PRUEBA DE CATALASA Fundamento La catalasa es una enzima que descompone al perxido de hidrgeno bajo la Frmula 2 H2O2----2 H2O + O2.

De esta manera las bacterias se protegen del efecto txico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azcares en oxgeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. La taxonoma de los cocos Gram positivos. Estos se pueden clasificar, en primera instancia, en cuanto a sus requerimientos atmosfricos. As tenemos los cocos Gram positivos anaerobios estrictos constituidos por los gneros Peptococcus y Peptoestreptococcus. Por otro lado tenemos los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que estn constituidos por la familia Micrococacceae (gneros Staphylococcus, Micrococcus, Planococcus Stomacoccus) y los

gneros Streptococcus Enterococcus.

Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+), con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos (-) de Erysipelothrix (-)

El gnero Staphylococcus es aerobio-anaerobio facultativo, por tanto su crecimiento en tioglicolato ser en toda la extensin del tubo. Requerimientos nutricionales El gnero Staphylococcus es no exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales, por lo tanto crece en medios de cultivo pobres. Excluyendo al gnero Streptococcus y algunos otros la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa. Esta prueba Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es Streptococcus. Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros: Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

Procedimiento de la prueba Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos tcnicas: Mtodo del (recomendado): portaobjetos

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24

horas y colocar sobre portaobjetos limpio de vidrio.

un

contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.

Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos. Mtodo del tubo de ensayo:

Prueba de la Coagulasa se usa para diferenciar el Staphylococcus aureus produce 2 formas de coagualasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa libre). La coagulasa ligada tambin conocida como "factor de Clumping " "factor de Clumping " se puede detectar mediante la realizacin de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de tubo. Prueba de portaobjetos Prueba del portaobjetos se hace conjuntamente con un control negativo para descartar auto aglutinacin. Se ponen 2 gotas de solucin salina en el portaobjetos microscpico rotulado con un nmero de muestra, Test (T) y control (C). Las 2 gotas son emulsionadas con la prueba de organismo mediante el uso de un cable de lazo, cable recto, o un palo de madera. Se pone una gota de plasma (plasma de conejo con anticoagulante (EDTA)1 ) en la gota de solucin salina inoculada correspondiente a la prueba y se mezcla bien con un una varilla de

LA COAGULASA La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos que permite la conversin del fibringeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de Staphylococcus. Un resultado de coagulasa positivo indica que la muestra contiene S.aureus Esta protena tambin es producida por Yersinia pestis.La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama staphylothrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibringeno en fibrina. Esto hace que se coagule la sangre.

Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio

madera. Agitar el portaobjeto con cuidado unos 10 segundos. Si es positivo: Se podr observar aglutinacin macroscpica en el plasma en los 10 segundos mientras que no se observara aglutinamiento en la gota de solucin salina. Si es negativo: aglutinamiento. No se observara

en 1 horas. Si es negativo entonces continuamos la incubacin por unas 18 horas.

subsp. anaerobius, Staphylococcus aureus subsp. Aureus, Staphylococc us delphini, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus lutrae, Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans. Lista de' 'staphylococci coagulasa negativo de relevancia clinica: S.saprophyticus, S.cohnii subsp. cohnii, S.cohnii subs p. urealyticum, S.captitus subsp. cap titus,S.warneri, S.hominis, S.epiderm idis, S.caprae.

NOTA: Si la prueba de la coagulasa de portaobjetos fuera negativa, debera hacerse una prueba de tubo como confirmacin. El aglutinamiento en las dos gotas es un indicativo de auto aglutinacin y por lo tanto debemos descartar la prueba de tubo. Prueba del tubo de ensayo Cogulos formados por la reaccin de la coagulasa en un tubo de ensayo La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcal (por ejemplo, con un coco gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius

Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el suero coagular, dando como resultado un cogulo (a veces el cogulo esta tan desarrollado que el liquido se solidifica completamente). Si sale negativo, el plasma permanece liquido. Un resultado negativo podra indicar que se podra tratar de S. epidermidis pero solo con unas pruebas ms precisas se puede confirmar este hecho, como por Ejemplo el API o mtodos de BBL CRYSTAL. Lista de staphylococci coagulasa positivo: Staphylococcus aureus

PRUEBA ESPORAS

DE

TINCIN

DE

su estudio y observacin son de enorme inters.

