Ecosistemas - Vol 18 I. Ecología Molecular

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009. http://www.revistaecosistemas.
net/
Ao 18 N 1 / 2009 Enero - Abril
Ecologa Molecular
Editorial Invitada: Ecologa y genes Revisiones: Genes y especies La huella gentica de la seleccin natural Gentica de comunidades La gentica, los marcadores moleculares y la conservacin de especies Aplicaciones de protemica en ecologa y evolucin Marcadores moleculares y ecologa del movimiento La parasitologa ecologca en la era de la gentica molecular 3 10 17 23 34 44 52 1
Fragmentacin del bosque y prdida del hbitat de helechos amenazados en el Parque Natural Fragas do Eume (NW de Espaa) Anlisis comparativo entre varios mtodos de estimacin de recarga en ambientes semiridos: caso del acufero Vents-Castellar (Alicante) Biologa reproductiva y conservacin del endemismo Polygala vayredae En memoria del Profesor Bazzaz II Reunin del grupo de trabajo de ecologa espacial de la AEET Efectos del cambio climtico en la vegetacin mediterrnea. Comentarios sobre un simposio de WCRP y Diversitas en Valencia "Introduccin al anlisis espacial de datos en ecologa y ciencias ambientales: Mtodos y Aplicaciones", de Fernando T. Maestre, Adrin Escudero y Andreu Bonet, 2008, ISBN:978-84-9849-308-5, 849 pp., Dykinson S.L., Madrid, Espaa. "Invasiones biolgicas", de Montserrat Vil et al. 2008. ISBN 978-84-00-08663-3, 215 pp., CSIC, Madrid, Espaa.
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Ecosistemas 18 (1): 1-2. Enero 2009.

http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=589 EDITORIAL INVITADA
Ecologa y genes
P. Jordano 1
(1) Integrative Ecology Group, Estacin Biolgica de Doana, CSIC. Isla de la Cartuja, Avda. Amrico Vespucio s/n, E-41092 Sevilla, Espaa.
Recibido el 2 de febrero de 2009, aceptado el 2 de febrero de 2009.
Jordano. P. Ecologa y genes. (2009). Ecosistemas 18(1):1-2.
En este monogrfico de ECOSISTEMAS ofrecemos una revisin de una de las reas de ecologa de mayor florecimiento reciente. La Ecologa Molecular ha tenido efectivamente un desarrollo espectacular en las tres ltimas dcadas, paralelo a dos tendencias muy claras dentro de las lneas habituales de trabajo en la ciencia ecolgica: mayor diversificacin de temas de estudio y mayor conexin entre diferentes disciplinas. Al igual que en la dcada de los sesenta del s. XX con los avances en estadstica multivariante y en los setenta con los modelos microeconmicos, la ecologa se nutre de nuevo de avances en otros campos para establecer un frtil mbito de estudio: la ecologa molecular. El salto ha sido paralelo a la importancia creciente que en aos recientes ha tenido en ecologa la consideracin de mltiples escalas de estudio: desde el individuo a la comunidad, con las escalas espaciales paralelas que les corresponden. La ecologa molecular es el campo de la biologa evolutiva que aplica las tcnicas y aproximaciones de la gentica molecular de poblaciones, filogentica molecular, y- ms recientemente- genmica, para resolver problemas ecolgicos. Entre estos destacan la diagnosis de especies, conservacin y caracterizacin de la biodiversidad, relaciones diversidad-rea, y numerosas cuestiones en ecologa de comportamiento. A comienzos del s. XX, E.B. Ford marc el inicio de las aplicaciones de la gentica al campo de la ecologa con su tratado Ecological Genetics (Ford 1964), una obra magna que, simplemente, trasladaba las aproximaciones genticas a la naturaleza: el estudio de la gentica en el campo. Personaje clave en el desarrollo de la New Synthesis que en aquella poca revivi los estudios evolucionistas, Ford fue junto con otro gentico de campo, Th. Dobzhansky, el padre de la gentica ecolgica, adelantndose bastante a los grandes avances tecnolgicos que la Ecologa Molecular tendra a finales del s. XX. En palabras de E.B. Ford, hace ms de cinco dcadas:
The term ecological genetics, which describes the technique of combined field and laboratory work outlined here, has recently come into general use... Consequently, ecological genetics deals with adjustments and adapatations of wild populations to their environment. It is thus, ... essentially evolutionary in outlook. Indeed it supplies the means, and the only direct means, of investigating the actual process of evolution taking place at the present time.
Esta definicin de gentica ecolgica de E.B. Ford encapsula los ingredientes bsicos de la ecologa molecular hoy da: el estudio de la evolucin en tiempo real en poblaciones naturales. Los temas que la ecologa molecular ha trado a la ecologa son muchos, aunque realmente ms que nuevas aproximaciones, las tcnicas moleculares han permitido contestar a viejas preguntas con nuevos mtodos, o plantear nuevas preguntas a viejas cuestiones. Los siete artculos que incluimos en este nmero de Ecosistemas incluyen una muestra de estas nuevas aproximaciones, escrita por destacados especialistas espaoles. Ello nos sirve para apreciar, por un lado, el notable avance de numerosos grupos espaoles en el rea de la ecologa molecular; por otra parte, resume bien las nuevas fronteras del conocimiento en este mbito.
Ecosistemas no se hace responsable del uso indebido de material sujeto a derecho de autor. ISSN 1697-2473.
Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.
Basta con hojear este nmero para darse cuenta de cmo se han difuminado las clsicas divisiones de los estudios de gentica de poblaciones a la luz de estas nuevas perspectivas: ya no tenemos las divisiones tpicas de variacin, seleccin, mutacin, deriva, flujo gnico, etc., sino que se abordan diferentes componentes dentro de una misma aproximacin. Es ms, la conexin efectiva de los genes y los ecosistemas permite abordar cuestiones evolutivas a diferentes escalas de organizacin (poblaciones, especies, comunidades) y rango geogrfico (hbitats, localidades, regiones, continentes, subregiones biogeogrficas). Los desarrollos de escrutinio de ADN en relacin con problemas ecolgicos han sido recientes, y han visto su mayor crecimiento desde mediados de los aos 90 del s. XX. El crecimiento espectacular del uso de marcadores moleculares en ecologa ha ido emparejado con los avances tcnicos que han ido aconteciendo en el campo de la gentica molecular, fundamentalmente en dos mbitos: desarrollo de nuevos tipos de marcadores y desarrollo de mtodos analticos (estadsticos) para el escrutinio de la variabilidad gentica. Esta dependencia metodolgica ha ido pareja a una dificultad: en tanto que la batera de mtodos moleculares ha sido rpidamente aplicada a desvelar patrones de variacin y estructura gentica en las poblaciones naturales, ha habido ms dificultad en desarrollar aplicaciones al estudio de los procesos que generan esta variabilidad. Por ejemplo, un tema clsico abordado por la gentica de poblaciones ha sido sin duda el estudio de la seleccin natural. Pero la mayor parte de las aplicaciones de mtodos moleculares en ecologa que podemos encontrar usan marcadores neutrales en enfoques bsicamente descriptivos, y aun hay pocos esfuerzos para aplicar en poblaciones naturales las tcnicas de genmica y protemica que pueden desvelar los procesos de seleccin natural en accin. Esto es, el estudio de la variabilidad de genes codificantes para caracteres fenotpicos clave en ecologa y fisiologa. Los desarrollos recientes de tcnicas de mapeo de variabilidad gentica para caracteres cuantitativos ofrecen la oportunidad de estudiar los efectos de la seleccin en condiciones de campo. Estos desarrollos han ido parejos a una cada vez mayor precisin en la deteccin e identificacin de la variabilidad gentica, que ha avanzado desde los alozimas en los aos 70 del s. XX, a los marcadores hipervariables en los 80-90 (AFLPs, microsatlites) y a los mega-variables (SNPs) en la ltima dcada. Y estos son avances que sin duda definen la prxima frontera para las aplicaciones de tcnicas basadas en ADN a problemas ecolgicos. La integracin continuada de las tcnicas basadas en ADN con experimentos ecolgicos en el campo va a proveer gran cantidad de informacin y nuevas perspectivas de anlisis para numerosas cuestiones ecolgicas. Las grandes lneas de avance han sido definidas en aos recientes por ejemplo en las aplicaciones de marcadores moleculares al estudio de la evolucin en amplias escalas temporales (filogenia), que ha dado como resultado aplicaciones directas al estudio de la composicin de las comunidades, y de la estructura geogrfica de los conjuntos de poblaciones que definen cada especie (filogeografa). La mayor precisin y resolucin de los marcadores moleculares para la identificacin individual ha permitido avances espectaculares en estudios de ecologa del comportamiento, al permitir relacionar variaciones en el grado de parentesco con variaciones de fitness, condicin corporal, emparejamiento, comportamiento de reproduccin, etc. Esta mayor resolucin de la variacin infra-especfica e intra-poblacional ha permitido comprender mejor los patrones de flujo gnico en ambientes naturales, y establecer patrones de flujo gnico en tiempo real asociados a variaciones del paisaje: es decir, entender cmo se mueven los genes a partir de estudios de campo de cmo se mueven los individuos en paisajes complejos. Esta mayor definicin de las tcnicas de escrutinio gentico infra-especfico est siendo clave en estudios recientes de las relaciones de parsitos y hospedadores, y en la comprensin de la evolucin de los patgenos, por no mencionar las aportaciones clave a la caracterizacin de la biodiversidad. Desde esta perspectiva, los estudios de gentica ecolgica han tenido un papel central en desarrollos recientes de ecologa de la conservacin para la caracterizacin robusta de unidades de conservacin, diagnosis de cuellos de botella demogrficos y de viabilidad de poblaciones. Los artculos recogidos en este nmero revisan estos aspectos y algunos ms, que constituyen temas candentes de investigacin en ecologa. Nuestra pretensin es presentarlos al amplio conjunto de lectores de ECOSISTEMAS, a modo de puesta al da e informacin bsica sobre un tema que aunque de alta complejidad tcnica, sin duda est marcando una serie de avances conceptuales en ecologa que definen algunos elementos clave de esta ciencia en este nuevo milenio.
Referencias
Ford, E.B. 1964. Ecological genetics (4 ed.). 1975. Chapman and Hall, Londres, Gran Bretaa.

http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=590 REVISIONES
Genes y especies
A. G. Sez 1
(1) Departamento de Biodiversidad y Biologa Evolutiva. Museo Nacional de Ciencias Naturales, CSIC, C/ Jos Gutirrez Abascal 2, E-28006 Madrid, Espaa.
Recibido el 4 de diciembre de 2008, aceptado el 8 de enero de 2009.
Sez, A. G. Genes y especies. (2009). Ecosistemas 18(1):3-9. La posibilidad de secuenciar y manipular los genes sigue abriendo fronteras en el estudio de las especies y la especiacin. En tiempos recientes particularmente en dos direcciones. Por un lado, la secuenciacin del gen COI (y otros) en miles de muestras de forma sistemtica y masiva, el llamado "DNA barcoding", est revelando una gran cantidad de biodiversidad, en buena medida previamente no sospechada y correspondiente a especies crpticas (morfolgicamente irreconocibles). En segundo lugar, el estudio de los genes responsables de los cambios morfolgicos nos est haciendo volver a dar una creciente importancia a la seleccin como motor de la especiacin y de la evolucin, incluso en presencia de dosis importantes de flujo gnico. Palabras clave: especies, especiacin, gentica evolutiva, cdigos barra, biodiversidad, genmica ecolgica, especies crpticas. Sez, A. G. Genes and species. (2009). Ecosistemas 18(1):3-9. Our increasing access to the identification and manipulation of genes keeps paving the way to our understanding of species and speciation. In my view, following two different threads in recent times: On the one hand, DNA barcoding - a systematic, molecular and complementary approach to species identification - is revealing a great deal of biodiversity, much of it previously unsuspected and morphologically cryptic. Secondly, a functional view of how genes shape microevolutionary changes is emphasizing the role of natural selection in the formation and evolution of species, even in the face of abundant gene flow. Key words: species, speciation, evolutionary genetics, DNA barcoding, biodiversity, ecological genomics, cryptic species.
Introduccin
Desde hace aproximadamente dos dcadas, la gentica molecular est ejerciendo una influencia enorme en los estudios sobre especies y especiacin, es decir, tanto en relacin a la caracterizacin gentica de los lmites entre especies y poblaciones (Avise 1994), como ms recientemente en cuanto a los mecanismos de formacin y evolucin de las especies (Coyne y Orr 2004). La primera tarea es predominantemente descriptiva, explicndonos el grado o el patrn de diferenciacin filogentica entre especies o poblaciones, mientras que la segunda es ms funcional. En este artculo pretendo repasar brevemente el primer aspecto, sobre todo centrndome en la reciente influencia que est ejerciendo el DNA barcoding sobre nuestra concepcin de los lmites entre especies. En segundo lugar pretendo repasar la influencia que la gentica molecular est ejerciendo sobre nuestra concepcin del proceso de especiacin y de diferenciacin fenotpica de las poblaciones naturales.
El tamborileo a menudo desigual de fenotipos y genotipos

Como escribi el padre de la filogeografa (biogeografa molecular), John Avise, morphological and molecular evolution can march to the beats of different drummers (Avise 1990). Lo cual no quiere decir que marchen de forma independiente, sino que no tienen porqu marchar necesariamente al mismo ritmo. El ejemplo concreto al que Avise se refera era el de los cclidos, peces de una morfologa y ecologa enormemente variada pero, que por tener muchos de ellos un origen muy reciente, presentan unas diferencias moleculares mnimas. Sin embargo, es ms comn en la literatura el caso contrario, en el que la diferenciacin gentica supera a la morfolgica.
Ese es el caso de las llamadas especies crpticas, que son especies en cualquiera de las acepciones no morfolgicas posibles de este trmino pero que a nivel prctico son indistinguibles por su apariencia (Sez y Lozano 2005). Tan indistinguibles que normalmente, antes de acudir a los marcadores moleculares, se suelen considerar como una sola especie. Uno de los ejemplos ms interesantes descubiertos en tiempos relativamente recientes es el caso de unas mariposas americanas conocidas como Astraptes fulgerator, y que segn Hebert et al. (2004) deberan clasificarse como, al menos, diez especies diferentes. De hecho es muy probable que sean muchas ms de diez especies, puesto que estos diez linajes se han descubierto en el noroeste de Costa Rica, mientras que la especie tiene un rango de distribucin mucho mayor, desde el sur de los EEUU hasta el norte de Argentina. Digo que es un caso muy interesante porque aunque las diferencias morfolgicas son mnimas con respecto a los adultos, no lo son en absoluto con respecto a las larvas, de colores muy dispares (Figura 1). El problema hasta hace poco es que no se conoca la correspondencia entre larvas y adultos. Tambin presentan diferencias en cuanto a su comportamiento y ecologa, adems de las genticas.
Figura 1. Especies crpticas inicialmente descritas como Astraptes fulgerator. Adultos (mariposas) y larvas (orugas). Slo las orugas son claramente distinguibles morfolgicamente. Tambin se distinguen ecolgica y genticamente. Los nombres mostrados son provisionales. Las fotografas de este montaje fueron amablemente cedidas por el profesor Daniel Janzen (Universidad de Pensilvania, EEUU).
Se puede argumentar que las especies crpticas no son entidades naturales, puesto que son nuestros sentidos y nuestra capacidad de discernimiento la que las define. Sin embargo, en mi opinin, eso no les quitara relevancia. Para empezar, muchos conceptos biolgicos tienen una buena dosis de subjetividad, como sin ir ms lejos el mismo concepto de especie, que puede estar basado en diferentes criterios, como el reproductivo, filogentico, ecolgico, etc, cuya eleccin depende del propio taxnomo, quien puede dar ms nfasis a unos aspectos que a otros. Eso no quiere decir que las especies no existan, sino que no existen bajo una sola definicin, y que son una realidad multifactica y continua, y no unidimensional y discreta (Hey 2001). Por otro lado, el hecho de que normalmente las especies sean distinguibles por su morfologa, mientras que otras no lo sean, o con mucha dificultad, tiene implicaciones biolgicas reales. Por ejemplo, nos puede indicar que las especies crpticas se encuentran en un pico adaptativo del que les resulta difcil salir. Es decir, que aunque sigan cambiando a nivel gentico, ecolgico, o etolgico, su morfologa se encuentra congelada, tal vez porque sea ptima y no necesite cambiar, o tal vez porque los cambios que pudieran ser ventajosos no se puedan dar, por ejemplo por constricciones en su desarrollo. Pudiera tal vez tambin indicarnos que el modo de reconocimiento entre esas especies no fuera visual, puesto que su morfologa es similar o idntica, sino qumico (feromonas), o comportamental. Los marcadores moleculares han permitido un aumento exponencial de la identificacin de las especies crpticas (Bickford et al. 2007). Pero una aproximacin relativamente reciente, el DNA barcoding, que podramos traducir por cdigos de ADN, est acelerando todava ms ese reconocimiento. Esta es la idea de que la descripcin taxonmica de las especies debera basarse no slo en la descripcin morfolgica de los ejemplares tipo, sino adems, en una secuencia de ADN que fuera fcil de obtener para cualquier organismo. Existe un consenso bastante generalizado en cuanto a cul debe ser el gen a amplificar en animales: la subunidad I de la oxidasa del citocromo c ( COI, de cytochrome c oxidase subunit I; Hebert et al. 2003).
En plantas todava se est buscando ese consenso (Pennisi 2007). Los cdigos de ADN son una idea surgida desde la ecologa, ms que desde la biologa evolutiva, que es ms consciente de la simplicidad del planteamiento, y por lo tanto de sus problemas. Pero, a pesar de ellos, es precisamente la generalizacin de su uso lo que convierte la idea en til. Iniciativas coordinadas por el Consortium for the Barcode of Life (http://www.barcoding.si.edu/), entre otras, agrupan proyectos que
conllevan la secuenciacin de enormes grupos de muestras, normalmente referidas a grandes grupos taxonmicos, como por ejemplo a las aproximadamente 10.000 especies de aves existentes en nuestro planeta, o a las ms de 30.000 especies de peces, o las referidas al muestreo de reas geogrficas ms o menos extensas, adems de numerosas iniciativas ms especficas. Los cdigos de ADN aportan una fuente masiva y muy eficiente de informacin molecular, lo que sin duda nos ofrece una primera aproximacin muy til. Sin embargo, no son capaces de ofrecernos una descripcin detallada de la biodiversidad, ni de estudiar los procesos evolutivos subyacentes. Por ejemplo, en mi opinin, el uso de un solo marcador no puede ser definitivo en la asignacin de especies crpticas (Sez et al. 2003). Individuos de una misma especie pueden diferir bastante en relacin a una secuencia gnica dada (por ej., Sez et al. 2000). Es cierto que los estudios con cdigos de ADN intentan tener eso en cuenta considerando tambin las diferencias intraespecficas, que tpicamente tienen una media estadstica claramente menor que la media de las diferencias interespecficas. Pero aun as, la distribucin de la biodiversidad, sea a nivel genotpico o fenotpico, no es uniforme, y por lo tanto sera prematuro establecer lmites entre especies basndose en un solo gen, especialmente en especies sexuales, que mezclan sus genealogas mediante segregacin cromosmica y recombinacin. De forma ideal, lo que nos hace decidir que dos linajes son independientes es que diferentes marcadores moleculares nos den el mismo patrn, con dos o ms grupos monofilticos recprocos. Si adems, los diferentes linajes conviven en el espacio y en el tiempo, es decir, son simptridos, teniendo por lo tanto la posibilidad de cruzarse sexualmente, entonces podremos estar ms seguros de que estemos hablando de aislamiento reproductivo, que an es el criterio ms generalizado para distinguir especies.
De Darwin a Mayr y otra vez a Darwin, pasando por los genes

Fue de hecho Ernst Mayr, a veces llamado el Darwin del siglo XX, el mayor instigador del concepto biolgico de especie. Segn este popular criterio, las especies que catalogamos debieran ser entidades naturales caracterizadas por su mutuo aislamiento reproductivo. Aunque la mayor parte de los autores admitimos este concepto como vlido en trminos generales, tambin hay muchos que pensamos que hay que abandonar la idea de mantener un nico criterio para definir las especies. Porque aunque la biodiversidad es discontinua, esas discontinuidades no son ni absolutas en relacin a los organismos o poblaciones, ni tampoco universales en relacin a los caracteres ms distintivamente discontinuos. Por eso, las especies taxonmicas slo pueden ser una aproximacin de las reales, que corresponden a entidades dinmicas y multifacticas, y que en ltima instancia, son los taxnomos los que deben consensuar unos lmites entre especies que no pueden ser sino hasta cierto punto arbitrarios (Hey 2001). El estudio molecular de la especiacin parece apoyar esta visin, que de hecho, como muchas otras ideas en biologa, fue primero propuesta por Darwin -I believe that species come to be tolerably welldefined objects, aunque tengan que haber pasado 150 aos para que empecemos a darle la razn (Darwin 1859). En mi opinin, la idea ms coherente, con unos lmites reales pero inextricables entre especies, venida de la biologa molecular es la visin gnica de la especiacin, de Chung-I Wu. Segn Wu y Ting (2004), el intercambio gnico al comienzo de la especiacin est permitido para la mayor parte del genoma pero no para ciertas regiones, para las que la seleccin no permite la persistencia de las variantes allicas de una de las subpoblaciones en la otra. Esas zonas prohibidas sern como islas genmicas que no se podrn intercambiar con xito entre las poblaciones divergentes, e irn extendindose hacia ambos lados del cromosoma conforme se vaya completando el proceso de aislamiento reproductivo (Figura 2).
Figura 2. Modelo de especiacin de Wu (revisado por Wu y Ting 2004). Las poblaciones sufren un proceso de diferenciacin en sus fenotipos (representado por el color verde o amarillo de las moscas), por ejemplo debido a su especializacin ecolgica. Dichos fenotipos estn codificados por uno o ms loci del genoma (representado aqu por un slo cromosoma). El flujo gnico se mantiene (en simpatra o parapatra) para la mayor parte del genoma (flechas azules), con la excepcin de los loci especializados (flechas rojas), cuyos alelos son diferencialmente eliminados de las poblaciones respectivas. Con el tiempo (del panel A al C), las regiones no intercambiables van extendindose hasta llegar a cubrir todo el cromosoma. Segn mi propia interpretacin, cabra esperar que a lo largo de este progresivo aislamiento gentico, otros caracteres fenotpicos tambin evolucionen (representado aqu por la pigmentacin del abdomen de las moscas amarillas).
Esta hiptesis explicara porqu hay muchas especies, ecotipos, o subespecies (denominaciones en el fondo bastante arbitrarias), que aunque no estn aisladas reproductivamente, s se diferencian claramente a nivel fenotpico. Es el caso, por ejemplo, de los dos morfos del caracol marino Littorina saxatilis. Este molusco, nativo de las costas del Atlntico Norte, presenta dos morfologas distintas, cada una de ellas asociada a uno de los lados de la zona intermareal. Se distinguen por el grosor de la concha, el tamao de la apertura y la forma de las espirales. Tales diferencias parecen ser adaptativas al entorno, con una zona alta intermareal ms clida y con ms predadores, y otra ms baja. En algunos lugares intermedios de la franja se pueden encontrar hbridos aparentemente frtiles de caractersticas intermedias, lo que indica que el aislamiento reproductivo no se ha completado entre los dos ecotipos. En un estudio en el que se pretenda averiguar si la diferenciacin en este organismo afectaba a todo el genoma en su conjunto, o bien por el contrario slo se basaba en una porcin de ste, se utilizaron numerosos marcadores moleculares distribuidos por todo el genoma de este caracol. Se encontr que slo alrededor del 5% de los marcadores utilizados mostraban unas diferencias por encima de las esperadas entre ambos ecotipos, sugiriendo que slo era una pequea parte del genoma la que estaba dirigiendo esta diferenciacin (Wilding et al. 2001). Los genes responsables de esa especializacin en Littorina saxatilis no se han aislado todava, pero s que se han aislado de otras especies: varias de Drosophila, peces con diferentes adaptaciones ecolgicas, algunas plantas, y de varios otros organismos (Carroll 2006; Noor y Feder 2006). Estas diferencias pueden tener que ver con la morfologa de los organismos, con sus adaptaciones ecolgicas, y/o con su aislamiento reproductivo. De todos estos estudios yo creo que lo que ms sorprende es que estas diferencias parecen depender de un pequeo nmero de genes. El modelo de especiacin dominante hasta hace muy pocos aos era, bajo distintas variantes, de Mayr. Segn este modelo, la diferenciacin entre poblaciones afectara a todo el genoma de forma similar, de tal forma que cada gen tendra un efecto muy pequeo sobre la evolucin del fenotipo: -The genetic basis of isolating mechanisms, in particular, seems to consist largely of a large number of genetic factors with small individual effects (Mayr 1963). En claro contraste, por ejemplo, el gen Odysseus es capaz, cuando se transfiere entre distintas especies de Drosophila, de crear hbridos estriles, aunque requiere de algunos otros genes que por
s solos no producen esterilidad (Sun et al. 2004). Ya se conocen muchos genes con un efecto directo sobre la evolucin de las especies. Algunos de ellos se han mostrado reincidentes, por haber provocado cambios fenotpicos parecidos en distantes linajes evolutivos, y por lo tanto de forma paralela o independiente, mltiples veces a lo largo de la evolucin. Es el caso del receptor de la melanocortina-1 (MC1R), responsable de cambios en la coloracin de muy diversos grupos animales, como distintas especies de ratones, aves, algunos reptiles, y hasta humanos y neandertales (Carroll 2006). Si uno reconstruye la filogenia con genes neutrales de especies o poblaciones recientemente diferenciadas, con frecuencia encuentra que esas filogenias no reflejan las diferencias morfolgicas existentes entre dichas poblaciones. O sea, que los individuos con distinta morfologa pueden coincidir en la misma parte del rbol, mientras que individuos similares en sus fenotipos puedan resultar muy separados en estas filogenias (Figura 3B). Es decir, que todava la diferenciacin no se observa en una gran parte del genoma. Sin embargo, es muy interesante comprobar que, en ocasiones, las reconstrucciones filogenticas realizadas utilizando los genes directamente responsables de las diferencias fenotpicas, pueden resultar muy similares a los rboles que esperaramos en base a esas diferencias. Ello sucede, por ejemplo, con Odysseus, gen mencionado anteriormente, en las moscas Drosophila o con la ectodisplasina, gen implicado en la diferenciacin morfolgica del pez espinoso desde su ecotipo marino al de agua dulce, transicin que sigui a la ltima glaciacin, hace de 10.000 a 20.000 aos (Figura 3A). As, mientras que la filogenia construida con la ectodisplasina distingue dos clados claramente diferenciados, cada uno correspondiente a un ecotipo, un rbol reconstruido con polimorfismos provenientes de un conjunto de marcadores diversos no ofrece separacin alguna de los ecotipos (Colosimo et al. 2005; Figura 3). Estas observaciones son compatibles con el escenario propuesto por Wu y Ting (2004) en su visin gnica de la especiacin (Figura 2), pero en todo caso se encuentran ms de acuerdo con Darwin, por el protagonismo otorgado a la seleccin natural, que con Mayr: Populations will drift apart genetically until a discontinuity through reproductive isolation develops, provided extrinsic barriers reduce dispersal (Mayr 1976).
Figura 3. El pez espinoso (Gasterosteus aculeatus) habita las aguas costeras del Atlntico Norte, y presenta dos ecotipos aqu indicados esquemticamente: el ancestral de agua salada, con placas endurecidas (en rojo), y el derivado, mejor adaptado al agua dulce y con menos placas (en azul). Mientras que la filogenia construida con el gen involucrado en dicha diferenciacin, la ectodisplasina, ofrece una filogenia que mayoritariamente separa los dos tipos morfolgicos (panel A), una segunda filogenia construida con 25 genes nucleares escogidos al azar no puede separarlos (panel B). Adaptado de Colosimo et al. (2005).
Pero lo ms caracterstico y dominante del legado de Mayr en relacin a la especiacin es la enorme importancia que concedi a las barreras geogrficas. Por ejemplo, cuando dijo: -It is unproven and unlikely that reproductive isolation can develop between contiguous populations (Mayr 1976). Sin embargo, y gracias en gran parte a la gentica molecular, hoy se duda ms de la contribucin relativa de la especiacin simptrida (sin barreras fsicas) frente a la aloptrida (con ellas), que de que la primera pueda tener lugar. La primera publicacin al respecto realmente persuasiva fue la de Schliewen et al. (1994), a la que han seguido unas pocas ms, todava ms convincentes. Lo que estos trabajos intentan demostrar es la altsima improbabilidad de una especiacin en presencia de barreras geogrficas, demostrando la existencia de especies recientemente originadas en lugares muy pequeos y aislados, y por lo tanto implicando, por exclusin, una especiacin simptrida. Estos hbitats son muy pequeos: lagunas surgidas de un crter, o remotas y diminutas islas, y sin relevantes barreras fsicas internas. Es adems muy importante que estn lo ms aislados posibles, para convencernos de que sea altamente improbable que las especies respectivas no provengan de poblaciones externas. Y por supuesto tienen que demostrar que las especies estn separadas reproductivamente, o en vas de ello. Aunque es difcil que se den todos estos criterios, tanto el trabajo de Schliewen et al. (1994) como otros trabajos posteriores son bastante convincentes, y por lo tanto, la especiacin en simpatra es hoy ms aceptada, aunque todava no sepamos de su predominancia. Por supuesto es muy difcil pensar en que una especiacin con flujo gnico pueda tener lugar sin seleccin (natural o sexual), y por lo tanto ambos conceptos estn estrechamente relacionados. De hecho, todos estos casos de especiacin en simpatra implican algn tipo de especializacin ecolgica ms o menos evidente, o de seleccin sexual. Ser importante estudiar cules son los genes responsables de estos procesos de diferenciacin, porque nos ayudarn a entender la secuencia de eventos acaecidos.
Agradecimientos
A Pedro Jordano por invitarme a participar en este nmero, y al Ministerio de Ciencia e Innovacin por su apoyo econmico: contrato Ramn y Cajal y proyecto del Plan Nacional I+D con referencia CGL2005-00307.
Referencias
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La huella gentica de la seleccin natural

F. Perfectti 1 , F.X. Pic 2 , J.M. Gmez 3
(1) Departamento de Gentica. Universidad de Granada, E-18071 Granada, Espaa. (2) Estacin Biolgica de Doana (CSIC). Pabelln del Per, E-41013 Sevilla, Espaa. (3) Departamento de Ecologa, Universidad de Granada, E-18071 Granada, Espaa.
Recibido el 5 de enero de 2009, aceptado el 27 de enero de 2009.
Perfectti, F., Pic, F.X., Gmez, J.M. (2009). La huella gentica de la seleccin natural. Ecosistemas 18(1):10-16. La seleccin natural es un proceso biolgico que constituye uno de los principales motores de cambio evolutivo, y el origen de las adaptaciones fenotpicas. La seleccin que acta sobre una determinada poblacin se puede detectar ecolgicamente cuantificando a nivel intrapoblacional la relacin existente entre el fenotipo de los individuos y su xito reproductivo diferencial. Sin embargo, detectar la actuacin de la seleccin pretrita es imposible usando una aproximacin exclusivamente ecolgica. Para afrontar este problema, durante los ltimos 40 aos se han desarrollado una serie de mtodos moleculares que infieren la actuacin de la seleccin. Un primer grupo de pruebas usa como modelo nulo la teora cuasi neutral de la evolucin molecular, y asumen que ha ocurrido seleccin cuando el resultado difiere significativamente de lo esperable segn evolucin neutral. Algunos tests, como por ejemplo la D de Tajima, la relacin d d , o las pruebas
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de MK o HKA, pueden determinar incluso el tipo de seleccin operante. Sin embargo, raramente pueden cuantificar la intensidad de seleccin. Este inconveniente es exitosamente superado por el anlisis de la seleccin basada en Campos Aleatorios de Poisson (PRF). Un segundo grupo de pruebas usa como mtodo para inferir la accin pretrita de la seleccin natural la comparacin entre la cantidad de diferenciacin gentica en caracteres cuantitativos (Q ) y la cantidad de diferenciacin gentica neutra (F ). Finalmente, unos de los ms
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recientes y prometedores mtodos que se estn desarrollando para el estudio de la seleccin natural est relacionado con el avance tan espectacular que est registrando en la actualidad la genmica. An estamos lejos de saber la verdadera utilidad de esta herramienta para el estudio de la seleccin natural en poblaciones naturales, pero el pronstico es bastante esperanzador. Palabras clave: seleccin natural, deriva gentica, evolucin neutral, genmica. Perfectti, F., Pic, F.X., Gmez, J.M. (2009). Genetic evidences of natural selection. Ecosistemas 18(1):10-16. Natural selection is one of the main factors driving the evolutionary process and the only one leading to adaptations. Selection acting on a population can be detected by quantifying the relationship between individual phenotype and relative fitness. However, detecting the effect of past selection is not possible by only using an ecological approach. To cope with this issue, several molecular evolutionary genetics methods have been developed during the last 40 years. A first group of tests use the quasi neutral theory of molecular evolution as null model, and assume the occurrence of selection when the observed outcome significantly departs from the expectations under neutral evolution. Some tests, such as Tajimas D, d /d ratio, MK test or HKA test, can determine the kind of selection acting on populations, but are
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unable to quantify its intensity. The analysis of selection based on Poisson Random Fields (PRF) overcomes this caveat. A second group of analyses infer selection by comparing the amount of genetic variation in quantitative traits (Q ) against the amount of neutral genetic
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variation (F ). Lastly, one of the most recent and promising methods to explore natural selection is related with the superb advance in
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genomics. Although we are still far from fully appreciate the importance of this tool, we believe that the use of the genomics will produce a qualitative enhancement in our understanding of the importance of natural selection in the wild. Key words: natural selection, genetic drift, neutral evolution, genomics.
El grado de diferenciacin y divergencia entre poblaciones o especies relacionadas, que pueden observarse y cuantificarse a nivel cuantitativo y molecular, puede ser explicado por seleccin natural y/o deriva gentica. Podemos decir que ambos procesos operan simultneamente en todas las poblaciones aunque la importancia relativa de cada uno de ellos puede variar de una manera substancial. Tradicionalmente, entender bien los procesos que determinan la diferenciacin poblacional y el peso que la seleccin natural puede tener frente a la deriva gentica en dichos procesos ha sido de capital importancia para la biologa evolutiva. La forma habitual para un eclogo de detectar un evento de seleccin es establecer una relacin estadstica entre un rasgo fenotpico y la eficacia biolgica, caracterizando as un suceso de seleccin fenotpica. La propia naturaleza de esta forma de proceder implica que hay que cazar los eventos de seleccin en el momento en que la seleccin natural est operando. Sin embargo, hay otra aproximacin basada en el anlisis de secuencias que busca las seales dejadas por la
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seleccin natural en los genomas de los organismos. Esta aproximacin est basada en la historia de acumulacin de substituciones en los linajes y no es una aproximacin contempornea, a diferencia de la aproximacin ecolgica basada en la asociacin fenotipo-eficacia biolgica. Adems, y a diferencia de ciertas interpretaciones seleccionistas, tampoco se trata de inferir seleccin a partir de un modelo de optimizacin que prejuzga que hay adaptacin, sino ms bien justamente lo contrario: a partir de modelos que consideran la evolucin neutral como la hiptesis nula, determinar qu desviaciones frente al modelo neutral ofrecen pistas para establecer los eventos de seleccin.
Detectando la huella gentica de la seleccin natural.

