GC (Gas Chromatography)

14:33 LANSIDA 3 comments

GC (Gas Chromatography) yang biasa disebut juga Kromatografi gas (KG) merupakan teknik instrumental yang dikenalkan pertama kali pada tahun 1950-an. GC merupakan metode yang dinamis untuk pemisahan dan deteksi senyawa-senyawa organik yang mudah menguap dan senyawasenyawa gas anorganik dalam suatu campuran Perkembangan teknologi yang signifikan dalam bidang elektronik, komputer, dan kolom telah menghasilkan batas deteksi yang lebih rendah serta identifikasi senyawa menjadi lebih akurat melalui teknik analisis dengan resolusi yang meningkat. (3) GC menggunakan gas sebagai gas pembawa/fase geraknya. Ada 2 jenis kromatografi gas, yaitu : 1. Kromatografi gascair (KGC) yang fase diamnya berupa cairan yang diikatkan pada suatu pendukung sehingga solut akan terlarut dalam fase diam. 2. Kromatografi gas-padat (KGP), yang fase diamnya berupa padatan dan kadang-kadang berupa polimerik.(4) SISTEM PERALATAN KROMATOGRAFI GAS (GC)

Gambar alat instrumen GC

1. 2. 3. 4. 5.

Kontrol dan penyedia gas pembawa; ruang suntik sampel; kolom yang diletakkan dalam oven yang dikontrol secara termostatik; sistem deteksi dan pencatat (detektor dan recorder); serta komputer yang dilengkapi dengan perangkat pengolah data.

1. Fase gerak Fase gerak pada GC juga disebut dengan gas pembawa karena tujuan awalnya adalah untuk membawa solut ke kolom, karenanya gas pembawa tidak berpengaruh pada selektifitas. Syarat gas pembawa adalah: tidak reaktif; murni/kering karena kalau tidak murni akan berpengaruh pada detektor; dan dapat disimpan dalam tangki tekanan tinggi (biasanya merah untuk hidrogen, dan abu-abu untuk nitrogen) 4). 2. Ruang suntik sampel Lubang injeksi didesain untuk memasukkan sampel ecara cepat dan efisien. Desain yang populer terdiri atas saluran gelas yang kecil atau tabung logam yang dilengkapi dengan septum karet pada satu ujung untuk mengakomodasi injeksi dengan semprit (syringe). Karena helium (gas pembawa) mengalir melalui tabung, sejumlah volume cairan yang diinjeksikan (biasanya antara 0,1-3,0 L) akan segera diuapkan untuk selanjutnya di bawa menuju kolom. Berbagai macam ukuran semprit saat ini tersedia di pasaan sehingga injeksi dapat berlangsung secara mudah dan akurat. Septum karet, setelah dilakukan pemasukan sampel secara berulang, dapat diganti dengan mudah. Sistem pemasukan sampel (katup untuk mengambil sampel gas) dan untuk sampel padat juga tersedia di pasaran(1). Pada dasarnya, ada 4 jenis injektor pada kromatografi gas, yaitu: a. Injeksi langsung (direct injection), yang mana sampel yang diinjeksikan akan diuapkan dalam injector yang panas dan 100 % sampel masuk menuju kolom.

b. Injeksi terpecah (split injection), yang mana sampel yang diinjeksikan diuapkan dalam injector yang panas dan selanjutnya dilakukan pemecahan. c. Injeksi tanpa pemecahan (splitness injection), yang mana hampir semua sampel diuapkan dalam injector yang panas dan dibawa ke dalam kolom karena katup pemecah ditutup; dan d. Injeksi langsung ke kolom (on column injection), yang mana ujung semprit dimasukkan langsung ke dalam kolom. Teknik injeksi langsung ke dalam kolom digunakan untuk senyawasenyawa yang mudah menguap; karena kalau penyuntikannya melalui lubang suntik secara langsung dikhawatirkan akan terjadi peruraian senyawa tersebut karena suhu yang tinggi atau pirolisis(2). 3. Kolom Kolom merupakan tempat terjadinya proses pemisahan karena di dalamnya terdapat fase diam. Oleh karena itu, kolom merupakan komponen sentral pada GC. Ada 3 jenis kolom pada GC yaitu kolom kemas (packing column) dan kolom kapiler (capillary column); dan kolom preparative (preparative column). Perbandingan kolom kemas dan kolom kapiler dtunjukkan oleh gambar berikut :

