GLUCOSE -TR

Glucosa
Trinder. GOD-POD
Determinacin cuantitativa de glucosa IVD
Conservar a 2-8C PRINCIPIO DEL MTODO La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidacin de glucosa a cido glucnico. El perxido de hidrgeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromognico de oxigeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD): -D-Glucosa + O2 + H2O cido glucnico + H2O2 H2O2 + Fenol + Ampirona Quinona + H2O La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de 1,2 glucosa presente en la muestra ensayada . SIGNIFICADO CLNICO La glucosa es la mayor fuente de energa para las clulas del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las clulas. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una 1,5,6 hiperglucmia, causada por un dficit de insulina . El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio. REACTIVOS R1
Tampn
POD GOD

4. 5.

Mezclar e incubar 10 minutos a 37C 15-20 minutos a temperatura ambiente (15-25C). Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos.

CLCULOS ( A ) Muestra x 100 (Conc. Patrn) = mg/dL de glucosa en la muestra ( A ) Patrn Factor de conversin: mg/dL x 0,0555= mmol/L. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles. VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: 3,33 6.10 mmol/L 60 110 mg/dL LCR: 60 80 % del valor en sangre
1

TRIS pH 7,4 92 mmol/L Fenol 0,3 mmol/L Glucosa oxidasa (GOD) 15000 U/L R2 Peroxidasa (POD) 1000 U/L Enzimas 4 - Aminofenazona (4-AF) 2,6 mmol/L GLUCOSE CAL Patrn primario acuoso de Glucosa 100 mg/dL

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de 0,04 mg/dL hasta el lmite de linealidad de 500 mg/dL. Si la concentracin es superior al lmite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisin:

PREPARACIN Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 Enzimas en un frasco de R 1 Tampn. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 1 mes en nevera (2-8C) o 7 das a Temperatura ambiente (15-25C).
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin durante su uso. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. GLUCOSE CAL Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm 0,10. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 505 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS 1 Suero o plasma, libre de hemlisis y LCR. El suero debe separarse lo antes posible del cogulo. Estabilidad: La glucosa en suero o plasma es estable 3 das a 2-8C. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (490-550) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C 2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. 3. Pipetear en una cubeta: RT (mL) (Nota1,2) Patrn (L) Muestra (L) Blanco 1,0 --Patrn 1,0 10 -Muestra 1,0 -10

Media (mg/dL) SD CV (%)

Intraserie (n=20) 96,8 241 0,81 1,43 0,83 0,59

Interserie (n=20) 98,4 248 1,55 3,73 1,58 1,50

Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = 0,0036 A. Exactitud: Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlacin (r): 0,99. Ecuacin de la recta de regresin: y= 1,0x + 0,12. Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado. INTERFERENCIAS No se han observado interferencias con: hemoglobina hasta 4 g/L, bilirrubina hasta 20 mg/L, creatinina hasta 100 mg/L, galactosa hasta 1 g/L. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la 3,4 determinacin de la glucosa . NOTAS 1. La calibracin con el Patrn acuoso puede dar lugar a errores sistemticos en mtodos automticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores sricos. 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin. 3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFA
1. 2. 3. 4. 5. 6. Kaplan A. Glucose. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1032-1036. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-33. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

PRESENTACIN Ref:1001190 Ref:1001191 Ref:1001192

Cont.

4 x 125 mL 4 x 250 mL 10 x 50 mL

BSIS17

Ed.2005

SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

GLUCOSE -TR

Glucose
Trinder. GOD-POD
Quantitative determination of glucose IVD
Store at 2-8C PRINCIPLE OF THE METHOD Glucose oxidase (GOD) catalyses the oxidation of glucose to gluconic acid. The formed hydrogen peroxide (H2O2), is detected by a chromogenic oxygen acceptor, phenol-aminophenazone in the presence of peroxidase (POD): -D-Glucose + O2 + H2O Gluconic acid + H2O2 H2O2 + Phenol + Aminophenazone Quinone + H2O The intensity of the color formed is proportional to the glucose 1,2 concentration in the sample . CLINICAL SIGNIFICANCE Glucose is a major source of energy for most cells of the body; insulin facilitates glucose entry into the cells. Diabetes is a disease manifested by hyperglycemia; patients with 1,5,6 diabetes demonstrate an inability to produce insulin . Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate clinical and other laboratory data. REAGENTS R1
Buffer
POD GOD

4. 5.

Mix and incubate for 10 min at 37C or 15-20 min at room temperature (15-25C). Read the absorbance (A) of the samples and standard, against the Blank. The colour is stable for at least 30 minutes.

CALCULATIONS ( A ) Sample x 100 (Standard conc.) = mg/dL glucose in the sample ( A ) S tan dard Conversion factor: mg/dL x 0.0555= mmol/L. QUALITY CONTROL Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210). If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents and calibrator for problems. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances. REFERENCE VALUES Serum or plasma: 3.33 6.10 mmol/L 60 110 mg/dL CSF: 60 80% of the blood value
1

R2
Enzymes

GLUCOSE CAL

TRIS pH 7.4 92 mmol/L Phenol 0.3 mmol/L Glucose oxidase (GOD) 15000 U/L Peroxidase (POD) 1000 U/L 4 Aminophenazone (4-AP) 2.6 mmol/L Glucose aqueous primary standard 100 mg/dL

These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS Measuring range: From detection limit of 0.04 mg/dL to linearity limit of 500 mg/dL. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2. Precision:

PREPARATION Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one vial R 2 Enzymes in one bottle of R 1 Buffer. Cap and mix gently to dissolve contents. The reagent is stable 1 month after reconstitution in the refrigerator (2-8C) or 7 days at room temperature (15-25C). STORAGE AND STABILITY All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date.
GLUCOSE CAL Once open is stable up to 1 month when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and contaminations prevented during their use.

Mean (mg/dL) SD CV (%)

Intra-assay (n=20) 96.8 241 0.81 1.43 0.83 0.59

Inter-assay (n=20) 98.4 248 1.55 3.73 1.58 1.50

Sensitivity: 1 mg/dL = 0.0036 A. Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagents (x). The results obtained using 50 samples were the following: Correlation coefficient (r): 0.99. Regression equation: y= 1.0x + 0.12. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used. INTERFERENCES Haemoglobin up to 4 g/L, bilirubin up to 20 mg/L, creatinine up to 100 mg/L and galactose up to 1g/L do not interfere. A list of drugs and other interfering substances with glucose determination 3,4 has been reported by Young et. al . NOTES 1. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a serum Calibrator. 2. Use clean disposable pipette tips for its dispensation. 3. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers. Instructions for many of them are available on request. BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. Kaplan L.A. Glucose. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1032-1036. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-33. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

Signs of reagent deterioration: - Presence of particles and turbidity. - Blank absorbance (A) at 505 nm 0.10. ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm. - Matched cuvettes 1.0 cm light path. - General laboratory equipment.

SAMPLES Serum or plasma, free of hemolysis1 and CSF. Serum should be removed from the clot as quickly as possible. Stability: Glucose is stable at 2-8C for 3 days. PROCEDURE 1. Assay conditions: Wavelength: . . . . . . . . . . . . . .. . 505 nm (490-550) Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 1 cm light path Temperature. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C 2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 3. Pipette into a cuvette:
WR (mL) (Note 1,2) Standard (L) Sample (L) Blank 1.0 --Standard 1.0 10 -Sample 1.0 -10

PACKAGING Ref:1001190 Ref:1001191 Ref:1001192

Cont.

4 x 125 mL 4 x 250 mL 10 x 50 mL

BSIS17

Ed.2005

SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com