La hiptesis nula: teora cuasi neutral de la evolucin molecular. Kimura (1968) y King y Jukes (1969) desarrollaron la teora neutral de la evolucin molecular, pasando de una interpretacin seleccionista de la evolucin a una donde la mayor parte del cambio en las secuencias era no adaptativo y debido a la mutacin. La probabilidad de reemplazo de un nucletido por otro en una secuencia solo dependera de la tasa de mutacin, jugando la seleccin un papel minoritario y reservado a la eliminacin de las variantes deletreas. Una importante revisin de la teora fue propuesta por Tomoko Ohta (1973; 1992), que introdujo la teora casi neutral de la evolucin molecular, donde se considera que la evolucin de mutaciones ligeramente deletreas o ligeramente beneficiosas, casi-neutrales, va a depender fundamentalmente de la tasa de mutacin, de los coeficientes de seleccin y del tamao poblacional. As, en linajes evolutivos con tamaos pequeos de poblacin es posible encontrar un mayor nmero de cambios no neutrales, ligeramente deletreos, mantenidos a baja frecuencia o incluso fijados por deriva gentica. A partir de este modelo terico de evolucin de secuencias se puede tener una hiptesis nula con la que comparar un juego de secuencias obtenidas, ya sea de poblaciones de una misma especie, o ms comnmente de especies diferentes pero con un ancestro comn no muy lejano. Las desviaciones frente a este modelo pueden ser interpretadas como claros indicios de eventos de seleccin positiva (s>0) o, ms frecuentemente, como evidencias de seleccin purificadora (s<0), aunque la seleccin equilibradora, o balanceada, u otros procesos demogrficos tambin pueden ser detectados (Figura 1). A continuacin haremos un repaso a los estadsticos ms utilizados para demostrar desviaciones frente a la hiptesis nula de neutralidad.
Figura 1. Esquema mostrando los efectos de diversos tipos de seleccin en la diversidad nucleotdica intra- e inter-especfica (Nielsen 2005).
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D de Tajima y sus derivados Estos estadsticos se han desarrollado para determinar si el espectro de frecuencias de los polimorfismos encontrados en un juego de secuencias es explicable bajo la hiptesis de evolucin puramente neutral. El estadstico D (Tajima 1989) compara dos estimas de la cantidad de variacin gentica () de un grupo de secuencias. La primera es obtenida a partir del nmero total de sitios polimrficos en la muestra de secuencias y la segunda como la proporcin de diferencias nucleotdicas entre las secuencias comparadas dos a dos. Ambas estimas deben ser iguales bajo una situacin de evolucin neutral (no seleccin, no recombinacin, no subdivisin poblacional, no cambios en el tamao poblacional). D se basa en la diferencia entre ambas estimas y tiene media cero y desviacin 1. Si se detectan desviaciones significativas, ests son indicadoras de no neutralidad, pero el factor concreto que las explica puede ser difcil de distinguir. As, por ejemplo, valores positivos de D pueden indicar seleccin positiva, seleccin equilibradora o bien una reduccin del tamao poblacional. Otros tests han incorporado informacin filogentica (por ejemplo una especie outgroup) para intentar estimar la direccin de los cambios y as tener una mayor potencia para detectar desviaciones frente a la hiptesis nula. El test de Fu y Li (Fu y Li 1993) es parecido al anterior en que tambin calcula un estadstico D como la diferencia de dos estimas de . Este test est basado en que diferentes tipos de mutaciones se acumulan de forma diferente en una filogenia. As, las mutaciones puramente neutrales pueden acumularse a lo largo de toda la filogenia, pero las mutaciones ligeramente deletreas lo harn nicamente en las ramas externas, o lo que es lo mismo, son ms recientes, puesto que la seleccin habr tenido ms tiempo para eliminar las mutaciones deletreas que aparecieron hace ms tiempo. Fay y Wu (2000) tambin desarrollaron un test basado en que el espectro de frecuencias esperado bajo condiciones de neutralidad debe estar enriquecido en mutaciones a baja frecuencia, siendo las mutaciones en alta frecuencia raras. Este test, que tambin requiere de informacin filogentica, es especialmente sensible a los arrastres o barridos selectivos. Hay que tener en cuenta que un evento de seleccin positiva eliminar polimorfismo no solo en la posicin responsable (el nucletido concreto), sino en una amplia regin de posiciones ligadas. As, un arrastre selectivo elimina variacin muy rpidamente, pero tambin puede llevar a las variantes neutrales ligadas a tener frecuencias altas, dejando una seal que puede ser detectada por estos tests. Deteccin de la seleccin usando dN/dS Cuando se dispone de secuencias de genes codificadores de protenas, a stas se les pueden aplicar una serie de pruebas estadsticas muy tiles para valorar la importancia de la seleccin en la evolucin de dichas secuencias. Quizs la ms conocida y usada sea la razn dN/dS (Kimura 1977). Esta razn compara la tasa de substituciones no sinnimas por sitio no sinnimo (dN) con la tasa de substituciones sinnimas por sitio sinnimo(dS). Habitualmente no se conoce el tiempo de divergencia entre las dos secuencias a comparar, y por tanto las tasas de cambio, y por ello se suelen utilizar las proporciones de substituciones no sinnimas (por sitio no sinnimo) y substituciones sinnimas (por sitio sinnimo). La interpretacin de la razn dN/dS es directa asumiendo que las substituciones sinnimas no se producen por seleccin y slo reflejan la tasa neutral de substitucin. As, dN/dS = 1 sera un indicador de evolucin neutral y, por contra, valores superiores a la unidad indicaran seleccin positiva y valores inferiores seleccin purificadora. En la prctica, la estima de estos parmetros puede complicarse si la divergencia entre las secuencias ha sido grande. Adems, ciertas substituciones sinnimas podran no ser neutrales y ser consecuencia de seleccin positiva. Hay ejemplos de que ciertas substituciones sinnimas pueden afectar a la estabilidad del mRNA o a la mecnica del splicing o que incluso manifiesten cierta seleccin para minimizar los errores de traduccin (Chamary y Hurst 2005; Parmley et al. 2006; Pal et al. 2006; Drummond y Wilke 2008). Las estimas genmicas de este parmetro varan ampliamente entre grupos. As para Drosophila se reportan valores bajos (indicando una, altamente eficaz, seleccin purificadora) mientras que para mamferos aparecen valores ms altos que pueden indicar que la seleccin purificadora no es tan efectiva, posiblemente debido a un tpico pequeo tamao poblacional. Conviene recordar aqu que la seleccin purificadora ser muy efectiva solo si |s| >> 1/4Ne y que, por tanto, en poblaciones pequeas pueden fijarse mutaciones ligeramente deletreas nicamente por deriva gentica (Ohta 1987; Bromham y Penny 2003) Prueba de MK McDonald y Kreitman (1991) idearon un test que compara el polimorfismo intraespecfico con la divergencia interespecfica. El test se utiliza para comparar secuencias codificadoras de protenas de dos especies muy emparentadas. Para ello se se construye una tabla de doble entrada donde se evala el nmero de sitios polimrficos sinnimos (PS) y no sinnimos (PN), y el nmero de substituciones fijas sinnimas (DS) y no sinnimas (DN). Si la evolucin es puramente neutral PN/PS= DN /DS. Sin embargo, si estas razones no son iguales, cabe asumir seleccin purificadora (si PN/PS>DN/DS) o positiva (si
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PN/PS< DN/DS). Desgraciadamente, factores demogrficos, como una expansin poblacional reciente, pueden producir una seal similar a la accin de la seleccin, complicando la interpretacin del test. Prueba de HKA La prueba de Hudson-Kreitman-Aguad (HKA, Hudson et al. 1987) utiliza secuencias de varios loci de especies altamente emparentadas, y pone a prueba la hiptesis neutral de que la divergencia (interespecfica) y el polimorfismo (intraespecfico) deben ser similares para cada locus. Se determinan tericamente los valores de polimorfismo esperado en dos especies (o poblaciones) y el grado de divergencia esperado entre las dos especies y se comparan con los valores observados. Las desviaciones sern indicativas de que otros procesos adicionales a la deriva han afectado la evolucin de esas secuencias. Puesto que la prueba se basa en obtener unos valores tericos de polimorfismo y divergencia, este test es sensible a factores demogrficos no contemplados en el modelo. Una ventaja de esta prueba es que es posible aplicarla a secuencias no codificadoras. Anlisis de la seleccin basada en campos aleatorios de Poisson Las pruebas estadsticas anteriormente comentadas pueden determinar si las desviaciones frente a la hiptesis nula de evolucin neutral son significativas e incluso el tipo de seleccin operante, pero ms raramente determinan la intensidad de la seleccin. Sawyer y Hartl (1992) desarrollaron, a partir del modelo de evolucin de Wright-Fisher, un marco terico para estimar analticamente la intensidad de la seleccin que afecta a una serie de variantes nucleotdicas: el modelo PRF (Poisson Random Field). Bajo una serie de asunciones (principalmente que las mutaciones surgen al azar en un curso temporal que sigue una distribucin de Poisson, que cada mutacin aparece en una posicin diferente y que no hay ligamiento) es posible obtener estimas de la intensidad de seleccin. La potencia de esta aproximacin es mayor cuando se utilizan datos de mltiples loci no ligados, como, por ejemplo, SNPs (polimorfismos de un solo nucletido en su acrnimo en ingls) repartidos por todo el genoma. Esta aproximacin se ha utilizado, por ejemplo, para cuantificar el papel de la seleccin en Drosophila y Arabidopsis (Bustamante et al. 2002), encontrando que en Arabidopsis se han acumulado mutaciones ligeramente deletreas, posiblemente debido a su sistema de cruzamiento principalmente autgamo. La unin de aproximaciones basadas en PRF con simulaciones por ordenador de procesos demogrficos es actualmente la estrategia mas completa para obtener informacin de la historia evolutiva de las poblaciones. La aplicacin de los mtodos ABC (approximate bayesian computation; Pritchard et al. 1999; Beaumont et al. 2002), junto con modelos PRF y la tecnologa de secuenciacin masiva de 2 y 3 generacin, proporcionar una visin ms realista del papel de la seleccin natural en el proceso evolutivo. Diversos programas informticos pueden ser muy tiles para dilucidar qu papel ha jugando la seleccin en el modelado de la diversidad nucleotdica. DnaSP (http://www.ub.es/dnasp/), VariScan (http://www.ub.es/softevol/variscan/), MEGA (http://www.megasoftware.net/), PAML (http://abacus.gene.ucl.ac.uk/software/paml.html), MKPRF (http://cbsuapps.tc.cornell.edu/mkprf.aspx) son, por citar unos pocos, programas muy utilizados para realizar varios de los tests anteriormente comentados.
Inferencia funcional y diversidad neutral

Con el avance de las tcnicas moleculares que permiten comprender la base gentica de la variabilidad de caracteres cuantitativos, el inters por determinar el papel de la seleccin natural y la deriva gentica en el proceso de diferenciacin poblacional se ha intensificado. No obstante, todava estamos lejos de poder identificar ntidamente los genes que determinan caracteres cuantitativos de inters evolutivo y si la diferenciacin poblacional en estos genes es debida a procesos selectivos o a procesos puramente demogrficos, como la deriva gentica. Por esta razn, la comparacin entre la cantidad de diferenciacin gentica en caracteres cuantitativos (QST ) y la cantidad de diferenciacin gentica neutra (FST ) representa un mtodo apropiado para analizar el papel de la seleccin natural frente al de los procesos demogrficos en la diferenciacin poblacional de caracteres cuantitativos de inters evolutivo. Cuando se comparan los ndices QST y FST se pueden obtener tres resultados. Primero, que QST > FST . En este caso la diferenciacin poblacional en caracteres cuantitativos es mayor que la diferenciacin gentica neutra (en funcin solamente de la deriva gentica) y se asume que la seleccin natural direccional, que favorece a distintos fenotipos en distintas poblaciones, es la responsable de la diferenciacin poblacional. Segundo, que QST < FST . En este caso la diferenciacin observada es menor que la que explica la diferenciacin gentica neutra y una explicacin podra ser la seleccin estabilizadora, que favorece a los fenotipos ms cercanos al promedio poblacional de manera que tiene un efecto homogeneizador. Finalmente, la tercera posibilidad es que QST FST . En este caso la cantidad de diferenciacin debida a
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procesos demogrficos iguala a la diferenciacin poblacional en caracteres cuantitativos pero no se puede decir que la deriva gentica sea la nica causa de dicha diferenciacin. Para estimar la cantidad de diferenciacin gentica en caracteres cuantitativos (QST ), lo ms comn es estimar los componentes de varianza entre y dentro de poblaciones mediante un anlisis de la varianza (ANOVA) tpico. En funcin del tipo de organismo de estudio y del grado de manipulacin que estos permitan, los valores de QST se pueden estimar a partir de datos puramente fenotpicos de poblaciones silvestres o de experimentos en condiciones controladas. En el primer caso, los QST resultantes no permiten separar los componentes genticos de los meramente ambientales, mientras que en el segundo caso los QST se basan en los componentes genticos solamente. En funcin del tipo de experimento, incluso es posible separar los efectos aditivos de los no aditivos, como los efectos maternos. Para estimar la cantidad de diferenciacin gentica neutra (FST ) se pueden utilizar distintos marcadores moleculares neutros cuya variacin entre y dentro de poblaciones se puede analizar mediante un anlisis de varianza molecular (AMOVA). Como en cualquier otra aproximacin experimental, hay que tener en cuenta los principales problemas o limitaciones a la hora de comparar los valores de QST y FST . En el caso de los QST , los principales problemas son dos. El primero reside en cmo se estima la diferenciacin gentica en los caracteres cuantitativos de inters. Todo lo que no sea varianza gentica aditiva (en particular, la varianza fenotpica debida a la respuesta plstica a distintos ambientes y la varianza debida a efectos maternos) puede enmascarar la verdadera divergencia poblacional en caracteres cuantitativos. El otro gran problema est en que generalmente la precisin y las propiedades estadsticas del ndice QST son bajas a no ser que se use un nmero elevado de poblaciones (la precisin del ndice QST mejora sensiblemente cuando el nmero de poblaciones se aproxima a 20). Las caractersticas del organismo de estudio van a permitir disear experimentos que incluyan un nmero alto de poblaciones y que estimen solamente los componentes de varianza gentica aditiva para estimar la diferenciacin poblacional de caracteres cuantitativos. En el caso de los FST , las estimas de diferenciacin gentica neutra dependern del grado de polimorfismo de los marcadores que se utilicen. Cuanto mayor sea el polimorfismo de los marcadores menor ser el grado de diferenciacin poblacional gentica neutra. Otro factor a tener en cuenta es que en la mayora de casos se ignora, aunque se acabe asumiendo, si los marcadores estn ligados a loci que s estn bajo seleccin o si las condiciones de equilibrio que se asumen para estimar los FST no se cumplen. Finalmente, las tasas de mutacin intrnsecas a cada tipo de marcador tambin pueden afectar los FST , que nada tienen que ver con la interpretacin puramente demogrfica del ndice FST . A pesar de estas limitaciones, que siempre hay que tener en cuenta a la hora de disear un experimento para comparar valores de QST y FST , los estudios de diferenciacin poblacional para determinar el peso de la seleccin natural o de la deriva gentica son claves para el avance de la biologa evolutiva. Las estimas de QST deben nutrirse de mltiples experimentos y observaciones de poblaciones naturales que al final nos permitan cuantificar y entender el grado de diferenciacin poblacional en caracteres cuantitativos. Por otro lado, las estimas de FST deben hacerse en base a una comparacin entre tipos de marcadores para estimar el sesgo intrnseco a la naturaleza de cada tipo de marcador. No obstante, los avances en el campo de la genmica, que permiten trabajar a nivel de genoma incluyendo regiones genmicas codificantes, reguladoras y estructurales, van a cambiar definitivamente el concepto de la diferenciacin poblacional gentica neutra basado en los valores de FST .
Anlisis genmico para el estudio del efecto de la seleccin

Gracias al avance de los ltimos aos que se ha experimentado en tres campos de investigacin (biomedicina, genmica funcional aplicada a la agricultura y gentica de poblaciones humanas), ha quedado patente la necesidad de desarrollar una lnea de investigacin en la que la genmica (y las dems -micas -ver Cieslak y Ribera 2009-) se aplique sistemticamente al campo de la biologa evolutiva. El principal objetivo es el de determinar el significado funcional de la variacin gentica que presentan las poblaciones de los organismos en sus ambientes naturales as como identificar los procesos evolutivos que generan o mantienen dicha variacin. En este caso, la variacin gentica no hace referencia solamente a regiones neutras, sino que tiene que ver con la variacin a nivel genmico con especial nfasis en aquellas regiones que pueden incluir genes de inters evolutivo. De todos modos, las tcnicas que se desarrollan para estudiar dicha variacin gentica acaban generando marcadores con carcter funcional (regiones reguladoras de genes y regiones codificantes de protenas) pero tambin neutro (regiones genmicas estructurales). Una de las consecuencias inmediatas de esta aproximacin es que se pueden evitar las limitaciones severas que aparecen cuando se trabaja con un nmero reducido de marcadores supuestamente neutros para contestar a preguntas evolutivas.
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Los estudios de genmica funcional aplicada a la biologa evolutiva pivotan alrededor de los anlisis de asociacin entre la variacin de caracteres cuantitativos de posible inters evolutivo y la variacin genmica que presente el organismo de estudio. Para poder trabajar a nivel genmico se tienen que desarrollar un gran nmero de marcadores que cubran todas las regiones genmicas. Dos de las aproximaciones ms comunes para la obtencin de dichos marcadores incluyen, por una parte el desarrollo de SNPs (polimorfismos de un solo nucletido en su acrnimo en ingls), y por otra el desarrollo de ESTs (marcadores de secuencia expresada en su acrnimo en ingls). Los SNPs son los polimorfismos ms comunes que determinan la variacin gentica de un organismo. Por ejemplo, aproximadamente el 90% de la variacin gentica en humanos se debe a polimorfismos de tipo SNP. Dado su gran nmero, podemos obtener SNPs en distintas regiones de un gen (SNPs funcionales) y en regiones genmicas estructurales (SNPs presuntamente no funcionales). En el caso de los ESTs, dado que se obtienen mediante la secuenciacin de ARNm clonado, estos marcadores representan porciones de genes expresados y su carcter es mucho ms funcional. A fecha de hoy y para un gran nmero de organismos representantes de toda la diversidad biolgica, existen inmensas libreras de SNPs y ESTs (con miles o cientos de miles de marcadores en muchos casos) que sirven de base para el desarrollo de la genmica funcional aplicada a la biologa evolutiva. A parte de la naturaleza y cantidad de marcadores distribuidos por todo el genoma del organismo de estudio, sigue siendo capital tener un buen diseo experimental (que siempre que sea posible debe incluir el seguimiento de poblaciones de campo y la manipulacin de poblaciones experimentales en condiciones controladas) para cuantificar la variacin gentica de caracteres cuantitativos de inters evolutivo. El reto ahora es el de desarrollar anlisis de asociacin entre caracteres cuantitativos y marcadores moleculares que nos permitan detectar las regiones genmicas responsables de la variacin gentica cuantitativa. Los mtodos estadsticos para dichos anlisis de asociacin estn en pleno desarrollo pues requieren en muchos casos el uso de herramientas como la biocomputacin que permite trabajar con miles de marcadores a la vez. Los principales problemas a los que hay que hacer frente y que pueden sesgar los resultados de los anlisis de asociacin son la deteccin de falsos negativos/positivos (intrnsecos al uso de un nmero muy grande de marcadores), el grado de ligamiento entre marcadores muy relacionado con los grupos de ligamiento, y/o la estructura geogrfica de la variacin gentica que presentan los datos como resultado de la historia de las poblaciones de estudio. El desarrollo de proyectos de genmica funcional aplicados a la biologa evolutiva requiere un cambio de mentalidad en todos los sentidos, incluyendo cuestiones meramente metodolgicas, de formacin de nuevos profesionales, y otras de tipo ms econmico y de estrategia pues, en el caso de trabajar con especies no modelo, la inversin inicial puede ser importante. Ese es el cambio ms importante que hay que hacer: decidir cmo y cuando invertir los recursos para generar herramientas que luego permitan responder a preguntas mucho ms ambiciosas dentro del campo de la biologa evolutiva. El 1 de febrero de 1898, Hermon Bumpus recibi 136 gorriones recolectados tras una glida tormenta que azoto Rhode Island (USA). Casi la mitad de ellos sobrevivi y Bumpus estudi las caractersticas fsicas de todos ellos para analizar que rasgos haban intervenido en la supervivencia frente al fro (Bumpus 1899). Este trabajo se convirti en un clsico de las estimas de seleccin natural y todava esos datos son analizados de diferentes formas (eg, Pugesek y Tomer 1996). Es posible imaginar que gran informacin podra haber obtenido Hermus Bumpus de haber dispuesto de herramientas como la tecnologa de secuenciacin masiva y las aproximaciones tericas y computacionales de la moderna teora de evolucin molecular. Con estos desarrollos, el papel de la seleccin natural en la evolucin de las poblaciones pronto podr ser valorado de forma precisa para muchos organismos, pasando de simples aproximaciones al papel de los diferentes procesos evolutivos a tener estimas robustas de su importancia en la historia evolutiva de las especies.
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Gentica de comunidades
M. Verd 1
(1) Centro de Investigaciones sobre Desertificacin (CSIC-UV-GV), E-46470 Albal, Valencia, Espaa.
Verd, M. (2009). Gentica de comunidades. Ecosistemas 18(1):17-22. Los estudios sobre los procesos responsables del ensamblaje de las especies en comunidades ecolgicas tradicionalmente han considerado a las especies como unidades de estudio. Sin embargo, dentro de las especies existe gran cantidad de variacin genotpica y fenotpica que puede finalmente ser decisiva en el resultado de las interacciones con el resto de especies en la comunidad (competencia, mutualismo, etc.) Recientemente se ha propuesto una nueva regla de ensamblaje de las comunidades que sugiere que la composicin gentica de una poblacin afecta a la estructura y composicin de la comunidad (es decir al fenotipo de la comunidad). Apoyando esta regla, varios estudios han demostrado que los cambios en la diversidad gentica de poblaciones de plantas conllevan cambios predecibles en sus comunidades asociadas de herbvoros y predadores. Ms all de la visin poblacional, la nueva gentica de comunidades pretende demostrar 1) que el genotipo particular de ciertos individuos es responsable del fenotipo de la comunidad, 2) que el fenotipo de la comunidad es heredable, y por lo tanto 3) que las comunidades evolucionan. Tras explicar estos tres conceptos, se discute el valor que esta aproximacin puede tener desde el punto de vista de la biologa de la conservacin. Palabras clave: diversidad gentica, diversidad de especies, estructura de comunidades, evolucin de comunidades, fenotipo extendido, reglas de ensamblaje. Verd, M. (2009). Community Genetics. Ecosistemas 18(1):17-22. Studies on the processes driving the assembly of species in ecological communities have traditionally considered the species as units of study. However, there is a large amount of genotypic and phenotypic variation within species that can ultimately be decisive in the outcome of interactions with other species in the community. (competition, mutualism, etc..). It has recently been proposed a new community assembly rule suggesting that the genetic composition of a population affects the structure and composition of the community (i.e. the phenotype of the community). Supporting this assembly rule, several studies have shown that changes in the genetic diversity of plant populations produce predictable changes in their associated communities of herbivores and predators. Beyond the population view, the new discipline of community genetics is aimed to demonstrate 1) that the particular genotypes of some individuals are responsible for the phenotype of the community, 2) that the phenotype of the community is heritable and therefore 3) that communities evolve. After explaining these three concepts, I discuss the value that this approach may have from the conservation biology perspective. Keywords: genetic diversity, species diversity, community structure, community evolution, extended phenotype, assembly rules.
Un tema de importancia capital en ecologa desde su fundacin ha sido el explicar cmo se ensamblan las diferentes especies para formar una comunidad (McIntosh 1985). Dichos procesos se han intentado plasmar en las llamadas reglas de ensamblaje, que tratan de predecir qu especies de la biota van a componer finalmente la comunidad. A grandes rasgos, el ensamblaje de las comunidades est regido por factores de organizacin abiticos y biticos. Los factores abiticos imponen filtros a la supervivencia de las especies, de tal manera que slo aquellas que posean ciertas caractersticas fenotpicas pueden formar parte de la comunidad. Los factores biticos, como la competencia o el mutualismo, determinan finalmente las especies que son excluidas o incluidas en la comunidad (Webb et al. 2002). Hasta ahora estos mecanismos de ensamblaje de comunidades consideraban a las especies como las unidades de estudio que interaccionaban entre s, cuando es bien sabido que dentro de las especies existe mucha variacin tanto fenotpica como genotpica. As pues, es plausible que los organismos de una especie respondan a la interaccin con organismos de otra especie de una manera distinta en funcin de los genotipos de los interactuantes. Es en este contexto donde recientemente se ha propuesto una nueva regla de ensamblaje de las comunidades que sugiere que la composicin gentica de una poblacin afecta a la estructura de la comunidad. Esto es as porque las presiones de seleccin en una poblacin pueden finalmente convertirse en presiones selectivas sobre la comunidad que depende de ella (Bangert y Whitham 2007).
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Una clara prediccin de esta regla es que la diversidad gentica que presenta una especie en una determinada poblacin estar correlacionada con la diversidad gentica de las especies que dependen de ella en la comunidad. Este proceso es fcilmente explicable si consideramos que la variacin gentica de una especie dominante puede determinar el ambiente bitico experimentado por el resto de la comunidad. Esta nueva perspectiva aporta un marco terico que unifica los dominios de la gentica de poblaciones y la ecologa de comunidades que atendan por separado a la diversidad gentica y a la diversidad de especies respectivamente (Vellend y Geber 2005). Bajo este marco, cada vez ms estudios pretenden probar si la correlacin existente entre diversidad de especies de un gremio (p. ej. plantas herbceas) y otras propiedades a nivel de comunidad (p.ej. diversidad de herbvoros, predadores, etc) pueden estar operando a nivel gentico. As por ejemplo, Crutsinger et al. (2006) determin experimentalmente en una planta dominante de campos abandonados (Solidago altissima) que el incremento en la diversidad gentica de la poblacin aumentaba la productividad ya que las mezclas con ms genotipos fueron las ms productivas. Existen dos explicaciones a este fenmeno:
q q
Efecto de Seleccin: la mezcla est dominada por una especie con un genotipo productivo. Efecto de Complementariedad: El reparto de recursos o las interacciones positivas conllevan un mayor uso total de los recursos.
Ambos efectos son fcilmente cuantificables de una manera experimental que compare la productividad de la mezcla de genotipos con la sumatoria de productividades obtenidas con los genotipos por separado (ver mtodo en Loreau y Hector (2001) y su aplicacin para genotipos en Reusch et al. 2005). En general, el efecto de complementariedad ha sido ms frecuentemente descrito como responsable de la relacin entre diversidad gentica y biomasa (Reusch et al. 2005; Crutsinger et al. 2006). Crutsinger et al. (2006) demostr que este incremento la diversidad gentica y consecuentemente de la biomasa de Solidago altsima, tena amplios efectos en la diversidad y estructura de la comunidad de predadores y herbvoros. De manera similar, Reusch et al. (2005) mostraron que la complementariedad entre los genotipos de la planta marina Zostera marina increment la biomasa de las mismas y que dicho incremento tuvo consecuencias que transcendieron de la poblacin a la comunidad, ya que varias especies de la fauna invertebrada asociada se vieron favorecidas tambin. De estos trabajos se deduce claramente que la variacin gentica de una especie dominante puede determinar el ambiente bitico experimentado por el resto de la comunidad. Es en este punto donde la unificacin de la gentica de poblaciones con la ecologa de comunidades adquiere su verdadero sentido. Existen mltiples casos descritos en los que la diversidad gentica se correlaciona con algn componente de las comunidades (diversidad, estructura) o de los ecosistemas (flujos de nutrientes). Sin embargo, sin manipulaciones experimentales es imposible saber si dicha correlacin es debida o no a un tercer factor que incrementa tanto la diversidad gentica como la variable medida a nivel de comunidad o ecosistema. Otro problema que se plantea con la mayora de estos estudios, tanto observacionales como experimentales es que la diversidad gentica est estimada mediante marcadores moleculares neutrales (microsatlites, RAPDs, etc). Por ello no se puede asociar la variacin gentica con ningn fenotipo particular que confiera propiedades a los individuos que transciendan al nivel de comunidades o ecosistemas. Ese es precisamente el paso que pretende dar la reciente disciplina conocida como gentica de comunidades. A diferencia de lo explicado hasta ahora, la nueva gentica de comunidades pretende trabajar con la identidad gentica de los individuos y no con la diversidad gentica de las poblaciones. Esta nueva visin pretende demostrar que el genotipo particular de ciertos individuos es responsable de los procesos que ocurren a nivel de comunidad o de ecosistema. Por ejemplo, en Populus spp. se han identificado las regiones del genoma que son responsables de la produccin de sustancias fitoqumicas que defienden a los rboles de los insectos cecidgenos. Los rboles pertenecientes a genotipos susceptibles a los insectos atraen directa o indirectamente a una comunidad de hongos, insectos y aves muy diferente a la que atraen los rboles con genotipos resistentes (Whitham et al. 2006). Con el desarrollo de la genmica cada vez es ms factible secuenciar masivamente el genoma de las especies y contar con secuencias de genes cuya funcin sea conocida, de tal manera que puedan realizarse estudios de asociacin genotipo-fenotipo. Originalmente, la gentica de comunidades es definida por Antonovics (1992) como el estudio de la gentica de las interacciones entre especies y sus consecuencias ecolgicas y evolutivas. Con esta nueva disciplina, se abra una puerta para que los eclogos pudieran estudiar el papel que jugaban las interacciones en el proceso evolutivo liberndose de las fuertes restricciones de reciprocidad en la interaccin que impona el modelo terico de coevolucin. Bajo este paraguas se desarroll una perspectiva reduccionista y otra holstica (Agrawal 2003). La aproximacin reduccionista se basa en el concepto individualista de la comunidad postulado por Gleason (1926) mediante el cual las especies se ensamblan en una comunidad de acuerdo a sus atributos individuales y est enfocada a documentar el cambio evolutivo rpido como producto de las interacciones interespecficas. Estas interacciones median el cambio en abundancia de especies y consecuentemente alteran la composicin gentica de los miembros de la comunidad, proporcionando materia prima para que acte la seleccin. Esta situacin es tpica en comunidades no en equilibrio, como las
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perturbadas por el hombre. Por tal motivo, esta aproximacin ha tenido su mayor aplicacin en el campo de la agricultura, donde la perturbacin antropognica ha llevado a una fuerte seleccin en los rasgos de las especies como producto de las interacciones interespecficas (Neuhauser et al. 2003). As por ejemplo, incorporando la informacin ecolgica (dinmica de regulacin poblacional, tasas de mortalidad, sistema de apareamiento) a los modelos puramente genticos de seleccin, se han podido conseguir mejores estimas de las tasas de evolucin ocurridas dentro del contexto de las comunidades. Sin embargo, la complejidad matemtica de esta aproximacin junto con su visin reduccionista, ha hecho que las comunidades estudiadas sean extremadamente simples, de slo dos especies, lo que limita su generalizacin a comunidades naturales ms complejas. En el extremo holstico, la gentica de comunidades trata de entender cmo ciertos genes de una especie pueden alterar la composicin y el funcionamiento de la comunidad ecolgica. Aunque algunos de sus conceptos, tales como evolucin y heredabilidad de comunidades, pueden recordar a la visin supraorgansmica de Clements (1936), lo cierto es que se trata ms de una terminologa confusa que de una coincidencia conceptual (Morin 2003). De hecho, la definicin de comunidad usada por esta aproximacin es la de Una asociacin de especies interactuantes que viven en un rea particular (Molles 1999) y no refleja en absoluto tendencias ni holistas (sensu Clements) ni reduccionistas (sensu Gleason). Esta aproximacin es la que ms desarrollo est experimentando en el campo de la ecologa en los ltimos aos y la que se tratar aqu con ms detalle. Tal desarrollo ha llevado a que actualmente se hable no slo de gentica de comunidades sino que se est expandiendo hacia la gentica de ecosistemas. En ltima instancia, esta aproximacin trata de presentar evidencias de que la variacin gentica heredable dentro de una especie tiene consecuencias en las comunidades y ecosistemas en los que habita. Tal efecto de los genes a niveles superiores del de poblacin fue acuado con el trmino de fenotipo extendido. Este trmino corresponde al ttulo del famoso libro de divulgacin cientfica escrito por Dawkins en 1982 y cuyo actual subttulo es el largo alcance del gen (Dawkins 1999). Para Dawkins, el fenotipo extendido es todo lo que los genes pueden influir para tener mayor xito. As por ejemplo, mientras que el fenotipo de los castores es su cuerpo, el fenotipo extendido incluye tambin las presas que construyen en los ros y que hace que los genes de los individuos buenos constructores tengan mayor xito. Obviamente, la modificacin de los cursos de agua realizadas por estos ingenieros de los ecosistemas tiene importantes efectos a nivel de la comunidad e incluso del ecosistema. Este ejemplo sirve para ilustrar que el fenotipo que se puede extender con efectos relevantes a nivel de comunidad no es el de cualquier especie si no fundamentalmente el de las especies claves. Esto nos lleva a pensar que la gentica de comunidades es la versin gentica del antiguo concepto de especie clave (Paine 1966) y cuya definicin ms aceptada es la de 'una especie que tiene un efecto desproporcionado en su ambiente en relacin a su abundancia' (Power et al. 1996) Sin embargo, la gentica de comunidades no slo trata con especies clave sino tambin con especies abundantes cuyos efectos genticos trascienden a la comunidad y al ecosistema (Whitham et al. 2003). Es precisamente en especies abundantes, como los rboles del gnero Populus donde se han desarrollado estudios ms detallados de gentica de comunidades. En estas especies se ha encontrado la base gentica de la produccin de sustancias qumicas de defensa (taninos condensados) y gracias a ello se han podido desarrollar mltiples experimentos de la extensin que distintos fenotipos qumicos tienen en la comunidad y en el ecosistema a travs de la resistencia a la herbivora que esos taninos confieren. De esta manera, se ha podido determinar que segn su genotipo y, por consiguiente, su fenotipo qumico, los distintos rboles interactan con un gremio diferente de artrpodos y stos a su vez con un diferente gremio de aves insectvoras (Bailey et al 2006). Otro efecto de los taninos condensados es que ralentiza la tasa de descomposicin de la hojarasca, por lo que las comunidades microbianas del suelo varan en funcin del fenotipo qumico de los rboles y consecuentemente el flujo de nutrientes en el ecosistema (Schweitzer et al. 2008 a,b). En resumen, podramos decir que 'las comunidades y ecosistemas poseen un fenotipo que se puede predecir a partir de los genes de las especies claves o abundantes' (Whitham et al. 2006). Hasta aqu no hay nada especialmente sorprendente ms all de que la estructura y funcionamiento de las comunidades y ecosistemas estn gobernadas por unas pocas especies importantes, algo que los eclogos saban desde hace tiempo. Sin embargo, la gentica de comunidades da un paso ms all y predice que el fenotipo de las comunidades es heredable y por lo tanto, las comunidades pueden evolucionar.
Heredabilidad y evolucin de las comunidades