Kolom Kemas

Kolom Kapiler

Kolom kemas terbuat dari gelas atau logam yang tahan karat atau dari tembaga dan aluminium. Panjang kolom jenis ini adalah 15 meter dengan diameter dalam 1-4 mm. Kolom kapiler sangat banyak dipakai karena kolom kapiler memberikanefisiensi yang tinggi (harga jumlah pelat teori yang sangat besar > 300.000 pelat). Kolom preparatif digunakan untuk menyiapkan sampel yang murni dari adanya senyawa tertentu dalam matriks yang kompleks. Fase diam yang dipakai pada kolom kapiler dapat bersifat non polar, polar, atau semi polar. Fase diam non polar yang paling banyak digunakan adalah metil polisiloksan (HP-1; DB-1; SE-30; CPSIL-5) dan fenil 5%-metilpolisiloksan 95% (HP-5; DB-5; SE-52; CPSIL-8). Fase diam semi polar adalah seperti fenil 50%-metilpolisiloksan 50% (HP-17; DB-17; CPSIL-19), sementara itu fase diam yang polar adalah seperti polietilen glikol (HP-20M; DB-WAX; CP-WAX; Carbowax-20M) (6). 4. Detektor

Komponen utama selanjutnya dalam kromatografi gas adalah detektor. Detektor merupakan perangkat yang diletakkan pada ujung kolom tempat keluar fase gerak (gas pembawa) yang membawa komponen hasil pemisahan. Detektor pada kromatografi adalah suatu sensor elektronik yang berfungsi mengubah sinyal gas pembawa dan komponen-komponen di dalamnya menjadi sinyal elektronik. Sinyal elektronik detektor akan sangat berguna untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif terhadap komponen-komponen yang terpisah di antara fase diam dan fase gerak. Pada garis besarnya detektor pada KG termasuk detektor diferensial, dalam arti respons yang keluar dari detektor memberikan relasi yang linier dengan kadar atau laju aliran massa komponen yang teresolusi. Kromatogram yang merupakan hasil pemisahan fisik komponenkomponen oleh GC disajikan oleh detektor sebagai deretan luas puncak terhadap waktu. Waktu tambat tertentu dalam kromatogram dapat digunakan sebagai data kualitatif, sedangkan luas puncak dalam kromatogram dapat dipakai sebagai data kuantitatif yang keduanya telah dikonfirmasikan dengan senyawa baku. Akan tetapi apabila kromatografi gas digabung dengan instrumen yang multipleks misalnya GC/FT-IR/MS, kromatogram akan disajikan dalam bentuk lain. Beberapa sifat detektor yang digunakan dalam kromatografi gas adalah sebagai berikut :
Jenis Detektor Jenis Sampel Batas Deteksi 5-100 ng 10-100 pg 0,05-1 pg 0,1-10 g Kecepatan Alir (ml/menit) Gas H2 Udara Pembawa 15-30 20-60 30-60 20-40 30-60 1-5 200-500 700-100

Hantaran panas Ionisasi nyawa Penangkap elektron Nitrogen-fosfor

Senyawa umum Hidrokarbon Halogen organic, pestisida Senyawa nitrogen organik dan fospat organic Senyawa-senyawa sulfur Senyawa-senyawa fosfor Senyawa yang terionisasi dg UV Halogen, N, S

Fotometri nyala (393 nm) Fotometri nyala (526 nm) Foto ionisasi Konduktivitas elektrolitik Fourier Transforminframerah (FTIR) Selektif massa Emisi atom