Objetivos 1. Estudiar las ensoparas y su disposicin en las las formas distintas vegetativas. 2. Comprobar morfologas. Material necesario -porta objetos bacterianos preparados. -colorantes: a) solucin de verde malaquita (5%) b) solucin de safranina (0,5%) -pinzas de madera -mechero bunsen o alcohol -microscopio o aceite de inmersin. REALIZACIN Se emplearn cultivos con frotis previamente

Fundamento Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin. La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes: 1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas. Las ensoparas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que

en

fase

estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener unos resultados satisfactorios hay

que

seguir

cuidadosamente

las

1.

Preparar los frotis bacterianos con verde malaquita.

Interpretacin de los resultados La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un mismo gnero.

instrucciones.

indicados. 2. Teir

Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min. Nota: evitar que la muestra hierva. Aadir ms colorante si ste evapora; es importante que muestra no se seque. 3. Lavar con abundante agua exceso de colorante. 4. Teir con safranina 1 min. 5. Lavar con abundante agua exceso de colorante. 6. Secar la preparacin. 7. Observar la preparacin al microscopio. Anotar la disposicin y la morfologa de las tres especies del gnero Bacillus. se la el

el

Las tres bacterias empleadas en esta prctica difieren en la disposicin y morfologa de las endosporas. B. sphaericusposee una endospora esfrica con localizacin terminal y deformante de la clula vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de tambor". B. thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la clula vegetativa, lo que provoca un abombamiento caracterstico denominado "en huso". B. subtilis forma una espora cilndrica subterminal no deformante. PRUEBA OXIDASA

Fundamento Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reaccin de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidacin del cito cromo que es reducido por el oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrgeno segn la especie bacteriana. El oxgeno acta por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa slo se encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algn microaerfilo (Vibrio fetus), pero los

Produccin de catalasa, ya que sta degrada el perxido de hidrgeno que se produce como consecuencia de la reduccin del oxgeno y cuya acumulacin es txica. Procedimiento Hacer una suspensin del microorganismo con solucin fisiolgica (inculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.

Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con colonias que provengan de medios de cultivo que contenga hidratos de carbono ni indicadores, por lo que si se la va a realizar se debe incubar los microorganismos en un placa de AS o bien un TSA (tripteina-soya-agar)

anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa. Asmismo, la presencia de oxidasa va ligada a la

Interpretacin

CRECIMIENTO EN ANAEROBIOS

La bsqueda de bacterias anaerobias slo se debe hacer cuando se pueda discernir su papel y tenga inters etiolgico y teraputico. Estos microorganismos son resistentes a aminoglicsidos (carecen de los sistemas necesarios para su penetracin) y monobactmicos y pueden desarrollar resistencia a otros antimicrobianos habitualmente eficaces, particularmente el grupo de Bacteroides fragilis. Suelen presentar alta actividad las asociaciones de beta lactmico/inhibidor de betalactamasa (amoxicilina/cido clavulnico y piperacilina/tazobactam), las carbapenemas (imipenema, meropenema y ertapenema), el metronidazol y el cloranfenicol. La resistencia del grupo de Bacteroides fragilis a la cefoxitina y a la clindamicina es elevada, como lo es de Bacteroides fragilis a la cefoxitina y a la clindamicina es elevada, como lo es an ms a la penicilina, situacin compartida por otros bacilos gramnegativos.

asociada a antimicrobianos toxiinfeccin por C. perfringens.

