INTRODUCERE Genetica ramura cea mai dinamic a biologiei, nscut n secolul XIX prin magistrala oper a lui Johan

n Gregor Mendel (Versuche ueber Pflanzen Hybriden publicat n 1865), a aprut ca tiin la nceputul secolului trecut (a devenit domeniu de sine stttor n anul 1900) i n doar cteva decenii a revoluionat ntreaga biologie, explicnd geneza ntregii diversiti a lumii organice la nivel cromosomial i cu ajutorul biochimiei la nivel molecular, ajungnd punct de reper n biologie, medicin, agronomie etc. Genetica, termen provenit din grecescul gennao = "a nate", este perceput drept disciplina biologic ce se preocup cu studiul ereditii, variabilitii i determinismului caracterelor. Ereditatea, din latinescul hereditas = "motenire", reprezint o calitate intrinsec a sistemelor biologice din nivelul individual de organizare i integrare a materiei vii, care asigur transmiterea nealterat, n irul de generaii, a bagajului informaional specific. Variabilitatea, din latinescul variare = "a se schimba", reprezint calitatea sistemelor biologice individuale, care permite schimbarea coninutului informaiei ereditare, n irul de generaii. Cu mult nainte ca oamenii s nceap s fie preocupai de mecanismele genetice ale transferului informaiei biologice de la celul la celul, de la prini la urmai sau de la generaie la generaie, ei au realizat selecia empiric a caracterelor, intervenind n sensul acumulrii de beneficii pentru societatea uman (creterea calitativ i cantitativ a produciei de lapte, ou, carne, ln, orez, bumbac, fiind doar cteva exemple). Printre primele dovezi rmase de-a lungul timpului, sunt cele aparinnd epocii cultivatorilor de plante, a trecerii de la cules i vnat la cultivarea plantelor. Astfel, de la populaiile din Orientul Mijlociu, au rmas documente n piatr ce au condus la concluzia c erau relativ comune lucrrile de selecie i ameliorare la animale, ct i polenizarea artificial. Mrturii de o deosebit profunzime despre fenomenul ereditii ne parvin i de la civilizaia Greciei Antice, India, China, Roma Antic. A urmat apoi n Evul Mediu o perioad de stagnare a descoperirilor n biologie.

LEGITILE EREDITII Experimentele lui Mendel Pregtit de o multitudine de descoperiri, observaii i experimente, momentul naterii geneticii ca tiin este momentul Mendel. Gregor Mendel (1822-1884), a experimentat pe diverse specii de plante aparinnd genurilor Hieracium, Phaseolus i n special Pisum, atenie deosebit acordnd mazrii (Pisum sativum). Mendel nu a fost primul care a efectuat experimente de ncruciare, dar a fost unul dintre primii care a fcut observaii referitoare la cte un singur caracter. Predecesorii lui au urmrit ntregul organism, cu trsturi complexe, putnd s observe apariia similaritilor i diferenelor dintre prini i urmai. Pe baza interpretrii matematice a rezultatele

obinute, Mendel a formulat ipoteze, a prezis i verificat transmiterea caracterelor de-a lungul generaiilor, fr a cunoate ns mecanismele biologice implicate n acest proces. Se cuvin dou remarci eseniale pentru a nelege ce l-a detaat pe Mendel de predecesorii si, ajutndu-l s precizeze fr echivoc legitile ereditii (Bra, 1999). n primul rnd a ales ca obiect de studiu o specie autogam, Pisum sativum, putnd urmri n descenden comportarea hibrizilor i n al doilea rnd a verificat puritatea genetic a plantelor luate n studiu, timp de 3-4 generaii. Alegerea mazrii drept obiect de studiu prezint i alte avantaje, printre care: perioada de vegetaie scurt, trsturi fenotipice distincte i contrastante, existena a numeroase soiuri ce dau natere la hibrizi fertili. n 1900, lucrarea lui Mendel a fost descoperit (mai degrab citit i neleas) simultan de 3 botaniti Hugo de Vries n Olanda, Carl Correns din Germania i Eric von Tschermak din Austria. ncrucirile au fost fcute cu mare atenie. Pentru a preveni autopolenizarea, n florile test ale plantelor mam, anterele au fost ndeprtate naintea maturrii complete a gineceului, castrarea relativ uar reprezentnd un alt avantaj. Polenizarea artificial s-a realizat cu polen provenit de la planta tat. Deci plantele ce au fost supuse castrrii i polenizrii artificiale, reprezint generaia parental, iar boabele aprute pe ele n urma dublei fecundri prin care a luat natere embrionul (diploid) i endospermul (triploid), reprezint generaia filial, hibrid. n cazul urmririi trsturilor precum culoarea tegumentului boabelor, clasificrile pot fi fcute imediat, n timp ce caractere precum nlimea tulpinii pot fi analizate abia dup plantarea seminelor i ajungerea la maturitate a indivizilor aparinnd generaiei filiale. Au fost efectuate experimente de hibridare pe parcursul a mai multor generaii precum i retroncruciri ntre hibrizi i plante de tip parental, pure din punct de vedere genetic. Oservaiile lui Mendel arat clar c temperatura mediului nconjurtor, umiditatea solului i cea atmosferic influeneaz creterea plantelor, dar c principalul factor determinator n exprimarea caracterelor rmne ereditatea. Monohibridarea Monohibridarea reprezint procesul de ncruciare (hibridare) a doi indivizi aparinnd aceleiai specii, puri din punct de vedere genotipic (homozigoi), deosebii ntre ei prin manifestarea fenotipic a unui singur caracter. J.Gr. Mendel a utilizat, pentru monohibridare, dou soiuri de mazre, pure din punct de vedere genotipic, ce prezentau caractere stabile i care se deosebeau prin culoarea tegumentului la boabe: unul cu boabe de culoare galben i altul cu boabe de culoare verde. n prima generaie hibrid, notat cu F1 (adic prima generaie filial - n latin filius, filia = fiu, fiic), a obinut numai plante cu boabe de o singur culoare - galben, n experimentul de acest tip. Plantele ce reprezint generaia parental (desemnat n tabele i grafice cu simbolul P), sunt cele ce au fost supuse castrrii i polenizrii artificiale, iar boabele aprute pe ele reprezint generaia filial, hibrid (desemnat prin F1). O prim constatare a lui Mendel a fost c toi hibrizii din F1 (prima generaie) aveau o singur culoare a boabelor. Experimentnd pe aceeai specie cu alt caracter, de pild forma boabelor (netede i zbrcite), a constatat c n F1 toi indivizii aveau boabe netede. Pe baza acestui experiment, Mendel a enunat principiul uniformitii hibrizilor n F1.