10-100 pg 1-10 pg 2 pg C/detik 0,5 pg C 12 pg S 4 pg N 1000 pg

20-40 20-40 30-40 20-40

50-70 120-170 80

60-80 100-150 -

Senyawa-senyawa organik

3-10

Sesuai untuk senyawa apapun Sesuai untuk

10 pg-10 ng 0,1-20 pg

0,5-30 60-70

elemen apapun

5. Komputer Komponen GC selanjutnya adalah komputer. GC modern menggunakan komputer yang dilengkapi dengan perangkat lunaknya (software) untuk digitalisasi signal detektor dan mempunyai beberapa fungsi antara lain:

Memfasilitasi setting parameter-parameter instrumen seperti: aliran fase gas; suhu oven dan pemrograman suhu; serta penyuntikan sampel secara otomatis. Menampilkan kromatogram dan informasi-informasi lain dengan menggunakan grafik berwarna. Merekam data kalibrasi, retensi, serta perhitungan-perhitungan dengan statistik. Menyimpan data parameter analisis untuk analisis senyawa tertentu(4).

DERIVATISASI Derivatisasi merupakan proses kimiawi untuk mengubah suatu senyawa menjadi senyawa lain yang mempunyai sifat-sifat yang sesuai untuk dilakukan analisis menggunakan kromatografi gas (menjadi lebih mudah menguap). Alasan dilakukannya derivatisasi:

Senyawa-senyawa tersebut tidak memungkinkan dilakukan analisis dengan GC terkait dengan volatilitas dan stabilitasnya. Untuk meningkatkan batas deteksi dan bentuk kromatogram. Beberapa senyawa tidak menghasilkan bentuk kromatogram yang bagus (misal puncak kromatogram saling tumpang tindih) atau sampel yang dituju tidak terdeteksi, karenanya diperlukan derivatisasi sebelum dilakukan analisis dengan GC. Meningkatkan volatilitas, misal senyawa gula. Tujuan utama derivatisasi adalah untuk meningkatkan volatilitas senyawasenyawa yang tidak mudah menguap (non-volatil). Senyawasenyawa dengan berat molekul rendah biasanya tidak mudah menguap karena adanya gaya tarik-menarik inter molekuler antara gugus-gusug polar karenanya jika gugus-gugus polar ini ditutup dengan cara derivatisasi akan mampu meningkatkan volatilitas senyawa tersebut secara dramatis. Meningkatkan deteksi, misal untuk kolesterol dan senyawasenyawa steroid. Meningkatkan stabilitas. Beberapa senyawa volatil mengalami dekomposisi parsial karena panas sehingga diperlukan derivatisasi untuk meningkatkan stabilitasnya. Meningkatkan batas deteksi pada penggunaan detektor tangkap elektron (ECD).

Inilah contoh derivatisasi yang digunakan untuk memperbaiki bentuk puncak pseudoefedrin:

Caranya : Sirup dekongestan dibasakan dengan amonia dan diekstraksi ke dalam etil asetat sehingga akan menjamin bahwa semua komponen yang terekstraksi berada dalam bentuk basa bebasnya daripada bentuk garamnya. Bentuk basa inilah yang bertanggungjawab pada bagusnya bentuk puncak kromatografi. Garam-garam atau basa-basa akan terurai karena adanya panas pada lubang suntik GC, sehingga dengan adanya proses ini akan dapat menyebabkan terjadinya peruraian. Jika ekstrak pada sirup dekongestan di lakukan kromatografi gas secara langsung maka kromatogram yang dihasilkan seperti gambar dibawah. Basa bebas triprolidin dan dekstrometorfan menunjukkan bentuk puncak yang bagus, akan tetapi pesudoefedrin yang merupakan basa yang lebih kuat karena adanya gugus hidroksil dan gugus amin memberikan bentuk puncak yang kurang bagus. Hal ini dapat diatasi dengan menutup gugus polar (gugus hidroksi dan amin) pada pseudoefedrin dengan cara mereaksikannya menggunakan trifluoroasetat anhidrida (TFA). Perlakuan dengan TFA ini tidak menghasilkan senyawa derivatif terhadap senyawasenyawa basa tersier dalam ekstrak (sirup dekongestan) ini. Reagen TFA ini sangat bermanfaat karena reagen ini sangat reaktif dan bertitik didih rendah (400C) sehingga kelebihan reagen TFA ini mudah dihilangkan dengan cara evaporasi sebelum dilakukan kromatografi gas. Ini kromatogram sebelum dilakukan derivatisasi......

