Cromatografia de Afinidade

Aline Cardoso Brbara Alamis Gabriel Branzani Isabela Rovero Marcos Maldonado Rafael Medeiros 3 A Farmcia FMU - Liberdade

O que ?

Cromatografia de afinidade uma tcnica que utiliza propriedades fsico-qumicas para separao dos componentes de uma mistura protica.

Como funciona?
A Cromatografia de Afinidade se baseia numa especificidade biolgica da protena que se pretende analisar, tal como a afinidade de uma enzima a um substrato ou a ligao entre antgeno e anticorpo.

Como funciona?
Consiste na separao de protenas de uma mistura e dividida em duas fases: uma estacionria, aonde a protena a se analisar se liga a polmeros com ligantes especficos contidos na parede do tubo; e outra, aonde h a eluio das protenas indesejadas restando somente aquela a ser estudada.

Fase Estacionria
Na fase estacionria, a protena de interesse se liga ao composto contido no tubo. Por exemplo: numa mistura de protenas A, B, C e D, desejamos estudar a protena A, que se liga facilmente com glicose. Portanto, a parede do tubo aonde essa mistura ser despejada conter glicose, que logo atrair a protena A para si, conseqentemente separando-a das demais, que sero filtradas do tubo.

Eluio
Aps restar no tubo apenas os ligante com as protenas de interesse, despejado no tubo uma soluo contendo os mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou reagente desnaturantes (uria, guanidina, etc) desprendendo a protena da parede do tubo. No exemplo, adicionado uma soluo de resduos de glicose que fazem com que a protena A se desprenda da parede do tubo, sendo despejada, em meio a soluo, em outro tubo para estudo.

Resumo

Aplicaes
Purificar e concentrar uma substncia de uma mistura em uma soluo tampo; Reduzir a quantidade de uma substncia em uma mistura; Entender as ligaes entre compostos biolgicos e determinadas substncias, como as drogas; Purificar e concentrar uma soluo enzimtica.

Referncias Bibliogrficas
http://www.bio.davidson.edu/courses/gen omics/method/Affinity.html http://www.quimica.ufscar.br/ignez/Aula0 8-extracao-3D http://teachline.ls.huji.ac.il/72682/Bookle ts/PHARMACIA-AffinityManual.pdf08-1007.pdf