Perpetund respectivii hibrizi prin autofecundare, n de-a doua generaie, Mendel a constatat reapariia fenotipurilor parentale (reapariia expresiilor fenotipice etalate de cei doi prini), n raport de aproximativ 3:1. n consecin, a fost enunat cel de-al doilea principiu - segregarea hibrizilor n F2. Mendel a precizat c n F1 se manifest fenomenul de dominan i recesivitate, n sensul c este etalat doar caracterul dominant, cel recesiv rmnnd ascuns. Prin simboluri, experimentul efectuat de Mendel poate fi reprezentat astfel: Prinii Galben() x Verde() Hibridare Gameii () x () F1 Galben() Autofecundare Gameii () i () () i () F2 1 galben ()+2 galben ()+1 verde() Segregare 3:1 fenotipic Segregare 1:2:1 genotipic Schema ... Dinamica fenotipurilor i genotipurilor n monohibridare Prin bulinele negre s-a redat factorul ereditar dominant (care determin culoarea galben a bobului), iar prin bulinele albe s-a redat factorul ereditar recesiv (care determin culoarea verde a boabelor) Mendel a ncercat s interpreteze i s-i explice rezultatele obinute. ntruct, la acea vreme, nu se cunotea nimic despre cromosomi i gene (substratul material al informaiei ereditare), Mendel a folosit termenul de factori ereditari i a presupus, cu o extraordinar intuiie, c n fiecare celul a organismului factorul ereditar determinant al unui caracter se afl n doz dubl, n timp ce n celulele sexuale se afl n doz simpl. Schematic: Prinii Gameii F1 Gamei Produi n F1 F2 Segregare genotipic Segregare fenotipic X aa X a Aa Autofecundare sau hibridare de tipul frate x sor A i a A i a AA 2Aa aa 1 2 1 3:1
Schema.... Dinamica factorilor ereditari n gamei i n hibrizi

AA A

Prin A se desemneaz factorul ereditar dominant i prin a factorul ereditar recesiv. Apoi Mendel a precizat c, dup fecundare i formarea zigotului, factorii ereditari nu se contopesc, ci doar se altur. n consecin, cnd se formeaz din nou gameii, ei se vor despri, fiecare trecnd ntr-un gamet. Astfel, conchide Mendel, gameii sunt puri din punct de vedere genetic. Aceasta este considerat prima lege elaborat de Mendel, supranumit: LEGEA PURITII GAMEILOR.

Dihibridarea Mendel a recurs i la ncruciarea de indivizi care se deosebeau prin expresia fenotipic a dou caractere - culoarea i respectiv forma boabelor. El a ncruciat mazre cu boabe netede i galbene cu mazre cu boabe zbrcite i verzi. n F1, ca i la monohibridare, toi indivizii au fost uniformi, avnd boabe netede i galbene. S-au manifestat fenomenele de dominan i recesivitate. n F2 a avut loc segregarea independent a caracterelor, fiind posibil recombinarea acestora i apariia de noi fenotipuri. Att forma ct i culoarea boabelor a segregat n raport de 3:1. n plus, au aprut i noi combinaii de caractere- boabe netede i verzi, pe de o parte, i boabe zbrcite i galbene, pe de alt parte. Iat cum poate fi redat, schematic, procesul: Prinii Gameii F1 Gameii hibrizilor din F1 AB Ab aB ab AABB AB AaBb AB AABB AABb AaBB AaBb X aabb X ab Autofecundare sau hibridare de tipul frate x sor Ab aB ab AABb AAbb AaBb Aabb AaBB AaBb aaBB aaBb AaBb Aabb aaBb aabb

Hibrizii din F2 care segreg, fenotipic, n raportul 9:3:3:1 i genotipic n raportul 1:1:2:2:4:2:2:1:1 Schema 2.3. Dinamica genotipurilor i fenotipurilor, n F1 i F2, n dihibridare Prin A i B, s-au redat factorii ereditari dominani (determinani ai culorii galbene i ai formei netede a bobului), iar prin a i b, s-au redat factorii ereditari recesivi (determinani ai culorii verzi i ai formei zbrcite a bobului). Examinnd tabelul, constatm c pe diagonala stnga sus - dreapta jos sunt plasai numai indivizi homozigoi (dominani n ambele caractere, recesivi n ambele caractere sau dominani ntr-un caracter i recesivi n cellalt). Pe diagonala stnga jos dreapta sus sunt plasai numai indivizi heterozigoi (n ambele caractere), pe diagonalele mici avem heterozigoi ntr-un singur caracter (de fiecare dat altul fiind homozigotul dominant i altul homozigotul recesiv) etc.. Prin urmare, din punct de vedere al constituiei ereditare, n hibridare, prin autofecundarea hibrizilor din generaia F1, ntlnirea probabilistic a celor patru categorii (tipuri) diferite de gamei, asigur formarea a 16 descendeni, a cror constituie genetic este de 9 tipuri i anume: 1/16 dublu homozigot dominant, 1/16 dublu homozigot recesiv, 2/16 homozigoi dominani pentru caracterul culoare i heterozigoi pentru form, 2/16 cu acelai raport de homozigoie/heterozigoie dar pentru cellalt caracter, 4/16 indivizi heterozigoi n ambele caractere, 1/16 homozigoi n ambele caractere dar unul recesiv, cellalt dominant, 1/16 cu

cellat caracter dominant (ambele homozigote), 2/16 indivizi heterozigoi pentru culoare i homozigoi recesivi pentru form i 2/16 indivizi homozigoi recesivi pentru culoare i heterozigoi pentru form. Sub aspect fenotipic, situaia se prezint astfel: 9/16 indivizi dominani (cu boabe galbene i netede), 3/16 dominani ntr-un caracter (boabe galbene i zbrcite), 3/16 dominani n cellalt caracter (boabe netede i verzi) i 1/16 indivizi recesivi n ambele caractere (boabe verzi i zbrcite), cum ester redat n tabelul urmtor: Genotipul Rata genotipurilor Rata fenotipurilor AABB 1 9 AABb 2 AaBB 2 AaBb 4 Galben i zbrcit Aabb 1 3 Aabb 2 Verde i neted aaBB 1 3 aaBb 2 Verde i zbrcit aabb 1 1 Tabelul.... Rata fenotipurilor i rata genotipurilor, n dihibridare, la mazre. Se impune, deci, o concluzie: n dihibridare, caracterele segreg independent unul de altul. Aceasta este, de fapt, cea de-a doua legitate stabilit de Mendel LEGEA SEGREGRII INDEPENDENTE A CARACTERELOR.. Trebuie specificat c tipurile parentale de gamei sunt dependente de numrul de factori ereditari implicai n hibridare. Vor aprea 2n tipuri de gamei, n fiind din numrul de factori ereditari aflai n stare heterozigot. Spre exemplu, dac avem un factor ereditar pentru culoarea galben i unul pentru cea verde, n=2/2 =1. Deci, 21=2, vom avea 2 tipuri de gamei. Recurgnd la o simbolistic universal, n care notm determinantul unui caracter cu A pentru expresia dominant i a pentru cea recesiv, cellalt determinant cu B i b etc., conform relaiei matematice precizate situaia se va prezenta astfel: - n cazul monohibridrii, prinii vor fi AA i aa, cu gameii A i respectiv, a. Hibridul va fi Aa, cu gameii A i a. - n cazul dihibridrii, prinii AABB i aabb vor avea gamei de tipul AB i ab, hibridul fiind AaBb. De data aceasta ns, avnd n vedere legea segregrii independente a caracterelor, gameii vor fi AB, ab, Ab i aB (deci, 2n=22=4 tipuri de gamei). Fenotipul Galben i neted

Universalitatea legitilor descoperite de Mendel Cercetri similare celor efectuate de Mendel au vizat i alte specii, inclusiv omul. Un exemplu n acest sens l constituie ncrucirile dintre cobai de culoare diferit: tipul slbatic, de culoare gri i tipul albinos (aprut prin mutaie). n hibridarea dintre o femel de tip albinos (cu blana de culoare alb), cu un mascul slbatic (cu blana de culoare gri), indivizii din generaia F1 (puii din prima generaie) aveau