Yang ini kromatogram sesudah derivatisasi......

Pustaka: 1. Kenkel, J., 2002, Analytical Chemistry for Technicians, 3th. Edition., CRC Press,
U.S.A.

2. Grob, R.L., 1995, Modern Practice of Gas Chromatography, 3th Ed., Jhon Wiley 3. 4. 5. 6.

and Sons, New York. Settle, F (Editor), 1997, Handbook of Instrumental Techniques for Analytical Chemistry, Prentice Hall PTR, New Jersey, USA. Kealey, D and Haines, P.J., 2002, Instant Notes: Analytical Chemistry, BIOS Scientific Publishers Limited, New York. Watson, D.G., 1999, Pharmaceutical Analysis: A textbook for pharmacy students and pharmaceutical chemists, Churchill Livingston, UK. Adamovics, J.A., 1997, Chromatographic Analysis of Pharmaceuticals, 2nd Edition, Marcel Dekker, New York.

pengenalan Kromatografi gas - khususnya kromatografi gas-cair - melibatkan sampel yang vapourised dan disuntikkan ke kepala kolom kromatografi. Sampel diangkut melalui kolom oleh aliran inert, fase gerak gas. Kolom itu sendiri berisi fase diam cair yang teradsorpsi ke permukaan padatan inert.

Silahkan lihat pada diagram skematik dari kromatografi gas

Instrumental komponen gas pembawa Gas pembawa harus kimia lembam. Gas yang umum digunakan termasuk nitrogen, helium, argon, dan karbon dioksida. Pemilihan gas pembawa sering tergantung pada jenis detektor yang digunakan. Sistem gas pembawa juga berisi saringan molekuler untuk menghilangkan air dan kotoran lainnya.

Contoh injeksi pelabuhan Untuk efisiensi kolom optimal, sampel tidak boleh terlalu besar, dan harus diperkenalkan ke kolom sebagai "plug" uap - lambat injeksi sampel besar menyebabkan pelebaran pita dan kehilangan resolusi. Metode injeksi yang paling umum adalah di mana microsyringe yang digunakan untuk menyuntikkan sampel melalui septum karet ke port vapouriser flash pada kepala kolom. Suhu port sampel biasanya sekitar 50 C lebih tinggi dari titik didih dari komponen volatil minimal sampel. Untuk kolom dikemas, ukuran sampel berkisar dari persepuluh mikroL hingga 20 mikroliter. Kolom kapiler, di sisi lain, perlu sampel lebih sedikit, biasanya sekitar 10-3 mL. Untuk GC kapiler, split / tidak pisah injeksi

digunakan. Silahkan lihat pada diagram dari split / injector tidak pisah;

Injector dapat digunakan dalam satu dari dua mode; split atau tidak pisah. Injektor berisi ruang panas yang mengandung liner kaca ke mana sampel disuntikkan melalui septum. Gas pembawa memasuki ruangan dan dapat meninggalkan oleh tiga rute (ketika injektor dalam mode split). Sampel vapourises untuk membentuk campuran gas pembawa, vapourised larutan pelarut dan vapourised. Sebagian campuran ini melewati ke kolom, tetapi keluar melalui outlet paling split. Stopkontak pembersihan septum septum berdarah mencegah komponen dari memasuki kolom.

