalmente en las paredes celulares de las plantas y se encuentran formados por molculas de carbohidratos ms sencillos, conocidos como monosacridos (las formas ms sencillas de los carbohidratos). Tal es el caso de la celulosa (cadena linear de glucosas), la

hemicelulosa (cadenas formadas principalmente de glucosa, galactosa, y manosa), B-glucanos (cadenas de glucosa), etc. Todos estos carbohidratos tienen en comn en sus estructuras qumicas enlaces que no pueden ser digeridos por las enzimas digestivas de las aves, de tal forma que las molculas de glucosa, galactosa y fructosa se encuentran totalmente indisponibles para las aves. Tomando en cuenta que carbohidratos como la a glucosa tiene un valor energtico de 4.1 kcal de energa metabolizable por gramo, se puede inferir que la degradacin de estas molculas puede aportar una cantidad importante de energa para las aves. Acido ftico . El P es uno de los nutrientes esenciales para mantener la vida de los animales, sus funciones son estructurales (formacin y desarrollo del tejido seo) y metablicas (forma parte de los nucletidos, molculas necesarias para la formacin de los cidos nucleicos y para el transporte de energa en el organismo). Es por tanto necesario que el ave reciba las cantidades adecuadas de P en el alimento, no tan solo para mantener un adecuado nivel de produccin sino para sobrevivir. Las fuentes de P en la racin se pueden dividir en dos grandes grupos, las que proporcionan P inorgnico como los fosfatos y las harinas de hueso y las provenientes de fuentes vegetales. La gran diferencia entre estos grupos es que alrededor del 60 a 70% del P presente en los vegetales no se encuentra libre sino en forma de fitato (Cuadro 3.). El cido ftico se forma de la esterificacin del alcohol inositol con un mximo de 6 grupos fosfato, llegando a contener hasta 28.2% de P en la molcula. Bajo las condiciones de pH del tracto gastro-intestinal, este compuesto se encuentra ionizado (fitato), presentando cargas negativas que atraen secuestrando molculas minerales (Ca, Mg, Fe Cu y Zn) y la porcin libre de los aminocidos bsicos (Lys, Arg, His) en las cadenas proteicas (Figura 2.). Es importante mencionar que las enzimas digestivas pancreticas; lipasa y tripsina (proteasa) tienen en su sitio activo un residuo del aminocido histidina, el cual al pH del duodeno se encuentra con un 50% de carga negativa. Esto hace surgir la pregunta: Puede el fitato actuar como factor detrimental al disminuir la eficiencia digestiva de estas dos enzimas pancreticas por medio de su unin al residuo de histidina que se encuentra en el sitio activo? La forma como se puede degradar el fitato para liberar el P y evitar su accin detrimental es por medio de las enzimas fitasas , que catalizan la liberacin secuencial de las molculas del P. (Figura 3). Se ha observado que como consecuencia de la degradacin del fitato se aumenta la utilizacin de otros nutrientes aparte del P, esto se debe a que cuando se degrada la molcula del fitato ya no existe la posibilidad de interacciones de esta molcula con minerales como el Ca ni con los aminocidos bsicos.

Fitasa La forma de uso comn en la actualidad para degradar el fitato de los productos de origen vegetal y liberar el P para que este pueda ser utilizado, consiste en la inclusin de la enzima fitasa en los alimentos para animales. Existen varios trabajos demostrando la capacidad de la fitasa para la liberacin del P, a continuacin se describen algunos de ellos.