n totalitate blana de culoare gri. Indivizii din F1, ncruciai ntre ei, au dat generaia F2, n care s-a produs segregarea celor dou fenotipuri n raportul de 3 gri: 1 alb, adic 3: 1. n F1 s-au manifestat dominana i recesivitatea. n consecin hibrizii erau uniformi (sub aspect fenotipic). n F2 s-a produs segregarea, fenotipic, n raportul de 3 dominant la 1 recesiv Evident, ca i la mazre, fenomenul a fost explicat pe baza legii puritii gameilor. n concluzie, legile descoperite de Mendel au caracter de universalitate, fiind aplicabile i deci valabile, pentru plante i animale, inclusiv pentru om. Interpretarea matematic a legilor descoperite de Mendel Fiind i matematician, Mendel a aplicat teoria i calculul probabilistic pentru interpretarea rezultatelor experimentelor sale, preocupat fiind de estimarea probabilitii obinerii de rezultate similare n cazul repetrii experimentelor. n cazul ncrucirii a dou soiuri diferite ntre ele prin expresia fenotipic a unui caracter, n prima generaie hibrid se obin exclusiv heterozigoi: AA x aa = Aa. Dei fenotipic indivizii sunt uniformi i manifest trstura dominant, genotipic ei conin ambii factori ereditari (de aici numele de heterozigoi). n descenden, aceste organisme heterozigote produc dou categorii de gamei (A i a), n proporie egal. ntlnirea probabilistic a celor dou tipuri de gamei duce la apariia a dou categorii de fenotipuri (dominant si recesiv) i a trei categorii de genotipuri (25% AA homozigot dominant, 25% aa homozigot recesiv i 50% Aa heterozigot cu manifestare dominant). Genotipic deci, raportul este de 1: 2: 1. Fenotipic, innd cont de faptul c AA i Aa au aceeai manifestare, raportul de segregare este de 3: 1, conform tabelului . Gameii A=50% A=50% A=50% AA=25% Aa=25% a=50% Aa=25% aa=25%

Tabelul.. . Probabilitatea apariiei genotipurilor i fenotipurilor n monohibridare. n cazul dihibridrii, Mendel a constatat c n F2, pentru caracterul forma bobului, din boabe erau fenotipic dominante (n experimental efectuat de el, 432 din 556 erau netede) i erau fenotipic recesive (adic 133 din 556 erau zbrcite). Pentru caracterul culoare a obinut aproximativ aceleai raporturi adic 416 din 556 erau galbene i 140 din 556 erau verzi. Fenotipurile reprezentnd cele dou caractere(neted i zbrcit pentru form, galben i verde pentru culoare) segreg independent. Pe baza rezultatelor obinute, conform modelului matematic ce ia n calcul ansa combinrii a dou fenomene independente, egal cu produsul probabilitilor lor separate (3/4+1/4)(3/4+1/4), Mendel a estimat c 9/16 din boabe vor fi netede i galbene (adic x = 9/16), 3/16 vor fi netede i verzi (3/4 x = 3/16), 3/16 zbrcite i galbene (3/4 x = 3/16) i 1/16 zbrcite i verzi (1/4 x = 1/16).

O alt problem ce-i poate gsi rezolvarea prin calcule matematice este aceea a noilor combinaii de gene la hibrizi. Pentru facilitarea nelegerii celor ce vor fi prezentate n continuare, relum unele precizri anterioare. n dihibridare, trihibridare etc., se produc recombinri de factori ereditari, pe baza apariiei gameilor recombinai. Astfel, hibridarea dintre un individ AABB i unul aabb determin (n F1) apariia heterozigoilor AaBb. Acetia vor da 4 tipuri de gamei, i anume: AB i ab de tip parental i Ab, aB de tip recombinat. Dac se noteaz cu p procentul de recombinare, nseamn c gameii Ab i aB au, fiecare n parte, frecvena de p/2. Implicit, fiecrui tip de gamei nerecombinai i revine frecvena de (1-p)/2. n consecin, se poate calcula frecvena celor patru tipuri de descendeni, adic frecvena recombinrilor. Gameii AB (1 p)/2 Ab p/2 aB p/2 ab (1-p)/2 AB (1-p)/2 (1-p)2/4 AABB p(1-p)/4 AABb p(1-p)/4 AaBB (1-p)2/4 AaBb Ab p/2 p(1-p)/4 AABb p2/4 AAbb p2/4 AaBb p(1-p)/4 Aabb aB p/2 p(1-p)/4 AaBB p2/4 AaBb p2/4 aaBB p(1-p)/4 aaBb ab (1-p)/2 (1-p)2/4 AaBb p(1-p)/4 Aabb p(1-p)/4 aaBb (1-p)2/4 aabb

Tabelul .... Calculul frecvenei recombinrii genice.

n continuare, se poate calcula frecvena fiecrui fenotip recombinat. Spre exemplu, fenotipul Ab va avea frecvena: p2/4 + p(1-p)/4 + p(1-p)/4 = (2p-p2)/4 = p(2-p)/4. Pe de alt parte, dac se cunoate frecvena recombinrii se poate calcula frecvena fenotipurilor parentale. De pild, dac frecvena recombinrii este de 20%, adic p=0,2, fenotipul Ab fiind p(2-p)/4, rezult 0,09 adic 9%.

Abateri de la principiul dominanei i recesivitii din F1 i de la raportul de segregare de tip mendelian din F2 Aa cum am precizat i demonstrat n paginile anterioare, pe baza experimentelor de hibridare ntre diferite soiuri ale speciei Pisum sativum L., Mendel a demonstrat existena uniformitii hibrizilor n F1 , segregarea caracterelor n descendena hibrizilor de F1 i segregarea independent a caracterelor (n cazul hibrizilor pentru mai mult dect un caracter). Ulterior, prin experimente i observaii efectuate n hibridri la alte specii de plante sau animale, s-a ajuns la concluzia c exist abateri de la principiul dominanei i

recesivitii fenotipurilor parentale n F1 i de la raportul de segregare din F2 sau, altfel spus, c exist alte tipuri de segregare (fa de tipul mendelian). Este evident c abaterile de la tipul mendelian de segregare se datoreaz manifestrii altor tipuri i raporturi de dominan/recesivitate. n mod normal, determinismul profund al unui caracter se datoreaz activitii unei gene. Dar, sub impactul factorilor de mediu, o gen se poate transforma ntr-o alel (prin mutaie). De obicei, genele domin asupra alelelor, n sensul c la heterozigoi se manifest fenotipul datorat genei, i numai la homozigoii recesivi, la haploizi i n cazul hemizigoiei se manifest fenotipul determinat de alela recesiv. Abaterile de la aceste reguli induc modificri ale fenomenului dominan/recesivitate i schimbri n raporturile de segregare. Dominana incomplet (semidominana) Recurgnd la o simbolistic general i unificatoare, putem nota o gen oarecare cu A i alela ei, rezultat prin mutaie, cu a. n cazul hibridrii AA x aa va rezulta individul Aa, heterozigot. Aa cum precizam, de obicei A domin pe a, fenotipul heterozigotului Aa fiind identic celui al homozigotului AA. Sunt ns i cazuri n care AA Aa. Un exemplu, devenit clasic de acum, este cel al hibrizilor dintre varieti de Mirabilis jalapa, observat n experimentele efectuate de C. Correns (n 1912). ncrucind varietatea cu floare de culoare roie, cu varietatea avnd flori de culoare alb, n F1 s-au obinut indivizi uniformi dar toi cu flori roz. ncrucind aceti indivizi ntre ei, n F2 s-au obinut indivizi cu flori roii (25%), cu flori roz (50%) i cu flori albe (25%) (deci un raport de segregare de 1:2:1, heterozigoii fiind fenotipic diferii de ambii homozigoi). n F3 indivizii din F2 care aveau flori roii, interncruciai, au dat doar descendeni cu flori roii, cei cu flori albe, doar descendeni cu flori albe, iar descendena celor cu florile roz a segregat n continuare, n raportul de 1:2:1. R x A R x r R + r+ A 25% 50% R 100% R 25% r 50% A 25% R = rou r = roz A = alb

25% A 100%

n acest caz (al motenirii culorii florii), absena dominanei este explicat prin mecanismele metabolice ale formrii pigmentului rou. Pigmentul se formeaz printr-o succesiune de reacii enzimatice. Exemple de manifestare a semidominanei pot fi date pentru multe alte specii de plante sau animale. De pild, n ncruciri ntre soiuri de Zea mays cu bob albastru i cu bob galben, n F1 rezult indivizi cu bob violaceu. n F2 segregarea este de 1 albastru: 2 violet: 1 galben. n literatura de specialitate, pentru segregarea de acest fel se folosete expresia "segregare de tip Zea" (1:2:1), tocmai spre a o deosebi de segregarea tipic (tip Pisum, 3:1). n lumea animal, un exemplu bine cunoscut de semidominan este cel referitor la rezultatul hibridrii ntre o ras de gini cu penajul negru i o ras cu penajul alb, hibridare n urma creia rezult tipul Andaluzia, cu penajul de culoare albstruie. n F2, din ncruciarea ntre indivizi ai tipului Andaluzia, iau natere indivizi cu penaj negru (25%), indivizi tip Andaluzia (50%) i indivizi cu penaj alb (25%). Evident, tipul Andaluzia nefiind constant, nu se poate vorbi de rasa Andaluzia (rasele la animale i soiurile la plante trebuie s fie stabile ereditar).