La heredabilidad de las comunidades (H2 C) en sentido amplio mide la proporcin de la variacin fenotpica de las comunidades que es determinada por la variacin gentica dentro de una especie. En otras palabras, H2 C mide la tendencia que presentan los individuos emparentados a mantener comunidades de organismos similares y procesos ecosistmicos parecidos (Whitham et al. 2003).
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Un ejemplo de cmo medir la heredabilidad de las comunidades se puede encontrar en Johnson y Agrawal (2005), quienes plantaron en condiciones ambientales controladas 926 individuos de Oenothera biennis pertenecientes a 14 clones (genotipos) que diferan en rasgos como la fenologa y la arquitectura. Estos autores observaron que las diferencias genotpicas entre plantas explicaban hasta el 41% de la variacin en la diversidad de las comunidades de artrpodos asociadas a dichas plantas. Al tratarse de clones, esta heredabilidad (H2 C= 0.41) se pudo calcular fcilmente simplemente dividiendo el componente gentico de la varianza por la varianza total. Cuando no se trabaja con clones, la heredabilidad de las comunidades se puede medir simplemente correlacionando la matriz de similitud genotpica entre los individuos de la especie clave con la matriz de similitud entre los fenotipos de las comunidades generadas por dichos individuos. Existen adems mtodos de ordenacin que permiten calcular simultneamente las coordenadas cartesianas de los individuos de las especies claves y de los fenotipos de sus comunidades asociadas, de tal manera que podemos usar tales coordenadas en modelos de ANOVA que descompongan la variacin total dentro y entre clases genticas (p.ej. entre genotipos, entre hermanos, etc), (Whitham et al. 2006). Aunque los experimentos con clones o con parientes ms o menos cercanos permiten estimar la heredabilidad del fenotipo extendido, en ltima instancia es deseable cuantificar la similitud existente entre las comunidades generadas por los padres y por sus hijos (heredabilidad en sentido estricto) para comprobar si las comunidades pueden evolucionar. En este nuevo contexto, la evolucin de las comunidades se refiere a cmo las interacciones genticas entre especies influyen en la eficacia biolgica de los miembros de la comunidad y conllevan la evolucin fenotpica de la comunidad. La cuantificacin de la tasa de evolucin de las comunidades se puede realizar 1) estimando los cambios temporales en la heredabilidad de las comunidades, 2) midiendo los procesos de retroalimentacin ecolgica entre la especie clave y sus miembros dependientes en la comunidad; es decir, cuantificando cmo los efectos de la especie clave sobre la eficacia biolgica de las otras especies de la comunidad revierten de nuevo en los genotipos de la especie clave y 3) cuantificando la covarianza gentica, que es una medida de cmo la variacin gentica entre poblaciones de especies claves covara con la variacin gentica de las poblaciones de sus especies dependientes en la comunidad. Un ejemplo que puede ilustrar todos estos procesos en conjunto es el efecto cascada que supone para la comunidad y el ecosistema la herbivora diferencial que ejercen los castores sobre los genotipos de Populus con bajos niveles de taninos. Tras 5 aos de herbivora diferencial, los genotipos con altos niveles de taninos triplicaron su abundancia en la poblacin de Populus. Como resultado de esa sobre-representacin de hojas llenas de taninos, las comunidades microbianas del suelo se inhibieron y la mineralizacin de nitrgeno se redujo. En ltimo trmino, la menor disponibilidad de minerales en el suelo afect a los propios Populus, que tuvieron que realizar una mayor inversin vegetativa (races finas que maximizan la absorcin de nutrientes) y vieron afectada su propia eficacia biolgica. Como conclusin desde el punto de vista terico es interesante destacar que, si existe una base gentica subyacente a la estructura de las comunidades, entonces estamos muy cerca de tender el deseado puente entre ecologa de comunidades y biologa evolutiva (Johnson y Stinchcombe 2007).
Aplicaciones a la conservacin de la biodiversidad

Desde el punto de vista prctico, esta nueva aproximacin de la gentica de las comunidades tiene unas implicaciones inmediatas a la biologa de la conservacin. Si la identidad gentica de los individuos de las especies claves caracteriza el fenotipo de una comunidad, entonces es esperable que plantas genticamente similares mantengan comunidades similares. Esta regla de similitud gentica (Bangert et al. 2006) debera proporcionar cierto poder predictivo sobre la diversidad, estructura y funcionamiento de las comunidades basado en el conocimiento de los genotipos de las especies claves. Esta herramienta sera especialmente til para detectar los efectos que en la comunidad y en el ecosistema pueden tener las invasiones de genotipos extraos. Al igual que las especies invasoras pueden desplazar competitivamente a las especies nativas, los genotipos invasores de una especie pueden igualmente desplazar a los genotipos nativos y extender su fenotipo alterando la comunidad dependiente. El efecto de estas invasiones, denominadas invasiones crpticas por ser difcilmente detectables, ya se ha documentado en algunos casos (Saltonstall 2002). Si los genotipos nuevos pueden tener efectos en cascada sobre las comunidades y los ecosistemas que invaden, es especialmente preocupante el caso de las invasiones de organismos modificados genticamente, ya que dichas modificaciones han sido especialmente diseadas para tener efectos muy significativos, como resistencia a patgenos, crecimiento rpido o superioridad competitiva. En definitiva, el incipiente campo de la gentica de comunidades puede aportar muchas soluciones ante los retos ambientales planteados actualmente. Para ello, sin duda se beneficiar del vertiginoso desarrollo de la genmica y necesariamente deber incorporar los conocimientos de historia natural que dan cuenta de las contingencias histricas de las interacciones biolgicas.
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La gentica, los marcadores moleculares y la conservacin de especies

J.A. Godoy 1
(1) Departamento Ecologa Integrativa. Estacin Biolgica Doana, CSIC. C/ Amrico Vespucio, s/n. E-41092 Sevilla, Espaa.
Godoy J.A. (2009). La gentica, los marcadores moleculares y la conservacin de especies. Ecosistemas 18(1):23-33. La presencia de la gentica y los marcadores moleculares en la ecologa y la biologa evolutiva no ha dejado de crecer en las ltimas dcadas, y la biologa de la conservacin no ha sido una excepcin. Por un lado, estudios tericos, experimentales y empricos han documentado los cambios genticos que las poblaciones sufren como consecuencia de la fragmentacin y el declive, y han confirmado las consecuencias negativas que stos pueden tener para la viabilidad poblacional y la evolucin adaptativa. Por otro lado, la aplicacin de marcadores moleculares y la rica teora evolutiva aporta informacin sobre la historia evolutiva, la demografa, la ecologa y el comportamiento de las especies que puede ayudar en la evaluacin de riesgos, la asignacin de prioridades, la delimitacin de unidades y el diseo de estrategias de conservacin eficaces. Adems, las tcnicas moleculares aportan mtodos para la asignacin de muestras a especies, poblaciones o individuos y para la identificacin de sexo que, sobre todo cuando se combinan con materiales obtenidos de manera no invasiva, aportan herramientas eficientes para la conservacin y la gestin de especies amenazadas. La presencia de la gentica en conservacin se ha visto impulsada en los ltimos aos por la aparicin de nuevos marcadores moleculares, el uso de muestras degradadas o antiguas, y por significativos avances en los mtodos de anlisis de datos que aprovechan desarrollos tericos importantes como la teora del coalescente. En particular, el salto a una escala genmica promete salvar la tradicional limitacin impuesta por la naturaleza predominantemente neutral de la variacin explorada con los marcadores moleculares tradicionales y ofrecer acceso a la base gentica de la variacin adaptativa. No obstante, la superacin de este y otros retos pendientes requerir un mayor nivel de interaccin entre enfoques empricos, tericos y experimentales, y entre las disciplinas de la gentica y la ecologa. La probada importancia de la variacin gentica para la persistencia de las especies y la sustancial contribucin de las tcnicas genticas a la prctica conservacionista demandan una mayor presencia de la gentica en la conservacin de especies, tanto en sus aspectos normativos como de gestin. Palabras clave: gentica de la conservacin, marcadores moleculares, ecologa molecular, unidades de conservacin, unidades de gestin, diversidad gentica, consanguinidad, estructura gentica, filogeografa, filogenia. Godoy J.A. (2009). Genetics, molecular markers and the conservation of species. Ecosistemas 18(1):23-33. Genetics and molecular markers have gained an increasing presence in ecology and evolutionary biology in the last decades, and conservation biology has been no exception. On the one hand, theoretical, experimental and empirical studies have documented the changes occurring in the genetics of populations as these become fragmented and small, and confirmed their negative consequences for population viability and adaptive evolution. On the other hand, the application of molecular markers in conjunction with the rich evolutionary theory yields information on the evolutionary history, the demography, the ecology and the behaviour of particular species, which can assist risk evaluations, the assignment of conservation priorities, the delimitation of conservation and management units and the design of effective conservation strategies. Finally, molecular markers provide methods for the assignment of samples to species, populations or individuals and gender, which especially when applied to non-invasively collected samples- become effective tools for the conservation and management of endangered species. The presence of genetics in conservation has received a significant boost in recent years from the incorporation of new molecular markers, the increasing use of degraded or ancient materials, and from significant advances in data analyses methods that build upon recent theoretical developments, like coalescent theory. Particularly, the leap to genome-wide analyses promises to overcome the predominantly neutral nature of traditional molecular markers and provide access to the molecular basis of adaptive variation. Nevertheless, overcoming this and other pending challenges will require an increased interaction between theoretical, experimental and empirical approaches and between genetics and ecology. The proved importance of genetics for species persistence and the significant contribution of genetic techniques to conservation practice call for an increased presence of genetics in species conservation, both in policy-making and management. Key words: conservation genetics, molecular markers, molecular ecology, conservation units, management units, genetic diversity, inbreeding, genetic structure, phylogeography, phylogeny.
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La presencia de la gentica en general, y de los marcadores moleculares en particular, en las reas de la ecologa y la evolucin no ha dejado de crecer en las ltimas dcadas, como bien pretende ilustrar este nmero monogrfico. El mbito de la conservacin biolgica no ha sido una excepcin y este proceso ha dado lugar a la disciplina de la gentica de la conservacin. La maduracin y consolidacin de esta disciplina ha estado marcada por la aparicin reciente de varios libros monogrficos (Avise y Hamrick 1996; Smith y Wayne 1996; Frankham et al. 2002; Allendorf y Luikart 2007) y una revista cientfica (Conservation Genetics, Springer Netherlands) expresamente dedicados a este tema. Esta revisin pretende ofrecer una visin esquemtica del mbito y el estado actual de la disciplina, con un nfasis en los mltiples usos que los marcadores moleculares ofrecen para el conocimiento y la conservacin de la biodiversidad y con ejemplos cercanos de nuestro entorno. Por ltimo, exploraremos los avances recientes y las oportunidades y desafos que el futuro plantea para esta joven y dinmica disciplina.
El papel de la gentica en la conservacin

Los antecedentes de la disciplina se pueden retrotraer a las preocupaciones tempranas por el mantenimiento de la diversidad gentica en especies explotadas, que fueron trasladadas al mbito de las especies silvestres con la descripcin de diversidad reducida acompaada de problemas reproductivos en especies emblemticas como el guepardo (OBrien et al. 1983). La prdida de potencial adaptativo asociada a la prdida de diversidad gentica, junto a la disminucin de eficacia biolgica promedio resultante de la acumulacin de endogamia y de alelos deletreos, se identificaron como riesgos de naturaleza gentica para la persistencia de las especies. Aunque la importancia de este riesgo frente a otros de naturaleza demogrfica y ecolgica fue cuestionada al principio (Caro y Laurenson 1994; Caughley 1994), algunos resultados experimentales y cada vez ms estudios empricos indican que tanto la magnitud de estos cambios como sus consecuencias pueden llegar a ser importantes y relevantes para la conservacin de las especies (Frankham 2005). Los factores genticos pueden describirse mejor, por tanto, como ingredientes clave en la receta de factores interactuantes que alimentan el torbellino de la extincin. Ms aun, se empieza a reconocer que la trascendencia de la diversidad gentica intraespecfica va mas all de sus efectos sobre la dinmica poblacional, para afectar a la estructura de las comunidades y a los procesos ecosistmicos (Hughes et al. 2008; Whitham et al. 2006; Verd 2009). Evaluar el estado gentico de las poblaciones y proponer medidas para preservar la diversidad gentica y prevenir los riesgos de naturaleza gentica para la persistencia de las poblaciones han sido pues objetivos centrales y fundamentales de la gentica de la conservacin para los que los marcadores moleculares han resultado enormemente tiles. Sin embargo, la aplicacin de los marcadores moleculares en conservacin no se limita a esto, sino que stos tambin pueden contribuir de manera fundamental al entendimiento de la historia evolutiva, la demografa y la ecologa de las especies en peligro. Los marcadores moleculares nos permiten describir patrones genticos en las poblaciones naturales a escalas que van desde individuos a especies. A partir de estos patrones, y aplicando la rica y extensa teora evolutiva y de gentica de poblaciones, podemos hacer inferencias sobre los procesos demogrficos y evolutivos que han actuado sobre la especie a distintas profundidades temporales. Es el conocimiento de estos procesos el que debe guiar la delimitacin de unidades de conservacin, la evaluacin de riesgos y el diseo de estrategias de conservacin. Por ltimo, los marcadores moleculares aportan herramientas eficientes para la identificacin de especies, asignacin de individuos a poblaciones, e identificacin de individuos que han encontrado numerosas aplicaciones en la prctica conservacionista.
Filogenias, prioridades de conservacin y factores de extincin

Los marcadores moleculares, en combinacin con mtodos de reconstruccin filogentica, han sido utilizados desde hace dcadas para la reconstruccin de las relaciones evolutivas entre especies, con la aspiracin ultima de reconstruir el rbol de la vida (Maddison et al. 2007). En el contexto de la conservacin, este tipo de enfoques permiten tomar en consideracin las divergencias evolutivas en las medidas de biodiversidad (Faith 2002) e invocar a la distincin filogentica como criterio para asignar prioridades de conservacin (e.g. Isaac et al. 2007). Al mismo tiempo las filogenias moleculares han sido utilizadas en combinacin con el mtodo comparativo para identificar los correlatos ecolgicos de la susceptibilidad a la extincin (e.g. Owens y Bennett 2000)
Historia evolutiva, filogeografa y unidades de conservacin

Cuando los mtodos filogenticos adquieren una mayor relevancia para la conservacin de especies es cuando se utilizan para analizar las relaciones entre alelos muestreados dentro de las especies. El anlisis filogentico de datos intraespecficos permite reconstruir la genealoga de la especie e investigar aspectos de su historia evolutiva reciente en un contexto geogrfico, incluyendo eventos de aislamiento y divergencia, expansin de rango, contacto secundario, etc. (Avise 2000). Estos enfoques han permitido constatar para muchas especies la existencia de unidades intraespecficas con suficiente divergencia evolutiva como para requerir una conservacin independiente (ESUs, (Moritz 1994)), o incluso para ser designadas como especies distintas (ver Sez 2009). El razonamiento subyacente es que las divergencias en secuencias mitocondriales sugieren un periodo de evolucin en aislamiento, que puede haber conllevado la evolucin de divergencias adaptativas y, eventualmente, aislamiento reproductivo. La posibilidad de que se den divergencias adaptativas en ausencia de aislamiento y
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divergencias mitocondriales profundas sin que estas estn acompaadas de divergencias adaptativas, ha llevado en los ltimos aos a reconocer las limitaciones de los mtodos estrictamente moleculares, y a insistir en la necesidad de definiciones de unidades de conservacin que consideren explcitamente las divergencias en caractersticas ecolgicas (e.g. Crandall et al. 2000). La mezcla de linajes divergentes puede acarrear consecuencias negativas para las poblaciones por la posible disrupcin de interacciones adaptativas entre genes (intrnsecas) o entre genes y ambiente (extrnsecas), un fenmeno conocido como depresin por exogamia (Edmands 2007). Aunque los ejemplos empricos de este fenmeno son escasos, sobre todo en relacin a los abundantes ejemplos de depresin consangunea, es un fenmeno que ha podido pasar en parte desapercibido por la posibilidad de que se manifieste en una segunda generacin, incluso despus de haberse observado heterosis en la primera. En el caso de Europa, los linajes divergentes se han originado tpicamente como resultado de periodos de aislamiento en las pennsulas mediterrneas durante los mximos glaciares (Taberlet et al. 1998; Hewitt 1999). En el caso del oso pardo, por ejemplo, se han identificado dos linajes principales, uno oriental y uno occidental, que a su vez se subdivide en dos sublinajes correspondientes a los refugios balcnico e ibrico. Este ltimo parece haber sido el principal responsable de la recolonizacin posglacial de Europa occidental, y ahora se extiende hasta la pennsula escandinava, donde se encuentra con el linaje oriental (Taberlet y Bouvet 1994; Taberlet et al. 1995). Aunque la interpretacin ms estricta de los resultados mitocondriales sugiere la separacin de los osos ibricos y balcnicos en dos unidades de conservacin, el estado de grave amenaza de las poblaciones ibricas y la posibilidad de divergencias adaptativas entre los osos ibricos y los escandinavos llevaron a proponer la reunin de osos ibricos y balcnicos en una nica unidad de conservacin (Taberlet y Bouvet 1994), que se materializ con la seleccin de osos eslovenos, de linaje balcnico, para el reforzamiento de las poblaciones de Pirineo. Es ms, el anlisis reciente de ADN antiguo de osos en la pennsula ibrica detect la presencia de haplotipos de los otros linajes en Iberia durante el pleistoceno y el holoceno, sugiriendo la existencia de flujo gnico abundante a travs de Europa en el pasado (Valdiosera et al. 2008). Por otro lado, el anlisis de la variacin mitocondrial en el quebrantahuesos revel la existencia de dos linajes africano/oriental y occidental- que divergieron en aislamiento pero que entraron posteriormente en contacto tras la expansin de linaje oriental hacia Europa (Godoy et al. 2004). En este caso, la mezcla natural de los linajes en el pasado, la ausencia de indicios de divergencias adaptativas y la precaria situacin de las poblaciones occidentales, aconseja tratar a la especie como una nica unidad de conservacin y valida la gestin conjunta de los linajes que ya se estaba realizando en el programa europeo de cra en cautividad. Por ltimo, los estudios filogeogrficos tambin pueden ser tiles en conservacin al ayudar a determinar el origen geogrfico de invasiones biolgicas, lo que resulta clave para limitar y prevenir el problema y para optimizar las medidas de control biolgico (Goolsby et al. 2006).
Estructura gentica, dispersin y unidades de gestin

Los anlisis de estructura gentica basados en frecuencias allicas han dominado con mucho las aplicaciones de marcadores moleculares en ecologa y conservacin. Estos datos permiten testar la existencia de diferencias significativas en la composicin gentica de las distintas poblaciones de una especie, y describir el nivel de diferenciacin a travs de ndices de distancia o de fijacin. La existencia de estructura para marcadores moleculares permite descartar la panmixia e indica, pues, un cierto grado de aislamiento gentico de las poblaciones, pero se ha de ser cuidadoso con la interpretacin biolgica de estos patrones. Por una parte, el alto nivel de resolucin que aportan marcadores hipervariables como los microsatlites puede resultar en una estructura con significacin estadstica pero no biolgica en situaciones en las que esta diferenciacin ha sido impulsada exclusivamente por la deriva en poblaciones recientemente aisladas (Hedrick 1999). Esta es la situacin en la que se encuentra el guila imperial ibrica y el lince ibrico. La poblacin de Doana de guila imperial se encuentra levemente diferenciada del resto de poblaciones para marcadores moleculares, incluso en presencia de flujo gnico (MartinezCruz et al. 2004), pero el anlisis de muestras histricas indica que la situacin era de panmixia a principios de siglo (Martinez-Cruz et al. 2007). Por otra parte, las dos poblaciones remanentes de lince ibrico en Doana y Sierra Morena, muestra unos niveles de diferenciacin altos para marcadores moleculares, pero tanto los datos moleculares como lo que sabemos de la historia demogrfica reciente, que indican la probable conexin de ambas poblaciones en un pasado reciente, sugieren que esto se debe a la accin de la deriva en tiempos recientes en consonancia con los tamaos efectivos y el tiempo desde el aislamiento de cada poblacin (Johnson et al. 2004). Por otra parte, la ausencia de estructura para marcadores neutrales no permite descartar categricamente la existencia de divergencias adaptativas, debido a la posibilidad que esta se desarrolle incluso en presencia de abundante flujo gnico, aunque esta posibilidad requiera invocar gradientes de seleccin especialmente intensos (Lenormand 2002). El significado de la estructura gentica ha de interpretarse pues con sumo cuidado y en combinacin con informacin sobre la ecologa (heterogeneidad ambiental) y la demografa de la especie (cuellos de botella y dispersin).
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De hecho, los marcadores moleculares ofrecen una batera de mtodos para estimar dispersin, un parmetro poblacional de una enorme relevancia en ecologa, biologa de poblaciones y conservacin, pero que se ha mostrado especialmente difcil de estimar por otros mtodos. La aproximacin tradicional basada en estimaciones a partir de los ndices de diferenciacin y la invocacin de un modelo de equilibrio migracin-deriva ha sido ampliamente criticada por imprecisa y por la improbabilidad del equilibrio en la mayora de las situaciones naturales que afectan a poblaciones recientemente perturbadas (Neigel 2002; Whitlock y McCauley 1999). Nuevos mtodos basados en la teora del coalescente pretenden ser ms precisos al utilizar la informacin genealgica que los estadsticos resumen no capturan (Beerli y Felsenstein 2001), o permiten eliminar las asunciones de equilibrio (Hey y Nielsen 2004). En todos estos casos las estimas de flujo gnico son obtenidas de manera indirecta y reflejan promedios para tiempos evolutivos recientes. No obstante, los marcadores moleculares pueden aportar tambin estimas de dispersin contempornea por mtodos directos. Estos se basan en la observacin repetida de un genotipo individual en dos poblaciones distintas (e.g. Palsboll et al. 1997), en la exclusin de todos los potenciales donadores locales de gametos o propgulos (e.g. Garca et al. 2007), o en la asignacin probabilsitica de los genotipos a poblaciones distintas a las que fueron muestreados (Berry et al. 2004). En base a esta ltima posibilidad se han desarrollado mtodos que simultneamente infieren el nmero de grupos genticos (poblaciones) distintos en una muestra y asignan fraccionalmente los individuos a cada uno de los grupos inferidos, incluso en ausencia de informacin sobre la poblacin o el lugar en la que fueron muestreados (Mank y Avise 2004). Las estimas obtenidas por mtodos moleculares han permitido investigar algunos de sus condicionantes ecolgicos de la dispersin, como rasgos de la historia de vida (Duminil et al. 2007) o la influencia de la matriz del paisaje (Holderegger y Wagner 2008). Este ltimo enfoque permite testar el efecto de barreras potenciales a la dispersin y optimizar el diseo de corredores ecolgicos para especies con distribuciones fragmentadas (Epps et al. 2007). Adems, estas estimas pueden jugar un papel clave en la delimitacin de unidades de gestin, i.e. grupos de poblaciones que, por no ser demogrficamente independientes, requieren una gestin conjunta (Palsboll et al. 2007).
Diversidad gentica y endogamia: evaluacin de riesgos

Evaluar la diversidad gentica de las especies en peligro, sopesar los posibles riesgos de naturaleza gentica y valorar la oportunidad de acciones de manejo que permitan maximizar la primera y minimizar los segundos son objetivos importantes y asumidos en la gentica de la conservacin. Los marcadores moleculares han sido utilizados ampliamente para estimar la diversidad gentica de las poblaciones. Los datos empricos revelan un patrn general de menor diversidad en especies amenazadas que en especies hermanas no amenazadas (Spielman et al. 2004). Estas comparaciones entre especies no permiten, sin embargo, determinar si la menor diversidad actual es una consecuencia directa del declive reciente o es una caracterstica intrnseca de la especie. En algunos casos, la disponibilidad de muestras en forma de ejemplares naturalizados que predatan el declive reciente permite distinguir entre estas dos posibilidades. As se ha podido demostrar que el declive reciente del guila imperial no ha conllevado prdidas significativas de diversidad nuclear, pero si de diversidad mitocondrial (Martinez-Cruz et al. 2007), o que la diversidad mitocondrial del quebrantahuesos ha quedado muy mermada como consecuencia de la extincin de poblaciones genticamente diferenciadas en Europa (Godoy et al. 2004). La otra gran preocupacin en poblaciones en declive es el aumento de la consanguinidad y sus posibles consecuencias negativas para la viabilidad de los individuos y las poblaciones. La ocurrencia de depresin consangunea se ha documentado ampliamente en poblaciones cautivas y silvestres. Los marcadores moleculares pueden aportar estimas de consanguinidad para poblaciones e individuos, que en algunos casos se han usado para demostrar la ocurrencia de depresin consangunea en poblaciones silvestres (Keller y Waller 2002). Paradjicamente, la ocurrencia de depresin consangunea puede ser especialmente difcil de demostrar en poblaciones amenazadas que han pasado por cuellos de botella recientes (Grueber et al. 2008). No obstante, los marcadores moleculares pueden aportar informacin sobre la historia de vida de la especie y la demografa previa que permita sopesar los riesgos relativos de ocurrencia de depresin consangunea. En particular, pueden ayudar a detectar la existencia de cuellos de botella en la historia reciente de las poblaciones y estimar los tamaos poblacionales efectivos. El primer tipo de anlisis se basa en detectar desviaciones en los patrones genticos observados respecto a lo esperado en el equilibrio mutacin-deriva para una poblacin estable. Por ejemplo, una reduccin poblacional intensa conduce a un aumento transitorio de la heterocigosidad respecto a la esperada en el equilibrio mutacin-deriva debido a la perdida preferente de alelos a baja frecuencia, (Luikart et al. 1998), o a una reduccin en la relacin entre el numero de alelos en un microsatlite con respecto a su rango allico (Garza y Williamson 2001). Ms recientemente, se han desarrollado mtodos bayesianos basados en la teora del coalescente para estimar cambios demogrficos histricos (Beaumont 1999). De nuevo, la disponibilidad de muestras histricas permite testar de manera mas directa la ocurrencia de cuellos de botella e incluso estimar la fecha y tamao del cuello (Chan et al. 2006). Por ultimo, los patrones genticos para marcadores moleculares pueden aportar estimas del tamao efectivo poblacional, parmetro clave para predecir los dinmica gentica de la poblacin por efecto de la deriva (Wang 2005).
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Herramientas moleculares para la prctica conservacionista

Los marcadores moleculares aportan tambin mtodos eficientes para la asignacin de muestras a especies, poblaciones o individuos, los cuales han encontrado mltiples aplicaciones en la prctica conservacionista. Por un lado, es posible asignar muestras a especies de manera no ambigua, incluso a partir de materiales altamente procesados o restos difcilmente identificables, a travs de secuenciacin de fragmentos informativos y posterior anlisis filogentico, o mediante ensayos moleculares diagnsticos. Este tipo de mtodos ha permitido constatar la presencia de especies esquivas o de muy baja densidad en reas concretas a partir de sus restos (Gomez-Moliner et al. 2004; Lopez-Giraldez et al. 2005; Palomares et al. 2002), investigar la identidad taxonmica de los ltimos ejemplares de esturiones del Guadalquivir (de la Herran et al. 2004; Gasent et al. 2001) y constatar la comercializacin ilegal de productos de especies amenazadas de ballenas o esturiones (Baker et al. 1996; DeSalle y Birstein 1996). La eficiencia de estos los mtodos moleculares de identificacin de especies ha motivado una propuesta de estandarizacin y aplicacin a gran escala cuyo objetivo es inventariar la vida sobre el planeta (The Barcode of Life; Ratnasinghaam y Hebert 2007). Los marcadores moleculares tambin aportan herramientas eficientes para la identificacin de hbridos entre especies o poblaciones divergentes. Estos mtodos han permitido constatar y cuantificar la ocurrencia de hibridacin entre lobos y perros (Vila et al. 2003), gatos monteses y domsticos (Oliveira et al. 2008), y entre especies autctonas y reintroducidas de perdiz (Negro et al. 2001) o malvasa (Muoz-Fuentes et al. 2007), por ejemplo. Por otro lado, la asignacin gentica de individuos a poblaciones promete ser til en el control de vedas regionales y en la deteccin de capturas y translocaciones ilegales (Manel et al. 2002), por ejemplo, en especies cinegticas (Frantz et al. 2006). A nivel individual las tcnicas moleculares permiten asignar gnero a muestras y restos recurriendo a marcadores ligados a los cromosomas sexuales, existiendo marcadores de amplio espectro tanto para aves (Fridolfsson y Ellegren 1999; Griffiths et al. 1998) como para mamferos (Buel et al. 1995; Fernando y Melnick 2001; Griffiths y Tiwari 1993). En aves con dimorfismo sexual escaso o nulo estas tcnicas previenen emparejamientos de individuos del mismo sexo en los programas de cra en cautividad o asisten en la seleccin de individuos para reforzamientos. El sexaje molecular del ltimo guacamayo de Spix en libertad a partir de una pluma permiti seleccionar individuos del sexo adecuado para ser liberados como potenciales parejas (Griffiths y Tiwari 1995). Por ltimo, la aplicacin de marcadores hipervariables para la identificacin individual a partir de muestras obtenidas por mtodos no invasivos, como excrementos, pelos o plumas ha encontrado mltiples aplicaciones para la gestin y conservacin de la fauna. La observacin de un determinado genotipo en un resto biolgico se puede considerar una captura o recaptura del individuo correspondiente que puede utilizarse para inventariar genticamente la poblacin, delimitar el uso del espacio por los distintos individuos, y para obtener estimas de parmetros poblacionales que son crticos para un adecuado manejo, como el tamao poblacional, las distancias de dispersin, las tasas de inmigracin, y la contribucin de los inmigrantes a la reproduccin, por ejemplo (Waits y Paetkau 2005). Esta metodologa se est aplicando con xito al seguimiento de las poblaciones cntabras de osos pardos (Prez et al. 2009) y de lince ibrico (Godoy et al., datos sin publicar).
Avances recientes y perspectivas de futuro

Numerosos avances recientes tanto en la obtencin de datos como en los mtodos de anlisis han revolucionado la disciplina de la gentica de la conservacin. Parte de estos progresos estn relacionados con la ampliacin del tipo de muestras susceptible de ser analizadas con marcadores moleculares. El anlisis de restos biolgicos que pueden ser colectados de manera no invasiva, como excrementos, pelos o plumas, facilita enormemente el anlisis de especies raras o evasivas, y posibilita la monitorizacin demogrfica y gentica de las poblaciones (Waits y Paetkau 2005). Por otro lado, las muestras histricas, arqueolgicas o paleontolgicas ofrecen la oportunidad de anlisis genticos a travs del tiempo que permiten testar de manera ms directa hiptesis filogeogrficas, evolutivas y demogrficas (Leonard 2008; Wandeler et al. 2007). Al mismo tiempo, han aumentado tanto el nmero de marcadores usados como su diversidad. La reconstrucciones filogenticas y los trabajos filogeogrficos han estado dominados en el pasado por el uso exclusivo de marcadores mitocondriales, que presentan algunas ventajas obvias, como su haploida y ausencia de recombinacin, pero tambin inconvenientes manifiestos, como la presencia de copias nucleares y una posible influencia de la seleccin mayor de lo esperado (Ballard y Whitlock 2004). Lo que es mas importante, la apreciacin de la enorme estocasticidad asociada a los procesos genealgicos han llevado al reconocimiento de la necesidad de incorporar mltiples secuencias nucleares en los anlisis de la historia evolutiva de las especies (Knowles y Maddison 2002). La aparicin de marcadores que permiten ensayar simultneamente cientos o miles de loci repartidos por el genoma, como los polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFLP) o los polimorfismos de un solo nucletido (SNPs), prometen aumentar la resolucin de las inferencias demogrficas y facilitar el anlisis de la variacin adaptativa (ver abajo).
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El segundo aspecto que se ha beneficiado de avances significativos recientes es el de los anlisis de datos genticos para las inferencias demogrficas y evolutivas. Las inferencias realizadas en filogeografa, que han estado tradicionalmente basadas en la construccin de un rbol o red filogenticos, la superposicin de este sobre un mapa y la reconstruccin de historias filogeogrficas ad hoc compatibles con el rbol, ha pasado por procedimientos de inferencia ms explcitos y objetivos como el anlisis filogeogrfico de clados anidados (NCPA, (Templeton 1998)), y ha derivado en los ltimos aos en una apuesta por la incorporacin de mtodos ms explcitamente estadsticos en los que se evala la verosimilitud de escenarios filogeogrficos alternativos (Knowles 2004). Esto ha sido posible gracias al desarrollo de mtodos basados en la teora del coalescente (Hudson 1990), que permiten relacionar modelos demogrficos y rboles de genes incorporando la estocasticidad inherente a los procesos genealgicos. Por otra parte, el anlisis de la estructura gentica se ha visto fuertemente influenciado por la aparicin de algoritmos que permiten inferir el numero de poblaciones en la muestra y asignar de manera probabilstica cada uno de los individuos, o fracciones de su genoma, a cada uno de estos grupos, incluso obviando la informacin a priori sobre la poblacin de origen de las muestras o sus coordenadas espaciales (Corander et al. 2004; Pritchard et al. 2000). Todos estos nuevos mtodos han hecho un uso creciente de la estadstica bayesiana (Beaumont y Rannala 2004) y de algoritmos eficientes, pero computacionalmente demandantes, basados en Monte Carlo y cadenas de Markov (Marjoram y Tavare 2006).
Perspectiva: retos y oportunidades.