Uso de la fitasa en el pollo de engorda 160 pollos Ross (80 machos y 80 hembras) de un da de edad, se distribuyeron totalmente al azar en 16 jaulas de bateras Petersime con 10 pollos por jaula (5 hembras y 5 machos). El periodo experimental fue del da 1 al da 19 de edad. El agua y el alimento se proporcionaron ad libitum.Los tratamientos fueron 4 (con 4 replicas cada uno) en arreglo factorial 2 x 2; Nivel de Ca y P disponible (1.0% Ca y 0.5% PD vs 0.9% Ca y 0.4% PD) por adicin no de 750 unidades de fitasa (FYT) de Peniophora Lycii/kg de alimento. Las dietas fueron sorgo+soya, usando Cr como marcador para medir la EM de la dieta. Las variables analizadas fueron; ganancia de peso, consumo de alimento, conversin alimenticia y la EM de las dietas. Los resultados pueden observarse en el cuadro 4. La disminucin del 0.1% de Ca y PD provoc una disminucin en la ganancia de peso, la cual fue recuperada al agregar la fitasa a el tratamiento bajo en Ca y P (P < 0.04). En el caso de la conversin alimenticia, la adicin de la fitasa tanto al control positivo como a la racin baja en Ca y PD produjo una mejora en este parmetro (P < 0.04). Finalmente el efecto en la EM de la dieta solo fue detectado para la adicin de la fitasa , independientemente de los niveles de Ca y PD, siendo el incremento en EM de alrededor de 110 kcal/kg por efecto de la adicin de la fitasa. Uso de la fitasa en la gallina de postura 120 gallinas Hy Line W36 de 52 semanas de edad se asignaron al azar a 60 jaulas (2 gallinas por jaula), para tener 10 jaulas por tratamiento. Los tratamientos fueron; 0, 150, 300, 450, 600 y 750 FYT/kg. La fuente de fitasa evaluada fue Peniophora Lycii y se agreg a dietas sorgo-pasta de soya con 15% de Proteina cruda, 2.82 Mcal/kg de EM, 3.8% de Ca y 0.3% de PD. El diseo experimental fue de bloques al zar, siendo el criterio de bloqueo el lugar de la jaula en la caseta experimental. Las aves se adaptaron durante 10 das a la dieta experimental y posteriormente se realiz la coleccin total de la excreta para medir la retencin de nutrientes. El

consumo se ajusto a 90 g/gallina/da para evitar desperdicios. Variables evaluadas, retencin de materia seca (MS), cenizas, P, nitrgeno (N) y la EMAn en base seca y en base hmeda. Como se puede observar en el cuadro 5 los resultados indicaron un efecto positivo en la retencin de todos los nutrientes evaluados, debido a la adicin de la fitasa Peniophora Lycii a la dieta control. A continuacin las ecuaciones lineales obtenidas a partir de los resultados experimentales: Ret. de MS % = 0.0058 x + 72.611 R 2 = 0.81; Ret. de cenizas % = 0.0157 x + 38.93 R 2 = 0.86; Ret. de P % = 0.0177x + 48.853 R 2 = 0.94; Ret. de N % = 0.0223x + 30.002 R 2 = 0.95; AMEn Mcal/kg BS = 0.0001x + 2.764 R 2 = 0.88; AMEn BH = 0.0001x + 2.5154 R2 = 0.88. Es importante mencionar que la EMA fue calculada en dos formas, antes y despus de hacer la correccin a retencin cero de N. Esto con la finalidad de comprobar si como mencionan algunos autores, el principal efecto de la fitasa se debe a la retencin de N, por tanto al hacer la correccin el efecto en la EMA desaparecera. Bajo las condiciones experimentales del trabajo descrito, el efecto sobre la EMA se mantuvo al hacer la correccin. Se muestran a continuacin las dos ecuaciones de regresin para poder observar el efecto mencionado. AME Mcal/kg BS = 0.0002x + 2.816 R 2 = 0.90 y AMEn Mcal/kg BS = 0.0001x + 2.764 R 2 = 0.88. Si bien la correccin por la retencin cero de N produce valores de EMA menores, el efecto de la adicin de la fitasa se mantuvo significativo (P < 0.05). Recomendaciones para obtener las mximas ventajas cuando se incluye fitasa en las raciones de las aves. Conocer las necesidades por PD para la gentica de las aves que se est manejando, esto para evitar por error estar formulando por debajo de las necesidades nutricionales de las aves. Hacer pruebas de retencin de la actividad de la fitasa en el alimento peletizado para asegurarse que la fitasa esta presente cuando el ave consume el alimento Carbohidratos no almidones (NSP) Este es un trmino muy amplio que se refiere a los polisacridos no almidones (NSP) as como a los oligosacaridos no almidones. El almidn es el segundo carbohidrato ms abundante en el reino vegetal despus de la celulosa (Choct y Kocher, 2000). En el caso de los polisacaridos no almidones su funcin es casi exclusivamente estructural en las plantas (Choct, 1997)