Codominana Codominana reprezint un fenomen genetic complex datorat n esen, polialeliei. Cel mai elocvent exemplu este furnizat de situaia grupelor sanguine umane, mai ales cele din sistemele AB0 i MN. n codominan se constat un comportament difereniat al alelelor, n sensul c unele dintre ele se afl n raport de dominan i recesivitate, n timp ce altele sunt codominante, n sensul c au "trie" egal i contribuie n mod egal la fenotipizarea unui nou caracter. Cunoaterea grupei sanguine a unui individ este extrem de important, din dou considerente - medical i juridic. Sub aspect medical, cunoaterea grupelor sanguine este obligatorie n cazul transfuziilor. Dac ne referim la sistemul AB0, oamenii aparin la patru grupe sanguine, notate cu A, B, AB i 0 (zero). Grupele de snge din sistemul AB0 pot fi redate schematic, astfel:

Fenotip

Genotip

A B

IAIA i IAI0 sau LALA i LAl IBIB i IBI0 sau LBLB i LBl

Antigen (polizaharid de pe globulele roii) A B

Anticorp (proteina din serul sanguin) Anti B () Anti A ()

AB 0

IAIB sau LALB I0I0 sau ll

A+B -

anti A()+anti B()

Tabelul ... Grupele de snge din sistemul ABO

n situaia n care antigenul A vine n contact cu anticorpul (adic, globulele roii de la un individ din grupa A cu serul sanguin al unui individ din grupa B), anticorpul (proteina) se leag la antigen (polizaharid) i l inactiveaz. Concomitent, se produce agregarea (aglutinarea) globulelor roii. n consecin, transfuziile de snge pot fi efectuate doar n sensul 00 / \ AA BB \ / AB AB Grupa 0 este donator universal, iar grupa AB este primitor universal. Grupa A poate dona grupei A i AB i poate primi de la A i 0. Grupa B poate primi de la B i 0 i poate dona grupei B i AB. Fiind genic determinate, evident, grupele sanguine sunt ereditare. Cele trei alele LA, LB i l ocup acelai locus pe cromosomii omologi. Alela LA prezint mai multe mutaii, dou dintre ele fiind mai frecvente - LA1 i LA2, ntre ele fiind un raport de dominan (LA1 domin pe LA2). n consecin, fenotipic, grupele sanguine din sistemul AB0 sunt A1, A2, B, A1B, A2B i 0, conform tabelului: Tot n cazul speciei umane mai exist un sistem de grupe sanguine i anume sistemul M N, cu grupele M, N i MN. Fr ndoial, innd cont de raportul de dominan, codominan i recesivitate dintre alelele precizate, este simplu s se prevad grupele de snge posibile ale descendenilor. n cazul n care se cunosc grupele sanguine ale prinilor (i invers), se pot stabili relaiile de paternitate i filiaie, cu repercusiuni pentru demersuri medico-legale i juridice. De pild, doi prini cu fenotipul 0 nu vor putea da natere dect la copii cu acelai fenotip (ll x ll = ll). Doi prini din grupa B, dac vor fi heterozigoi, vor putea da natere la copii din grupele B sau 0 (LBl x LBl = LBLB, LBl i ll) etc..

Supradominana Reprezint fenomenul datorit cruia heterozigoii depesc ambii prini n fenotipizarea unor caractere (mai ales cantitative, cum ar fi habitusul, productivitatea etc., inclusiv viabilitatea), ca o component a capacitii de a da rspunsuri adecvate la presiunea seleciei. Schematic, supradominana poate fi redat astfel: AA < Aa > aa

10 8 6 4 2 0 AA Aa aa

Figura.... Fenotipizarea hibridului Aa intermediar comparativ cu prinii

Se apreciaz c n supradominan sunt implicate mai multe gene cu caliti aditive. n mod frecvent, supradominana reprezint rezultanta interaciunii a dou alele, rezultant ce face ca heterozigoii s se situeze n afara amplitudinii de variabilitate a fiecruia dintre cei doi homozigoi. n condiii normale de dominan i recesivitate, cel mai bun genotip este homozigotul dominant, toi indivizii unei populaii putnd fi adui, prin selecie, n stare homozigot.
15 10 5 0 AA Aa aa

Figura ... Fenotipizarea hibridului Aa n supradominan

Gene letale O alt cauz a modificrii raportului mendelian de segregare n descendena hibrizilor din F1 o constituie prezena genelor letale. Noiunea de de gen letal a fost introdus de L. Cunot (1911). El a observat c ncrucind oareci de culoare galben, ntotdeauna n descenden rezult un amestec de indivizi de culoare galben i de alt culoare, n raport de 2: 1. Rezultatele au impus dou concluzii. n primul rnd, faptul c descendena segreg nseamn c oarecii galbeni sunt heterozigoi. n al doilea rnd, segregarea fiind continuu n raport de 2: 1 i descendena indivizilor de culoare galben segregnd mereu, nseamn c o parte dintre descendenii indivizilor de culoare galben i anume cei homozigoi (a cror descenden ar trebui s nu segrege), nu iau natere. Prin urmare, gena dominant n stare homozigot este letal. Aceasta a fost presupunerea lui Cunot. Sacrificarea femelelor gestante a confirmat aceast

presupunere, deoarece s-au identificat embrioni mori care corespundeau ca numr procentului indivizilor necesari pentru asigurarea raportului de segregare 3: 1. Dac notm gena pentru culoarea normal a blnii cu a i mutanta care determin apariia culorii galbene cu Ay (Y de la cuvntul englezesc yellow = galben), situaia se va prezenta astfel: - indivizi galbeni heterozigoi au genotipul Aya. Prin ncruciarea lor rezult: Aya x Aya = AyAy (25%) + 2Aya (50%) + aa (25%) nseamn c, n mod continuu, indivizii AyAy mor n stare embrionar. Genele letale pot fi identificate dup gradul manifestrii lor (n genetic se folosete termenul de penetran) i anume: a. gene letale propriu-zise, cu penetran de 100%, care produc moartea tuturor descendenilor; b. gene semiletale, cu penetran de 50%, avnd ca rezultat moartea a circa 50% dintre indivizi; c. gene subvitale, cu penetran de 30% i procent similar de inducere a letalitii. O alt clasificare a acestor gene se face pe criteriul stadiului ontogenetic n care i instaleaz efectul. Din acest punct de vedere, ele pot fi: a. gene letale gametice sau haplofazice, care determin moartea gameilor; b. gene letale zigotice sau diplofazice, care determin dispariia zigotului (deci fecundarea are loc, dar zigotul nu este viabil); n funcie de cromosomii pe care sunt plasate, genele letale pot fi: a. autosomale (plasate pe autosomi); b. heterosomale (plasate pe heterosomi, adic pe cromosomii sexului). Fenomenul letalitii genice nu este caracteristic doar animalelor, ci a fost descris i la plante. Spre exemplu, la Zea mays (porumb) s-au identificat 15 gene diferite care, n stare homozigot, blocheaz formarea clorofilei i, n final, fotosinteza. Plantele de acest tip ajung albinotice i, fiind incapabile de asimilaie, pier. Evident, dac am dori s ncadrm aceste gene n una din clasificrile anterioare, le-am plasa n categoria genelor subletale, deoarece provoac dispariia organismului purttor abia anterior atingerii stadiului de maturitate sexual.