Sin duda, una de las objeciones ms habituales al uso de marcadores moleculares en conservacin es que al ser supuestamente neutrales no tienen por qu reflejar la variacin para caracteres cuantitativos, ms directamente relacionada con la adaptacin contempornea o con el potencial de adaptacin futura. Las comparaciones de diversidad y diferenciacin para marcadores moleculares y para caracteres cuantitativos muestran una correlacin positiva significativa, pero en general dbil y muy variable entre poblaciones, caracteres y estudios, siendo todava una cuestin controvertida (McKay y Latta 2002). El anlisis molecular de la variacin adaptativa es, sin embargo, posible y cada vez ms accesible a travs de varias estrategias que incluyen el anlisis de asociaciones marcador/ambiente, el mapeo de QTLs, el anlisis de genes candidatos, los escrutinios genmicos y los anlisis de expresin gnica (Perfectti et al. 2009; Vasemagi y Primmer 2005). En el contexto de la conservacin, el anlisis molecular de la variacin adaptativa ha estado prcticamente limitado al anlisis de variacin en los genes del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en animales, por su papel clave en la respuesta a patgenos (Piertney y Oliver 2006). La nueva generacin de tecnologas de secuenciacin genmica (Hudson 2008) promete facilitar sustancialmente la deteccin de genes responsables de caracteres claves para la eficacia, incluyendo genes deletreos y genes implicados en adaptaciones locales (Kohn et al. 2006; Ryder 2005). Se ha llegado ya a proponer ndices que pretenden medir la diversidad adaptativa de la poblaciones a partir de la frecuencia de genes con seales de seleccin encontrados en escrutinios genmicos (Bonin et al. 2007). A pesar de la gran contribucin ya realizada por los marcadores moleculares y de las promesas de las nuevas tecnologas de anlisis genmico, el progreso de la disciplina y su impacto en la conservacin de la biodiversidad podran beneficiarse de una mayor integracin a tres niveles. Una primera necesidad de integracin es entre disciplinas: se echa de menos una mayor presencia de la gentica cuantitativa y un mayor nivel de interaccin con la ecologa, necesario como hemos visto para trascender las limitaciones impuestas por la naturaleza neutral de los marcadores moleculares. En este sentido, la gentica de la conservacin puede verse como un aspecto aplicado de la ecologa evolutiva (Latta 2008). Un segundo nivel de integracin que podra resultar en avances sustantivos en la disciplina, tanto en sus aspectos fundamentales como en los aplicados, es entre sus hasta ahora generalmente separados enfoques terico, experimental y emprico (Pertoldi et al. 2007). Por ltimo, la gentica de la conservacin tiene en gran medida pendiente su integracin en la prctica conservacionista, tanto a nivel de legislacin como de gestin (Vernesi et al. 2008). Aunque los principios generales como la importancia de preservar la variacin interespecfica y respetar las divergencias adaptativas intraespecficas quedan recogidos generalmente en los enunciados de las leyes de proteccin de la biodiversidad europeas y nacionales, esto no se traduce en la posibilidad de proteger discontinuidades significativas dentro de las especies al mismo nivel que las especies, como sucede en la legislacin estadounidense (Fallon 2007). Por otro lado, la consideracin de los aspectos genticos sigue teniendo escasa relevancia para la conservacin de las especies en general y los gestores hacen escaso uso de la informacin gentica disponible. Aunque esto puede interpretarse como un aspecto mas de un divorcio difcilmente reconciliable entre ciencia y gestin (Mace y Purvis 2008), en este caso ste puede estar agravado por la tradicional separacin curricular entre formacin de campo y de laboratorio, en la que la mayora de los gestores ha quedado del lado de la primera. No obstante, la situacin en nuestro pas no es del todo desalentadora. Muchas de las Estrategias de Conservacin de Especies Amenazadas ya aprobadas, incluidas las del oso pardo, el guila imperial ibrica, el quebrantahuesos, el urogallo y el lince ibrico, hacen mencin expresa a los riesgos de empobrecimiento gentico y reconocen la necesidad de informacin gentica que gue las actuaciones de conservacin y gestin. En el caso del lince ibrico, las preocupaciones sobre la escasa diversidad y los riesgos de depresin por consanguinidad de la poblacin de Doana han motivado ya acciones de translocacin que se iniciaron en 2007 con el traslado de un macho desde Sierra Morena que produjo las primeras camadas mixtas nacidas en libertad en la primavera de 2008.
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La gentica de la conservacin y la aplicacin de marcadores moleculares son ya elementos a los que no nos podemos permitir renunciar en nuestros esfuerzos por entender y conservar la biodiversidad. Afrontar los enormes retos que el futuro nos depara exigir, entre otras muchas cosas, un mejor entendimiento de la dinmica de los genes en situaciones de declive, fragmentacin y cambios ambientales sin precedentes. Esta tarea slo ser abordable con una verdadera empresa multidisciplinar que exigir romper las tradicionalmente slidas barreras entre disciplinas y en la que la gentica debe jugar un papel clave.
Referencias
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Aplicaciones de protemica en ecologa y evolucin

A. Cieslak 1 , I. Ribera 2
(1) Museo Nacional de Ciencias Naturales (CSIC), 28006 Madrid, Espaa. (2) Institut de Biologia Evolutiva (CSIC-UPF), 08003 Barcelona, Spain
Cieslak, A., Ribera, I. (2009). Aplicaciones de protemica en ecologa y evolucin. Ecosistemas 18(1):34-43. La evolucin de las caractersticas ecolgicas de las especies es uno de los temas ms intensamente estudiados, pero su complejidad suele limitar estos estudios a evidencias indirectas de las adaptaciones reales de los organismos. Recientemente, mtodos moleculares como los "micro-arrays" y la secuenciacin a gran escala han incrementado de manera notable el conocimiento de los genomas y las vas metablicas. Con ello, ha sido posible por primera vez estudiar con detalle la interaccin a nivel molecular de los organismos con su medio. Sin embargo, la investigacin de los procesos bioqumicos asociados a cuestiones ecolgicas y evolutivas relacionando a los organismos con sus hbitats se suele limitar a los llamados "organismos modelo". Los ltimos avances en protemica han permitido un enorme incremento de su uso en ecologa y biologa evolutiva. Estas metodologas son en muchos aspectos perfectamente aplicables a estudios ecolgicos, ofreciendo la posibilidad de trabajar con una amplia gama de organismos. En este trabajo hacemos una breve revisin de las principales metodologas y de cmo la protemica se ha utilizado hasta la fecha en diferentes estudios ecolgicos y evolutivos en organismos no-modelo. Palabras clave: expresin de protenas, organismos no-modelo, electroforesis bidimensional, secuenciacin de protenas, diferenciacin ecolgica, especiacin. Cieslak, A., Ribera, I. (2009). Applications of proteomics in ecology and evolution. Ecosistemas 18(1):34-43. The evolution of ecological traits has been subject to intense research efforts for a long time. The complexity of ecological traits usually limits these studies to indirect evidence on the actual adaptive variations. More recently, molecular methods, such as micro-arrays and large-scale genomic sequencing, considerably increased the knowledge on genomes and metabolic pathways. With this, it became possible for the first time to study in detail the interaction of organisms and their environment at the molecular level. However, the investigation of biochemical processes associated to ecological and evolutionary questions relating organisms to their habitats are typically restricted to so-called model organisms. The latest methodological advances in proteomics led to a strongly increase in their use in ecology and evolutionary biology. These approaches are in many respects suitable for ecological studies, and offer the possibility to work on a wide range of organisms. Here we briefly review the methodology and describe how proteomics has been used to date in different fields of evolutionary biology and ecology in non-model organisms. Key words: protein expression, non-model organisms, bidimensional electrophoresis, protein sequencing, ecological differentiation, speciation.
Introduccin
La utilizacin de protenas como herramienta de estudio en ecologa y evolucin se desarroll inicialmente con el uso generalizado de los isoenzimas a partir del final de los aos 60 (Murphy et al. 1996), pero con el descubrimiento de la tcnica de la PCR (Mullis y Faloona 1987) y el mtodo Sanger de secuenciacin (Sanger et al. 1977) se abandon progresivamente ante la posibilidad de obtener directamente la secuencia de ADN. El uso de isoenzimas como marcadores moleculares, o el estudio de protenas individuales, no puede tampoco considerarse como protemica en el sentido actual del trmino, que implica el estudio de la expresin global de protenas de un organismo (o por lo menos de una fraccin cuantitativamente significativa) (Brower 2001). Aunque algunas de las tcnicas utilizadas en protemica, y en especial la electroforesis bidimensional, se desarrollaron mucho antes (Henry et al. 1968), inicialmente se utilizaron casi de modo exclusivo en estudios de fisiologa y bioqumica humanas, dada la complejidad y el coste econmico del mtodo. La metodologa se basa en la combinacin de dos procesos de separacin, el primero (Iso-Electric Focusing, IEF) segrega las protenas en base a su
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punto isoelctrico en un gradiente de pH, y el segundo en base a su tamao molecular. El trmino protemica se acu a principios de los 90, cuando la metodologa se mejor y fue posible obtener resultados altamente reproducibles, permitiendo identificar y caracterizar protenas con gran precisin. El principal avance metodolgico fue la invencin de los gradientes de pH inmovilizados (IPGs, de su nombre en ingls, Bjellqvist et al. 1982), y la mejora de los geles de electroforesis de poliacrilamida, originalmente descritos por Laemmli (1970). La posibilidad de secuenciar de forma automtica las protenas aisladas de los geles (Edman y Begg 1967) potenci el uso de los geles bidimensionales, aunque solo el desarrollo de tcnicas de caracterizacin mediante espectrometra de masas (MALDI-TOF o MALDI-TOF-MS) permiti su uso generalizado, al permitir identificar de un modo ms econmico muestras pequeas de protenas una vez digeridas enzimticamente (Kumarathasan et al. 2005). La posibilidad de aislar, cuantificar y secuenciar protenas mediante geles bidimensionales de alta resolucin es una herramienta muy poderosa para el estudio de un amplio espectro de procesos ecolgicos y evolutivos abordables desde una perspectiva comparativa. La posibilidad de estudiar los cambios en la expresin de protenas causados por cualquier tipo de estmulo en cualquier organismo siempre estuvo presente, aunque su aplicacin en ecologa o evolucin, adems de las dificultades tcnicas y el elevado coste, no habra permitido ir mucho ms all de la informacin que ya se poda obtener mediante las tcnicas de estudio tradicionales para procesos fisiolgicos o del desarrollo. Con el advenimiento de la era genmica, el crecimiento exponencial de las secuencias conocidas y la posibilidad de identificar las protenas obtenidas produjeron un efecto sinrgico entre los estudios genmicos y los estudios de expresin de genes (Brower 2001). Por primera vez fue posible identificar las protenas de modo relativamente fcil y econmico, y asociar estas identificaciones a procesos fisiolgicos y vas metablicas. En su inicio estas posibilidades estaban muy restringidas a un pequeo nmero de organismos modelo, supuestamente representativos de grandes grupos de animales. Dos factores han ayudado a superar este problema: (1) el reconocimiento de la homologa entre los mecanismos moleculares bsicos de todos los organismos, tanto a nivel de secuencia de protenas como de procesos metablicos (ver Karr 2008 para una revisin reciente), y (2) la identificacin de virtualmente todos los cADNs expresados en algunos organismos modelo y sus transcripciones putativas en protena (los ORF, open reading frame). A pesar del crecimiento continuo de las bases de datos pblicas, de su interconectividad y de la posibilidad de hacer anlisis comparativos de procesos del desarrollo y de vas fisiolgicas de modo relativamente sencillo, el anlisis de procesos complejos en organismos no-modelo sigue comportando grandes dificultades tanto tcnicas como conceptuales. En este trabajo nos centraremos en las aplicaciones en ecologa y evolucin de una de las tcnicas protemicas ms utilizadas y accesibles, la electroforesis bidimensional (2-DE). Existen numerosos trabajos especializados detallando los aspectos ms tcnicos del mtodo (ver por ejemplo Grg y Weiss 2006; Kraj y Silberring 2008; o Westermeier et al. 2008), as como algunas revisiones recientes sobre el uso de 2-DE en ecologa y evolucin (Anderson et al. 2000; Navs y Albar 2003; Lpez 2007; Karr 2008; ver Tabla 1 y Apndice). Aqu expondremos slo los aspectos ms generales de la metodologa, para centrarnos a continuacin en algunas de las aplicaciones que consideramos ms prometedoras, as como en dar una visin general de las principales tendencias en los estudios publicados hasta la fecha.
Procedimiento metodolgico
Electroforesis bidimensional El principio bsico de la electroforesis bidimensional (2-DE) es la separacin en dos gradientes perpendiculares de una muestra de protena aislada del organismo (habitualmente protena total), bien sea del organismo entero, de una muestra de tejido o de fluido, o de un cultivo celular. En general, las protenas se denaturalizan, aunque es posible aislarlas en su forma activa nativa. El primer paso es separar la mezcla de protenas de acuerdo a su punto isoelctrico en un gradiente de pH fijo. El gradiente de pH se puede variar, dependiendo del tipo de protenas que se desea separar con ms precisin, o de si se tiene conocimiento previo de la proporcin de protenas bsicas o cidas en la muestra inicial. En el segundo paso las protenas, ya separadas en el gradiente de pH de acuerdo a su punto isoelctrico, se separan de acuerdo a su masa molecular. La capacidad de resolucin depender de la densidad del polmero utilizado, y de la longitud del gel. Los geles con las protenas separadas en los dos gradientes perpendiculares se tien, habitualmente con plata (Fig. 1), y la distribucin de las manchas con las protenas individuales se fotografa o se escanea (Grg y Weiss 2006; Kraj y Silberring 2008).
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Figura 1. Imagen tpica de un gel bidimensional. El gradiente de pH est en el eje horizontal, incrementndose de derecha a izquierda, en este caso de 3 a 11. El gradiente vertical es de tamao (peso molecular), de 220 a 14.3x10^(-3) kDa (tomado de Cieslak et al. 2007).
La tcnica de electroforesis bidimensional se utiliza habitualmente para comparar los patrones de expresin de protenas en dos o ms muestras, bien sea de ejemplares de diferentes especies, diferentes poblaciones, sometidos a diferentes tratamientos, o de diferentes tejidos del mismo individuo. Normalmente se comprueba la reproducibilidad de los resultados mediante rplicas de la misma muestra, y mediante variaciones en el procedimiento experimental. Existen una serie de normas de buena praxis consensuadas entre los especialistas, que se considera deben cumplir los estudios que utilicen esta tcnica (Taylor et al. 2007; Proteomics standards initiative, ver www.psidev.info, www.fixingproteomics.org). El anlisis comparativo de los geles se realiza mediante programas de anlisis de imagen. Los programas ms avanzados no slo comparan imgenes digitales calibradas con los puntos de referencia establecidos por el investigador, sino que son capaces de calcular la torsin y la deformacin de un gel en comparacin a otro tomado como referencia, de modo que se compensan en parte los errores experimentales. Para evitar en lo posible este error experimental es posible tambin utilizar la tcnica DIGE (Differential In-Gel Electrophoresis, nl et al. 1997), que permite analizar hasta tres muestras simultneamente mediante la utilizacin de tres pigmentos distintos para marcar las protenas, que se visualizan a distintas longitudes de onda. En principio esta tcnica permite evitar completamente los artefactos experimentales introducidos por la electroforesis, aunque la utilizacin de pigmentos distintos puede afectar a la estimacin cuantitativa de la expresin (Krogh et al. 2007). En los anlisis se compara no solo la presencia o ausencia de determinadas protenas, sino los cambios en la intensidad de la expresin. En la Figura 2 se muestran los resultados de la comparacin de patrones de expresin de tejido de una especie de mariposa antes y despus de un determinado tratamiento hormonal (Cieslak et al. 2007). En este ejemplo, se ve como la expresin de algunas protenas se ve alterada por el tratamiento, mientras que otras no se ven afectadas. La identificacin de tres o ms protenas afectadas de modo paralelo sugiere la existencia de un cluster que responde de modo simultneo a un mismo estmulo, permitiendo el estudio de vas o redes metablicas. La caracterizacin de estas vas requiere identificar la protenas y, eventualmente, confirmar los cambios de expresin mediante, por ejemplo, PCR cuantitativas o Western-blotting, caso de que se disponga de anticuerpos de las protenas correspondientes.
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Figura 2. Ejemplo de cambios cuantitativos en la expresin de algunas protenas identificados mediante 2-DE. Las seis imgenes corresponden a un mismo grupo de protenas en un extracto de los discos de las alas de la larva de la mariposa Papilio dardanus, tras someterse in vitro a diferentes tratamientos hormonales con hormona juvenil (JH) y Ecdisona (Ecd). Cada una de las barras verticales en la grfica del gel Ref. indica el nivel de expresin de una protena determinada en un experimento. Este nivel de expresin ha sido determinado por una medida de densiometra de la mancha en el gel (tomado de Cieslak et al. 2007).
Secuenciacin de protenas y anlisis de fragmentos Una vez localizada una protena de inters se puede extraer directamente del gel, e identificarla secuenciando la cadena de amino-cidos, o mediante espectrometra de masas (MS) de los fragmentos resultantes de una digestin enzimtica. La secuenciacin se realiza normalmente por el extremo N, mediante el mtodo descrito por Edman y Begg (1967), que aunque fiable es relativamente caro si se quiere secuenciar toda la protena. Adems, es posible que la secuenciacin se bloquee por la presencia de grupos qumicos como azcares, acetiles u otras modificaciones del amino-cido terminal, lo que requiere un tratamiento especial para eliminarlos y poder iniciar la secuenciacin. Este procedimiento requiere una cantidad mnima de protena (de 0.5 a 1.5 pmol), lo que dificulta la secuenciacin de protenas con niveles de expresin muy bajos. Mediante espectrometra de masas se determina el peso molecular de los fragmentos resultantes de la digestin enzimtica con una proteasa, en lo que se conoce como peptide mass fingerprint (PMF). Conociendo los puntos de digestin de la protena, se puede comparar el patrn resultante con el de otras protenas conocidas, para obtener una identificacin aproximada. Existen programas informticos que asignan probabilidades de identificacin para un patrn de fragmentos, como Mascote (Perkins et al. 1999), Aldente http://www.expasy.org/tools/aldente) o ProFound (Zhang y Chait, 2000). El principal problema de este mtodo es la falta de datos de referencia de organismos no-modelo (Panchaud et al. 2008). Existen otros procedimientos ms recientes que permiten identificar con mayor precisin protenas de organismos no-modelo, sin necesidad de disponer de informacin genmica o protemica. As, es posible identificar sin ambigedades la secuencia de un pptido o un fragmento a partir de su masa molecular, mediante lo que se conoce como peptide sequence tag (PST). El espectro de masas as obtenido se puede asociar a una protena concreta presente en las bases de datos pblicas. Programas que utilizan estos mtodos son, por ejemplo, GutenTag (Tabb et al. 2003) y MultiTag (Sunyaev et al. 2003) para la secuenciacin de pptidos; y Sequest (Eng et al. 1994) o SALSA (Hansen et al. 2001) para el PST. Para muchas aplicaciones no es necesaria una identificacin precisa de la protena, y con una aproximacin que identifique la familia, o el grupo funcional, es suficiente. Estudio de alteraciones metablicas y fisiolgicas En algunos casos es suficiente con identificar la presencia de determinadas protenas como respuesta a un tratamiento, o como marcadores biolgicos (por ejemplo, para identificar la presencia de un parsito en una muestra, Calvo et al. 2005; o para caracterizar la composicin de los venenos de serpiente, Fox y Serrano 2008). Sin embargo, el estudio de respuestas fisiolgicas normalmente requiere la identificacin de vas metablicas con ms de una protena. En estos casos se requiere
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no solo determinar qu protenas estn presentes, sino si estn sobre- o infrareguladas, as como la secuencia temporal de su expresin. Aunque en estos casos la utilizacin de las tcnicas de protemica es ms complicada, su uso abre una enorme variedad de posibilidades para abordar todo tipo de problemas biolgicos en prcticamente cualquier organismo. El conocimiento cada vez ms detallado del metabolismo bsico comn a todos los organismos, la posibilidad de establecer homologas entre secuencias de genes de linajes muy distantes, y la estimacin ms precisa de las relaciones filogenticas entre los grandes grupos facilita la elaboracin de hiptesis acerca de los cambios esperados y la interpretacin de los cambios observados. Cualquier informacin generada en los experimentos es susceptible de ser utilizada en estudios fisiolgicos, ya que las bases de datos pblicas no solo permiten la identificacin de las protenas y los genes involucrados, sino que las enmarcan en vas metablicas especficas que permiten deducir su papel fisiolgico en el organismo. Algunas de estas bases de datos son, por ejemplo, KEGG (www.genome.jp/kegg) o PANTHER (www.pantherdb.org), que incluyen una gran cantidad de vas metablicas junto con sus interconexiones. Una vez identificadas las vas metablicas implicadas, y los mecanismos fisiolgicos generales, de ser necesario siempre es posible disear experimentos ms especficos que permitan un conocimiento ms profundo de los cambios estudiados. Adems de las dificultades inherentes a la falta de informacin genmica y protemica especfica de la mayora de organismos no-modelo, hay que tener siempre en cuenta la posibilidad de que las diferencias observadas se deban a alteraciones no relacionadas directamente con el tratamiento que se quiere testar, sino que sean respuestas inespecficas al estrs, alteraciones experimentales, o a factores colaterales desconocidos. En una revisin reciente, Petrak et al. (2008) encontraron que en una elevada proporcin de estudios de expresin diferencial con 2-DE se repetan las mismas protenas, aunque los procesos o los tratamientos a comparar eran muy distintos. Incluso algunas protenas que habitualmente se consideran de un nivel de expresin muy constante (house-keeping), y que de hecho se utilizan a menudo como referencia para comparar alteraciones en el nivel de expresin (como GAPDH, actina o tubulina), presentan frecuentemente alteraciones no especficas (Petrak et al. 2008). Un problema adicional del uso de organismos no-modelo, con ejemplares capturados en su medio natural y no criados en cautividad en condiciones controladas, son las fuentes de variabilidad no controladas, como su configuracin gentica, su edad o estado fisiolgico, o la presencia de patgenos o parsitos. La presencia de esta variabilidad adicional requiere asegurar la repetibilidad y representatividad de los resultados. A pesar de todo, existen multitud de cuestiones de inters que no se pueden resolver con organismos modelo, de modo que el uso de organismos en su medio natural es imprescindible si se quiere que las tcnicas protemicas se extiendan hasta convertirse en una herramienta ms en el arsenal metodolgico de eclogos y bilogos evolutivos.
Ejemplos del uso de protemica en organismos no-modelo

El uso de geles bidimensionales aplicado a cuestiones ecolgicas y evolutivas en organismos no-modelo se ha desarrollado de forma significativa en los ltimos cinco o seis aos. Sin pretender ser exhaustivos, del cerca del centenar de trabajos considerados en esta revisin ms de la mitad (57) se han publicado desde 2005 (Tabla 1), con un crecimiento prcticamente exponencial. Como ya se ha mencionado, el uso de protemica en organismos no modelo se ha desarrollado paralelamente al desarrollo de la genmica, y a la posibilidad de interpretar los resultados (esto es, la identificacin de protenas expresadas de modo diferencial) en clave ecolgica o evolutiva. Muchos de los trabajos anteriores a la era genmica son bsicamente descriptivos, centrados en la caracterizacin de protenas en organismos con inters comercial (como el mejilln, Lpez 2005) o sanitario, tanto plagas vegetales (nematodos, Van der Beek et al. 1997; Navs et al. 2002; Calvo et al. 2005) como venenos (serpientes, Mackessy 2002; Fox y Serrano 2008; escorpiones, Nascimento et al. 2006; o araas, Yuan et al. 2007) (no se han incluido trabajos especficos de patgenos humanos). En algunas ocasiones las protenas as caracterizadas se han utilizado para establecer relaciones filogenticas entre especies prximas (Aquadro y Avise 1981; Miyazaki et al. 2004), variabilidad gentica entre poblaciones (Fullaondo et al. 2001; Blank et al. 2005; Biron et al. 2006), o la dinmica de zonas hbridas (Diz y Skibinski 2007) (ver la Tabla 1 para ejemplos adicionales). Con la generalizacin del uso de la tcnica de la PCR y la secuenciacin directa del DNA, la aplicacin de datos protemicos para establecer relaciones filogenticas ha desaparecido casi por completo, y solo est justificado cuando el inters no es simplemente reconstruir la filogenia del grupo sino estudiar la evolucin de las protenas o las vas metablicas implicadas (por ejemplo, Toni y Aliberdi 2007; Singh y Matta 2008; Valcu et al. 2008). Solo recientemente se han empezado a utilizar tcnicas de protemica para responder cuestiones ecolgicas o evolutivas que difcilmente podran resolverse de otro modo. Muchas de ellas implican el estudio de las diferencias en adaptaciones ecolgicas o fisiolgicas, tanto de especies prximas como de poblaciones de una misma especie. Ejemplos son el estudio de la tolerancia trmica y los efectos del cambio climtico (Roush et al. 2004; Gardestrom et al. 2007; Prtner y Farrell 2008); cambios asociados al estrs osmtico (salinidad) (Blank et al. 2006; Wang et al. 2008), al establecimiento de simbiosis o el efecto del parasitismo (Biron et al. 2005 para cambios de comportamiento producidos por un parsito; o Barneath et al. 2006 para la simbiosis coral-alga), o cambios asociados a la especializacin ecolgica y la especiacin (Martnez-Fernndez et al. 2008; Ramm et al. 2009). La ltima generacin de mtodos de espectrometra permite secuenciar el proteoma de forma masiva e indiscriminada, sin seleccin
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previa. Se hace posible as el anlisis de la expresin de protenas de comunidades o ecosistemas en su totalidad (Nunn y Timperman 2007 para sistemas marinos, o Banfield et al. 2005 y Denef et al. 2007 para estudios de biofilms de procariotas), estudiar respuestas fisiolgicas generales (e.g. al estrs osmtico, Klktz et al. 2007; Wang et al. 2008), o procesos en biologa del desarrollo (Chan y Foster 2008). En ltima instancia, los mtodos descritos aqu son una herramienta potencialmente muy til para estudiar procesos de especiacin, y en particular para identificar y caracterizar las protenas, y los genes, involucrados en los procesos de diferenciacin adaptativa que conducen a la especiacin (Ramm et al. 2009). En contraste con los mtodos de secuenciacin genmica indiscriminada, el uso de geles bidimensionales permite identificar directamente las protenas que se expresan de modo diferencial, lo que reduce enormemente el nmero de candidatos cuando se quieren caracterizar las diferencias adaptativas o funcionales entre individuos sometidos a diferentes condiciones, entre poblaciones supuestamente divergentes genticamente, o entre especies prximas. En la actualidad es posible obtener mediante el estudio de la expresin de protenas con geles bidimensionales una gran cantidad de informacin sobre la base molecular de muchos procesos fisiolgicos en organismos no-modelo, a pesar de las dificultades inherentes a la falta de informacin genmica y protemica especfica.
Agradecimientos
Los trabajos de protemica de AC e IR se financian con los proyectos CGL2007-61943 y CGL2007-61665 respectivamente.
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Apndice
Nmero de trabajos publicados por ao utilizando mtodos de protemica en estudios ecolgicos y evolutivos con organismos no-modelo, incluidos en esta revisin (ver Tabla 1).
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Marcadores moleculares y ecologa del movimiento

J.J. Robledo-Arnuncio 1 , S.C. Gonzlez Martnez 1
(1) Departamento de Sistemas y Recursos Forestales, CIFOR-INIA, E-28040 Madrid, Espaa.
Robledo-Arnuncio, J.J., Gonzlez-Martnez, S.C. (2009). Marcadores moleculares y ecologa del movimiento. Ecosistemas 18 (1):44-51. El estudio del movimiento es parte esencial del anlisis ecolgico a nivel de gen, individuo, poblacin, comunidad y ecosistema. Los marcadores de ADN son herramientas muy tiles para el estudio del movimiento a todos estos niveles, permitiendo, por ejemplo, establecer relaciones de parentesco entre individuos, determinar el origen poblacional de individuos migrantes, estudiar sistemas de apareamiento, cuantificar la escala de interacciones interespecficas, o caracterizar el patrn espacial de la dispersin y la competencia. A nivel de gen, los marcadores de ADN son imprescindibles para estudiar la estructura y el flujo gentico dentro y entre poblaciones, as como su efecto combinado con otras fuerzas evolutivas y los factores biticos y abiticos del medio sobre la adaptacin local. En este artculo se revisan algunos mtodos basados en marcadores de ADN que pueden resultar de utilidad en ecologa del movimiento, identificndose reas de estudio en las que se espera estos marcadores sean de especial utilidad en los prximos aos. Palabras clave: ecologa espacial, dispersin, flujo gentico, migracin, adaptacin local, microsatlites, SNP. Robledo-Arnuncio, J.J., Gonzlez-Martnez, S.C. (2009). Molecular markers and movement ecology. Ecosistemas 18(1):44-51. The study of movement is central to ecological analysis at the gene, individual, population, community and ecosystem levels. DNA markers are very useful tools for the study of movement at all these levels, allowing, for instance, the determination of population origin of migrants, the study of mating systems, the quantification of the scale of interspecific interactions, or the characterization of dispersal and competence spatial patterns. At the gene level, DNA markers are necessary to study genetic structure and gene flow within and among populations, and to study their combined effects with other evolutionary forces and biotic and abiotic factors on local adaptation. We review in this paper some DNA-marker methods of potential utility in movement ecology, identifying study areas where they are expected to be especially useful during the next years. Key words: spatial ecology, dispersal, gene flow, migration, local adaptation, microsatellites, SNP.
Introduccin
La mayora de los procesos caractersticos de la vida estn ligados al movimiento, con causas que operan a mltiples escalas espaciales y temporales. El modo en que los individuos se desplazan determina sus opciones de supervivencia y reproduccin, la distribucin y escala de sus interacciones con el medio y, en consecuencia, la estructura y dinmica de poblaciones, comunidades y ecosistemas (Nathan et al. 2008). A nivel del individuo, el estudio del movimiento proporciona informacin sobre el desarrollo de su ciclo vital, su comportamiento y su interaccin con los factores biticos y abiticos del entorno. A nivel poblacional, el patrn de movimiento de un conjunto de individuos informa sobre procesos demogrficos tales como la competencia intraespecfica, la organizacin social o la migracin denso-dependiente. A nivel de comunidad, el movimiento de los individuos de las distintas especies y su eventual correlacin proporcionan informacin sobre procesos ecolgicos tales como el efecto combinado de la dispersin y la competicin sobre la coexistencia, la dinmica espacial de relaciones antagnicas de tipo predador-presa o parsito-hospedante, o de mutualismos como la dispersin zoocora. El desarrollo durante las ltimas dcadas de la teora de gentica de poblaciones ha mostrado adems la importancia del movimiento a un nivel inferior al del individuo, el del gen, para la evolucin y la diversificacin de la vida (Templeton 2006). El proceso evolutivo consiste en ltima instancia en la variacin espacial y temporal de las frecuencias de las distintas variantes gnicas. El movimiento de genes dentro y entre poblaciones, con un alcance potencial determinado por el desplazamiento de
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individuos y propgulos, es una fuerza evolutiva que interacciona con la seleccin natural, la deriva gentica y los procesos de endogamia, especialmente en ambientes heterogneos (Lenormand 2002). El movimiento gnico condiciona por tanto el grado de adaptacin local de las poblaciones y es un proceso fundamental de la ecologa evolutiva. Los marcadores de ADN (regiones del ADN cuyo polimorfismo es posible determinar mediante mtodos de laboratorio) son herramientas empricas muy tiles para el estudio del movimiento en sus distintos niveles ecolgicos. Por ejemplo, se usan con frecuencia a modo de etiquetas de identificacin individual o 'cdigos de barras', permitiendo establecer relaciones de parentesco entre individuos, determinar el origen poblacional de migrantes o caracterizar el patrn espacial de dispersin de polen y semillas. Pueden proporcionar adems informacin histrica sobre las tasas de migracin entre poblaciones o sobre el origen y las rutas de colonizacin ms probables seguidas por los fundadores ancestrales de las poblaciones que actualmente ocupan una regin o continente. En ecologa evolutiva, los marcadores de ADN son imprescindibles para estudiar el patrn y la dinmica espacial de los genes y su interaccin con factores ambientales. Los mtodos de laboratorio y modelos estadsticos necesarios para investigar el movimiento de individuos en el campo son a menudo similares a los requeridos para determinar la dinmica espacial de los genes, pero las regiones del ADN consideradas en cada caso pueden ser distintas. Los estudios del movimiento a nivel individual o superior utilizan en general marcadores denominados 'neutros', por no encontrarse sometidos a la seleccin natural, eligindose aquellos que por su elevado polimorfismo confieren mayor resolucin en la diferenciacin de individuos o poblaciones. En el caso del movimiento de genes, se utilizan tanto marcadores neutros como otros situados en las regiones del ADN correspondientes al gen o genes de inters, con objeto de revelar el patrn y la dinmica espacial de las variantes (alelos) que se piensa confieren una ventaja o desventaja selectiva respecto a determinado carcter fenotpico. A continuacin se resumen una serie de cuestiones de ecologa del movimiento de inters actual, junto con algunos mtodos basados en marcadores de ADN que pueden resultar de utilidad para su estudio. Se dedica un apartado independiente a la ecologa evolutiva del movimiento de genes.
Marcadores moleculares en ecologa del movimiento