Toma de muestras

Como las especies encontradas en las diferentes infecciones son, con la excepcin de algunos clostridios, las mismas que se hallan en la micro flora habitual, para que los estudios microbiolgicos tengan valor es necesario que las muestras sean tomadas de forma que la flora normal no las contamine. Por ello que no se deben estudiar muestras nasales, orales, de vas respiratorias bajas recogidas por procedimientos que no impidan su contacto con bacterias de otras localizaciones, cutneas, vaginales, urinarias tomadas por miccin o sondaje o digestivas, salvo para procesos muy concretos, como botulismo, diarrea

En las infecciones abiertas es necesario recurrir a muestras representativas, que deben ser de la parte profunda, tomadas quirrgicamente por aspiracin percutnea o tras la eliminacin de los tejidos necrticos superficiales por curetaje o por aspiracin. En su defecto, se puede tomar la muestra con un hisopo de la base de la lesin. El uso del broncofibroscopio ha mejorado la toma en neumonas (catter telescopado protegido o lavado broncoalveolar) y la puncin transtraqueal ha cado en desuso. Otras muestras respiratorias vlidas son la puncin pulmonar directa y la toracocentesis

Transporte al laboratorio

En el transporte de una muestra para la bsqueda de bacterias anaerobias se debe evitar la presencia de oxgeno, aunque estas pueden sobrevivir varias horas, incluso das, en un medio de transporte adecuado, dependiendo de su naturaleza. En general, en las muestras purulentas pueden Sobrevivir ms tiempo que en los lquidos claros. Para el transporte en anaerobiosis se encuentran disponibles en el mercado tubos, frascos y viales con una atmsfera anaerobia que contienen un medio de transporte reducido y resarzurina como indicador de la presencia de oxgeno (Port-A-Cul, Becton Dickinson). Las jeringas utilizadas en la aspiracin de pus no deben utilizarse como transporte debido al riesgo de pinchazos y la posible expulsin accidental de su contenido; adems, el oxgeno difunde a travs de la estructura de plstico de sus

paredes. Una vez realizada la aspiracin se debe expulsar el posible contenido gaseoso, tapando la aguja con una gasa estril impregnada en alcohol para eliminar el riesgo de aerosoles. A continuacin, se cambia la aguja por otra estril y se inocula el contenido, previa desinfeccin del tapn de goma, en la superficie del agar de un vial de transporte para anaerobios.

Recepcin y procesamiento de las muestras Recepcin.

Las muestras de tejidos y biopsias quirrgicas se remitirn en un frasco estril que se puede introducir en una bolsa de anaerobiosis de plstico transparente y flexible (ver ms adelante sistemas de anaerobiosis). Adems, existen frascos de transporte para muestras de tejido y biopsias que contienen una base de agar y un indicador de anaerobiosis. El tejido se introduce aproximadamente a 5 mm de la base e inmediatamente despus se enrosca el tapn.

Una vez recibida la muestra en el laboratorio se anota la fecha y hora de recepcin y se comprueba que cumple los requisitos para su aceptacin (correcta identificacin, muestra adecuada, condiciones de transporte, etc.). Una informacin ms detallada sobre la recepcin aparece en el Procedimiento 1a de la SEIMC (Recogida, transporte y procesamiento general de las muestras en el laboratorio de microbiologa). Procesamiento.

El procesamiento inicial incluye su preparacin, examen directo e

inoculacin en los medios de cultivo apropiados. Preparacin.

tratando la muestra con calor o alcohol (ver ms adelante en el apartado 11.2). Inoculacin de la muestra

Tras el examen inicial, la muestra se procesa con las mximas precauciones y lo antes posible, siendo aconsejable que no transcurran ms de 15 minutos desde su recepcin. Si es posible, la preparacin se deber hacer en una cmara de anaerobiosis para minimizar su oxigenacin. El material purulento se mezcla bien con la ayuda del agitador Vortex. Las muestras de tejido o de biopsia se homogeneizan, ya sea con un bistur, cortando trozos muy finos hasta obtener una consistencia homognea, o en un mortero estril aadiendo 1 mililitro de caldo. En el caso de que la muestra se haya obtenido con torunda, se exprime en un pequeo volumen de caldo mediante movimientos rotatorios sobre las paredes del tubo y este caldo se procesa como una muestra lquida. Cuando se investiga la presencia de Clostridium se puede realizar un enriquecimiento, que consiste en eliminar todas las formas vegetativas y conservar las esporas