Interaciunea genelor Este un alt fenomen care determin modificarea raportului de segregare i chiar apariia de noi fenotipuri n descendena hibrizilor din F1. Interaciunea genelor a fost constatat la ncruciarea dintre dou rase de gini, ambele albe: Leghorn i Wyandotte. Prin experimente i observaii multiple s-a demonstrat c la rasa Leghorn culoarea alb este dominant, n timp ce la rasa Wyandotte este recesiv. n consecin, dac rasa Leghorn este ncruciat cu o ras de culoare nchis, F1 va fi de culoare alb. Dac se ncrucieaz indivizi ai rasei Wyandotte cu indivizii unei rase

colorate, indivizii din F1 vor fi, n totalitate, colorai. Prin urmare, la cele dou rase, Leghorn i Wyandotte, culoarea alb a penajului este determinat de gene diferite, nealele. Se consider c Leghorn la origine avea penajul colorat (CC; C = simbolul pentru gena determinant a culorii, de la cuvntul englezesc colour = culoare). Exprimarea genelor determinante ale culorii este blocat ns de alt gen inhibitoare (II; I = simbolul pentru respectiva gen, de la cuvntul englezesc inhibitory = inhibitor). Deci, genotipic, rasa Leghorn este CCII. Rasa Wyandotte de culoare alb (ca i rasele White, Plymonth etc.) dar recesiv, are genotipul ccii. Prin ncruciarea dintre cele dou rase CCII x ccii, rezult hibrizii din F1, de culoare alb, cu genotipul CcIi. Acetia formeaz gameii CI, cI, Ci, ci i prin ncruciare dau hibrizii din F2, conform tabelului. . Gam CI Ci cI ci e-ii CI CCII CCIi CcII CcIi Alb Alb Alb Alb Ci CCIi CCii CcIi Ccii Alb Colorat Alb Colorat cI ci CcII Alb CcIi Alb CcIi Alb Ccii Colorat CcII Alb CcIi Alb ccIi Alb ccii Alb

Tabelul ... Segregarea culorii, n F2, la hibrizii obinui ntre rasele de gini Leghorn i Wyandotte

Prin urmare, raportul de apariie a indivizilor cu penaj colorat este de 3/16. Genotipul lor conine gena inhibitoare n stare recesiv homozigot, iar gena pentru culoare, n stare dominant, homozigot sau heterozigot. Fenomenul se numete epistazie, iar gena inhibitoare, a crei aciune mpiedic manifestarea aciunii genei pentru culoare, se numete epistatic. Gena inhibat se numete hipostatic.

x Ras neagr Rasa Leghorn

= F1

x Ras neagr Rasa Wyandotte

= F1

x Rasa Leghorn Rasa Wyandotte

= F1

+ F2
Figura . Rezultatele ncrucirilor dintre o ras cu penaj de culoare neagr i rasele Leghorn i Wyandotte, precum i ale ncrucirii dintre Leghorn i Wyandotte

Polialelia sau alelia multipl Gena, care este responsabil de determinarea unui caracter, ocup o poziie bine definit pe un cromosom (ocup un locus). Orice gen, pe parcursul existenei ei, a putut suferi una sau mai multe mutaii. n consecin, pentru o gen au putut aprea una sau mai multe alele (n limba greac, alelon = altul). Rezult deci, cu claritate, c o alel sau o serie de alele ale unei gene sunt implicate n determinismul aceluiai caracter (evident, asigurndu-i fenotipizri diferite) i ocup acelai locus n cromosomul omolog (adic, n poziia din cromosomul n care se gsete gena). Evident, din acest punct de vedere, o gen poate avea o alel sau mai multe (A poate avea alelele a1,a2,..,an), dar un individ nu poate avea dect 3 stri posibile (AA, Aa sau aa, sau alte combinaii care s desemneze statutul de homozigot recesiv sau heterozigot). ntr-o populaie ns, genotipic i, bineneles, fenotipic, poate exista o multitudine de indivizi,cu o multitudine de combinaii,att ntre gena slbatic i alelele ei, ct i ntre alele. Noiunea (termenul) de alel a fost introdus n tiin de W. Johannsen n anul 1909. Prin experiene de hibridare de tip mendelian se pot identifica alelele, se poate stabili raportul de segregare i se poate stabili tipul de relaii ntre o gen i alelele ei, adic, dac este dominan complet, semidominan etc.. Prin urmare, relund i analiznd n detaliu problema, rezult c ntr-o populaie, pentru o anumit gen, pot exista mai multe alele. Aa cum am precizat, acestea provin prin

mutaii succesive, fie ale genei normale, fie ale uneia sau unora dintre alele. ntruct notaia alelelor poate duce la confuzii, este bine s redm cteva dintre modalitile de desemnare (notare) a lor. La modul general, gena slbatic se noteaz cu A, iar alelele cu a1, a2, a3...an. Dar gena normal (slbatic) se mai poate nota i cu prima, primele sau un grup de litere din denumirea n englez a primei mutante (care a fost descoperit i descris) pentru caracterul respectiv, nsoit de indicele +, alelele fiind notate cu aceleai indicative, dar fr indicele +. O alt notaie prevede folosirea unei singure abrevieri, rezultat de la denumirea primei mutante, cu indicele + pentru gena slbatic i a aceleiai abrevieri, avnd mereu alt indice format din literele ce desemneaz mutantele decelate ulterior, pentru restul alelelor. S exemplificm. Culoarea normal a ochiului la Drosophila melanogaster este roie. Mutanta cu ochi albi se noteaz cu w (de la cuvntul englezesc white = alb). Gena salbatic, n acest caz, se noteaz cu w+. Alelele mutante, altele dect white, se noteaz cu we (eosin), wa (apricot), wch (cherry), wco (corai). Prin urmare, culoarea ochilor la drosofila cuprinde o gam larg de mutante ntre alb i rou. Fiecare nuan se datoreaz unei alele, fapt pentru care se consider c, la aceast musculi, exist un sistem polialelic, o serie alelomorf. n aceast serie alelomorf fenotipul slbatic este dominant, toate fenotipurile mutante fiind recesive. i ntre alelele mutante exist raporturi de dominan i recesivitate. Ordinea dominanei este determinat de intensitatea culorii ochilor, pe care o confer o alel. Prin urmare, alela w, care determin culoarea alb a ochilor (deci, lipsa complet a pigmentului) este recesiv, n raport cu toate celelalte alele. n final, referitor la polialelie putem sublinia cteva particulariti, i anume: - polialelele ocup acelai locus n cadrul unui cromosom (grup de linkage); - polialelele fiind, de fapt, mutante ale unei singure gene, afecteaz ntotdeauna acelai caracter. n ncruciare ntotdeauna domin gena slbatic. Concomitent, unele alele sunt dominante fa de altele. De aceea, cnd se ncrucieaz doi indivizi alelici, n F1 nu apare tipul slbatic, ci domin unul dintre genitori. Sunt i situaii n care una dintre alele domin asupra tipului slbatic. Este cazul animalelor agouti i al unor culori sau forme de ochi la Drosophila melanogaster.