Estudio del movimiento en ecologa Una de las preguntas bsicas al estudiar cualquier proceso ecolgico con algn tipo de dinmica espacial es a qu escala y de acuerdo con qu patrn se produce el movimiento y la interaccin de los distintos componentes del sistema de estudio. As por ejemplo, la teora neutral de la biodiversidad propone que es posible predecir el nmero y la abundancia de especies de una comunidad a nivel local en funcin de la tasa de inmigracin, asumiendo que todas las especies en un determinado nivel trfico son equivalentes en sus interacciones ecolgicas (Hubbell 2001). Para testar esta hiptesis, an muy discutida frente a modelos de nicho (Gravel et al. 2006), es necesario asumir explcitamente tasas de migracin o/y funciones de dispersin (p. ej. Hardy y Sonk 2004; Esther et al. 2008), siendo esencial una calibracin realista de estas ltimas, para lo cual los estudios empricos basados en marcadores de ADN pueden ser de gran ayuda. Otra de las cuestiones ms debatidas en ecologa espacial es cul es el rango mximo de distancias de dispersin y con qu frecuencia se producen eventos de dispersin a larga distancia. De la probabilidad y el alcance mximo de la dispersin depende la estructura de las metapoblaciones, la resiliencia de las especies a la fragmentacin del paisaje, o la capacidad para migrar en un hbitat heterogneo y dinmico. As, se ha mostrado que la rapidez de colonizacin de las plantas hacia el norte tras el ltimo mximo glaciar, aparentemente imposible pero sugerida por el registro fsil, puede explicarse tericamente con slo suponer que una pequea proporcin de las semillas dispersadas cada ao lo hacen a distancias de unos pocos kilmetros (Clark 1998). Este requisito terico parece cumplirse en la realidad, segn confirman las funciones netamente leptocrticas estimadas mediante marcadores moleculares (Gonzlez-Martnez et al. 2006; Robledo-Arnuncio y Garca 2007; Jones y Muller-Landau 2008). La habilidad de las especies para migrar es adems un factor importante en su capacidad de respuesta al actual escenario de cambio climtico global. Por otra parte, el riesgo de invasin de ecosistemas naturales por especies invasoras depende en gran medida del potencial dispersor de stas. Por estos y otros motivos, el ajuste de funciones de densidad de probabilidad de distancias de dispersin viene atrayendo la atencin de eclogos vegetales desde hace aos, y con renovado inters desde que se cuenta con la potencia brindada por los marcadores moleculares (Austerlitz et al. 2004; Jones y Muller Landau 2008), si bien el ajuste del extremo de esta funcin (la dispersin a larga distancia) sigue suponiendo un reto difcil (Nathan 2005). En este campo, la combinacin de mtodos clsicos de observacin y marcadores moleculares (anlisis de parentesco) han proporcionando interesantes resultados sobre la contribucin diferencial de distintos vectores animales al patrn espacial en la dispersin de semillas en plantas (Jordano et al. 2007). Tambin en plantas, el anlisis gentico de progenies maternas permite el ajuste de funciones de dispersin polnica efectiva, necesarias para caracterizar espacialmente el sistema de reproduccin (p. ej. Oddou-Muratorio et al. 2005), analizar su sensibilidad a la fragmentacin (White et al. 2002), o predecir el riesgo de introgresin gentica desde poblaciones artificiales (Fig. 1) o del escape de transgenes hacia poblaciones naturales (Devaux et al. 2006).
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Figura 1. Un ejemplo del uso de marcadores moleculares en ecologa del movimiento con implicaciones en la conservacin y uso de los recursos naturales. La variedad de pino silvestre de Sierra Nevada (Pinus sylvestris var. nevadensis) tiene una distribucin muy reducida y se ve amenazada por la existencia de repoblaciones de origen no local en las proximidades (a). Con la ayuda de marcadores moleculares y dado que las repoblaciones presentaban alelos discriminantes (b), se logr identificar las zonas de la poblacin natural con mayor introgresin gentica y aquellas sin introgresin (c), informacin que se puede utilizar para definir reservas genticas en esta especie (Juan J. Robledo-Arnuncio, Miguel Navascus, Santiago C. Gonzlez-Martnez, Luis Gil, en preparacin).
En el reino animal, la caracterizacin del movimiento resulta de inters desde mltiples perspectivas. La propia definicin de poblacin depende del rango de desplazamiento de los individuos al alimentarse, reproducirse, escapar de predadores o parsitos e interaccionar socialmente. En este contexto, las aplicaciones de los marcadores de ADN incluyen, por ejemplo, la determinacin de la estructura espacial de las interacciones sociales y reproductivas en hormigas (Ross 2001), la comprobacin de la teora de la 'distribucin libre ideal' (ideal free distribution) en avispas parsitas (Tentelier et al. 2008), el estudio de la estructura y la dinmica espacial de grupos familiares de elefantes (Vidya y Sikumar 2005) o el proceso de dispersin y el comportamiento reproductivo de las aves (Double et al. 2007) y peces andromos (Bentzen et al. 2001). De especial relevancia, dado su impacto social, es el uso de marcadores para determinar los movimientos (y orgenes) de grupos y pueblos humanos en el pasado, que se considera en la actualidad una herramienta de gran utilidad en antropologa (ver, por ejemplo, Hamilton et al. 2005). Aproximaciones metodolgicas Uno de los mtodos de anlisis basado en marcadores de ADN que se utiliza ms ampliamente en ecologa del movimiento es el anlisis de parentesco, para el cual son ptimos los marcadores neutros altamente polimrficos, tales como los microsatlites nucleares. Mediante la comparacin del genotipo de un individuo dado con el de todos los progenitores potenciales de una poblacin o grupo de estudio, el anlisis de parentesco puede llegar a identificar el padre, madre o pareja parental ms probable del mismo para un nivel de significacin dado (Marshall et al. 1998; Gerber et al. 2000). A partir de la asignacin (o exclusin) de parentesco, es posible estimar distancias de dispersin, variables del sistema de reproduccin tales como la tasa de autogamia o el nmero efectivo de padres de una progenie (Ritland 2002), o tasas de inmigracin de individuos desde el exterior de la poblacin de estudio (Slavov et al. 2005). Es posible adems estimar conjuntamente parmetros fenotpicos o ambientales que afectan el xito reproductor de los individuos, lo que permite ajustar los denominados gradientes de seleccin (Burczyk et al. 2006). El anlisis de parentesco es uno de los mtodos ms frecuentemente utilizado para ajustar funciones de densidad de probabilidad de distancias de dispersin. Su mayor limitacin es que requiere el muestreo y genotipado exhaustivo de todos los individuos reproductores de la poblacin de estudio y que su nivel de resolucin disminuye con el nmero de stos ltimos. Esta restriccin impone unos lmites en la escala de estudio que hacen muy difcil el estudio de la dispersin a larga distancia. Un grupo de mtodos con menores limitaciones logsticas y espaciales que el anlisis de parentesco son los denominados mtodos de asignacin gentica. stos ltimos consisten en determinar la poblacin de origen ms verosmil de un individuo o grupo de individuos de entre una serie de poblaciones de origen potenciales predefinidas. Requieren conocer el genotipo del individuo o individuos de la muestra focal y de una muestra de individuos de cada una de las poblaciones de origen posibles, utilizando como funcin discriminante las frecuencias genotpicas esperadas en cada poblacin bajo las hiptesis de equilibrio
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de Hardy-Weinberg y equilibrio de ligamiento (Manel et al. 2005). Estos mtodos se han utilizado para estimar tasas de migracin entre poblaciones humanas, animales y de plantas. Tambin se han usado para identificar individuos inmigrantes procedentes de poblaciones introducidas, como piscifactoras, o para demostrar la captura ilegal de animales (ver una revisin de mtodos y aplicaciones en Manel et al. 2005). Los mtodos de asignacin gentica son potencialmente tiles para el estudio de la dispersin a larga distancia, pero entre sus desventajas destaca su escasa resolucin cuando las frecuencias allicas no son muy divergentes entre las poblaciones o cuando las tasas de migracin son bajas, estando adems sujetos a posibles sesgos si faltan en la muestra alguno de los orgenes potenciales de inmigrantes (Paetkau et al. 2004). Otra gran categora de mtodos basados en marcadores de ADN con aplicacin en ecologa del movimiento son los denominados mtodos 'indirectos'. A grandes rasgos, consisten en la inferencia de parmetros como los coeficientes de la funcin de dispersin o la tasa de migracin entre poblaciones mediante la comparacin de la estructura gentica espacial observada y la esperada tericamente bajo determinado modelo demogrfico en equilibrio. Por ejemplo, caso de contarse con una estimacin independiente de la densidad efectiva de la poblacin, es posible estimar la varianza de las distancias de dispersin a partir de la regresin entre los coeficientes de parentesco gentico de pares de individuos y su distancia de separacin espacial (Rousset 2000). Ms recientemente, se ha utilizado de forma anloga la estructura gentica espacial de la nube polnica para inferir la funcin de dispersin de polen en plantas (Austerlitz y Smouse 2001; Robledo-Arnuncio et al. 2006). Estos mtodos tienen la ventaja de la economa de muestreo, pero presentan una baja precisin y en ocasiones una fuerte sensibilidad a la violacin del modelo terico subyacente, que suele ser bastante simple.
Marcadores moleculares en ecologa evolutiva del movimiento de genes

Dispersin versus flujo gentico Los procesos de dispersin de individuos y/o propgulos slo tienen consecuencias evolutivas cuando van acompaados de flujo gentico, es decir, cuando suponen un cambio en las frecuencias allicas o distribucin de los genotipos entre y dentro de las poblaciones. Para ello, es necesario que los genotipos inmigrantes sean (i) diferentes a los locales y que (ii) sobrevivan hasta la edad reproductora, existiendo numerosos procesos post-dispersin que pueden suponer cambios dramticos, a partir de una distribucin inicial de los individuos/propgulos condicionada por los mecanismos de dispersin de las especies. Es precisamente con respecto a (i) que los eventos de dispersin a larga distancia adquieren importancia, ya que se espera que inmigrantes que viajan distancias largas estn ms diferenciados genticamente de los individuos locales que aquellos que proceden de poblaciones vecinas. Con respecto a (ii), en plantas, por ejemplo, se ha propuesto en repetidas ocasiones que son los patgenos y predadores de las semillas, junto con procesos de competencia inter- e intra-especfica, los que condicionan el patrn de reclutamiento subsiguiente a la dispersin de semilla. Es tpica la existencia de predacin densodependiente relacionada con la distancia al origen (por ejemplo, los denominados efectos Janzen-Connell), estando el patrn de reclutamiento estrechamente relacionado con las distancias relativas de movimiento de semilla y predadores (Nathan y Casagrandi 2004). Por ltimo, es necesario indicar que al igual que en el caso de los patrones de dispersin, tanto la cantidad como la distribucin del flujo gentico se ven afectados por factores ecolgicos a diferentes escalas, desde gradientes microambientales de seleccin a la existencia de barreras ambientales o geogrficas. Por ejemplo, Cavers et al. (2003) encontraron barreras ambientales y geogrficas asociadas con diferencias morfolgicas y aislamiento fenolgico, todo ello contribuyendo a una marcada diferenciacin gentica en Cedrela odorata, un rbol neotropical. Consecuencias microevolutivas del movimiento de genes La existencia de flujo gentico puede tener consecuencias beneficiosas o perjudiciales para la poblacin receptora. Entre los efectos beneficiosos cabe destacar el denominado rescate gentico (genetic rescue). Las poblaciones pequeas pueden beneficiarse de la existencia de flujo gentico debido tanto a efectos genticos como demogrficos (Alleaume-Benharira et al. 2006; Garant et al. 2007). Entre los primeros, cabe destacar el incremento de la varianza gnica disponible para la seleccin, que puede contrarrestar los efectos estocsticos de la deriva gentica aumentando la eficacia de la seleccin y posibilitando un mayor grado de adaptacin local. El flujo gentico puede adems introducir nuevas variantes gnicas beneficiosas en la poblacin receptora a mayor velocidad que las obtenidas por mutacin. Entre los efectos demogrficos, el incremento del tamao y densidad poblacional puede reducir los posibles efectos deletreos de la endogamia y los efectos estocsticos de la deriva gentica. De hecho, se piensa que los inmigrantes procedentes de poblaciones grandes adyacentes a poblaciones marginales puedan estar mejor adaptados que los residentes locales si la poblacin marginal ha sufrido deriva gentica y las diferencias ambientales entre poblaciones no son muy grandes (Alleaume-Benharira et al. 2006). Otro efecto demogrfico importante es que la dispersin recurrente desde el rea de distribucin central de una especie puede mantener poblaciones en zonas con condiciones ambientales fuera de su rango ecolgico y que de otra forma no sobreviviran, abriendo la posibilidad de que surjan adaptaciones nuevas y que el nicho ecolgico evolucione (Garant et al. 2007 y referencias all citadas).Por otro lado, si la variacin ambiental es muy fuerte, un flujo gentico recurrente podra mantener alelos mal adaptados en las poblaciones receptoras (migration load), llegando, en casos extremos, a sustituir a los mejor adaptados a las condiciones ambientales locales (gene swamping), limitando el grado de adaptacin local (Lenormand 2002). Este ltimo caso se produce cuando la tasa de migracin es elevada con respecto a los diferenciales de seleccin, lo que supone, en general, que los alelos con mayor xito medio (considerando todas las poblaciones que intercambian genes) tiendan a fijarse
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en todas las poblaciones, incluyendo aquellas donde no confieren una ventaja adaptativa. Es importante sealar que los alelos adaptados al ambiente local en las poblaciones ms densas tendran mayor probabilidad de fijarse en otras poblaciones que los alelos adaptados localmente en poblaciones de menor densidad. Este hecho tiene consecuencias importantes para la conservacin de los acervos genticos de las especies, ya que precisamente las poblaciones marginales (en sentido ecolgico o de distribucin) cuentan por lo general con densidades ms bajas y se veran por tanto ms expuestas a la prdida de alelos locales debida a flujo gentico, lo que implicara la prdida de posibles adaptaciones valiosas a condiciones ecolgicas singulares. Adems, las poblaciones marginales que reciban una gran cantidad de genotipos mal adaptados localmente reduciran su fitness, lo que implicara una reduccin adicional de la densidad, entrando en un proceso retroalimentado que puede terminar con la extincin de la poblacin (migration meltdown, Lenormand 2002). Una cierta evidencia del mantenimiento de genotipos maladaptados en poblaciones marginales proviene del estudio de clinas latitudinales en rboles forestales, donde los ensayos en condiciones controladas muestran adaptacin local en las poblaciones centrales mientras que en los extremos de las clinas persisten poblaciones subptimas, es decir con mayor supervivencia en otros rangos de las especies analizadas (Savolainen et al. 2007). El proceso de migration meltdown podra limitar el rango de distribucin de las especies (Kirkpatrick y Barton 1997) y suponer la reduccin del mismo, ya que cambios pequeos en las tasas de migracin tienen, en ocasiones, consecuencias importantes en el equilibrio entre migracin-seleccin y conducen al predominio o desaparicin de una especie en un hbitat determinado (Ronce y Kirkpatrick 2001). Pero no siempre el incremento del flujo gentico (y la introduccin recurrente de genotipos mal adaptados) supone un lmite al rango de distribucin de una especie, ya que existe tambin un efecto demogrfico positivo que tiene como consecuencia un incremento de la varianza gentica (y, por tanto, del potencial de seleccin) y la purga de mutaciones deletreas. Los modelos tericos predicen que la fitness media en el rango de distribucin de una especie es mxima con tasas de migracin intermedias (Alleaume-Benharira et al. 2006; Lopez et al. 2008). Otra consecuencia de la existencia de un equilibrio migracin-seleccin es el establecimiento de clinas genticas (muy abundantes en la naturaleza, ver por ejemplo, Garca-Gil et al. 2003 para pino silvestre o Berry y Kreitman 1993 para Drosophila) que tienen una transicin ms suave que el gradiente ambiental que las origina (May et al. 1975). Este proceso crea oportunidades para el desarrollo de nuevas adaptaciones, al poner en contacto genotipos diferentes en ambientes de transicin ecolgica o ecotonos. Tasas de recombinacin elevadas en estos ambientes clinales favorecen la creacin de nuevas combinaciones genticas a la vez que reducen los efectos selectivos (al romper complejos gnicos co-adaptados en otros ambientes y, por tanto, reducir la varianza de la fitness). Aproximaciones metodolgicas Los mtodos analticos basados en marcadores de ADN neutrales, que segn se ha indicado son los utilizados habitualmente para el estudio del movimiento a nivel de individuo o superior, se pueden utilizar tambin para evaluar el movimiento de genes a diferentes escalas. Existen adems una serie de mtodos indirectos, tambin basados en marcadores moleculares neutrales, que estiman directamente flujo gentico histrico entre poblaciones, ms concretamente Ne m (el producto del nmero efectivo poblacional y la tasa de migracin). Si bien los mtodos clsicos asumen un modelo simplista de migracin en isla, los ms precisos no asumen ningn modelo de migracin a priori y se basan en estimaciones de mximaverosimilitud o Bayesianas y cadenas de Markov con muestreo Monte Carlo (por ej. Beerli y Felsenstein 2001). Otras aproximaciones se benefician de la relacin aproximadamente lineal entre el logaritmo de la frecuencia media de alelos especficos de cada poblacin y Ne m (Slatkin 1985). Los valores histricos de flujo gentico, Ne m, se han utilizado frecuentemente para evaluar el aislamiento efectivo de las poblaciones (cuando Ne m < 1) y para correlacionar atributos biolgicos de las especies con su potencial para el intercambio de genes (ver, por ejemplo, Tabla 4.4 en Lowe et al. 2004). Por ltimo, destaca el desarrollo reciente de marcadores moleculares (ESTs, secuencias de genes nucleares, SNPs, etc; ver revisin en Krutovsky y Neale 2005) que por estar localizados en zonas codificantes de genes candidatos para caracteres adaptativos (tales como la sequa en plantas o el metabolismo primario en animales, Ford 2002) estn potencialmente afectados por la seleccin natural y proporcionarn, en el futuro, una herramienta de gran utilidad para el estudio de procesos relacionados con el equilibrio migracin-seleccin. Un ejemplo notable de este tipo de marcadores se puede encontrar en Ingvarsson et al. (2008), donde los autores encontraron dos polimorfismos no sinnimos en el gen de fenologa phyB2 de Populus tremula que explicaban 1,5 y 5 % de la variacin en la fecha de formacin de la yema de crecimiento y que, a su vez, presentaban un gradiente marcado de variacin latitudinal en esta especie.
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Conclusiones y Perspectivas
El uso de marcadores moleculares en ecologa del movimiento est ayudando a investigar preguntas fundamentales para entender el funcionamiento de los ecosistemas. En particular, se conocen con detalle los patrones de movimiento a corta y media distancia y la estructura poblacional de muchos organismos, tanto plantas como animales, al igual que se ha avanzado en la comprensin de las fuerzas evolutivas que afectan los sistemas naturales a diferentes escalas. El desarrollo de nuevos marcadores adaptativos (por ejemplo, SNPs), que son fcilmente automatizables y muy abundantes en el genoma, permitir en el futuro cercano el estudio del equilibrio entre seleccin y flujo gentico con mayor precisin y proporcionar herramientas ms informativas para la gestin y uso de los recursos naturales. Sin embargo, algunos de los puntos fundamentales de esta disciplina siguen sin tener una respuesta satisfactoria y no existen en la actualidad aproximaciones metodolgicas que permitan acercarnos a las respuestas. Entre ellos destacan los relacionados con la estimacin y deteccin de flujo gentico a larga distancia, la evaluacin de diferenciales de seleccin y anlisis de los equilibrios de fuerzas (incluyendo el flujo gentico) que condicionan la existencia de adaptacin local y el desarrollo de modelos de simulacin y prediccin de la respuesta de los sistemas naturales a los cambios ambientales que consideren de forma explcita la capacidad de migracin y adaptacin de los individuos. Tambin, gran parte de los estudios actuales se basan en una o pocas especies y no consideran las interacciones entre organismos, lo que supone una visin parcial y sesgada de la complejidad ecolgica real, y se hace necesario el desarrollo de aproximaciones ecosistmicas. Por tanto, el desarrollo tcnico que es patente en los ltimos aos tendr que ir acompaado de un desarrollo metodolgico de igual o mayor nivel, al que la comunidad cientfica de ecolgos, genetistas y especialistas en evolucin tendr que dar forma en los prximos aos.
Referencias
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La parasitologa ecologca en la era de la gentica molecular

J. Prez-Tris 1
(1) Departamento de Zoologa y Antropologa Fsica, Facultad de C. Biolgicas. Universidad Complutense, 28040 Madrid, Espaa.
Recibido el 12 de enero de 2009, aceptado el 2 de abril de 2009.
Prez-Tris, J. (2009) La parasitologa ecologca en la era de la gentica molecular. Ecosistemas 18(1):52-59. El estudio de la ecologa de las relaciones entre parsitos y hospedadores se ha beneficiado recientemente de la aplicacin de tcnicas moleculares de diagnstico e identificacin de los parsitos. Dichas tcnicas, basadas en la amplificacin y secuenciacin de un fragmento del ADN de los parsitos, no slo facilitan enormemente la deteccin de infecciones, sino que han abierto un nuevo campo de investigacin acerca de la diversidad a menudo crptica de estos parsitos, sus patrones de divergencia evolutiva, o sus singularidades ecolgicas. Este tipo de aproximaciones han dado pujanza a la parasitologa ecolgica, que gracias a las tcnicas moleculares ha experimentado un crecimiento exponencial durante la ltima dcada. Palabras clave: interacciones parsito hospedador, PCR, parasitologa molecular, diagnstico parasitolgico, diversidad crptica. Prez-Tris, J. (2009) Ecological parasitology in the molecular genetics era. Ecosistemas 18(1):52-59. The use of molecular techniques for diagnosing and identifying parasites has recently been incorporated into research on the ecology of host-parasite interactions. Molecular techniques based on the amplification by means of PCR of a fragment of parasite DNA have greatly helped to increase the rate of detection of parasite infections. In addition, these techniques have opened a new research field about the diversity of these parasites which is often cryptic to the eye, the patterns of evolutionary divergence of parasite lineages, or the ecological singularities exhibited by different parasites. These kinds of approaches have boosted up research on ecological parasitology, as shown by the exponetial growth of the field during the last decade. Key words: host-parasite interactions, PCR, molecular parasitology, parasitological diagnosis, cryptic diversity.
El parasitismo ha sido siempre un importante tema de investigacin bsica, clnica y aplicada, por lo que no sorprende que la parasitologa incorporara los desarrollos de la gentica molecular rpidamente y con entusiasmo en el mismo momento en que el uso generalizado de la PCR o la secuenciacin de ADN lo hicieron posible. Durante las ltimas dcadas, el estudio a nivel molecular de los parsitos que afectan a los humanos o a sus cultivos y producciones animales ha sido uno de los frentes ms activos en parasitologa clnica y aplicada. De hecho, hoy en da se ha secuenciado ya el genoma completo de algunos parsitos de especial importancia socioeconmica, como el que causa la forma ms virulenta de malaria humana (Plasmodium falciparum). Sin embargo, estos desarrollos metodolgicos han tenido ms dificultades para implantarse en el estudio de los parsitos que afectan a las poblaciones naturales. De hecho, la utilizacin de tcnicas moleculares de estudio de parsitos es muy reciente en ecologa, y su uso sigue estando restringido a unos pocos taxones parsitos. Probablemente, el principal motivo por el que las tcnicas moleculares no se han popularizado entre los parasitlogos es la dificultad de aislar marcadores moleculares a partir de organismos que, en muchas ocasiones, son en s mismos difciles de separar de sus hospedadores. Este problema es especialmente acentuado en el caso de los parsitos intracelulares, cuyo ADN es difcil de separar del ADN del hospedador al purificar el material gentico a partir de muestras de tejido infectado. En las pginas que siguen haremos un recorrido por los ms importantes avances que ha experimentado la parasitologa ecolgica gracias a la utilizacin de tcnicas moleculares, utilizando como hilo conductor el ejemplo particular de protozoos parsitos sanguneos causantes de la malaria en las aves (del gnero Plasmodium, al igual que sus equivalentes en humanos) y otros gneros estrechamente emparentados con ellos (Haemoproteus y Leucocytozoon). Estos microorganismos, pertenecientes al orden de los hemospordios (Apicomplexa, Haemosporida), se cuentan entre los parsitos ms estudiados si es que no son de hecho los ms estudiados desde el punto de vista ecolgico y evolutivo, una perspectiva que, en
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contraposicin a la visin clnica o veterinaria del parasitismo, pretendo seguir en este texto. De todas formas, el evidente sesgo taxonmico de mi planteamiento har que lo que sigue no sea ni exhaustivo ni totalmente objetivo, aunque espero que s sea representativo de la revolucin molecular que ha experimentado el campo de la parasitologa ecolgica. De hecho, todo lo que aqu se describe, tanto en su vertiente conceptual como en la puramente metodolgica, es directamente aplicable a cualquier otro sistema de interacciones entre parsitos y hospedadores.
Por qu es importante el parasitismo?

El parasitismo es uno de los estilos de vida ms ampliamente extendidos en la naturaleza: prcticamente cualquier organismo vivo puede ser hospedador de alguna especie de parsito; de hecho, la mayor parte de las especies conocidas albergan numerosas especies de parsitos. Los parsitos se aprovechan de sus hospedadores para conseguir recursos que necesitan para vivir, causndoles daos ms o menos severos como consecuencia de dicha explotacin. Como la accin de los parsitos supone una prdida de eficacia biolgica de sus hospedadores, la seleccin natural favorece en stos la evolucin de mecanismos de resistencia, los cuales a su vez promueven la seleccin recproca de mecanismos de explotacin ms eficientes en los parsitos. La lectura detenida del prrafo anterior permite identificar una serie de caractersticas de las relaciones entre parsitos y hospedadores que justifican su inclusin entre los grandes asuntos de la biologa. En primer lugar, el parasitismo implica el establecimiento de relaciones muy estrechas entre organismos muy distintos, como mnimo el parsito y su hospedador definitivo (en el que el parsito se reproduce), pero con frecuencia tambin otros hospedadores intermediarios o secundarios, reservorios o vectores. Los procesos de seleccin natural antagnica que afectan a estas complejas relaciones han permitido consolidar algunas de las ideas que dan cuerpo a la teora evolutiva, como la hiptesis de la reina de corazones, que postula la existencia de carreras de armamentos coevolutivas entre parsitos y hospedadores (como consecuencia de la seleccin que cada uno de ellos ejerce sobre su contrario), en las que ni los parsitos ni los hospedadores consiguen nunca proclamarse ganadores definitivos. Es importante tener en cuenta que los parsitos causan enfermedades, configurando as uno de los ms importantes desafos a los que se enfrentan los organismos vivos en su afn por sobrevivir y reproducirse. No es por ello sorprendente que los parsitos hayan sido el objeto de enormes esfuerzos de investigacin clnica y veterinaria, as como el blanco de las investigaciones dedicadas a la evolucin de las enfermedades. Por ltimo, determinar la diversidad de especies de parsitos que existen no slo contribuye al mejor conocimiento de toda la biodiversidad, sino que supone un importante punto de partida para estudiar algunas de las formas de vida ms fascinantes de cuantas se dan en la naturaleza. La importancia del parasitismo en trminos de biodiversidad se suele considerar siempre en relacin con el posible impacto negativo del transporte de patgenos, reservorios y vectores (Daszak et al. 2000). Por ejemplo, la introduccin de reservorios y vectores de Plasmodium relictum en Hawai caus la extincin de numerosas especies de aves nativas, el acantonamiento de muchas otras en hbitats sin vectores, y una fuerte seleccin de individuos resistentes en las poblaciones locales (Woodworth et al. 2005). Sin embargo, una circunstancia que rara vez se tiene en cuenta, quizs por la mala prensa de los parsitos o por lo difcil que resulta estudiarlos, es que cada vez que se extingue una especie, la prdida de biodiversidad que conlleva su desaparicin se multiplica por el nmero de sus especies parsitas especficas (Koh et al. 2004), una prdida que puede ser especialmente dolorosa por el potencial que tienen los parsitos para la investigacin de enfermedades (el estudio detallado de los mecanismos que han desarrollado a lo largo de su evolucin para protegerse de la resistencia de sus hospedadores podra ayudarnos a comprender mejor el funcionamiento del sistema inmune, por ejemplo).
A hombros de gigantes: un poco de historia

Aunque los parsitos se conocen desde antiguo, su importancia como agente evolutivo no fue reconocida hasta hace relativamente poco. Curiosamente, la primera formalizacin de hiptesis acerca del papel de los parsitos como agentes de seleccin natural no se debe a ningn bilogo clnico ni a ningn naturalista, sino a un genetista. En 1949, J.B.S. Haldane propuso que, de acuerdo con los desarrollos de la teora evolutiva que acababan de cristalizar en lo que hoy conocemos como la sntesis moderna, un organismo podra adquirir mediante seleccin natural la resistencia frente a organismos patgenos ms fcilmente que la resistencia frente a sus depredadores, un agente evolutivo este ltimo que, sin embargo, haba recibido mucha ms atencin en los crculos cientficos de la poca (Lederberg 1999). La comunidad cientfica no asumi el desafo enseguida, y tardaron en producirse nuevos desarrollos conceptuales dirigidos a una mejor comprensin de la seleccin natural impuesta por el parasitismo. De hecho, la parasitologa fue una ciencia eminentemente descriptiva hasta la dcada de los 80. Probablemente, uno de los ms importantes revulsivos del estudio de la ecologa y evolucin del parasitismo se debi a William Hamilton y Marlene Zuk (1982), quienes propusieron que muchos de los caracteres ornamentales por los que las aves eligen a sus parejas han evolucionado como indicadores de la resistencia a los parsitos de sus poseedores. Desde ese momento, el estudio de la ecologa de las relaciones entre parsitos y hospedadores creci enormemente, extendindose a casi cualquier aspecto de la ecologa evolutiva muy especialmente la de las aves (Clayton y Moore 1997), y abonando el campo para la incorporacin de las tcnicas moleculares cuando stas se hicieron accesibles a los bilogos de campo.
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A finales del siglo XX, se publicaron algunos protocolos para la amplificacin mediante PCR de fragmentos de ADN mitocondrial (genes de ARN ribosmicos; Feldman et al. 1995) de algunos parsitos comunes en poblaciones naturales, especialmente de parsitos de la malaria aviaria (del gnero Plasmodium). Sin embargo, dichos protocolos no servan para investigar la mayora de los parsitos existentes en la naturaleza, por lo que su uso no lleg nunca a extenderse demasiado. Todo esto cambi cinco aos ms tarde, cuando el equipo de Staffan Bensch, de la Universidad sueca de Lund, propuso un nuevo protocolo basado en la amplificacin de un fragmento del gen citocromo b, localizado en la mitocondria del parsito, a partir de muestras de sangre de aves obtenidas en la naturaleza (Bensch et al. 2000). Este mtodo serva para la prctica totalidad de especies de parsitos de la malaria aviaria, adems de otras especies afines, muy extendidas y estudiadas en poblaciones naturales (las del gnero Haemoproteus y, ms recientemente, las de Leucocytozoon). De pronto, se dispona de un mtodo de diagnstico e identificacin de parsitos en poblaciones naturales de aves rpido, fiable y fcil de utilizar incluso por los no especialistas, que adems tena una capacidad de deteccin de parsitos varios rdenes de magnitud mayor que la de la microscopa (Hellgren et al. 2004). Obviamente, el desarrollo de esta tcnica supuso una revolucin no slo metodolgica, sino tambin conceptual, que pasaremos a describir con mayor detalle en las pginas siguientes (Fig. 1).
Figura 1. El estudio de la malaria aviaria experiment una revolucin con la publicacin del primer protocolo universal para la secuenciacin de un fragmento del gen citocromo b de parsitos sanguneos de aves (Bensch et al. 2000). El grfico muestra el nmero de publicaciones incluidas en la base de datos bibliogrfica ISI-Web of Science (Thomson, enero de 2009) con la palabra clave avian malaria. La flecha indica el ao de publicacin del trabajo de Bensch et al. (2000).
Del todo est en todas partes a la diversidad crptica

Una visin tradicional entre los eclogos microbianos es que los microorganismos tienden a formar linajes poco diversos y generalmente cosmopolitas, como consecuencia de su aparente ubicuidad y facilidad de dispersin (OMalley 2007). De acuerdo con este estado de cosas, la idea de que todo est en todas partes se aplicaba tambin a los parsitos sanguneos de las aves cuando stos se estudiaban slo al microscopio. Al fin y al cabo, la sangre de las aves es un medio muy homogneo, y los parsitos parecen ser fcilmente transportables, localmente por sus insectos vectores, y entre regiones geogrficas remotas gracias a las grandes migraciones de las que son capaces sus hospedadores. As, hasta hace relativamente poco se haban descrito unos pocos cientos de especies de parsitos sanguneos de aves identificables al microscopio (Valkinas 2005), la mayora de ellas presentes en una amplia variedad de especies hospedadoras con orgenes filogenticos y geogrficos bastante diversos. Sin embargo, esta idea se ha ido difuminando, hasta ser completamente rebatida, desde que es posible la identificacin de variantes genticas de parsitos mediante tcnicas moleculares. En primer lugar, llama la atencin la existencia de una enorme diversidad gentica dentro de cada una de las especies de parsitos reconocidas por la taxonoma tradicional (las denominadas especies morfolgicas), diversidad que no estamos sino empezando a comprender (Martinsen et al. 2006). Resulta gratificante comprobar que las tcnicas moleculares apoyan la taxonoma tradicional: las especies morfolgicas forman grupos de linajes recprocamente monofilticos (grupos cuyos miembros descienden todos de un ancestro comn; Fig. 2), pero tambin que la diversidad de parsitos es mucho ms compleja de lo que se crea, existiendo numerosas variantes genticas (en ocasiones decenas) dentro de cada especie morfolgica (Hellgren et al. 2007; Prez-Tris et al. 2007). Algunas de estas variantes sin duda representan la variacin
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gentica en el citocromo b que es esperable dentro de las distintas especies. Sin embargo, una propiedad interesante de estas variantes genticas es que, con frecuencia, su distribucin est muy estructurada entre especies hospedadoras, con parsitos especficos de distintas especies de aves aun cuando stas se presentan en los mismos hbitats (Waldenstrm et al. 2002; Fallon et al. 2005; Ricklefs et al. 2005) y cuentan con claras oportunidades de colonizar no ya individuos de la misma especie, sino el mismo hospedador individual (Prez-Tris y Bensch 2005a). Esta especificidad enseguida sugiri la posibilidad de que las variantes genticas de los parsitos fuesen entidades biolgicamente relevantes, quizs especies diferentes. De hecho, la secuenciacin de genes nucleares y mitocondriales de los mismos parsitos ha permitido comprobar que, en la mayora de los casos, las variantes genticas podran clasificarse sin problemas como buenas especies biolgicas. Esta diversidad crptica de parsitos (crptica porque no podemos percibirla mediante la observacin de los parsitos al microscopio) nos obliga a adoptar un nuevo paradigma a la hora de interpretar la evolucin de las interacciones entre parsitos y hospedadores. De la visin clsica de que unos pocos parsitos se reparten la explotacin de toda la diversidad de aves (el todo est en todas partes) pasamos a la posibilidad de que existan tantas especies de parsitos como especies de aves diferentes pueblan el planeta, o incluso ms (Bensch et al. 2004).
Figura 2. Relaciones filogenticas de 11 variantes de citocromo b aisladas de infecciones correspondientes a 6 especies morfolgicas diferentes de Haemoproteus. Cada especie morfolgica tiene sus variantes genticas agrupadas en un crculo. Se representan imgenes microscpicas de macrogametocitos (clulas prerreproductivas femeninas) y microgametocitos (masculinos, abajo) de los parsitos de cada especie, con el nmero de observaciones para cada variante gentica entre parntesis. Los nmeros en las ramas del rbol filogentico representan el apoyo estadstico (medido como porcentaje) de dos mtodos diferentes de reconstruccin filogentica (Bayesiano y de mxima verosimilitud, respectivamente). [Modificado de Hellgren et al. 2007a].
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Parsitos con diferentes papeles ecolgicos