kolom Ada dua jenis umum kolom, dikemas dan kapiler (juga dikenal sebagai tubulus terbuka). Kolom dikemas mengandung, halus dibagi inert, bahan pendukung padat (umumnya didasarkan pada tanah diatom) dilapisi dengan fase diam cair. Kebanyakan kolom dikemas 1.5 - 10m panjang dan memiliki diameter internal dari 2 - 4mm. Kolom kapiler memiliki diameter dalam beberapa persepuluh milimeter. Mereka dapat menjadi salah satu dari dua jenis; dinding berlapis terbuka tubular (WCOT) atau dukungan terbuka berlapis tubulus (Scot). Dinding berlapis kolom terdiri dari sebuah tabung kapiler yang dindingnya dilapisi dengan fase diam cair. Untuk mendukung berlapis kolom, dinding bagian dalam kapiler dipagari dengan lapisan tipis bahan pendukung seperti tanah diatom, ke mana fase stasioner telah teradsorpsi. Kolom Scot umumnya kurang efisien daripada kolom WCOT. Kedua

jenis kolom kapiler lebih efisien daripada kolom dikemas. Pada tahun 1979, tipe baru kolom WCOT telah dibuat - yang Silika Buka Fused Tubular (FSOT) kolom;

Ini memiliki dinding yang lebih tipis dari kolom kaca kapiler, dan diberikan kekuatan oleh lapisan Polimida. Kolom ini adalah fleksibel dan dapat digulung ke dalam kumparan. Mereka memiliki keunggulan kekuatan fisik, fleksibilitas dan reaktivitas rendah.

kolom suhu Untuk pekerjaan yang tepat, temperatur kolom harus dikontrol ke dalam persepuluh dari gelar. Suhu kolom optimal tergantung pada titik didih sampel. Sebagai aturan praktis, suhu sedikit di atas titik didih rata-rata hasil sampel dalam waktu elusi dari 2 - 30 menit. Suhu minimal memberikan resolusi yang baik, tapi meningkatkan waktu elusi. Jika sampel memiliki berbagai macam mendidih, lalu suhu pemrograman dapat berguna. Suhu kolom meningkat (baik terus menerus atau dalam langkah) sebagai hasil pemisahan.

detektor Ada banyak detektor yang dapat digunakan dalam kromatografi gas. Detektor yang berbeda akan memberikan berbagai jenis selektivitas. Sebuah detektor non-selektif menanggapi semua senyawa kecuali gas pembawa, detektor selektif menanggapi berbagai senyawa dengan properti fisik atau kimia umum dan detektor khusus menanggapi suatu senyawa kimia tunggal. Detektor juga dapat dikelompokkan ke dalam detektor tergantung konsentrasi dan detektor tergantung aliran massa. Sinyal dari detektor tergantung konsentrasi ini terkait dengan konsentrasi zat terlarut dalam detektor, dan biasanya tidak merusak Pengenceran sampel dengan make-up gas akan menurunkan respon detektor. Detektor tergantung aliran massa biasanya menghancurkan sampel, dan sinyal ini terkait dengan kecepatan molekul-molekul zat terlarut masuk detektor. Tanggapan detektor tergantung aliran massa tidak dipengaruhi oleh make-up gas. Silahkan lihat pada tabel ringkasan dari detektor GC umum:

Air buangan dari kolom dicampur dengan hidrogen dan udara, dan dinyalakan. Senyawa organik terbakar dalam nyala menghasilkan ion dan elektron yang dapat menghantarkan listrik melalui nyala api. Sebuah potensi listrik yang besar diterapkan pada ujung burner, dan elektroda kolektor terletak di atas api. Arus yang dihasilkan dari pirolisis dari setiap senyawa organik yang diukur. Jumlah besar secara massal sensitif daripada konsentrasi sensitif; ini memberikan keuntungan bahwa perubahan kecepatan aliran fase gerak tidak mempengaruhi respons detektor. FID merupakan detektor umum yang berguna untuk analisis senyawa organik, tetapi memiliki sensitivitas yang tinggi, berbagai respon besar linear, dan kebisingan yang rendah. Hal ini juga kuat dan mudah digunakan, tetapi sayangnya, ia menghancurkan sampel.