Poligenia sau polimeria Vizeaz mai ales expresia fenotipic a caracterelor cantitative (nlime, greutate, producie de fructe sau semine, producie de alcaloizi, vitamine, uleiuri etc.). nc din secolul XVIII, prin experimentele sale de hibridare, J. Klreuter a constatat c hibrizii din F1 rezultai din ncruciarea ntre Nicotiana tabacum pitic i Nicotiana tabacum nalt, aveau nlimea intermediar. n F2 aprea o segregare gradual, n sensul c se identific o adevrat scar a indivizilor, de la cel pitic, pn la cel nalt. Cercetrile efectuate de suedezul H. Nilson Ehle pe gru i americanul E. M. East pe porumb, ntre anii 1910-1913, au permis descoperirea fenomenului poligeniei. n urma acestor cercetri s-a conchis c determinismul caracterelor cantitative este poligenic, n sensul c ele sunt determinate de mai multe gene nealele. Segregarea genelor nealele este independent (ca i caracterele independente), doar efectul lor fiind cumulativ.

Un exemplu tipic de efect cumulativ ni-l furnizeaz manifestarea culorii pielii la om. Culoarea pielii n cazul omului este determinat de coninutul de melanin, care variaz ntre 0 - 11% pentru rasa alb, 12 - 25% la mulatrii deschii, 25 - 40% la mulatrii adevrai, 41 - 55% la mulatrii de culoare nchis, 56 - 78% la rasa negroid. Prin cstoria ntre un individ din rasa alb (europoid) i unul din rasa neagr (african), n F1 rezult indivizi de tip mulatru (relativ uniformitate). Prin cstoria ntre mulatri, n F2 se obine o segregare de 1 alb: 4 mulatri deschis: 6 mulatri propriu-zis: 4 mulatri nchis: 1 negru. Pentru a explica acest raport, C.B. Davenport, care a studiat problema (mai ales, n Jamaica i insulele Bermude), a considerat c n apariia culorii pielii sunt implicate dou perechi de gene cu alelele lor - P1p1 i P2p2. Negrii au genotipul P1P1P2P2, iar albii p1p1p2p2. Din cstoria alb x negru, rezult: P1P1P2P2 x p1p1p2p2 F1 P1p1P2p2 Cstoria ntre mulatri induce apariia a mai multe tipuri de indivizi n F2, i anume: Gameii P1P2 P1p2 p1P2 p1p2 P1P2 P1P1P2P2 Negru P1P1P2p2 Mulatru nchis P1p1P2P2 Mulatru nchis P1p1P2p2 Mulatru P1p2 P1P1P2p2 Mulatru nchis P1P1p2p2 Mulatru P1p1P2p2 Mulatru P1p1p2p2 Mulatru deschis p1P2 P1p1P2P2 Mulatru nchis P1p1P2p2 Mulatru p1p1P2P2 Mulatru p1p1P2p2 Mulatru deschis p1p2 P1p1P2p2 Mulatru P1p1p2p2 Mulatru deschis p1p1P2p2 Mulatru deschis p1p1p2p2 Alb

Tabelul... Fenotipurile i genotipurile aprute prin cstoria ntre mulatri.

Dac se face un back-cross ntre un alb p1p1p2p2 i un mulatru P1p1P2p2, descendenii vor fi: 25% P1p1P2p2; 25% p1p1p2p2 i 50% mulatri, intermediari ntre prini (adic P1p1p2p2 i p1p1P2p2). Retroncruciarea unui negru P1P1P2P2 cu un mulatru P1p1P2p2 induce apariia a 25% negri, 50% mulatri nchii, intermediari ntre cei doi prini i 25% mulatri. Davenport a conchis c acumularea cantitativ a pigmentului n piele este determinat de efectul cumulat al genelor P1 i P2 i al alelelor. Astfel, negrii au genele n stare homozigot, mulatrii nchii au o gen homozigot i celelalte n stare heterozigot (P1p1P2P2, P1P1p2P2), mulatrii propriu-zii sunt heterozigoi pentru ambele gene sau homozogoi pentru ambele, dar una n stare dominant i cealalt n stare recesiv (P1p1P2p2; P1P1p2p2; p1p1P2P2), mulatrii deschii au o singur gen dominant n stare heterozigot (P1p1p2p2 sau p1p1p2P2).

TEORIA CROMOSOMIAL A EREDITII (MORGANISMUL) Profesor la Universitatea Columbia, din New York, Thomas Hunt Morgan (18661945) a sintetizat ntr-o teorie unitar multitudinea cercetrilor din domeniul geneticii, elabornd ceea ce a rmas n tiin sub denumirea de "TEORIA CROMOSOMIAL A EREDITII". Morgan a fost primul care a introdus Drosophila melanogaster ca model experimental n genetic, fapt ce s-a dovedit a fi o alegere deosebit de inspirat. Ea crete uor n condiii de laborator, pe medii ieftine, n recipiente de mici dimensiuni, iar timpul necesar pentru o nou generaie este de circa 10 zile, la temperatura de 25oC i, n plus, este extrem de prolific. La nivelul multor esuturi ale larvelor de D. melanogaster exist un tip special de cromosomi, numii cromosomi uriai sau cromosomi politeni, care pot fi observai cu uurin la microscopul optic. ARGUMENTE PENTRU PLASAREA GENELOR (FACTORILOR EREDITARI) PE CROMOSOMI

Comportamentul cromosomilor s-a demonstrat a fi similar cu dinamica factorilor ereditari descris de Mendel. Argumentul imbatabil pentru considerarea cromosomului drept suport material al factorilor ereditari (pentru plasarea genelor pe cromosomi) l-au furnizat experimentele efectuate cu drosofila. S prezentm doar unul dintre ele. n experimentele efectuate de Mendel, utiliznd mazrea cu bobul galben i cea cu bobul verde, segregarea n F2 era aceeai, indiferent de culoarea printelui ales ca mascul i a celui ales ca femel. Nu acelai lucru se constat, ns, cnd se fac ncruciri reciproce ntre indivizii w+ i w de drosofila. Situaia a condus la concluzia c gena responsabil de manifestarea respectivului caracter este cantonat pe unul dintre cromosomii sexuali. Iat care sunt rezultatele n cele dou tipuri de ncruciare:

P F1

w+w+ w+w 50% w+y 25%

X X

wy w+y 50% wy 25%

+ cu ochi de culoare roie F2 w+w+ 25% 100% cu ochi roii; w+w 25%

50% ochi roii;50% ochi albi

Dinamica genotipurilor i fenotipurilor n ncruciri reciproce.

n ncruciarea reciproc: P F1 ww ww+ 50% cu ochi roii; F2

+

x x cu ochi albi

w+y wy 50% w+y 25%

ww ww wy 25% 25% 25% 50% cu ochi roii;50% cu ochi albi 50% cu ochi roii;50% cu ochi albi