Definicin y clasificacin de los NSP Los polisacridos son polimeros de monosacridos unidos por medio de enlaces glicosdicos. Existen varios terminos para definirlos como; Fibra cruda, que se refiere nicamente a porciones de NSP insolubles y lignina; fibra de la dieta, NSP + lignina; fibra detergente neutro (NDF), cellulosa, hemicelulosa y lignina; fibra detergente cido (ADF), celulosa + lignina; hemicellulosa, es un termino no muy claro que abarca los arabinoxylanos, xilanos, B-glucanos, mananos, galactanos, y xiloglucanos; Pentosanos tambin es otro termino no claro y define a los arabinoxiloanos y xilanos; Pectinas, termino que define los NSP basados en el cido poligalacturnico; y finalmente las gomas y muclagos. Hoy en da existe una clasificacin mucho ms clara que agrupa los NSP en tre grupos: celulosa, polimeros no celulsicos y polisacaridos pcticos (Choct y Kocher, 2000; Cuadro 6) En la figura 4 se puede observar la complejidad de estas molculas.

Papel de los NSP durante la digestin de los alimentos Estos carbohidratos usualmente dificultan la digestin de los alimentos en dos formas; Por efecto de dilucin, formando un obstculo para que las enzimas alcancen sus respectivos sustratos, estos compuestos tambin forman capas sobre la pared intestinal, lo que hace ms difcil la absorcin de los nutrientes ya digeridos. Precisamente esto es lo que explica las diferencias entre la utilizacin de la pasta de soya entre los cerdos y las aves, precisamente los cerdos aprovechan alrededor de un 40% ms la EM de la soya (2.44 Mcal/kg en aves vs. 3.88 Mcal/kg en cerdos. Los cerdos poseen una capacidad fermentativa a nivel del ciego mucho ms grande que las aves, lo que permite la accin bacteriana cuyas enzimas si pueden degradar los NSP en monosacaridos que son fermentados a su vez para la produccin de cidos grasos volatiles que son absorbidos a nivel del ciego. Como un ejemplo se puede observar en el cuadro 7 las diferencias en las digestibilidades en algunos NSP en cerdos y aves. Otra forma de ilustrar este concepto proviene de la informacin publicada por Choct y Annison (1990), en donde se observa un decremento lineal en la EM de varios ingredientes conform se aumenta la concentracin de NSP en los mismos (Figura 5) Uso de las enzimas para degradar NSP en la formulacin de alimento balanceado. Una de las formas de usar estas enzimas es simplemente agregarla a la racin sin darle ningn valor energtico. Si sucede que la formulacin se esta haciendo sin