Aparte de sus interesantes patrones de variacin gentica, otra caracterstica interesante de los parsitos identificados mediante tcnicas moleculares es que las diferentes variantes frecuentemente demuestran claras diferencias ecolgicas: diferente prevalencia y distribucin geogrfica (Fallon et al. 2003), distinta fenologa de transmisin (Prez-Tris y Bensch 2005b), o diferente patrn de asociacin con el sistema inmunitario de su hospedador (Bonneaud et al. 2006), entre otras caractersticas. Un buen ejemplo de las implicaciones de la singularidad ecolgica de las diferentes variantes genticas de parsitos lo encontramos en los zarceros comn (Hippolais polyglotta) e icterino (H. icterina), dos especies hermanas de aves que ocupan Europa occidental y oriental, respectivamente, con una estrecha zona de contacto en el centro del continente, donde ambas especies coinciden e incluso en ocasiones hibridan (Figura 3). La existencia de esta zona de contacto se interpreta como el resultado del encuentro de ambas especies tras su expansin postglacial en Europa desde refugios glaciares separados (donde cada especie habra persistido durante los periodos ms fros del Pleistoceno), probablemente localizados en las pennsulas Ibrica y Balcnica. En este contexto, una cuestin interesante es qu ocurre con las poblaciones de parsitos cuando sus especies hospedadoras se encuentran en una zona de contacto. Una posibilidad es que los parsitos encuentren una oportunidad para expandirse de una especie a la otra, pero tambin puede ocurrir que lo que encuentren sea una barrera contra la dispersin, por ejemplo si cada especie hospedadora tiene parsitos muy especficos, incapaces de completar su ciclo en la otra especie. El anlisis microscpico de los parsitos de los zarceros demuestra que ambas especies estn frecuentemente infectadas por un parsito fcilmente identificable por su morfologa, Haemoproteus belopolskyi, lo que apoya la idea de que este parsito se dispersa libremente entre especies a ambos lados de la zona de contacto. Sin embargo, cuando se analiza el citocromo b de estos parsitos, encontramos que cada especie de zarcero tiene una variante gentica tpica, cuya prevalencia supera el 80% de individuos infectados en su especie de ave caracterstica, pero no llega al 5% en la otra especie. Ms an, las escasas ocasiones en que una variante del parsito infecta a la especie de zarcero equivocada tienen lugar en la zona de contacto, lo cual sugiere que las dos variantes genticas del parsito pueden transmitirse de una especie de zarcero a la otra all donde ambas coinciden, pero dicho intercambio no prospera ms all de esa zona, dejando a cada variante de parsito restringida a una nica especie hospedadora en la prctica totalidad de su rea de distribucin (Reullier et al. 2006). En otras palabras, la zona de contacto entre ambos zarceros, lejos de ser una va de dispersin de parsitos entre dos especies hospedadoras (la conclusin derivada del anlisis microscpico), es ms bien el lmite de la distribucin geogrfica de cada parsito. Lo ms sorprendente de este hecho es que ambas variantes genticas de H. belopolskyi se diferencian tan solo en una base de la secuencia del citocromo b utilizada para su identificacin (una divergencia de tan solo el 0,2%). Esto nos lleva a admitir el inquietante hecho de que la diferencia mnima detectable entre dos variantes genticas de parsitos puede ser suficiente para que stas constituyan entidades biolgicas diferenciadas.
Figura 3. El parsito Haemoproteus belopolskyi, que puede identificarse al microscopio por su morfologa (vase Fig. 2), infecta al zarcero comn (cuya distribucin se representa en los mapas en color azul) y al zarcero icterino (en amarillo) en todas las localidades de Europa donde las infecciones de parsitos de estas aves han sido estudiadas (A). La franja de color prpura en la que se concentra gran parte de las localidades muestreadas representa la zona de contacto entre ambas especies de zarceros. El anlisis del citocromo b de estas infecciones muestra un reparto muy desigual (B) de dos variantes genticas de dicho parsito entre ambas especies hospedadoras, cuya distribucin geogrfica (C) dibuja un escenario completamente diferente del que sugera el anlisis microscpico. Para ms detalles, vase Reullier et al. (2006).
Las tcnicas moleculares han permitido rebatir una de las ideas tradicionales acerca de la interaccin entre las aves y sus parsitos: el papel de las especies de aves migratorias como puente para la dispersin de parsitos entre las avifaunas residentes en distintos continentes unidos por las rutas migratorias (Hellgren et al. 2007b). El anlisis de la transmisin de ms de 200 linajes de parsitos de aves en Europa y frica ha permitido comprobar que, aunque las aves migratorias se infectan con parsitos europeos y africanos (ya que se exponen a ambos tipos) y transportan dichos parsitos en la sangre
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durante sus migraciones intercontinentales, cada especie de parsito se transmite en un solo continente, y rara vez consigue colonizar las especies residentes en el otro continente. As, la transmisin tanto en Europa como en frica slo se ha podido constatar en unos pocos de los parsitos investigados (menos del 1%), un patrn que podra explicarse por la ausencia de vectores capaces de transmitir el mismo parsito en ambos continentes. En cualquier caso, es interesante indicar que dentro de cada especie morfolgica existen especies crpticas de transmisin europea y africana. Adems, los marcadores moleculares han permitido comprobar que el cambio de regin geogrfica de transmisin ha ocurrido en varias ocasiones independientes en diferentes linajes parsitos, que posteriormente han experimentado una diversificacin importante en su nueva rea de transmisin (Hellgren et al. 2007b). Por ltimo, la identificacin de parsitos mediante tcnicas moleculares es tambin importante porque permite investigar las posibles diferencias en la virulencia de diferentes especies crpticas de parsitos. Y no slo eso, tambin permite analizar las consecuencias de la infeccin simultnea por varias de estas especies. De hecho, las infecciones mltiples pueden ser especialmente virulentas como consecuencia de la competencia entre los parsitos presentes en la sangre (Read y Taylor 2001), una circunstancia que parece aplicarse a los parsitos sanguneos en poblaciones naturales de avin comn Delichon urbica (Marzal et al. 2008).
Por qu hay tantos parsitos?

Quizs uno de los ms importantes avances cientficos que ha permitido el estudio gentico de los parsitos es la reconstruccin de su filogenia, y con ella la interpretacin de sus patrones de diversificacin. A pesar de lo mucho que se ha investigado este grupo de parsitos, las relaciones filogenticas entre y dentro de los gneros Plasmodium, Haemoproteus y Leucocytozoon siguen sujetas a debate (Martinsen et al. 2008). Resolver las relaciones evolutivas entre estos parsitos es importante no slo para entender la evolucin de unos agentes patgenos con tanta importancia socioeconmica y ecolgica. Tambin lo es porque, utilizando filogenias bien apoyadas, es ms fcil comprender los procesos de diversificacin de los parsitos y los patrones de coevolucin con sus hospedadores (Prez-Tris et al. 2005). Con la ayuda de las tcnicas moleculares, se ha podido comprobar que los principales mecanismos de diversificacin de linajes de los parsitos sanguneos de las aves son la coespeciacin (la divergencia de especies de parsitos paralela a la de sus hospedadores) y el cambio de hospedador (un evento frecuentemente seguido de otro de especializacin; Ricklefs et al. 2004). Recientemente se ha podido comprobar que, adems de estos procesos, algunos linajes parsitos han divergido sustancialmente dentro de una nica especie hospedadora, generando comunidades de parsitos muy ricas y exclusivas de dicha especie (un ejemplo de este fenmeno se da en la curruca capirotada, Sylvia atricapilla; Prez-Tris et al. 2007). La complicacin de las interacciones entre parsitos y hospedadores como consecuencia de dichos eventos de diversificacin abre las puertas a nuevas vas de investigacin muy prometedoras.
El futuro de la parasitologa molecular

Todo lo que se ha expuesto hasta aqu es el resultado de investigaciones realizadas a base de secuenciar uno o unos pocos genes de los parsitos, principalmente genes mitocondriales. Aunque dichas tcnicas han supuesto un claro punto de inflexin en el conocimiento de estos parsitos y de las relaciones que mantienen con sus especies hospedadoras, ya empieza a notarse que los cientficos las han llevado hasta el lmite de sus posibilidades. Por ejemplo, si consideramos que las diferentes variantes de parsitos identificadas mediante la secuenciacin de genes mitocondriales son autnticas especies, resulta algo incomodo no disponer de informacin acerca de la variabilidad gentica existente dentro de cada una de esas especies, y cmo se distribuye dicha variacin a diferentes escalas geogrficas. Para responder a este tipo de cuestiones, resulta fundamental el desarrollo de otro tipo de marcadores, como microsatlites o polimorfismos de un solo nucletido (SNPs). Sin embargo, poner a punto estas tcnicas es especialmente difcil en el caso de parsitos intracelulares, cuyo ADN se encuentra en baja proporcin en comparacin con el de su hospedador. Sin lugar a dudas, la secuenciacin del genoma completo de algunos parsitos de la malaria humana supondr una ayuda en este sentido (De Roode y Read 2003), aunque dichos desarrollos estn sirviendo para comprobar que, desafortunadamente, los marcadores de los parsitos humanos no son de aplicacin inmediata a las especies de parsitos que infectan a las aves. Pero no nos desanimemos: el desarrollo de nuevas tecnologas, como la seleccin mediante microscopa de precisin de clulas individuales, o la amplificacin de ADN a partir de una nica clula, dibujan un panorama optimista en cuanto a las posibilidades que existen de desarrollar marcadores moleculares de los parsitos sanguneos de las aves. Este tipo de marcadores permitir, en un futuro no muy lejano, investigar con detalle la filogeografa de estos parsitos, conseguir una mayor resolucin en su anlisis sistemtico, o identificar la variacin existente en loci implicados en su interaccin con sus hospedadores, como los que codifican los antgenos activadores de la respuesta inmune, o los que ayudan al parsito a combatir la resistencia del hospedador. Obviamente, estos desarrollos se beneficiarn de su combinacin con aproximaciones microscpicas, que no por llevar ms tiempo usndose estn anticuadas; de hecho, resultan imprescindibles para una correcta interpretacin de los datos genticos, aumentando considerablemente la profundidad de anlisis cuando se combinan con stos (Valkinas et al. 2008). Adems, aunque las tcnicas moleculares suelen incrementar la capacidad de deteccin de infecciones de parsitos, la microscopa sigue siendo imprescindible para detectar aquellos parsitos cuyo ADN es ms difcil de amplificar (Valkinas et al. 2006). Sin duda, los slidos puentes que han conseguido establecerse entre la
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parasitologa tradicional y las nuevas aproximaciones moleculares nos estn permitiendo disfrutar de uno de los momentos ms excitantes en la historia de la parasitologa ecolgica.
Agradecimientos
Gracias a todos los que han contribuido a generar los conocimientos que se resumen en este trabajo, y a Pedro Jordano por invitarme a divulgarlos aqu.
Referencias
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=580 INVESTIGACIN
Fragmentacin del bosque y prdida del hbitat de helechos amenazados en el Parque Natural Fragas do Eume (NW de Espaa)
A.L. Teixido 1 , L.G. Quintanilla 1 , F. Carreo 2
(1) rea de Biodiversidad y Conservacin, Departamento de Biologa y Geologa, Escuela Superior de Ciencias Experimentales y Tecnologa, Universidad Rey Juan Carlos, C/ Tulipn s/n, 28933 Mstoles, Madrid, Espaa. (2) rea de Geologa, Escuela Superior de Ciencias Experimentales y Tecnologa, Universidad Rey Juan Carlos, C/ Tulipn s/n, 28933 Mstoles, Madrid, Espaa.
Recibido el 27 de octubre de 2008, aceptado el 1 de diciembre de 2008.
Teixido, A.L., Quintanilla, L.G., Carreo, F. (2009). Fragmentacin del bosque y prdida del hbitat de helechos amenazados en el Parque Natural Fragas do Eume (NW de Espaa). Ecosistemas 18(3):60-73. A pesar de la intensa destruccin sufrida por los bosques de las costas de Europa, hay pocos estudios sobre la fragmentacin de estos ecosistemas y sus consecuencias sobre la biodiversidad. El P. N. Fragas do Eume es una de las mejores representaciones de los bosques del litoral atl ntico europeo y tiene importantes poblaciones de helechos ibero-macaronsicos amenazados en sus bosques de ribera. En este trabajo se estudi la distribucin de las clases de ocupacin del suelo de este parque a partir de imgenes areas de los aos 2002 y 2003. El bosque en conjunto ocupa el 30% de la superficie y corresponde principalmente a tres parches de gran tamao. No obstante, la mayora de los parches son muy pequeos (<10 ha) y tienen escasa o nula superficie no afectada por los factores de borde. En las riberas, la deforestacin es menor y el bosque cubre el 76% de la longitud de los cauces. Hay 47 km de bosque de ribera a baja altitud (<400 m) y orientado al N, hbitat ptimo de helechos amenazados. La restauracin del bosque en las riberas degradadas debe ser una medida prioritaria para la recuperacin de estos helechos. Palabras clave: bosque de ribera, efectos de borde, Fragas do Eume, fragmentacin, helechos amenazados, ortoimgenes, prdida de hbitat, SIG Teixido, A.L., Quintanilla, L.G., Carreo, F. (2009). Forest fragmentation and loss of threatened ferns habitat in Fragas do Eume Natural Park (NW Spain). Ecosistemas 18(3):60-73. Despite large destruction suffered by the forests of coastal Europe, few studies have examined the fragmentation of these ecosystems and its consequences on biodiversity. Fragas do Eume Natural Park is one of the best remaining forests in the Atlantic coast of Europe and has important populations of threatened Ibero-Macaronesian ferns in its riparian forests. The distribution of land cover classes in this Park was studied by using aerial images from the years 2002 and 2003. The whole forest occupies 30% of the area and is mainly held by three big patches. Nevertheless, most patches are very small (<10 ha) and affected by edge factors. In riversides, deforestation was less intense and 76% of the stream length is covered by forest. North-facing low-altitude (<400 m) riparian forest, optimum habitat for threatened ferns, occupies 47 km of streams. Forest restoration in the damaged riversides must be a priority action to conserve these ferns. Key words: riparian forest, edge effects, Fragas do Eume, fragmentation, threatened ferns, orthoimages, habitat loss, GIS
Introduccin
La fragmentacin del hbitat engloba dos procesos: la prdida de hbitat y la fragmentacin del hbitat per se, es decir, su disgregacin al margen de la prdida de superficie (Fahrig 2003). Hay abundantes evidencias empricas de que la prdida de hbitat tiene intensos efectos negativos sobre la biodiversidad (Brooks et al. 2002; Santos y Tellera 2006). Los efectos
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negativos de la fragmentacin per se (en adelante, fragmentacin) sobre la biodiversidad se deben al aumento del nmero de parches de menor tamao, al aislamiento de los parches y a los efectos de borde (Andrn 1994; Fahrig 2003). En hbitats forestales, los fragmentos de bosque son ms susceptibles a las condiciones fsicas de borde, que exponen a los organismos a las condiciones extremas de una matriz de hbitat circundante muy diferente del original (Murcia 1995; Ries et al. 2004). De hecho, los bordes tienen distinta composicin especfica que el interior de los fragmentos (p. ej. Belinchn et al. 2007). Los bosques son hbitats especialmente afectados por la fragmentacin y la prdida de hbitat a escala global (Brooks et al. 2002; Echeverria et al. 2006). Los bosques son vulnerables a estos procesos ya que experimentan algunos cambios estructurales que afectan a su capacidad para preservar la biodiversidad (Laurance et al. 2002; Santos et al. 2002). La mayora de los estudios de fragmentacin se han llevado a cabo en bosques tropicales (p. ej. Gaveau et al. 2007) y, especialmente, en bosques templados (p. ej. Pan et al. 2001; Echeverria et al. 2006). En la Pennsula Ibrica hay algunos estudios de fragmentacin de bosques montanos (Garca et al. 2005; Quevedo et al. 2006) y bosques mediterrneos (Santos et al. 2002; Plieninger 2006), principalmente orientados a los vertebrados. Por el contrario, no se han considerado ni los bosques prximos a la costa ni los bosques de ribera, donde la presin antrpica y la fragmentacin son ms intensas (Izco 1994). Los bosques del litoral atlntico de la Pennsula Ibrica y Macaronesia (archipilagos de Azores, Madeira y Canarias) albergan varias especies de helechos amenazados, entre las que destacan Culcita macrocarpa, Dryopteris aemula, D. guanchica, Hymenophyllum tunbrigense, Vandenboschia speciosa y Woodwardia radicans. Su hbitat ptimo son los bosques de ribera en valles encajonados orientados al norte (Amigo y Norman 1995). La destruccin y modificacin de estos bosques son sus principales amenazas (Domnguez et al. 1996). En el norte de Espaa, lmite septentrional de varias de estas especies, nicamente crecen a baja altitud, generalmente por debajo de 400 m (Quintanilla 1997). El Parque Natural Fragas do Eume (Galicia, NW Espaa) incluye uno de los mayores bosques del litoral atlntico de la Pennsula Ibrica e importantes poblaciones de helechos ibero-macaronsicos amenazados. Durante la segunda mitad del siglo XX, sus bosques sufrieron procesos de fragmentacin y prdida de hbitat debido a la plantacin de eucaliptos (Eucalyptus globulus) y a la construccin de un gran embalse. Los principales objetivos del presente estudio son: (1) caracterizar los patrones de fragmentacin de estos bosques, y (2) cuantificar la extensin de los bosques de ribera a baja altitud y orientacin de umbra, hbitat ptimo de los helechos amenazados. Este trabajo es un punto de partida para analizar posteriormente los posibles efectos de la fragmentacin y prdida del bosque de ribera en los helechos ibero-macaronsicos amenazados del litoral atlntico.
Material y mtodos
rea de estudio El P. N. Fragas do Eume comprende unas 9.000 ha en el tramo final del ro Eume (Fig. 1). El ro forma una garganta con direccin E-W en la que se encajonan sus abundantes afluentes. El rea protegida se extiende desde 650 m, en los montes de su extremo SE, hasta el nivel del mar, en la desembocadura del Eume. El clima es atlntico, con una precipitacin media anual en torno a 1.700 mm y una temperatura media anual de 14 C (Carballeira et al. 1983). Predominan las rocas cidas cuarcita, esquisto, filita, granito, y los suelos son ricos en materia orgnica. Hay tres tipos de bosque en funcin del relieve: robledal (en las laderas), aliseda (en las riberas con sedimentos encharcados) y avellaneda (en riberas abruptas con lechos rocosos Figs. 2 y 3; vanse estructura y composicin florstica en Amigo y Norman 1995). Alisedas y avellanedas son el hbitat de los helechos amenazados presentes en el parque (Fig. 4).
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Figura 1. Localizacin del P. N. Fragas do Eume. En la regin de Galicia fraga se aplica a los bosques de la franja costera, donde slo quedan pequeos fragmentos en los valles ms inaccesibles.
Figura 2. En las riberas de aguas lentas, la alisedas tienen principalmente Alnus glutinosa y Fraxinus angustifolia. En las laderas, los robledales estn dominados por Quercus robur y Castanea sativa. El lmite entre ambos tipos de bosque se intuye en esta imagen otoal del ro Eume, ya que los rboles de la aliseda pierden antes la hoja. En la esquina superior derecha sobresalen las copas de una plantacin de Eucalyptus globulus (foto: L. G. Quintanilla).
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Figura 3. En las riberas abruptas, las avellanedas se caracterizan por la abundancia de Corylus avellana, Fraxinus excelsior y Ulmus glabra (foto: L. G. Quintanilla).
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Figura 4. Helechos amenazados del P. N. Fragas do Eume y sus categoras de amenaza a nivel nacional (EN, En Peligro; VU, Vulnerable; NE, No Evaluado; Baares et al. 2004) y regional (E, En Peligro; V, Vulnerable; Decreto 88/2007 del DOG, Catlogo gallego de especies amenazadas). *, incluido en el Anexo II de la Directiva de Hbitats (Directiva 92/43/CEE del Consejo de 21 de mayo de 1992). (Fotos: L. G. Quintanilla).
Clases de ocupacin del suelo Para analizar y caracterizar los patrones de fragmentacin del bosque y la extensin de los bosques de ribera, se delimitaron y clasificaron parches a partir de las ortoimgenes de los aos 2002 y 2003 del Sistema de Informacin Geogrfica de Parcelas Agrcolas. Las ortoimgenes, con resolucin espacial de 0,25 m, se integraron en un Sistema de Informacin Geogrfica (SIG) basado en ArcGIS v9.1 (ESRI 2001) para su anlisis espacial. En el SIG tambin se incluy el Mapa Topogrfico Nacional digital 1:25.000 (hojas 22-I, 22-II, 22-III, 22-IV y 46-II) y el Modelo Digital de Terreno (MDT25), cuya resolucin es de 25 m. La alta resolucin de las ortoimgenes permiti delimitar parches de hasta 0,01 ha, menores a las de trabajos similares (p. ej. 0,2 ha, Plieninger 2006; 6,25 ha, Echeverria et al. 2006). La clasificacin de los parches se realiz fotointerpretando y digitalizando directamente en pantalla segn las clases de ocupacin del suelo de CORINE Land Cover al nivel 5 (IGN 2002). Se diferenciaron las siguientes clases: bosques, plantaciones de eucalipto, plantaciones de pino, matorral de transicin, tojal-brezal, roquedos, cauces, embalse, prados y praderas, tierras de labor en secano, tejido urbano discontinuo, carreteras, zonas de extraccin minera y zonas industriales y comerciales. La clase bosques agrup robledales, alisedas y avellanedas (vase rea de estudio). Segn la nomenclatura CORINE, estos bosques corresponderan a dos clases diferentes: los robledales a bosques caducifolios, y las alisedas y avellanedas a bosques de ribera. No obstante, en el rea de estudio no hay fronteras netas entre ambas clases, sino ecotonos de anchura
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variable en funcin de los gradientes de humedad, temperatura, radiacin, etc. Por ello, todos los tipos de bosque se reunieron en una nica clase al delimitar parches. Aunque no se pudo calcular la superficie de los bosques de ribera, s se determin su longitud, dada su importancia como hbitat para los helechos amenazados. Para ello, se cartografi su ubicacin en una capa lineal obtenida a partir del solapamiento entre las capas de bosque y de cauces. Anlisis de la fragmentacin Se calcul el nmero de parches y la superficie total (ha) y relativa (%) de cada clase de ocupacin del suelo. El anlisis de fragmentacin del bosque se llev a cabo mediante las variables del paisaje seleccionadas en recientes estudios de fragmentacin de bosques (Echeverria et al. 2006 y sus referencias). De este modo, para la clase bosques se estim: (a) la superficie de cada uno de los parches (ha) y, especficamente, la superficie del parche de mayor tamao (ha) y la superficie relativa que ocupa en el parque (%), (b) la superficie interna total de la clase (superficie de la clase tras restarle a los parches un borde de amortiguacin de 50 m, distancia adecuada para valorar la influencia de borde en bosques templados vanse revisiones de Murcia 1995; Ries et al. 2004; Honnay et al. 2005), (c) la longitud total (km) del borde de la clase y (d) un ndice de adyacencia (longitud total km y relativa % del borde de la clase con cada una de las otras clases). De la capa lineal de bosques de ribera se calcularon su longitud total y la longitud de los bosques de ribera que cumplieron simultneamente dos criterios de calidad de hbitat para los helechos amenazados: altitud inferior a 400 m y orientacin de umbra (WNWNEE, es decir, 292,5067,5 N). El modelo digital del terreno disponible es posterior a la construccin de la presa del Eume, por lo que carece de la informacin del relieve inundado por este embalse. Por ello, los cauces cubiertos por la lmina de agua se excluyeron en todos los clculos relativos al bosque de ribera.
Resultados y Discusin
Distribucin de las clases La localizacin de cada una de las clases se muestra en el Mapa 1. El bosque es la clase dominante, con 2.659 ha, lo que supone cerca de un 30% de la extensin total del parque (Tabla 1). La gran extensin del tojal-brezal (26,6%) contrasta con la relativa escasez del matorral de transicin (3,4%). La proporcin de rboles fue el criterio para distinguir estas clases: <30% de rboles, tojal-brezal; entre 30-75%, matorral de transicin; y >75%, bosque (IGN 2002). Hasta hace poco tiempo, la regeneracin del bosque en Galicia se consideraba escasa (Fernndez 1994), de ah la poca extensin de transiciones matorral-bosque. Hay que advertir, adems, que parte de los matorrales de transicin no proceden de la evolucin del tojalbrezal, sino de la degradacin del bosque. Las plantaciones de eucaliptos son el cultivo forestal ms abundante, especialmente en las zonas ms bajas (mitad W) y en la orilla N del embalse del Eume. Los monocultivos de Eucalyptus globulus se han expandido de manera generalizada en todo el litoral atlntico de Espaa, en respuesta a la gran demanda de la industria papelera. En Galicia este rbol, en monocultivo o mezclado con otras especies, cubre ya el 13% de la superficie (Villanueva-Aranguren et al. 2002).
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Mapa 1. Distribucin de las clases CORINE de ocupacin del suelo en el P. N. Fragas do Eume.
Clase de ocupacin
Nmero de parches (ha)
Superficie (%) 29,7 20,4 1,6 3,4 26,6 1,1 0,3 4,5 9,7 2,2 0,3 0,2 0,1 0,0
Bosque Plantaciones de eucalipto Plantaciones de pino Matorral de transicin Tojal-brezal Roquedos Cauces Embalse Prados y praderas Tierras de labor en secano Tejido urbano discontinuo Autovas y carreteras Zonas de extraccin minera Zonas industriales y comerciales
137 200 96 267 213 63 1 1 132 198 72 30 4 1
2.659,5 1.829,7 144,9 302,9 2.386,2 94,2 24,5 400,1 867,1 200,7 26,0 17,9 7,4 0,7
Total
1.415
8.961,8
100
Tabla 1. Nmero de parches y superficie de las clases de ocupacin del suelo del P. N. Fragas do Eume.
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La distribucin de las clases CORINE en el rea de estudio ya se haba cartografiado como parte del mapa realizado a escala continental por el proyecto CORINE Land Cover 2000 (EEA 2007). La coincidencia entre este mapa y el del presente estudio, es decir, la superficie a la que ambos mapas atribuyen la misma clase de ocupacin, representa slo el 27% del parque. Esto se debe sobre todo a la diferencia de escala, ya que en el mapa europeo el rea mnima cartografiable se fij en 25 ha (EEA 2007), mientras que en el mapa del parque se llegaron a distinguir parches de tan slo 0,01 ha. En Galicia hay un grado excepcional tanto de dispersin de la poblacin como de minifundismo (Marey et al. 2006). Ambos patrones se cumplen claramente en el P. N. Fragas do Eume. Por un lado, a pesar de que la mayor parte del parque corresponde a zonas de relieve muy abrupto, incluye 72 parches de tejido urbano discontinuo (Tabla 1). Por otro lado, como ejemplo de la distribucin de la propiedad, la mayor parte de las parcelas de bosque son inferiores a 1 ha. Todo esto hace que el paisaje sea muy heterogneo y que el estudio de la fragmentacin de los hbitats se haya tenido que hacer a gran escala, para as poder delimitar parches de pequeo tamao. Fragmentacin del bosque La superficie relativa de bosque (30%) es similar a la descrita para territorios templados de Norteamrica (30-35%, Fuller 2001; Pan et al. 2001). No obstante, superficies incluso menores al 10% han sido registradas para bosques templados europeos de llanura y meseta, altamente fragmentados por el uso de la agricultura (ver Santos et al. 2002). Sin embargo, los bosques atlnticos de Galicia (NW Espaa) todava conservan superficies cercanas al 20% (Villanueva-Aranguren et al. 2002). La superficie de bosque relativamente alta en el rea de estudio puede ser debido al hecho de ser un rea protegida y a la complejidad de su relieve, permitiendo una alta representacin de hbitats forestales (Tellera y Santos 1998; Saura y Carballal 2004). Al respecto, una superficie relativa de bosque similar a la calculada en el presente estudio fue registrada en un rea montana protegida de un bosque atlntico del NW Espaa (27,6%, Garca et al. 2005). En las Fragas do Eume hay 137 parches de bosque (Tabla 1), la mayora menores de 10 ha (Fig. 5). No obstante, estos parches pequeos representan una superficie escasa en el conjunto de los bosques (Fig. 5). La marcada tendencia hacia valores pequeos en la distribucin del tamao de los parches indica altos niveles de fragmentacin y, adems, este hecho podra conducir a menores tasas de diversidad y riqueza y a una menor heterogeneidad del paisaje (Santos et al. 2002; Garca et al. 2005). Slo tres parches superan las 200 ha (273, 751 y 1.004 ha), pero suponen casi toda la superficie de bosque (Mapa 2). El parche mayor, en el valle final del Eume, representa un 11% de la superficie protegida y es el mejor ejemplo de bosque en la costa de Galicia. La conexin de estos tres grandes parches mediante la restauracin del bosque favorecera el movimiento de especies forestales (Garca et al. 2005).
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Figura 5. Variacin en el tamao de los parches de bosque del P. N. Fragas do Eume. El porcentaje de (a) nmero de parches y (b) superficie relativa de los distintos tamaos de parche se muestra sobre cada barra.
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Mapa 2. Distribucin de la clase bosque en el P. N. Fragas do Eume. Se sealan los tres parches de mayor tamao y su superficie.
La longitud total de borde de todas los parches de bosque es 484 km y su superficie interna total tras restarles un borde de amortiguacin de 50 m es de 1.178 ha, que se corresponden con un 46% de la superficie total de bosque. Este valor es un porcentaje elevado para 2.659 ha repartidas en 137 parches de bosque, debido principalmente al dominio en trminos de rea de los tres grandes parches de bosque, que suman algo ms de 2.000 ha. El relativo bajo porcentaje de superficie sometida a los factores de borde es un rasgo propio de la tipologa de la fragmentacin del hbitat (Ranta et al. 1998). La longitud de borde se debe en gran medida a que los parches de bosque tienen formas alargadas y bordes intrincados (Mapa 2). As ocurre en general en Galicia y es consecuencia del efecto combinado de la accin humana y otros factores topogrficos e hidrolgicos (Saura y Carballal 2004). Los bosques ocupan las zonas menos alteradas, que son aquellas donde la complejidad del relieve ha impedido otros aprovechamientos. En estas zonas, la forma de los bosques responde a la accin conjunta de altitud, pendiente, humedad del suelo, patrones de drenaje, etc. (Saura y Carballal 2004 y referencias all citadas). La abundancia de parches de pequeo tamao tambin contribuye a la longitud de borde y, por lo tanto, a la superficie interna de bosque. De hecho, al eliminar el borde de amortiguacin de 50 m, slo permanecen 27 de los 137 parches originales, es decir, hasta un total de 110 parches quedaran desprovistos de superficie interna de bosque. En los bordes de los parches de bosque se originan unas condiciones abiticas y biticas ms extremas y causan cambios en la abundancia y distribucin de las especies, con mayor mortalidad de fauna o flora cerca del borde con respecto al interior del bosque (Murcia 1995; Ries et al. 2004; Belinchn et al. 2007). Cuanto mayor es el contraste entre los parches adyacentes mayor es el grado de aislamiento de los parches forestales, comportndose como bordes abruptos o impermeables que actan como una barrera muy difcil de cruzar por organismos especializados en un hbitat (Lpez-Barrera 2004; Ries et al. 2004). En las Fragas do Eume, los parches de bosque lindan principalmente con tojal-brezal, eucaliptal y, en menor medida, con el embalse (Tabla 2). La diferencia de condiciones abiticas y biticas entre estas clases y el bosque, puede tener efectos negativos sobre los organismos especialistas que habitan en l (p. ej. Amigo y Norman 1995; Carneiro et al. 2008).
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Clase adyacente al bosque (km) Tojal-brezal Plantacin de eucalipto Embalse Matorral de transicin Prados y praderas Plantacin de pino Tierras de labor en secano Tejido urbano discontinuo 175,1 161,7 53,1 44,0 34,7 8,9 5,9 0,4
ndice de adyacencia (%) 36,2 33,4 10,9 9,1 7,2 1,9 1,2 0,1
Total
483,8
100
Tabla 2. ndice de adyacencia entre el bosque y el resto de clases de ocupacin del suelo del P. N. Fragas do Eume.
Bosque de ribera: hbitat de helechos amenazados El ro Eume y sus afluentes suman 123 km de cauces dentro del P. N. Fragas do Eume. El bosque de ribera representa 94 km, de los cuales 47 km estn cubiertos por bosques de ribera a baja altitud y orientados en umbra, ptimos para los helechos amenazados. Por lo tanto, el bosque de ribera cubre el 76% de su ubicacin potencial (todos los cauces) y el hbitat para las especies de helecho amenazadas un 38% de los cauces. Estas cifras sobreestiman la conservacin del bosque de ribera, ya que en su clculo se han excluido los cauces inundados por el embalse del Eume (vase Anlisis de la fragmentacin). No obstante, se puede concluir que la deforestacin ha sido menos intensa en las riberas que en el conjunto del bosque (ocupa 30% de su superficie potencial). La razn principal es su inaccesibilidad, debido al encajonamiento de la red fluvial (Saura y Carballal 2004). Adems, las condiciones ecolgicas inherentes a este hbitat (p.ej. humedad, productividad), han podido conllevar un menor impacto de los efectos negativos de la fragmentacin y una mayor capacidad de regeneracin tras distintas perturbaciones (Schnitzler et al. 2005). Finalmente, hay que abordar las posibles implicaciones que pueda tener la fragmentacin detectada en el presente estudio sobre la conservacin de los helechos amenazados. En primer lugar, los efectos demogrficos y genticos del aislamiento entre parches de hbitat dependern en gran medida de la capacidad que tenga el organismo para dispersarse entre ellos (Hanski 1999). De este modo, la dispersin puede aumentar la persistencia mediante la colonizacin de parches de hbitat vacos o mediante un efecto de rescate en parches ocupados con exiguos tamaos de poblacin (Noel et al. 2006). La migracin de individuos entre los parches ayudara adems a contrarrestar el empobrecimiento gentico debido a la deriva gentica (Mech y Hallett 2001). Las seis especies consideradas en este estudio, como los helechos en general, producen gran cantidad de esporas transportadas por el viento a grandes distancias, lo que les confiere una alta potencialidad de dispersin (Page 2002). Las poblaciones de Galicia de C. macrocarpa, D. aemula y W. radicans han sido estudiadas mediante electroforesis de isoenzimas (Quintanilla et al. 2007; A. Jimnez, datos sin publicar). Estos estudios muestran que la diferenciacin gentica entre las poblaciones es muy baja, lo cual indica que hay dispersin efectiva de esporas (flujo de genes) entre ellas. Por lo tanto, la eficacia de este sistema de dispersin debe favorecer la ocupacin y persistencia de los helechos amenazados en los parches de bosque mediante colonizacin y efecto rescate y, por lo tanto, reducir el riesgo de extincin. Respecto a la longitud de borde, hay caractersticas del hbitat de estos helechos que pueden atenuar sus efectos negativos. Estas especies se sitan en fondos de valle encajonados, donde la sombra topogrfica causa una reducida exposicin a la radiacin luminosa. Cuanta menos luz alcance el sotobosque, ms dbiles sern los efectos de borde fsicos (Matlack 1993;
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Ries et al. 2004). La orientacin de umbra de los valles donde viven estos helechos tambin contribuye a suavizar los efectos de borde sobre el microclima, al recibir una menor radiacin luminosa que otras orientaciones (Honnay et al. 2005). En coherencia con estos argumentos, la fragmentacin y los efectos de borde deben de tener una importancia menor que la prdida de hbitat para la conservacin de estas especies, como sugieren algunos modelos poblacionales (Falcy y Estades 2007). Por ello, la restauracin del bosque en las riberas degradadas podra ser importante para el incremento metapoblacional de estos helechos.
Agradecimientos
Agradecemos a dos revisores annimos sus valiosos comentarios para mejorar el manuscrito original. Adems agradecemos a Jess Santamarina y Miguel Salvande la ayuda durante el desarrollo del trabajo; a Luis Costa, Director del P. N. Fragas do Eume, y los agentes forestales, las facilidades durante el trabajo de campo; a A. Jimnez por la cesin de datos no publicados; y a Fernando T. Maestre y Adrin Escudero, las sugerencias aportadas al texto. Este estudio ha sido financiado mediante el contrato para asistencia tcnica 215/2006 de la Consellera de Medio Ambiente e Desenvolvemento Sostible de Galicia. El Fondo Galego de Garanta Agraria cedi las ortofotos usadas en el estudio.
Referencias
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=585 TESIS Y PROYECTOS
Anlisis comparativo entre varios mtodos de estimacin de recarga en ambientes semiridos: caso del acufero VentsCastellar (Alicante)
I. Touhami 1
(1) Departamento de Ecologa, Universidad de Alicante. Apartado de correos 99. 03080 Alicante, Espaa
Touhami, I. (2009). Anlisis comparativo entre varios mtodos de estimacin de recarga en ambientes semiridos: caso del acufero Vents-Castellar (Alicante). Ecosistemas 18(1):74-77.
La cuantificacin exacta de la recarga es imprescindible para la gestin y proteccin apropiadas de los valiosos recursos del agua subterrnea. Un tema importante en el uso de los mtodos descritos en este trabajo, como para la mayora de los mtodos usados para estimar la recarga, es la dificultad en determinar la incertidumbre asociada a cualquier estimacin. Idealmente, las estimaciones de recarga se deben presentar junto con niveles estadsticos de confianza o como una gama de valores probables. En los ltimos aos el acufero Vents-Castellar, situado en el trmino municipal de Agost (Alicante), est siendo sometido a un seguimiento exhaustivo de diferentes variables hidrolgicas con el objeto de aumentar el grado de conocimiento de su dinmica y poder establecer patrones de optimizacin para su gestin hdrica. Entre las variables medidas se encuentran aquellas relacionadas con su forma de recarga. El conocimiento de los mecanismos de recarga y su cuantificacin es fundamental tanto en la gestin de un acufero, como para evaluar los recursos explotables, conocer el grado de explotacin y planificar actuaciones para su desarrollo sostenible. El rea de experimentacin est ubicada en una zona climticamente semirida con un rgimen de precipitacin de carcter estacional, siendo la poca otoal cuando la que se producen las mayores precipitaciones, frecuentemente en forma de episodios tormentosos de gran intensidad. La cubierta vegetal est formada por diversos tipos de comunidades diferenciables por su estructura y composicin especfica. El propsito de este trabajo es estudiar la influencia climtica en la recarga de este pequeo sistema, sobre todo desde el punto de vista de la precipitacin, su distribucin a lo largo del ao y la naturaleza de los eventos unido a la cantidad realmente infiltrada, y ampliar el conocimiento acerca del funcionamiento hidrolgico del sistema para poder contribuir a realizar una mejor gestin de los recursos hdricos en la zona.
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Resultados
De los resultados obtenidos podemos deducir lo siguiente: 1. Comportamiento del acufero Vents-Castellar frente a la recarga La piezometra del acufero es fundamental para caracterizar su funcionamiento y poder estimar su recarga. Por otro lado, su anlisis permite controlar la evolucin de las reservas de agua subterrnea y determinar sus variaciones en funcin de la alimentacin y de los gastos. Los registros automatizados han permitido precisar que la respuesta del nivel frente a las entradas por lluvias presenta 1) una circulacin rpida que origina recuperaciones de nivel varias horas despus de infiltrarse y 2) un flujo ms retardado, que perdura durante varias semanas y que parece generar mayores volmenes de agua. Este tipo de circulacin por la zona no saturada es caracterstico de acuferos krsticos (Fig.1).
Figura 1. Mapa del rea de estudio y corte geolgico del sistema Vents- Castellar.
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2. Comparacin entre diversos mtodos aplicados para la estimacin de la recarga del acufero Vents-Castellar Los resultados de la aplicacin de los distintos mtodos para la estimacin de la recarga son muy variables, (Fig. 2). La recarga calculada mediante el mtodo BALAN (Samper y Garca Vera, 1992) representa el 8 % de la precipitacin media anual. Este valor es muy comparable a los obtenidos mediante la aplicacin del mtodo hidrodinmico (5-37%) y el mtodo de Cloruros (12-16%). Los valores de recarga obtenidos mediante el mtodo de Kessler (1965), APLIS (Andreo et al., 2004) y Evadia (Padilla y Pulido-Bosch, 1986) presentan valores altos (44-66%, 34-46% y 23-28%, respectivamente).
Figura 2. Grfico de comparacin de los diferentes mtodos aplicados para la estimacin de recarga en el acufero Vents-Castellar (los resultados se muestran como valor medio desviacin estndar).
La mayor parte de los procesos y mecanismos de recarga son relativamente bien conocidos, pero la obtencin de una estimacin fiable de la magnitud de la recarga natural entraa una extraordinaria dificultad. Por un lado, los tipos de recarga son muy variados. Para un mismo tipo de recarga los mecanismos pueden a su vez variar de unas zonas a otras dependiendo de las condiciones hidroclimticas e hidrogeolgicas. 3. Relevancia del anlisis de imgenes de satlite para la determinacin de los usos de suelo: Su importancia en la gestin de los recursos hdricos. Los resultados obtenidos en este apartado muestran una cierta relacin entre el tipo de cobertura del suelo y agua infiltrada hacia el acufero. El anlisis de la imagen de satlite muestra que los acuferos con suelos desnudos y con escasa cubierta vegetal se recargan ms que los acuferos con abundante cubierta vegetal. Esta ltima formacin aporta menos precipitacin neta, presenta un elevado consumo de agua y baja percolacin. El conocimiento del tipo de cubierta del suelo y su estado fisiolgico o de crecimiento constituye una informacin de gran importancia para poder predecir los efectos de las futuras actuaciones en materia de gestin de los recursos hdricos. Por esta razn, la gestin mediante un sistema de informacin geogrfica (SIG) de la informacin que se extrae del anlisis de imgenes supone una gran ayuda en la toma de datos, evaluacin de superficies, gestin de recursos hdricos y obtencin de informacin rpida y eficaz de grandes reas, al tiempo que permite la actualizacin peridica de esta informacin.
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El trabajo realizado ha permitido mejorar el conocimiento tanto de la recarga como del funcionamiento hidrogeolgico del acufero Vents-Castellar. Los resultados se encuentran directamente relacionados con la cantidad y calidad de los datos disponibles, las limitaciones de las diversas tcnicas de estudio utilizadas, y las particularidades de la naturaleza heterognea de los acuferos carbonatados. Como actividades futuras sera conveniente orientarse a estudiar la importancia del tipo de cubierta vegetal y su distribucin espacio-temporal en la mejora de la reserva hdrica en el suelo y por tanto la recarga de los acuferos. En este sentido, la teledeteccin se alza como una fuente de informacin espacial que complementa a las ms clsicas herramientas de modelacin.
Referencias
Samper, J., Garca Vera, M. A. 1992. Manual de usuario del programa BALAN_8. Dpto. Ingeniera del terreno. E. T. S. de Ingenieros de Caminos. UPC. Barcelona. Espaa. Kessler, H. 1965. Water balance investigations in the karst regions of Hungary. Actes Collection. Dubrovnik, AIHS-UNESCO 1:91-105. Andreo, B., Vas, J., Lpez-Geta, J.A., Carrasco, F., Durn, J.J., Jimnez. P. 2004. Propuestas metodolgica para la estimacin de la recarga en acuferos carbonticos. Boletn Geolgico y Minero 115 (2):177-186. Padilla, A., Pulido-Bosch, A. 1986. El programa EVADIA para estimacin automtica de la lluvia til. En: Simposio del Agua en Andaluca: SIAGA-86, II, pp, 631-636. Granada, Espaa.
ISSAM TOUHAMI Anlisis comparativo entre varios mtodos de estimacin de recarga en ambientes semiridos caso del acufero Vents-Castellar (Alicante) Tesis de Master. Instituto Agrnomo Mediterrneo de Zaragoza (IAMZ) y la Universidad de Alicante. Julio de 2007. Directores: Juan Bellot Abad y Jose Miguel Andreu Rodes Publicaciones resultantes de la tesis: I. Touhami, J.M. Andreu, J. Bellot, E. Garca-Snchez, A. Pulido. 2008. Contribucin de algunos eventos de recuperacin al conocimiento de la recarga en el acufero del Vents. Geo-Temas 10:1597-1600
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=586 TESIS Y PROYECTOS
Biologa reproductiva y conservacin del endemismo Polygala vayredae