Dinamica genotipurilor i fenotipurilor n ncruciri reciproce ntruct att masculii ct i femelele au trei perechi identice de autosomi, diferenele constnd n prezena heterosomilor pereche (XX) la femele sau nepereche (XY) la masculi, rezult c respectiva gen este plasat pe unul dintre cromosomii sexului i anume pe cromosomul X, deoarece femelele heterozigote se comport (fenotipic) asemenea celor homozigote dominante, n timp ce masculii (fiind hemizigoi) se manifest recesiv sau dominant, n funcie de tipul cromosomului X pe care l-au primit (cu gena slbatic sau cu alela mutant plasat pe el). Fenomenul, cunoscut i sub numele de sex linkage, se constituie n cauz pentru abaterea de la tipul mendelian de segregare. Un alt exemplu, care confirm ipoteza plasrii genelor pe cromosomi, l constituie asocierea dintre lipsa unui cromosom din perechea IV i lipsa ochilor, la aceeai insect. Prin urmare, pe un cromosom, ntr-un anumit loc, numit locus, se afl plasat o gen. Pe cromosomul omolog, n aceeai poziie, adic n acelai locus, se afl plasat aceeai gen sau una dintre alelele ei. PLASAREA LINIAR A GENELOR PE CROMOSOMI n paginile anterioare am demonstrat, fr dubii, c genele sunt plasate pe cromosomi. Dar, un calcul extrem de simplu ne arat c numrul de cromosomi este mult mai mic, fa de numrul caracterelor etalate de un individ. La Drosophila melanogaster de pild, s-au identificat mai multe sute de caractere i numai 8 cromosomi. innd cont de omologia cromosomilor, n fapt exist patru perechi i, avnd n vedere raportul de alelism al genelor, putem vorbi doar de 4 grupe de linkage ca entiti diferite. Deci, genele responsabile pentru cele cteva sute de caractere sunt cantonate n patru cromosomi, ntr-un cromosom existnd mai multe gene. Dar cum sunt ele plasate, n mod concret, ntr-un cromosom? i ce dovezi avem, totui, c mai multe gene sunt plasate n acelai cromosom? Argumentele pentru plasarea mai multor gene pe acelai cromosom aparin tot colii lui T.H. Morgan i au fost susinute de experimente extrem de simple i clare, totodat.

ncruciarea s-a derulat dup urmtoarea schem: P G F1 G F2 pr+ pr+ pr+ pr+ pr pr+vg+ pr+vg+ vg+ vg+ vg+ vg+ vg pr+vg+ pr vg X X X X pr+vg+ pr vg pr pr pr pr+ pr vg vg vg vg+ vg

pr+vg+ prvg

pr+vg+ prvg pr vg pr vg

Dihibridare, implicnd gene linkate, la Drosophila melanogaster

Segregare genotipic: 25% homozigot dominant + 50% heterozigot, + 25% homozigot, recesiv Segregare fenotipic: 75% dominant + 25% recesiv S-a efectuat o experien de hibridare (tip dihibridare), ntre indivizi de D. melanogaster ce difereau ntre ei prin culoarea ochilor i forma aripilor. Femela era fenotipic normal (pr+pr+vg+vg+), iar masculul dublu mutant - avea ochii purpurii (prpr) i aripile vestigiale (vgvg). n F1 s-au obinut doar indivizi fenotipic normali. Prin ncruciarea lor, n F2, n loc s se obin segregarea de tip mendelian, de 9:3:3:1, s-au obinut doar dou categorii de fenotipuri - 75% de tip parental dominant i 25% de tip parental recesiv. Deci, un raport tipic monohibridrii (adic 3 : 1). Prin urmare, se impune o prim concluzie. Cele dou caractere nu segreg independent. De aici supoziia c ele sunt plasate (genele ce le determin) pe acelai cromosom. Adic, pentru individul normal vom avea pr+ vg+, i pr wg pentru cel mutant. pr+ vg+ pr wg Pentru a elimina confuziile, precizm c cele dou gene sunt cantonate pe cromosomii perechii a II-a. Indicativul "pr" red mutanta purple (purpuriu, n englez). Prin urmare cele dou gene sunt localizate pe acelai cromosom i se transmit mpreun. Fenomenul este cunoscut, n genetic, sub numele de linkage (nlnuire, legare). Este, n fond, nu numai o abatere, ci o completare a legii segregrii independente a caracterelor, demonstrat de Mendel.

TRANSMITEREA NLNUIT A TUTUROR GENELOR PLASATE PE UN CROMOSOM (LINKAGE)

Autenticitatea linkage-ului a fost confirmat i prin retroncruciarea de tipul Testcross (FT). Adic, un individ din F1 (un mascul) se ncrucieaz cu unul dublu mutant (o femel). Se obin dou clase fenotipice i anume: 50% indivizi normali i 50% indivizi

dublu mutani. Precizm c este obligatorie respectarea sexelor indicate, deoarece masculul nu prezint fenomenul de crossing-over i, n consecin, rezultatele experimentului sunt constante. P(F1) G FT pr+ vg+ pr vg pr+ vg+, pr vg pr vg pr vg 50% Heterozigoi cu fenotip normal (dominant)
Rezultatele retroncrucirii
+ +

x x

pr vg pr vg pr vg

pr vg pr vg 50% Homozigoi cu fenotip recesiv(dublu mutant)

Deci, att genotipic (Sg), ct i fenotipic (Sf), segregarea este de 1:1. n consecin, cele 500 de gene identificate la Drosophila melanogaster au fost repartizate n patru grupe de linkage, corespunztoare celor patru perechi de cromosomi omologi. Se cuvine menionat faptul c mrimea unei grupe de linkage sau, altfel spus, numrul genelor plasate ntr-o grup este n concordan cu mrimea cromosomului. Astfel, grupa a IV-a de linkage, fiind plasat pe cromosomii perechii a IV-a (punctiformi), conine doar 12 gene. Ca o concluzie, general, menionm c la fiecare specie, numrul grupelor de linkage este identic cu numrul cromosomilor unui set haploid (genom). In conformitate cu teoria linkage-ului, atunci cnd dou gene segreg mpreun, nseamn c fac parte din aceeasi grup de linkage, iar cnd segreg independent (dup modelul mendelian) nseamn c fac parte din grupe diferite de linkage - adic sunt plasate pe cromosomi diferii. La Drosophila melanogaster a fost posibil i localizarea concret a fiecrei gene ntr-un anumit cromosom. Evident, au fost necesare nenumrate experimente de hibridare, n care se luau, succesiv, tot alte perechi de caractere (gene) i se nota cu meticulozitate comportamentul lor (dac segregau independent sau nu).

SEX-LINKAGE (TRANSMITEREA NLNUIT A GENELOR PLASATE PE HETEROSOMI) Aa cum am precizat deja, specia Drosophila melanogaster are patru grupe de linkage, adic are patru perechi de cromosomi. Mai exact drosofila are trei perechi de autosomi i doi heterosomi identici la femele (notai XX) i diferii la masculi (notai XY). Prin experimente proiectate i efectuate cu deosebit grij, T.H.Morgan i grupul su de cercettori au reuit s demonstreze c una dintre genele responsabile pentru

determinismul culorii ochilor este plasat pe heterosomul X (vezi harta genetic), rezultatele ncrucirilor ntre indivizi normali i indivizi mutani depinznd, ntotdeauna, de sexul mutantului.

CROSSING-OVER (SCHIMBUL RECIPROC DE GENE) Aa cum precizam n rndurile anterioare, nu ntotdeauna genele aparinnd aceluiai grup de linkage, se transmit mpreun. S-au constatat nenumrate excepii. n tentativa de a da explicaii adecvate abaterilor de la regul, Morgan i echipa sa au constatat c ntre cromosomii omologi poate avea loc un schimb reciproc de gene. Fenomenul a primit numele de crossing-over. Pentru genetic, au rmas clasice experimentele efectuate de Morgan i coala sa, n demonstrarea realitii i autenticitii schimbului reciproc de gene.