ningn margen de seguridad y junto con esta situacin se presenta una disminucin en el consumo de alimento por cualquier causa que no sea infecciosa, por ejemplo, estrs calrico, se obtendrn buenos resultados, sin embargo, bajo situaciones normales en donde siempre se formula con un margen de seguridad, la adicin de la enzima producir una liberacin de nutrientes, principalmente energa y esta situacin provocar que el ave reciba un exceso de nutrientes que ya no necesita. Las consecuencias son las siguientes: 1. Al agregar la enzima al alimento sin asignarle ningn valor nutricional producir de inmediato un aumento en el costo de formulacin del mismo. 2. Si el animal esta cubriendo ya sus necesidades nutricionales a partir de la racin, la adicin de la enzima al liberar nutrientes indisponibles hasta ese momento produce un exceso de nutrientes para el ave, lo que puede provocar depsitos de grasa indeseables y tambin un aumento de materia orgnica de fcil fermentacin en las excretas los que se traducir en ms problemas de contaminacin. Es por las razones mencionadas con anterioridad que se recomienda asignarle un valor nutricional a la enzima. En el caso de la actividad enzimtica de Aspergillus aculeatus, la cual posee acciones de B-glucanasa, celulasa y pectinasa, se recomienda el uso de los valores DIF (factores de mejora de la digestibilidad por sus siglas en Ingls), los cuales pueden ser observados en el cuadro 8. Futuro de las enzimas para NSP Con base en la complejidad de los NSP de los diferentes ingredientes vegetales de origen vegetal para formular se hace necesario trabajar con ccteles enzimticos, los cuales debern ser diseados muy especficamente para cada situacin, ya que los contenidos de NSP son muy variados e inclusive son afectados por el estado de madurez de la planta as como a las condiciones climticas del campo en donde se produjo el ingrediente, situaciones ms agresivas hacen que la planta deposite ms complejos NSP para protegerse. Recomendaciones para obtener las mximas ventajas cuando se incluyen enzimas para degradar los NSP en las raciones de las aves. Asignar siempre un valor nutricional a la enzima para obtener los mejores resultados, comenzando por un costo de formulacin ms bajo. Usar la enzima el complejo enzimtico ms adecuado para los ingredientes con los que est formulando, no es lo mismo trabajar con maz y/ sorgo y pasta de soya, que incluir canola, trigo cebada. Estabilidad de la actividad enzimtica durante el proceso de peletizado Debido a que una parte importante de los alimentos para pollo de engorda son sometidos al

proceso de peletizado, es necesario asegurarse de que se est trabajando con un producto resistente a las condiciones de alta temperatura y presin a las que se somete el alimento. La resistencia de las enzimas al proceso de peletizado se obtiene de dos maneras; Por medio de la resistencia intrnseca de la protena enzimtica a la temperatura y por medio de la aplicacin de una cubierta diseada para resistir las condiciones extremas de calentamiento. En la figura 3 puede observarse el efecto de la temperatura de peletizado sobre la recuperacin de la actividad fitasa en cuatro presentaciones enzimticas. Como se puede constatar no todas las presentaciones demostraron una eficiente recuperacin en el alimento peletizado. Conclusiones El uso de las enzimas para liberar el P de la molcula del cido ftico, as como el uso de las enzimas para degradar los NSP y hacer disponible la energa que contienen estos compuestos es ya una prctica comn en la alimentacin animal. Y esta prctica ha permitido una mejor utilizacin de los recursos para la produccin de protena animal. Es importante verificar la estabilidad durante el proceso de peletizado de la enzima a utilizarse para asegurar los resultados esperados. Literatura citada Choct, M. and Annison, G. 1990. Anti-nutritive activity of wheat pentosans in poultry diets. British Poultry Science. 31:809-819 Choct, M. 1997. Feed non-starch polysaccharides: Chemical structures and nutritional significance. Feed milling international. June : 13-26 Choct, M. and Kocher, A. 2000. Non-starch polysaccharides: Digestion and its secondary effects in monogastrics. Proceedings of the 24th annual scientific meeting of the Nutrition Society of Australia, 24: 31-38. Cortes, A., C., B. Fuente M., S., Fernandez T., M.C. Mojica E., E. Avila G., 2005 Efecto en pollos de engorda de una fitasa microbiana (Peniophora Lycii) en dietas sorgo+soya deficientes en fsforo sobre la digestibilidad ileal de protena, aminocidos y energa metabolizable. Veterinaria Mxico (en prensa) F.A.O. 1995. Sorghum and millets in human nutrition. Food and Agriculture Organization of the United Nations. Rome Food an nutrition series: 27. Gmez, S., C., Mojica, & S.R. Fernndez. 2003. Effect several levels of Peniophora lycii phytase on nutrient utilization in laying hens. Poult. Sci. 82 (Suppl.1):50. Havenstein, G.B., P.R., Ferket, & M.A. Quareshi. 2003a. Growth, livability and feed conversion of 1957 vs. 2001 broilers when fed representative 1957 and 2001 broiler diets. Poult. Sci. 82:1500-1508.