S. Castro 1,2,3
(1) CESAM y Departamento de Biologia de la Universidad de Aveiro, Campus Universitrio de Santiago, 3810-193 Aveiro, Portugal (2) Departamento de Biologa Vegetal y Ciencias del Suelo, Facultad de Biologa, Universidad de Vigo, As Lagoas-Marcosende 36200 Vigo, Espaa (3) Centre for Functional Ecology and Department of Life Sciences, Faculty of Science and Technology, University of Coimbra, Calada Martins de Freitas 3001-455 Coimbra, Portugal.
Castro, S. (2009). Biologa reproductiva y conservacin del endemismo Polygala vayredae. Ecosistemas 18(1):78-84.
Existe un consenso generalizado de que el estudio de la biologa reproductiva de especies endmicas, raras o amenazadas es esencial para comprender su estado actual y planificar el desarrollo de estrategias adecuadas de conservacin in situ y ex situ. Polygala vayredae Costa (Polygalaceae) es una especie endmica de la cadena pre-Pirenaica oriental, clasificada como vulnerable segn las categoras de la IUCN (Baares et al. 2003). A pesar de su carcter de especie amenazada, la informacin disponible relativa a la biologa de esta especie es escasa y limitada a trabajos antiguos (Bols 1927, 1946; Bols y Vayreda 1922). El principal objetivo de esta Tesis de Doctorado consisti en estudiar la biologa reproductiva de P. vayredae evaluando de forma detallada los diferentes pasos del ciclo de vida de las plantas, para tratar de detectar las causas de su estado actual y aportar informacin de base, til para programas futuros de conservacin. Para alcanzar estos objetivos se estudiaron los siguientes tpicos: biologa floral y sistema de reproduccin de la especie, ecologa de la polinizacin y mecanismos de dispersin.
Biologa floral y sistema de reproduccin: como afectan al xito reproductivo de esta planta?
Las flores son las estructuras directamente involucradas en la fecundacin pero tambin en la atraccin de los vectores de polinizacin. As, sus caractersticas morfolgicas y funcionales desempearn un papel fundamental en el xito reproductivo de la planta. La estructura floral de Polygala vayredae revel estar especialmente adaptada para la reproduccin cruzada (xenogamia) y entomofilia (Fig. 1), encontrndose de acuerdo con el sistema de reproduccin y auto-incompatibilidad observados en los experimentos de polinizacin controlada (Fig. 2). Sus flores papilonadas son extremadamente elaboradas, presentando los rganos sexuales encerrados en la corola. Anteras y estigmas quedan expuestos a los visitantes nicamente cuando se produce el movimiento de la quilla por accin del peso de un insecto mientras forrajea en busca de nctar y/o polen. La flor produce nctar en una glndula localizada en la base del largo tubo de la corola, siendo accesible apenas a insectos con largas probscides. Al contrario de lo observado en otras especies del gnero Polygala (Weekley y Brothers, 2006), no se observ un mecanismo que asegure la reproduccin en ausencia de visitantes florales efectivos (i.e., delay selfing), por lo que esta especie depende estrictamente de vectores de polinizacin eficientes para producir frutos y semillas. Como consecuencia de las complicadas caractersticas florales, la escasez e imprevisibilidad de los polinizadores, as como la ineficiencia de la mayora de visitantes florales, en condiciones naturales las tasas de produccin de frutos y semillas son muy bajas y variables. Sin embargo, esta estrategia reproductiva previene los efectos negativos derivados de cruzamientos entre individuos emparentados (i.e., depresin por endogamia), siendo la planta capaz de sobrevivir a aos de escasez de polinizadores debido a su hbito perenne.
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Figura 1. A. Flor de Polygala vayredae; B. Bombus pascuorum visitando las flores de P. vayredae de forma eficiente y legtima; C. Bombus terrestris robando una flor de P. vayredae mediante una incisin realizada en la base del tubo de la corola.
Figura 2. Desarrollo de tubos polnicos en los pistilos de Polygala vayredae. A. Auto-polinizacin (escala = 100 m). B. Polinizacin xengama (escala = 200 m).
La longevidad floral es otro rasgo floral que influencia directa e indirectamente el xito reproductivo de la planta, pudiendo afectar a la cantidad y calidad del polen exportado y recibido y contribuyendo a la capacidad de atraccin de la planta (Ashman 2004). La longevidad floral ha sido descrita como el resultado de un trade-off entre el cumplimiento de las funciones masculina y femenina y el coste energtico de mantener las flores abiertas o producir nuevas estructuras (Ashman y Schoen 1994, 1996). Sin embargo, mientras que el efecto de la polinizacin en la duracin floral ha sido estudiado en diversas especies, las consecuencias de mantener las flores abiertas durante largos perodos de tiempo es un tpico que ha recibido escasa atencin. En nuestro caso, tiene especial importancia al tratarse de plantas sometidas a limitacin de polinizadores. Las flores de P. vayredae presentan longevidades florales largas y variables. De forma similar a los patrones descritos en otras especies (e.g., Stpiczynska 2003), se observ que la senescencia floral de P. vayredae es activada por la recepcin de polen, pero es indiferente a su exportacin. De esta forma, las flores de esta especie revelaron capacidad para reducir o incrementar su longevidad, dentro de determinados lmites, en respuesta a la abundancia de polinizadores. En situaciones de escasez e imprevisibilidad de polinizadores, una longevidad floral larga puede mantener la oportunidad para la fertilizacin. Pero, los estudios que realizamos tambin revelaron un elevado coste reproductivo en la produccin de descendencia, una vez que la produccin de frutos y semillas decrece significativamente con el aumento de la edad en la cual la flor es polinizada. Una reduccin del xito femenino en estados tardos de la vida de la flor podra alterar el balance coste-beneficio para mantener la flor abierta, en el sentido de promover longevidades ms cortas, contrariando parcialmente la seleccin de longevidades florales largas mediadas por la escasez en los servicios de polinizacin.
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La presentacin secundaria de polen consiste en la recolocacin y presentacin del polen en otras estructuras florales diferentes de las anteras (Yeo 1993). Estas estructuras estn frecuentemente localizadas en una zona prxima a la regin estigmtica. La presentacin secundaria de polen ha sido propuesta como un mecanismo preciso de transferencia de polen debido a que aproxima los lugares de presentacin y recepcin de los gametos masculinos (Inouye et al. 1994). Sin embargo, no existen estudios experimentales que lo comprueben. Polygala vayredae presenta un mecanismo de presentacin secundaria de polen en una estructura en forma de cesto cerca de la regin estigmtica frtil. Se observ que la recolocacin del polen en esta estructura conduce a prdidas significativas de polen (cerca del 49% del polen total producido por la flor). No obstante, esta estructura tambin permite la exportacin de polen y en el global, las prdidas totales fueron similares a las registradas en otras especies con presentacin primaria de polen (e.g., Rademaker et al. 1997). Sin embargo, la localizacin prxima de las estructuras de presentacin y recepcin del polen, gener conflictos entre las funciones masculina y femenina (auto-interferencia), afectando significativamente al xito reproductivo de la flor. A pesar de la presencia de un sistema de auto-incompatibilidad, el nmero de tubos polnicos creciendo en el estilo y la produccin de frutos decreci significativamente en presencia de polen propio en las papilas estigmticas depositado durante la visita del polinizador. La hercogamia ha sido descrita como un mecanismo implicado en la diminucin de la auto-interferencia (Webb y Lloyd 1986) y en P. vayredae revel estar positivamente correlacionada con el xito femenino. As, la presentacin secundaria de polen podr constituir un mecanismo preciso de transferencia de polen, pero tambin presenta sus costes. Estudios futuros debern comparar especies emparentadas con y sin presentacin secundaria de polen para evaluar las ventajas y desventajas de este mecanismo. Despus de la polinizacin, el crecimiento de los tubos polnicos y fecundacin de los vulos dependen de un complejo conjunto de interacciones fsicas y fisiolgicas entre el pistilo y los gametofitos masculinos que determinarn el xito reproductivo final de la planta (e.g., Hormaza y Herrero 1996). Como las observaciones de campo indicaron una tasa de produccin de semillas en flores polinizadas inferior a la esperada examinamos las barreras reproductivas que operan antes de la fecundacin. Para ello se estudi la anatoma del pistilo, las sustancias de reserva disponibles para el crecimiento de los tubos polnicos, as como el desarrollo de los tubos polnicos a lo largo del pistilo despus de polinizaciones xengamas. Se observ que los granos de polen que llegan a las papilas estigmticas entran en contacto con un exudado rico en lpidos, germinando fcilmente. A pesar del gran nmero de granos xengamos depositados sobre las papilas estigmticas, solo un reducido nmero de tubos polnicos fue observado creciendo a lo largo del estilo en direccin al ovario. El estilo presenta una morfologa peculiar, presentando un canal estilar hueco que se inicia pocas clulas por debajo de las papilas estigmticas, y que constituye el lugar donde crecen los tubos polnicos. Inicialmente este canal es estrecho y se encuentra recubierto por un muclago rico en lpidos, pero se engrosa significativamente a lo largo del estilo en direccin al ovario. Respecto a la disponibilidad de nutrientes, no se encontraron sustancias de reserva significativas a lo largo del estilo. El rea reducida de los espacios intercelulares que se encuentran inmediatamente debajo de las papilas estigmticas y la reducida rea del canal estilar en su inicio son sugeridos como los condicionantes fsicos del nmero de tubos polnicos capaces de progresar en el estilo. En niveles posteriores no existen limitaciones fsicas al desarrollo de tubos polnicos, aunque la falta de nutrientes puede estar relacionada con la disminucin del nmero de tubos polnicos observada a lo largo del estilo. Finalmente, el nmero de tubos polnicos en la entrada del ovario es habitualmente superior al nmero de vulos disponibles. Sin embargo, en este punto, el crecimiento de los tubos se torna errtico conduciendo a una baja tasa de fertilizacin. Estos resultados sugieren que a pesar de las limitaciones fsicas y fisiolgicas impuestas por el estilo, las interacciones que ocurren en el ovario desempean tambin un papel fundamental y determinan el xito reproductivo final de P. vayredae.
Polygala vayredae y sus visitantes florales

La diversidad de visitantes florales, as como su variabilidad en el tiempo y espacio, desempean un papel fundamental en el xito reproductivo de la planta y en la evolucin de sus caracteres florales (e.g., Herrera et al. 2002). Sabiendo que Polygala vayredae depende estrictamente de vectores de polinizacin para producir descendencia se revel fundamental para su conservacin determinar el espectro de visitantes florales, as como su comportamiento y eficiencia en el transporte del polen, teniendo en cuenta una escala espacial y temporal. Se observ que las flores son visitadas por ms de 24 especies distintas de insectos (e.g., Bombus pascuorum y B. terrestris, Fig. 1B y C). Sin embargo, dada la complejidad de la flor, solo cuatro especies de insectos revelaron ser polinizadores eficientes. Para ello deben de bajar la quilla y entrar en contacto con los rganos sexuales mientras forrajean por nctar o polen. Las restantes especies se comportan como robadores de nctar que no participan en la polinizacin (contrariamente a lo que ha sido observado en otros sistemas, e.g., Navarro, 2000). As, se observ que la eficiencia de los visitantes florales est ntimamente relacionada con las peculiares caractersticas morfolgicas de la flor. Entre las especies de polinizadores eficientes fue posible identificar dos grupos distintos de acuerdo a su comportamiento: los nectarvoros Bombus pascuorum (reinas) y Anthophora sp., y los colectores de polen Eucera longicornis y Halictus sp. Considerando que estos insectos son generalistas en el sentido de que explotan un conjunto de especies muy diverso y teniendo en cuenta la estructura especializada de la corola de P. vayredae, la interaccin entre esta planta y sus polinizadores muestra un patrn de especializacin asimtrica. No se observaron diferencias significativas entre los polinizadores en la cantidad de polen depositada en los estigmas tras una visita. Sin embargo, el comportamiento general
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de los dos grupos fue significativamente diferente (e.g., tiempo dedicado a cada flor, nmero de flores visitadas por parcela y distancia entre visitas). Esto, potencialmente puede influenciar la calidad del polen depositado. La cantidad de polen depositado sobre las papilas estigmticas es superior a la necesaria para fecundar los dos vulos, conduciendo a prdidas significativas de gametos masculinos pos-deposicin (Inouye et al. 1994). Respecto al espectro de visitantes florales, se observ una gran variabilidad espacio-temporal, con los visitantes eficientes siendo, en general, escasos (1.5% a 19.0% del total de visitas registradas) y los robadores de nctar abundantes (81% a 91%). En consecuencia, el xito reproductivo result muy variable entre las poblaciones estudiadas y a lo largo de los aos monitorizados. Al producir nctar como recompensa floral las plantas atraen a un conjunto diverso de visitantes florales, algunos de ellos no adaptados a la morfologa floral de la planta. Entre estos, y como se ha comentado anteriormente, destacan los robadores de nctar que en presencia de corolas tubulares largas y/o cerradas, al no poder acceder al nctar legtimamente, realizan incisiones en la base de la corola sin entrar en contacto con los rganos sexuales (Inouye 1980). A pesar de que apenas se han considerado los efectos de este comportamiento en la funcin materna, los estudios desarrollados hasta el momento revelan impactos significativos de este tipo de comportamiento (directa o indirectamente) en el xito reproductivo de la planta (e.g., Irwin et al. 2001). En este estudio se evaluaron los efectos del robo de nctar en el xito de las funciones masculina (medida como distancias de transporte de anlogos de polen) y femenina (medida como produccin de semillas). Se observ que el robo de nctar por abejorros es intenso y decrece significativamente la cantidad de nctar disponible, afectando a las funciones masculina y femenina de la flor. Se observaron diferencias significativas en la dispersin de polvos fluorescentes y en la produccin de frutos entre flores robadas y flores no robadas. Las flores no robadas dispersaron su polvo fluorescente a distancias ms largas y a mayor nmero de flores y produjeron significativamente ms frutos que las flores robadas. Los resultados obtenidos sugieren que el intenso robo de nctar en P. vayredae presenta importantes efectos negativos en la fecundidad de la planta afectando a las funciones masculina y femenina, por una modificacin del comportamiento de los visitantes legtimos que evitan visitar las flores robadas y/o abandonan la poblacin, disminuyendo as el flujo de polen y el nmero de frutos y semillas producidos en la poblacin. La morfologa floral se encuentra ntimamente correlacionada con sus vectores de polinizacin (Galen 1999). La seleccin de rasgos florales es un proceso dinmico mediado por los polinizadores, pero sujeto a presiones de otros factores tambin (e.g., Giles et al. 2006), entre los cuales se destaca el robo de nctar (Irwin 2006). Despus de estudiar el espectro de visitantes florales y el efecto de los robadores de nctar en el comportamiento de los polinizadores surgi la cuestin de cmo interaccionan estos dos grupos en la seleccin de rasgos florales. As, se estudi de qu forma la morfologa de la flor, frecuencia de robo y produccin de nctar afectan el comportamiento de los visitantes legtimos e ilegtimos. Para incorporar el nctar como variable se explor la relacin entre la dimensin de la glndula y la produccin de nctar. Los resultados revelaron una correlacin positiva y significativa entre ambas variables, indicando que la dimensin de la glndula es un buen estimador de la produccin relativa de nctar de cada flor. Despus de evaluar la variacin de los diversos caracteres florales en las tres poblaciones principales de esta especie, se correlacion el papel de cada rasgo floral con el xito reproductivo femenino, incorporando en el anlisis la frecuencia de robo de nctar. Las flores presentaron gran variabilidad en todos sus rasgos florales y, en general, las caractersticas florales medidas estn positivamente correlacionadas. El nctar revel una vez ms ser una caracterstica importante en las interacciones flor-visitante, con los visitantes legtimos estando fuertemente influenciados por esta caracterstica. En dos de las poblaciones estudiadas se observ una correlacin negativa entre la frecuencia de robo y las visitas legtimas, y en otra poblacin una correlacin positiva entre la dimensin de la flor y la frecuencia de robo. Estas observaciones parecen indicar la ocurrencia de una seleccin indirecta de determinados fenotipos florales mediada por los robadores de nctar.
Dispersin de las semillas

La dispersin de las disporas constituye un importante estado de transicin en el ciclo de vida de las plantas con semilla. Hasta el momento, varios experimentos de reintroduccin han revelado que especies de distribucin restringida pueden ocupar potencialmente reas mas extensas (e.g., Mnzbergov y Herben 2004). Sin embargo, en muchos casos, su baja fecundidad y/o su reducida capacidad para la dispersin de sus semillas conducen a una distribucin espacial agregada dentro de la poblacin y rea de distribucin (e.g., Lavergne et al. 2004). Este estudio evalu los mecanismos de dispersin de Polygala vayredae analizando el funcionamiento de sus sndromes de dispersin (anemocoria y mirmecocoria, Fig. 3), el espectro de dispersores y su variabilidad espacio-temporal, su comportamiento y capacidad de dispersin y el papel del elaiosoma en la atraccin de las hormigas y en la germinacin de las semillas. La dispersin de las disporas se inicia cuando (1) la cpsula o la semilla caen debajo de la planta madre (barocoria) o (2) cuando las semillas son directamente recolectadas por hormigas en las mismas cpsulas (mirmecocoria, Fig. 3B). La adaptacin funcional de las cpsulas aladas para la anemocoria se encuentra reducida, limitando la posibilidad de dispersin a largas distancias, siendo la planta esencialmente mirmeccora. Un conjunto de hormigas diverso fue observado interaccionando con las semilla de P. vayredae, y se mostr que el elaiosoma desempea un papel fundamental en su atraccin. Considerando la capacidad de las hormigas para manipular la semilla y las distancias de dispersin, se identificaron distintos grupos funcionales de hormigas. Desde el punto de vista de la planta, la mayora de las hormigas presentan una interaccin de dispersin positiva con las semillas, pero tambin se observaron interacciones neutras y negativas. En general, las distancias de dispersin son limitadas y mayoritariamente determinadas
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por la dimensin de la hormiga. La frecuencia de interaccin y el espectro de los grupos funcionales de hormigas varo significativamente en el contexto espacio-temporal y podra estar involucrado en la seleccin direccional o disruptiva en las caractersticas de las semillas. En general se observaron tasas bajas de depredacin de semillas y la tasa de germinacin entre semillas con y sin elaiosoma fue similar. La capacidad de esta planta para producir nuevas ramas a partir de caules subterrneos junto con un mecanismo que promueve la dispersin de semillas dentro de la poblacin podran ser algunos de los factores involucrados en la actual densidad y distribucin localizada de P. vayredae.
Figura 3. A. Fruto de Polygala vayredae (cpsula alada con 2 semillas con elaiosoma); B. Formica gagates removiendo una semilla del fruto de P. vayredae.
En resumen, los resultados revelaron que (1) P. vayredae depende estrictamente de vectores de polinizacin para producir semillas, (2) sus caractersticas florales limitan el conjunto de polinizadores eficientes, (3) su longevidad floral favorece la transferencia de polen, pero presenta costes reproductivos significativos sobre el xito femenino, (4) la presentacin secundaria de polen presenta costes reproductivos sobre el xito de las componentes masculina y femenina, (5) las flores de P. vayredae son visitadas por un conjunto de insectos diverso, de los cuales solo cuatro especies se comportan como polinizadores eficientes, (6) los polinizadores eficientes son frecuentemente escasos y variables en el tiempo y espacio, (7) los visitantes ineficientes ejercen un efecto negativo sobre el comportamiento de los polinizadores eficientes y, consecuentemente, sobre el xito reproductor masculino y femenino de la planta, (8) la dispersin de los frutos alados a largas distancias se encuentra muy limitada, y finalmente, (9) la dispersin es mayoritariamente efectuada por hormigas que dispersan las semillas a distancias reducidas, con el conjunto de actores variando enormemente entre poblaciones y aos de estudio. A la vista de estas observaciones podemos concluir que P. vayredae presenta los siguientes problemas reproductivos: limitacin de polen/polinizadores y limitada distancia de dispersin de sus diasporas. Los programas futuros de conservacin que consideren estos puntos, conservando la fauna polinizadora y dispersora del rea y protegiendo las interacciones planta-animal, promovern el mantenimiento de las poblaciones actuales y, consecuentemente, la conservacin de esta especie.
Referencias
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Publicaciones resultantes de la tesis: Castro S., Loureiro, J., Rodriguez, E., Silveira, P., Navarro, L., Santos, C. 2007. Evaluation of polysomaty and estimation of genome size in Polygala vayredae and P. calcarea using flow cytometry. Plant Science 172:1131-1137. Castro, S., Silveira, P., Navarro, L. 2008. Consequences of nectar robbing in the fitness of a threatened plant species. Plant Ecology 199:201208. Castro, S., Silveira, P., Navarro, L. 2008. Effect of pollination on floral longevity and costs of delaying fertilization in the outcrossing Polygala vayredae Costa (Polygalaceae). Annals of Botany 102:10431048. Castro, S., Silveira, P., Navarro, L. 2008. How does secondary pollen presentation affect the fitness of Polygala vayredae (Polygalaceae)? American Journal of Botany. 95:706712. Castro, S., Silveira, P., Navarro, L. 2008. How flower biology and breeding system affect the reproductive success of the narrow endemic Polygala vayredae Costa (Polygalaceae)?. Botanical Journal of the Linnean Society 157:6781. Castro, S.; Silveira, P.; Navarro, L. 2009. Floral traits variation, legitimate pollination, and nectar robbing in Polygala vayredae (Polygalaceae). Ecological Research 24:4755. Castro, S.; Silva, S.; Stanescu, I.; Silveira, P.; Navarro, L. 2009, (en prensa). Pistil anatomy and pollen tube development in Polygala vayredae Costa (Polygalaceae). Plant Biology doi.:10.1111/j.1438-8677.2008.00126.x.
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=583 NOTAS
En memoria del Profesor Bazzaz