Una vez homogeneizada con la ayuda de una pipeta Pasteur se deposita una gota, si la muestra es purulenta, o 2-3 gotas, si no lo es, en cada uno de los medios de cultivo utilizados, una gota en un portaobjetos para la tincin de Gram y el resto en un medio lquido de enriquecimiento.

Medios de cultivo Para conseguir una recuperacin ptima de bacterias anaerobias es fundamental elegir correctamente los medios de cultivo primarios. La mayora de estas bacterias requieren para su crecimiento vitamina K1 y hemina. Para su aislamiento e identificacin presuntiva se aconseja utilizar una combinacin de medios enriquecidos no selectivos, selectivos y difernciale entre los que se incluyen:

Examen directo Proporciona de forma inmediata informacin semicuantitativa acerca de los microorganismos presentes y un diagnstico presuntivo de la existencia de bacterias anaerobias, lo cual es importante para establecer una terapia inicial, ya que el proceso de aislamiento e identificacin puede demorarse varios das.

- Un medio de agar sangre para anaerobios como agar Brucella o agar Schaedler con un 5% de sangre de carnero, a los que se aaden vitamina K1 (1 g/ml) y hemina (5 g/ml). En estos medios crecen tanto las bacterias anaerobias facultativas como las anaerobias obligadas. - Agar Bacteroides bilis esculina con amicacina (BBE). Es un medio selectivo para Bacteroides del grupo fragilis y Bilophilia spp. Contiene amicacina (100 g/ml) que inhibe la mayora de facultativos, bilis (20%) que con casi exclusividad slo permite el crecimiento de las especies citadas y esculina que al ser hidrolizada en presencia de un indicador (citrato frrico) vira el medio a color negro. Permite una fcil deteccin de las especies de Bacteroides del grupo fragilis al ser esculina positiva. A veces, pueden crecer otras especies, como Fusobacterium mortiferum, Fusobacterium varium, algunas entero bacterias, Pseudnimas aeruginosa, entero cocos, levaduras, etc., aunque se distinguen de los Bacteroides del grupo fragilis por el

tamao de sus colonias, que normalmente es inferior a 1 mm de dimetro. - Agar con alcohol fenil-etlico (PEA) con un 5% de sangre de carnero. El alcohol inhibe el crecimiento de bacilos gramnegativos facultativos, principalmente el crecimiento en velo de las especies de Proteus. Tambin evita el crecimiento en velo de algunas especies de Clostridium comoClostridium septicum, facilitando de este modo su aislamiento. Se aconseja sembrar en este medio las muestras purulentas o cuando sea previsible una infeccin mixta.

- Un agar sangre selectivo, como agar Schaedler con neomicina (75 g/ml) y vancomicina (7,5 g/ml) (SNV) o con kanamicina (75 g/ml) y vancomicina (7,5 g/ml) (SKV) o el Clsico agar Brucella con kanamicina, vancomicina y en este caso sangre lacada (ASLKV). Son medios selectivos para bacilos gramnegativos como el grupo de Bacteroides fragilis y especies de Prevotella. La presencia de neomicina o de kanamicina inhibe a la mayor parte de los aerobios facultativos y la presencia de vancomicina inhibe la mayora de los grampositivos y especies de Porphyromonas. A veces pueden crecer en estos medios levaduras y anaerobios facultativos resistentes a estos aminoglicsidos por lo que siempre debe realizarse una tincin de Gram y un ensayo de aerotolerancia a todos los aislados. - Agar con yema de huevo (AYE). Cuando se sospecha la presencia de clostridios, para detectar la produccin de lipasa y/o lecitinasa.