Havenstein, G.B., P.R., Ferket, & M.A. Quareshi. 2003b. Carcass composition and yield of 1957 vs. 2001 broilers when fed representative 1957 and 2001 broiler diets. Poult. Sci. 82:1509-1518. Jones, D.R., K.E. Anderson & G.S. Davis. 2001. The effects of genetic selection on production parameters of single comb white leghorn hens. Poult. Sci. 80:11391143. Jongbloed, A. W., Everts, H. and Kemme, P. A.1991. Phosphorus availability and requirements in pigs. In Recent Advances in Animal Nutrition 1991, Butterworths, England, pp. 65-80 Cuadro 1. Efecto de la seleccin gentica en los parmetros productivos del pollo de engorda a los 42 das de edad 1

1 Adaptado de Havenstein et al., 2003 a y b 2 Como % del peso corporal total 3 Como % del peso corporal total a, b Nmeros con diferente literal por columna son estadsticamente (P <0.0001) distintos

Cuadro 2. Efecto de la seleccin gentica en la respuesta productiva de la gallina de postura a

a Adaptado de Jones et al., 2001 b Adaptado del manual de la gallina Bovans blanca, 2003 Aves en produccin hasta las 86 semanas de edad (aves sometidas a muda forzada a las 62 semanas)

Cuadro 3. Contenido de P total y P ftico en algunos ingredientes vegetales 1

1 Adaptado de Jongbloed, 1991 2 Adaptado de F.A.O., 1995

Cuadro 4. Efecto de la adicin de la fitasa de Peniophora Lycii sobre el crecimiento del pollo y la energa metabolizable de la dieta ( 0 a 19 das de edad) 1

1 Adaptado de Cuevas et al. , 2005 (en prensa) Medias de 4 rplicas de 10 pollos cada una. Dietas sorgo-pasta de soya Control; Ca: 1.0% y P Disp. 0.5%. Deficiente en P; Ca: 0.09% y P Disp. 0.4%. fitasa de Peniophora Lycii: 750 FYT/kg Nmeros con diferente literal por columna son estadsticamente diferentes al nivel de significancia indicado en el cuadro

Figura 1. Estructura del cido ftico

Fitato (cido ftico en forma ionizada)

Figura 2. Interacciones fitato-minerales, fitato-aminocidos

Cuadro 5. Efecto de varios niveles de la fitasa de Peniophora Lycii en la retencin de nutrientes en la gallina de postura.

Adaptado de Gomez et al., 2003 En todos los casos efecto lineal significativo de fitasa (P < 0.05)

Figura 3 . Hidrlisis del cido ftico

Cuadro 6. Clasificacin de los NSP

Adaptado de Choct Y Kocher, 2000

Figura 4. Estructuras de dos NSP / Pectinas (residuos de Ac. Galacturnico)

B-Glucanos (polimeros de glucosa, con enlaces B 1-3 y B 1-4)

Cuadro 7. Comparacin entre las digestibilidades de algunos NSP en cerdos y aves

Adaptado de Choct y Kocher, 2000

Figura 5. Efecto de la concentracin de los pentosanos y B-glucanos en la relacin energa metabolizable/energa bruta en varios ingredientes vegetales / Adaptado de Choct y Annison, 1990

Cuadro 8. Valores DIF recomendados cuando se formula alimento con la enzima proveniente de Aspergillus aculeatus

Figura 3. Efecto de la temperatura sobre la recuperacin de la actividad fitasa en 4 diferentes productos enzimticos.