T. Sebasti 1,2
(1) rea de Ecologa Vegetal y Botnica Forestal, Centre Tecnolgic Forestal de Catalunya, Pujada del Seminari s/n, 25280 Solsona, Espaa. (2) Escuela Tcnica Superior de Ingeniera Agraria, Universitat de Lleida, Av. Rovira Roure 191, 25198 Lleida, Espaa
Sebast, T. (2009). En memoria del Profesor Bazzaz. Ecosistemas 18(1):85-86
Se cumple ahora un ao de la desaparicin de Fakhri A. Bazzaz, eclogo eminente pionero en los estudios sobre el efecto del cambio climtico y otras perturbaciones en los ecosistemas terrestres. Profesor en la Universidad de Illinois entre 1977 y 1984, donde tambin realiz su master y el doctorado, fue despus profesor en la prestigiosa universidad de Harvard. El profesor Bazzaz anticip la importancia de la acumulacin de los gases invernadero sobre la biota natural terrestre, desarrollando estudios precursores, relativos a los efectos del dixido de carbono sobre organismos y ecosistemas terrestres. Consecuencia natural de sus numerosos y famosos estudios sobre las perturbaciones, los trabajos en los que mostraba cmo los efectos del dixido de carbono elevado afectan a los ecosistemas fueron publicados a partir de los aos ochenta, convirtindole en uno de los primeros cientficos en entender cmo las actividades humanas estaban alterando la integridad y funcionalidad del paisaje natural. En este sentido, Bazzaz declar ante el congreso de los Estados Unidos y mantuvo conversaciones inspiradoras con el despus nombrado premio Nbel, y entonces vicepresidente de los Estados Unidos, Al Gore. Su poder visionario se basaba en los numerosos y rigurosos estudios realizados en su laboratorio, y en la utilizacin de numerosas tcnicas experimentales, al tiempo que combinaba diversas disciplinas biolgicas puestas al servicio de la ecologa. Estos estudios se plasmaron en una produccin de ms de 300 artculos cientficos, 18 captulos de libro y 6 libros. Incansable viajero y activo participante en numerosas reuniones cientficas en todo el mundo, Bazzaz visit Espaa por primera vez a finales de los 90. En esta primera visita imparti un curso organizado por su postdoctoranda M Teresa Sebasti de la Universidad de Lleida y el Centro Tecnolgico Forestal de Catalua. As inici un periplo que le llev a universidades y otras instituciones cientficas en Catalua, Valencia, Andaluca, Castilla, Madrid y Navarra, siendo acogido en todas partes con amabilidad y respeto por los diversos investigadores. Este primer viaje dej una huella profunda en la memoria del profesor Bazzaz, tanto a nivel personal como cientfico.
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II Reunin del grupo de trabajo de ecologa espacial de la AEET

M. de la Cruz Rot 1 , F.T. Maestre 2
(1) Departamento de Biologa Vegetal, E.U.I.T. Agrcola. Universidad Politcnica de Madrid. Ciudad Universitaria, 28040 Madrid, Espaa. (2) rea de Biodiversidad y Conservacin, Departamento de Biologa y Geologa, Escuela Superior de Ciencias Experimentales y Tecnologa, Universidad Rey Juan Carlos, C/ Tulipn s/n, 28933 Mstoles, Madrid, Espaa.
de la Cruz, M., Maestre, F.T. (2009). II Reunin del grupo de trabajo de ecologa espacial de la AEET. Ecosistemas 18(1):88-90.
Bajo el lema Anlisis Espacial en Ecologa: Mtodos y Aplicaciones, se celebr entre los das 24 y 26 de septiembre de 2008 en la Escuela Universitaria de Ingeniera Tcnica Agrcola de la Universidad Politcnica de Madrid la segunda reunin de trabajo del Grupo de Ecologa Espacial de la AEET (ECESPA), organizada por los que esto escriben en colaboracin con miembros de ECESPA y la Asociacin Espaola de Ecologa Terrestre (AEET). Esta reunin congreg a ms de 60 estudiantes, investigadores, profesores de universidad y tcnicos de la administracin llegados de toda la geografa espaola. Al igual que en la reunin anterior, celebrada en 2006, las sesiones incluyeron ponencias invitadas y comunicaciones de los asistentes, tanto orales como psteres. En total se presentaron cuatro ponencias invitadas, dieciocho comunicaciones orales cortas y trece psteres (Fig. 1).
Figura 1. Vista de los asistentes a la reunin de trabajo.
La reunin se inici con dos talleres prcticos de 4 horas, uno sobre anlisis de patrones de puntos en entorno R (impartido por Marcelino de la Cruz) y otro sobre anlisis SADIE (impartido por Fernando Maestre). Los talleres se repitieron dos veces durante el primer da de la reunin, de forma que ambos pudieron ser seguidos por los 40 asistentes que formalizaron su inscripcin en primer lugar.
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En la primera ponencia invitada, Pedro Jordano, de la Estacin Biolgica de Doana, ofreci a los asistentes nuevas perspectivas en el estudio de las interacciones planta-animal. Pedro mostr cmo el empleo de tcnicas analticas novedosas, como los marcadores moleculares hipervariables, junto con el empleo de nuevas herramientas tecnolgicas (ordenadores de altas prestaciones) permiten acercarse a problemas ecolgicos clsicos (dinmica poblacional, dinmica metapoblacional, estructura gentica de las poblaciones) con un grado de detalle impensable hace unos aos. En su ponencia, Thorsten Wiegand, del Helmholtz Zentrum fr Unweltforschung, expuso el uso de algunas tcnicas recientes en el anlisis de patrones de puntos. Utilizando distintos ejemplos muy ilustrativos, Thorsten mostr como ir ms all del tradicional modelo nulo de aleatoriedad espacial completa ('CSR') ajustando modelos espaciales con un fuerte significado biolgico (procesos heterogneos, procesos doblemente agrupados, especies 'repulsoras' y 'atractoras' de diversidad). En la tercera ponencia invitada, Luis Santamara, del IMEDEA (CSIC), present un marco de estudio para las distancias y patrones espaciales de dispersin endozocora. Apoyndose en diversos casos de estudio, Luis demostr cmo la interaccin entre el dominio vital (home range), el movimiento (velocidad y direccin) y el tiempo de retencin de las semillas en el tracto digestivo de los dispersores define un gradiente de situaciones que condiciona tanto la forma de estudio como el modelado del funcionamiento de la dispersin. En su ponencia, Vicente Rozas, del CINAM de Galicia, present los resultados de un estudio sobre la evolucin del patrn espacial en cuatro parcelas de bosque caducifolio a lo largo de diez aos. A partir de los resultados de su estudio, Vicente mostr que la contextualizacin temporal y la cuantificacin de parmetros de los procesos ecolgicos potencialmente explicativos son tan importantes como la eleccin de las tcnicas estadsticas apropiadas para la descripcin de los patrones espaciales. Las distintas comunicaciones orales y psteres (Fig. 2) trataron una gran variedad de temas y ambientes en los que el espacio jugaba un papel importante en los diferentes niveles de organizacin, pasando por ejemplo desde el estudio del patrn espacial de mortalidad de plntulas, hasta el anlisis de los efectos del vecindario ecolgico en la interaccin planta-frugvoro o el efecto del patrn espacial de la vegetacin en la desertificacin del ecosistema.
Figura 2. Vista de una de las sesiones de psteres.
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Uno de los alicientes de esta reunin fue la presentacin virtual, por parte de Pedro Jordano, Fernando Valladares y Fernando Maestre, del libro 'Introduccin al Anlisis Espacial de Datos en Ecologa y Ciencias Ambientales' que, afortunadamente ya en las libreras, surgi como consecuencia de la I reunin de trabajo de ECESPA (Fig. 3). El libro est teniendo muy buena acogida y esperamos que el libro que estamos empezando a preparar sobre la II reunin de ECESPA sea igual de exitoso.
Figura 3. Presentacin del libro 'Introduccin al Anlisis Espacial de Datos en Ecologa y Ciencias Ambientales'.
Desde ECESPA esperamos que las distintas actividades que se vayan proponiendo tengan tan buena acogida como las desarrolladas hasta ahora, y que todo aquel interesado proponga actividades que sirvan para contribuir al desarrollo de la utilizacin y anlisis de datos ecolgicos espacialmente explcitos.
Agradecimientos
Agradecemos a la Escuela Universitaria de Ingeniera Tcnica Agrcola de la UPM, a la AEET y al proyecto REMEDINAL (S0505/AMB/0335), financiado por la Comunidad de Madrid, por apoyar financiera y logsticamente esta reunin de trabajo, as como a todos los ponentes invitados, autores de comunicaciones orales y asistentes por su participacin y el inters mostrado. Los resmenes de las distintas ponencias invitadas, comunicaciones orales y psteres pueden descargarse en la pgina web de ECESPA (www.ecologiaespacial.es).
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Efectos del cambio climtico en la vegetacin mediterrnea. Comentarios sobre un simposio de WCRP y Diversitas en Valencia
A. Vilagrosa 1 , M.J. Estrella 2
(1) Fundacin CEAM, Departamento de Ecologa, Universidad de Alicante. Apartado de correos 99, 03080 Alicante. Espaa. (2) Departamento de Geografa, Universidad de Valencia, Avda. Blasco Ibaez 28, 46010 Valencia. Espaa.
Vilagrosa, A., Estrella, M.J. (2009). Efectos del cambio climtico en la vegetacin mediterrnea. Comentarios sobre un simposio de WCRP y Diversitas en Valencia. Ecosistemas 18(1):90-91.
El pasado 27 y 28 de Noviembre del 2008 se celebr en Valencia el seminario: Predicciones de Cambio Climtico y Vegetacin organizado por los comits espaoles WCRP (World Climate Research Programme) y Diversitas. El seminario reuni a un amplio espectro de especialistas dedicados a la investigacin sobre las consecuencias del calentamiento global. Se presentaron un total de 9 comunicaciones impartidas por expertos nacionales e internacionales. Uno de los principales objetivos del seminario fue el de ser un foro y punto de encuentro entre profesionales, especialistas, jvenes investigadores y cientficos en general interesados en diversos aspectos del cambio climtico con especial nfasis en el funcionamiento de los ecosistemas mediterrneos. Las comunicaciones fueron muy variadas abarcando desde temticas relacionadas con el cambio de temperatura experimentado por el planeta en los ltimos 100 aos hasta aspectos tan concretos como fisiologa de plantas en un contexto de cambio climtico. Entre las comunicaciones podemos destacar la conferencia inagural, Global temperature change over the instrumental period in the context of the last 1000 years, impartida por el Dr. Phil Jones que expuso los principales resultados en cuanto al incremento de temperatura que se est experimentando y los principales problemas encontrados y soluciones dadas en relacin con la homogeneidad de los datos con los que ha realizado sus investigaciones. Se trat de una charla muy metodolgica planteando ventajas e inconvenientes, y alternativas, sobre las diferentes variables que pueden usarse en este tipo de estudios. Las conferencias del primer da estuvieron relacionadas con modelos de vegetacin y suelo, modelos regionales de cambio climtico, manipulaciones de la precipitacin en ecosistemas semiridos e interacciones entre vegetacin, erosin y desertificacin impartidas por conocidos especialistas como M.A. Gaertner (U. Castilla-La Mancha), F.I. Pugnaire (EEZA, CSIC), F. Lpez Bermdez (U. Murcia) y J.M. Gutirrez-Llorente (U. Cantabria). Durante el segundo da se impartieron conferencias relacionadas con diversos aspectos de la vegetacin y el cambio climtico como la impartida por A. Mestre de la AEMET Impacto del Cambio Climtico sobre los ecosistemas forestales, Respuestas de las comunidades vegetales al cambio climtico. El papel de episodios extremos por F. Lloret (UB-CREAF) o Fisiologa de las plantas en un contexto de cambio climtico impartida por M. Ribas (IMEDEA, CSIC). Una interesante conferencia sobre patrones espaciales de precipitacin en el Mediterrneo fue impartida por J. Martn-Vide (U. Barcelona) con el ttulo Subtropicalidad y variacin pluviomtrica en el Mediterrneo. Para finalizar, simplemente nos gustara comentar el alto grado de satisfaccin del pblico asistente, que se puso de manifiesto por los comentarios que se escuchaban a la finalizacin del seminario, y el inters de las reuniones de este tipo, muy focalizadas, que esperamos se vayan incrementando en nuestro sistema cientfico.
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Figura 1. Ciudad de las Artes y las Ciencias de Valencia en cuyas instalaciones se realiz el seminario.
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=579 RESEAS BIBLIOGRFICAS
"Introduccin al anlisis espacial de datos en ecologa y ciencias ambientales: Mtodos y Aplicaciones", de Fernando T. Maestre, Adrin Escudero y Andreu Bonet, 2008, ISBN:978-84-9849-308-5, 849 pp., Dykinson S.L., Madrid, Espaa.
T. Wiegand 1 , I. Martnez Cano 1
(1) UFZ, Helmholtz Centre for Environmental Research, Department of Ecological Modelling, Permoserstr. 15, D-04318 Leipzig, Alemania.
Wiegand, T., Martnez Cano, I. (2009). Resea bibliogrfica del libro "Introduccin al Anlisis Espacial de Datos en Ecologa y Ciencias Ambientales: Mtodos y Aplicaciones.", de Fernando T. Maestre, Adrin Escudero y Andreu Bonet. Ecosistemas 18(1):92-94.
Esta obra monumental, que pesa 1.85 Kg., es sin duda la compilacin ms completa de tcnicas y ejemplos de anlisis espacial en Ecologa y Ciencias Ambientales jams publicada en la literatura impresa en castellano. Hay que agradecer a los editores su trabajo incansable, que finalmente ha resultado en este maravilloso volumen de gran utilidad, que puede servir como introduccin al mundo de la Ecologa Espacial tanto a estudiantes como a profesores, investigadores o profesionales interesados, as como manual de referencia para los ya familiarizados con esta importante disciplina. La historia de este libro est estrechamente relacionada con el Grupo de Trabajo de Ecologa Espacial (ECESPA; www.ecologiaespacial.es), grupo constituido en 2006 dentro de la Asociacin Espaola de Ecologa Terrestre (AEET; www.aeet.org) con el objetivo de fomentar el contacto e intercambio de conocimientos entre investigadores interesados en tcnicas de Ecologa Espacial. El precursor de estos 1.85 Kg. fue un monogrfico publicado en la revista Ecosistemas (nmero 2006/3) con diez contribuciones conceptuales y metodolgicas. La repercusin y acogida de este monogrfico hizo evidente la necesidad de un volumen an ms grande que presentara de forma detallada las principales herramientas y conceptos del anlisis espacial en Ecologa y disciplinas afines. Como indican Fernando Maestre y Adrin Escudero en su introduccin, el libro nace con la vocacin de contribuir a llenar este hueco. Pero qu hace de la Ecologa Espacial algo tan importante como para merecer llenar 1.85 Kg. de papel cuando nadie hablaba de ella hace 30 aos? Aunque la importancia de las relaciones espaciales en Ecologa fue reconocida desde el propio nacimiento de la disciplina, el espacio no fue considerado de forma explcita, salvo por unos pocos pioneros, hasta la mitad de la dcada de los 80. Los experimentos de campo trataban de eliminar la contaminacin espacial mediante tcnicas de aleatorizacin y diseos en bloques. En los estudios observacionales, se seleccionaban reas que se perciban como espacialmente homogneas para tomar las muestras, de tal manera que las comparaciones entre sitios permitieran contrastar escenarios ecolgicos idealizados, reduciendo en la medida de lo posible la variabilidad derivada de la heterogeneidad espacial. Pese a que estos aos estuvieron marcados por teoras tan influyentes como la Biogeografa de Islas, basadas fundamentalmente en fenmenos espaciales, la formulacin de las mismas era implcita en lo que respecta al tratamiento de las relaciones espaciales.
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Durante la dcada de los 80, una serie de factores favorecieron la generalizacin del tratamiento explcito de las relaciones espaciales por parte de los eclogos. En primer lugar, se generaliz el uso de imgenes de satlite y fotografa area, lo que permiti descubrir gran cantidad de patrones ecolgicos ignorados hasta entonces. A la vez, los ordenadores personales, cada vez ms potentes, se integraron como herramienta de investigacin en Ecologa, permitiendo la visualizacin, modelado y anlisis de relaciones espaciales complejas. Finalmente, la Ecologa como disciplina haba alcanzado un punto en el que la incorporacin del espacio era necesaria para poder continuar avanzando. Incluir la componente espacial en los estudios ecolgicos impuls a su vez el desarrollo de las herramientas necesarias para caracterizar y analizar las relaciones espaciales. Muchas de estas tcnicas aparecen reunidas por primera vez en este libro. La ltima dcada de investigacin en Ecologa y disciplinas afines ha supuesto un aumento importante de los estudios que incluyen un tratamiento especfico de la dimensin espacial, haciendo de la Ecologa Espacial una de las reas ms activas y dinmicas dentro de la Ecologa contempornea. El objetivo actual consiste en relacionar y unificar la heterogeneidad espacial y la escala a la que se manifiestan distintos procesos y, a la vez, a estudiar la estructuracin espacial de las poblaciones y comunidades. Por tanto, una de las mayores dificultades de la Ecologa Espacial radica en su carcter interdisciplinar, lo que muchas veces obstaculiza la difusin y el intercambio de mtodos entre disciplinas y dificulta la elaboracin de material didctico. Esto se ve magnificado al considerar la creciente inclusin de informacin relacionada con el ambiente fsico y socioeconmico en los estudios con carcter ms aplicado. Por tanto, alguien que se enfrente por primera vez a esta disciplina puede verse fcilmente abrumado por la gran variedad en contenidos y orgenes de la informacin disponible. En la mayora de los casos, las referencias de carcter general no se han desarrollado pensando en una audiencia que se ajuste a la formacin o experiencia de un eclogo. Tal es el caso de la principal obra de referencia en anlisis espacial escrita por Noel Cressie (1993), destinada a estadsticos y cuyo volumen y densidad de conocimientos pueden fcilmente desanimar a alguien que da sus primeros pasos en este vasto campo. No obstante, una de las grandes aportaciones de la obra de N. Cressie fue sistematizar y dividir la Estadstica Espacial en tres grandes ramas: (i) el anlisis de datos continuos, que se identifica con la geoestadstica (Isaaks y Srivastava, 1989; Diggle y Ribeiro, 2007); (ii) el anlisis de variables promediadas para un rea determinada, (Haining, 2003; Banerjee et al., 2004); y (iii) el anlisis de entes discretos y puntuales (Diggle, 2003; Illian et al., 2008). Adems de esta especializacin en distintas ramas, otra de las grandes dificultades existentes es la de encontrar un software de confianza para realizar estos anlisis o adquirir la informacin necesaria, aunque el programa de uso pblico R representa una opcin gratuita, actualizada y fiable (Bivand et al., 2008). De esta manera, cualquiera que trate de enfrentarse por primera vez al anlisis de datos espaciales, se ve enfrentado tambin a un maremgnum de literatura marcado por una impronta disciplinar importante y a la existencia de una gran variedad de herramientas. En esta situacin y gracias al esfuerzo de los miembros del ECESPA, surge el ambicioso proyecto de reunir en un formato accesible y asequible la informacin necesaria para comenzar a andar por este complejo mundo del anlisis de datos espaciales. Tal fin exigi reunir a ms de medio centenar de investigadores procedentes de distintos centros de investigacin y universidades de Espaa y el extranjero. La obra resultante, de ms de 800 pginas y 1.85 Kg., consta de 27 captulos organizados en dos grandes secciones: i) conceptos y tcnicas para el anlisis espacial de datos ecolgicos y ii) aplicaciones prcticas. La primera parte del libro contiene 14 captulos de introduccin general que cubren la vasta variedad de tcnicas y conocimientos necesarios para el anlisis de datos cuantitativos, categricos y de puntos. Estos captulos contienen, entre otras, introducciones al concepto de escala, anlisis de patrones de puntos, ndices de distancia (SADIE), mtodos geoestadsticos, anlisis multivariado con estructura espacial, modelos de distribucin espacial, y modelos espacialmente explcitos. La segunda parte del libro presenta casos prcticos de aplicacin de las tcnicas introducidas en la primera parte, incluyendo en gran medida investigaciones recientes o incluso an en proceso de publicacin. Pese a que comnmente el reto de componer una obra homognea en estructura, profundidad y enfoque a lo largo de los distintos captulos suele verse mermada en tales situaciones, es mrito de los editores F.T. Maestre, A. Escudero y A. Bonet haber conseguido elaborar un volumen consistente y que ha logrado sin lugar a dudas el difcil objetivo que se haban planteado. Debido a este esfuerzo, el libro posee un carcter eminentemente aplicado y pedaggico y al mismo tiempo mantiene una estructura comn en los distintos captulos, incluyendo ejemplos con datos ecolgicos reales, una revisin de software disponible y una revisin de pginas Web de inters. Es notorio destacar que el libro incluye adems un CD con datos y algunos ejemplos acompaados de rutinas de programacin en R y SAS. El libro parte de una introduccin general por F.T. Maestre y A. Escudero dedicada a los problemas que plantea el anlisis de datos espaciales y los distintos tipos de datos espaciales. A continuacin, D. Garca (Captulo 2) profundiza en el importante concepto de la escala espacial como eje central y unificador de los distintos tipos de anlisis, para seguir con el tratamiento de los distintos tipos de datos. M. de la Cruz Rot (Captulo 3) presenta una excelente introduccin a los desarrollos ms recientes del anlisis de patrones de puntos, que constituyen una de las principales fuentes de informacin de datos
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espaciales y una rama muy dinmica dentro del anlisis espacial. El capitulo 4, de F.T. Maestre y J.L. Quero, est enfocado a los datos en forma de recuentos (p. ej. nmero de insectos por planta, o de semillas por muestra de suelo) y su anlisis con ndices basados en distancia (SADIE). El anlisis de la correlacin espacial en datos continuos y agregados por reas es expuesto por J.M. Iriondo y colaboradores (Captulo 5); mientras que las aplicaciones basadas en la Geoestadstica (anlisis de variables continuas en el espacio) son presentadas por A. Gallardo y F.T. Maestre (Captulo 6). A continuacin, F. Rodrguez y colaboradores presentan una introduccin a los modelos ocultos de Markov (Captulo 7), que permiten analizar aspectos de la dinmica temporal de datos espaciales. A. Lpez de Luzuriaga y J.M. Olano exponen seguidamente la utilizacin de mtodos multivariables en el anlisis espacial de datos ecolgicos (Captulo 8). En el Captulo 9, J.J. Camarero y M.J. Fortin revisan los conceptos y las tcnicas asociados a la deteccin cuantitativa de fronteras ecolgicas y ecotonos en ecosistemas terrestres. Este es un aspecto olvidado en la mayora de tratados de carcter general, pero que posee un gran inters en Ecologa. R. Daz-Sierra y M.A. Zavala presentan una revisin sobre los modelos dinmicos y espacialmente explcitos (Captulo 10), con nfasis en los modelos matemticos y mecanicistas. A continuacin, I. Martnez y colaboradores presentan una introduccin al importante campo de los modelos empricos predictivos de distribucin (Captulo 11). L. Santamara y colaboradores (Captulo 12) introducen los modelos mecanicistas de dispersin de semillas, que consideran simultneamente plantas y animales. El siguiente captulo por J. Pea y colaboradores trata sin duda de uno de los aspectos ms importantes y que representa la herramienta bsica para la adquisicin y preparacin de datos espaciales, es decir, los Sistemas de Informacin Geogrfica. Los captulos tericos concluyen con la excelente revisin por R. Zas sobre la autocorrelacin espacial y el diseo y anlisis de experimentos, que destaca tanto por su contenido como por su calidad y claridad en la exposicin. El libro se completa con una seccin final de aplicaciones prcticas que abarcan investigaciones en un rango amplio de sistemas ecolgicos y niveles trficos. Estos estudios permiten al lector profundizar e identificar las distintas tcnicas presentadas en la parte terica y muestran cmo el empleo de las mismas puede ayudar a dar respuesta a las grandes cuestiones dominantes en la Ecologa actual. Esta obra supone por tanto una referencia de gran valor para cualquiera interesado en la Ecologa Espacial, especialmente para aquellos que estn iniciando una carrera de investigacin en Ecologa o pretendan ampliar la calidad y enfoque de sus estudios. Se aade adems la posibilidad de descargar el libro completo a travs de la pgina Web del ECESPA (www.ecologiaespacial.es), lo que permitir explorarlo desde cualquier parte sin tener que llevar siempre encima los 1.85 Kg. Sin duda alguna, el valor pedaggico y como manual de referencia de este volumen le aseguran tener un rincn reservado en el escritorio de cualquier investigador interesado en la Ecologa Espacial.
Referencias
Banerjee, S., Carlin, B.P., Gelfand, A.E. 2004. Hierarchical modeling and analysis for spatial data. Monographs on statistics and applied probability, vol. 101. Chapman and Hall/CRC, Boca Ratn, Florida, USA. Bivand, R.S., Pebesma, E.J., Gmez-Rubio, V. 2008. Applied spatial data analysis with R. Springer, New York, USA. Cressie, N.A.C. 1993. Statistics for spatial data. Wiley series in probability and mathematical statistics. Applied probability and statistics section. John Wiley and Sons, Inc. New York, USA. Diggle, P.J. 2003. Statistical analysis of spatial point patterns, 2nd ed. Arnold; London. UK. Diggle, P.J., Ribeiro, P.J.Jr. 2007. Model-based geostatistics. Springer, New York, USA. Haining, R. 2003. Spatial data analysis: Theory and practice. Cambridge University Press, UK. Illian, J., Penttinen, A., Stoyan, H., Stoyan, D. 2008. Statistical analysis and modelling of spatial point patterns. John Wiley and Sons, Chichester, UK. Isaaks, E.H., Srivastava, R.M. 1989. Introduction to applied goestatistics, Oxford Universtiy Press, New York, USA.
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http://www.revistaecosistemas.net/articulo.asp?Id=581 RESEAS BIBLIOGRFICAS
"Invasiones biolgicas", de Montserrat Vil et al. 2008. ISBN 978-84-00-08663-3, 215 pp., CSIC, Madrid, Espaa.
G.O. Carvallo
(1) Departamento de Ciencias Ecolgicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. C/ Casilla 653, Santiago de Chile, Chile.
Carvallo, G.O. (2009). Resea bibliogrfica del libro "Invasiones biolgicas", de Montserrat Vil et al. Ecosistemas 18(1):95-96.
Especies exticas e invasoras: Tiempo de sntesis:

Aunque siempre han estado ah, poca era la importancia que se les daba a las especies no-nativas en los estudios ecolgicos. Consideradas casi como sistemas secundarios a la hora de formular teoras o contrastar hiptesis, se les relacionaba con estudios agro-ecolgicos, forestales, urbanos o de plagas. Slo en las dcadas recientes la comunidad cientfica ha puesto nfasis en estudiar este tipo de especies, principalmente desde que comenzaron a intuirse los efectos deletreos que tienen sobre las biotas locales. Para las especies exticas, pasar de ser sospechosas de dao a ser sindicadas como una de las ms graves amenazas a la biodiversidad hubo un slo paso. Y desde ese estatus han seducido a hordas de eclogos quienes las han incorporado a las temticas clsicas del rea, generando una revolucin que slo puede ser comparable al advenimiento de las tcnicas de gentica molecular a mediados de la dcada de los ochenta. Pocas veces aparecen tpicos con un impacto tan profundo en ciencia que adems tienen una aplicacin directa en problemas sociales y de higiene pblica. La creciente importancia de este tema se refleja en el aumento de libros, revistas especializadas, congresos y simposios que han surgido en los ltimos aos (Richardson and Pysek, 2008). Pero esta historia no es nueva. No pudo ser otro ms que el visionario Charles Darwin (1859) quien puso atencin a las especies domesticadas y que se haban naturalizado en algunas regiones de Europa. Darwin propuso las primeras hiptesis respecto a las especies exticas, postulando un principio de semejanza filogentica con las especies residentes. Probablemente la grandeza del resto del trabajo de Darwin eclips su exploracin en el tema de las especies exticas, tpico que se mantuvo casi en el completo anonimato durante el resto del siglo XX. Charles Elton (1958), a quien podra considerarse como el padre del estudio de las Bio-Invasiones, ha realizado las contribuciones ms importantes a la disciplina, centrndose en aspectos tericos y empricos. Fue en la dcada de los noventa, en la que temticas como conservacin y cambio climtico a escala global adquirieron gran importancia en la agenda de los investigadores, cuando comenz a requerirse un conocimiento profundo de las especies exticas, de los sitios ms vulnerados, de los mecanismos de invasin y la necesidad de evaluar su impacto sobre la biodiversidad local. Esto gener el asentamiento definitivo de este tpico como disciplina. En este contexto, el libro aqu comentado es un aporte formidable a la comunidad hispano-parlante que busca este tipo de informacin. El libro, que consta de dos partes, est estructurado de forma muy coherente. En su primera parte los captulos son una revisin al estado del arte de esta disciplina, incorporando una recopilacin de conceptos (Captulo 1), algo que se agradece cuando existen tantas formas de referirse al mismo problema. Sin duda hay una contribucin significativa con el hecho de ordenar y diferenciar las diferentes definiciones que se les han dado a las especies forneas, por lo que este captulo se puede considerar una buena sntesis de los muchos criterios utilizados. Para determinar si una especie es invasora se requiere de un conocimiento preciso de su auto-ecologa, por lo que muchas veces los conceptos extica/invasora son utilizados como sinnimos, generando confusin y una inadecuada aproximacin para quienes son principiantes en el tema.
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De las misma forma, la amplia diversidad de hiptesis que explican el establecimiento de especies exticas, hiptesis que muchas veces no son excluyentes entre si, se basan en un manejo adecuado de la teora ecolgica. Los distintos modelos conceptuales incluidos en la primera parte del libro (Captulos 6 al 9) presentan con suficiencia y claridad el marco terico que es necesario manejar para relacionarse con el tema. Si bien estos captulos no contrastan la mayora de las hiptesis con resultados empricos, sus autores son investigadores que estn publicando constantemente en las revistas ms importantes del tema, por lo que probablemente, para este libro, sus coordinadores consideraron preferible dar nfasis a la difusin de dichas hiptesis ms que constituir revisiones acadmicas o tcnicas que dificultaran el entendimiento de la teora ecolgica asociada al fenmeno de las bioinvasiones. Un aspecto del libro, que si puede ser criticable, es el hecho de que incluye slo la historia, regiones y ejemplos de bioinvasiones para Espaa. Sin embargo, este sesgo puede ser considerado como una invitacin para que grupos de investigacin de otras latitudes aborden y profundicen en esta lnea, contrastando sus resultados con quienes ya han avanzado en este tipo de investigaciones. El libro, en sus dos partes, finaliza con un anlisis del impacto econmico que tienen las bioinvasiones y cual ha sido la gestin realizada para procurar su erradicacin (Captulos 10 y 16), lo que atraer la atencin de quienes se especializan en materias econmicas, sociales y de planificacin de polticas pblicas y buscan tener mayor informacin de calidad en el tema. Si bien cada captulo de la primera parte podra constituir un libro por si slo, tiene el acierto de entregar una visin sinttica de una temtica amplia. La segunda parte del libro constituye una plyade de casos de estudios, en los que se destaca el especial cuidado de los coordinadores por lograr paridad entre los sistemas de estudio animal y de plantas, as como incluir prcticamente todas las regiones de Espaa. Al igual que en la primera parte del libro, se omiti una profundizacin acadmica de los ejemplos, sin embargo los antecedentes incorporados son suficientes para dar una aproximacin adecuada tanto para un nivel principiante como para el especialista que requiere de una fuente rpida de consulta. Cada caso, as como todo el resto del libro, est excelentemente ilustrado, entregando un atractivo grfico complementario a la informacin abordada. Una revisin rpida de las referencias de los casos de estudios permitir apreciar el nivel de conocimiento que se tiene de cada sistema particular. Algunos sistemas han sido estudiados en profundidad (la hormiga Argentina Linepithema humile, las tortugas del gnero Trachemys, las algas del gnero Caulerpa, los efectos de Carpobrotus en la polinizacin de las especies nativas) perfilndose como ejemplos clsicos de invasiones, que adems tambin afectan varios ecosistemas alrededor del mundo. Otros ejemplos carecen de las referencias adecuadas, lo que puede ser interpretado como un desconocimiento de dichos sistemas o que han sido recientemente abordados, esto afecta de especial forma al conocimiento de las especies exticas residentes en las islas Canarias. De esta forma el libro se constituye tambin en una fuente primaria de informacin, invitando a profundizar en el conocimiento de las especies exticas en algunas regiones de Espaa. Dar una visin general y sinttica de un tema en el que da a da aparecen nuevos antecedentes tericos y empricos sobrepasa las intenciones de cualquier comunidad de expertos. La orientacin que se le ha dado al libro es una contribucin de los autores para cualquier lector que est seriamente interesado en los aspectos concernientes a las especies exticas y de bioinvasiones, lo que junto a la ventaja de ser un material que se encuentra disponible de forma gratuita en internet (http://digital.csic.es/handle/10261/5272) lo convierten en una herramienta que se mantendr vigente por un tiempo prolongado como gua y referencia.
Referencias
Darwin, C. 1859. On the origin of species by means of natural selection or the preservation of favoured races in the struggle for life. 1st ed. John Murray, London, UK. Elton, CS. 1958. The ecology of invasions by animals and plants. Methuen and Co., London, UK Richardson, D.M., Pyek, P. 2008. Fifty years of invasion ecology. The legacy of Charles Elton. Diversity and distributions 14:161-168.
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Ecosistemas - Vol 18 I. Ecología Molecular

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Ecosistemas 18 (1). Enero 2009. http://www.revistaecosistemas.

Ao 18 N 1 / 2009 Enero - Abril

Ecosistemas 18 (1): 1-2. Enero 2009.

Recibido el 2 de febrero de 2009, aceptado el 2 de febrero de 2009.

Jordano. P. Ecologa y genes. (2009). Ecosistemas 18(1):1-2.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1): 3-9. Enero 2009.

Recibido el 4 de diciembre de 2008, aceptado el 8 de enero de 2009.

El tamborileo a menudo desigual de fenotipos y genotipos

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

De Darwin a Mayr y otra vez a Darwin, pasando por los genes

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1): 10-16. Enero 2009.

La huella gentica de la seleccin natural

Recibido el 5 de enero de 2009, aceptado el 27 de enero de 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Detectando la huella gentica de la seleccin natural.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Inferencia funcional y diversidad neutral

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Anlisis genmico para el estudio del efecto de la seleccin

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1): 17-22. Enero 2009.

Recibido el 16 de diciembre de 2008, aceptado el 21 de enero de 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Heredabilidad y evolucin de las comunidades

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Aplicaciones a la conservacin de la biodiversidad

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1): 23-33. Enero 2009.

La gentica, los marcadores moleculares y la conservacin de especies

Recibido el 2 de diciembre de 2008, aceptado el 14 de enero de 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

El papel de la gentica en la conservacin

Filogenias, prioridades de conservacin y factores de extincin

Historia evolutiva, filogeografa y unidades de conservacin

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Estructura gentica, dispersin y unidades de gestin

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Diversidad gentica y endogamia: evaluacin de riesgos

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Herramientas moleculares para la prctica conservacionista

Avances recientes y perspectivas de futuro

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Perspectiva: retos y oportunidades.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1): 34-43. Enero 2009.

Aplicaciones de protemica en ecologa y evolucin

Recibido el 7 de enero de 2009, aceptado el 28 de enero de 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.

Ecosistemas 18 (1). Enero 2009.