Crossing-over ntre cromosomii sexului Prin ncruciarea unei femele de Drosophila melanogaster, dublu mutant (cu dou mutaii recesive, ale genelor localizate pe cromosomul X, determinnd culoarea galben a corpului i culoarea alb a ochilor), cu un mascul normal, n F1 s-au obinut doar indivizi de dou tipuri - deci, o segregare de 1:1. Femelele erau cu fenotip normal, dar heterozigote i masculii cu fenotipizare mutant, dar hemizigoi genotipic. Fenomenul a primit denumirea de ereditate n cruci (criss-cross), deoarece fenotipul mamei se manifest la fii, iar cel al tatlui la fiice. Prin ncruciarea indivizilor femeli i masculi din F1, s-a constatat apariia, n F2, a patru clase de indivizi - dou clase conforme rezultatelor determinate de linkage i alte dou clase cu recombinare de caractere. Proporia era de 49,25% pentru fiecare dintre primele dou clase i de 0,75% pentru fiecare din clasele cu recombinare. Precizm c w reprezint mutanta pentru culoarea ochilor (ochi albi) i y reprezint mutanta pentru corp galben (de la cuvntul englezesc yellow), w+ i, respectiv, y+ reprezentnd genele normale. Deci, plecndu-se de la femele dublu mutante i masculi normali, n F1 s-a obinut o segregare fenotipic (Sf) de 1:1 i una genotipic (Sg) tot de 1:1, femelele fiind heterozigote, cu fenotip normal (dominant) i masculii hemizigoi, cu fenotip recesiv (mutant). Schematic, ncruciarea este redat astfel: Prini Gamei Xyw Xyw Xyw x x Xy+w+ Y Xyw, Y

F1 Gamei nerecombinai recombinai F2

Xyw Xy+w+ Xyw, Xy+w+ Xy+w, Xyw+ Xyw Xyw Xyw Y 49,75% Xy+w+ Xy+w+ Xyw Y 49,75% x Xy+w Xy+w Xyw Y 0,75%

Xyw Y Xyw, Y Xyw+ Xyw+ Xyw+ Y 0,75%

Crossing-ower ntre cromosomii sexului

Teoretic, gameii indivizilor de F1 trebuiau s fie doar de dou tipuri: la femele Xyw i X , iar la masculi Xyw i Y. Dar rezultatele ncrucirii indivizilor din F1, dnd un cu totul alt raport de segregare n F2 i, mai ales, dnd o categorie de indivizi cu recombinri de caractere, s-a ajuns la concluzia c a avut loc crossing-overul ntre cromosomii omologi i apariia a dou noi tipuri de gamei n cazul femelelor: Xy+w i Xyw+. Prezena acestor gamei explic apariia indivizilor cu fenotipuri recombinate, n F2. Acetia sunt att masculi, ct i femele, cu corp gri i ochi albi sau cu ochi roii i corp galben. Deci, ntre genele y+ i w+ i alelele lor, situate pe cromosomii X omologi, au avut loc schimburi, rezultnd noi grupe de linkage. Adic, din y+w+ i yw, au rezultat y+w i yw+, alturi de tipurile parentale care s-au meninut.
y+w+

Crossing-over ntre autosomi Un alt experiment, efectuat de Morgan i colaboratorii si, a demonstrat existena crossing-overului i ntre autosomi. ncrucind o femel de Drosophila melanogaster cu corpul negru (b - de la black) i aripi normale (vg+) cu un mascul cu corpul gri (b+) i aripi vestigiale (vg), n F1 s-au obinut indivizi heterozigoi b+bvg+vg, cu fenotipul normal. ncrucindu-se indivizii din F1 cu indivizi dublu mutani (ncruciare de analiz genetic), s-a constatat c n FT, fenotipul indivizilor difer n funcie de sexul lor. Astfel, dac se efectueaz o retroncruciare ntre un mascul din F1, heterozigot (b+bvg+vg) cu o femel mutant (bbvgvg), n FT se obine segregarea de 1:1, ca n experimentele pentru demonstrarea fenomenului linkage (adic reapar indivizii cu fenotip parental - corp negru i aripi normale i corp gri cu aripi vestigiale). Deci, linkage-ul este total. P G F1 G FT b vg+ b vg+ b vg+ b vg+ b+ vg b vg+, b+ vg b vg+ b vg x x x x b+ b+ b+ b b b b+ b vg vg vg vg vg vg vg vg

Sf Sg

1 1(bbvg+vg)

1 1(b bvgvg)
+

Retroncruciarea unui mascul heterozigot , cu o femela dublu mutant

Precizam anterior c, n acest caz, este vorba de autosomi - mai concret, de perechea a II-a de omologi. Atunci, cum se explic diferena de comportament dintre masculi i femele? S-a ajuns la concluzia c, n cazul masculilor de Drosophila melanogaster, cromosomii din perechea a II-a nu prezint fenomenul de crossing-over. Lipsa crossing-overului este valabil i pentru cromosomii sexului (la mascul), n sensul c ntre cromosomii X i Y nu se cunoate existena acestui fenomen. n ncruciarea reciproc (retroncruciare) dintre o femel hibrid de F1 (b+bvg+vg) i un mascul dublu mutant (bbvgvg), n FT, pe lng tipurile parentale (corp negru i aripi normale; corp gri i aripi vestigiale), mai apar nc dou clase fenotipice (care, n mod normal, nu trebuiau s apar: corp gri i aripi normale; corp negru i aripi vestigiale). ntr-o populaie suficient de mare, proporia indivizilor este de 41,5% pentru fiecare dintre tipurile parentale i cte 8,5% pentru fiecare dintre tipurile recombinante. Deci, linkage-ul genelor b+ i vg+ se deregleaz i respectivele gene "segreg", datorit schimbului reciproc de material cromatic ntre cromosomii omologi. Rezult c femelele din F1 pot forma patru tipuri de gamei - dou normale i dou recombinate, primii fiind numii gamei necrossing-overi, ceilali fiind gamei crossingoveri.

P G F1 GF1 FT segregare

b vg+ x b vg+ b vg+ x + b vg x b+ vg b vg+, b+ vg x i b+ vg+, b vg b vg+ b+ vg b vg b vg 41,5% 41,5% 83,0 % indivizi necrossing-overi

b+ b+ b+ b b b+ vg+ b vg 8,5%

vg vg vg vg vg

b vg b vg b vg 8,5% 17,0% indivizi crossing-overi

Tipurile de indivizi aparui, cu i fr crossing-over, n ncruciarea reciproc.

Redarea schematic a crossing-overului Rezumnd cele relatate pn aici, constatm c ntre doi cromosomi omologi, mai precis ntre cte una dintre cromatidele cromosomilor omologi, poate avea loc schimb de material, prin crossing-over simplu, dublu, triplu sau multiplu. Atunci cnd se produce o singur ruptur are loc un singur schimb de gene, in sensul c un segment cromatidic de lungimea uneia sau a mai multor gene i schimb poziia de pe un cromosom pe cellalt. Evident, teoretic, crossing-overul simplu, n functie de zona n care se produce, poate facilita schimbul a dou blocuri de gene, nu numai a unei gene.Dar, ntruct s-a produs doar o singur ruptur, evident este vorba de un crossing-over simplu. Crossing-overul dublu presupune dou rupturi care faciliteaz schimbul a dou gene, a dou blocuri de gene etc. Schematic, situaia poate fi redat astfel: ABCDEF aBCDEF AbCDEF AbCdef AbCdEF abcdef Abcdef aBcdef aBcDEF aBcDef Cromosomii omologi iniiali, redai Crossing-over Crossing-over Crossing-over Crossing-over printr-o simplu dublu triplu quadruplu singur cromatid
Tipuri de crossing-over

Mecanismele crossing-overului Pentru explicarea modalitilor concrete prin care se realizeaz crossing-overul s-au emis mai multe ipoteze, care pot fi grupate n dou mari categorii, i anume: I. Cele ce consider c fenomenul se datoreaz ruperii cromatidelor i schimbului reciproc de segmente (breakage theory). II. Cele ce consider drept cauz a fenomenului replicaia selectiv a cromatidelor n timpul dublrii materialului cromosomial (copy-choise theory). Schematic, situaia se red astfel:

Figura ...Schimb reciproc de segmente prin ruperea cromatidelor

II
Schimb reciproc de segmente cromatidice prin copiere selectiv