Un agar selectivo para Clostridium difficile, cuando se investigue la presencia de esta especie, como agar fructosacicloserina-cefoxitina (CCFA) o agar yema de huevo-cicloserina-cefoxitina (CCEY).

antibiticos o a otros factores, o bien cuando las bacterias se encuentran en cantidades muy pequeas.

Sistemas de anaerobiosis.

incubacin

en

Como medio lquido de enriquecimiento o de mantenimiento se recomienda usar caldo de tioglicolato sin indicador, suplementado con vitamina K1(200 l) y hemina (20 l). Este medio se utiliza para recuperar las bacterias anaerobias en caso de que falle la anaerobiosis en la incubacin de los cultivos primarios, haya una inhibicin del crecimiento debido a

Su eleccin viene determinada por el coste, nmero de cultivos y limitaciones de espacio. Los ms comunes son las cmaras, jarras o cajas y bolsas de anaerobiosis. Con independencia del sistema utilizado es importante monitorizar el ambiente anaerobio con una tira indicadora de azul de metileno o de resarzurina, y la temperatura de incubacin.

Existen diferentes modelos de cmaras para anaerobios, en las que se consigue una atmsfera anaerobia mediante una mezcla de gases que contiene 5% de H2, 5-10% de CO2 y 85-90% de N2. Poseen un sistema de intercambio que consiste en un compartimento rgido con una puerta interior y otra exterior. Las jarras son recipientes cilndricos, de metal o de plstico rgido, que deben cerrarse hermticamente y en los que la atmsfera anaerobia se obtiene entre 1 y 2 horas despus de introducir unos sobres (GasPak, Becton Dickinson) en los que, al aadir H2O se libera H2 y CO2El H2 se combina con el oxgeno existente formando agua gracias a la presencia de un catalizador. Actualmente existen sistemas en los que no hace falta aadir H2O o introducir el catalizador (Anaerogen , Oxoid). Mediante una tcnica automatizada, Anoxomat, tambin se puede lograr una atmsfera anaerobia en las jarras. Como ya se ha sealado debe introducirse un indicador de oxgeno, que suelen ser tiras de papel con azul de metileno, que se

decoloran al desaparecer presencia del oxgeno.

la

microorganismos de crecimiento rpido y se empleen medios selectivos como el BBE para el grupo de Bacteroides fragilis o el EYA para clostridios, en cuyo caso se pueden examinar a las 24 h. Si en las placas no se observa ningn crecimiento se deben reincubar hasta completar 7 das, al menos las de agar sangre no selectivo, ya que algunos anaerobios requieren este tiempo para formar colonias visibles (Actinomyces, Porphyromonas, Propionibacterium, Bilophila,...). Se aconseja mantener la incubacin del medio lquido de enriquecimiento entre 7 y 10 das y se deben realizar subcultivos, si se aprecia turbidez u otro signo de crecimiento, en agar sangre y agar chocolate que se incubarn en una atmsfera con 10% de CO2, y en agar sangre para anaerobios incubado en anaerobiosis. Este mismo proceder se realiza al final del periodo de incubacin si no se ha detectado crecimiento para considerarlo definitivamente estril.

En el diagnstico de la actinomicosis el tiempo de incubacin debe ser mayor, generalmente entre 2 y 4 semanas.

BACILOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

Tiempo de incubacin. Inmediatamente despus de su siembra las placas de cultivo se incuban a 35-37C en el sistema de anaerobiosis disponible. Si se utiliza una cmara se pueden examinar a las 24 h, puesto que no es necesario sacarlas, mientras que si se emplean jarras o bolsas hay que esperar 48 h, a no ser que se busquen

Los microorganismos pertenecientes al gnero Mycobacterium se caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las restantes eubacterias. La pared

de las Mycobacterias posee un alto contenido de lpidos que la hace impermeable a los agentes hidroflicos, por lo tanto estos microorganismos no se tien adecuadamente con los reactivos utilizados en la coloracin de Gram y no pueden ser clasificados como Gram positivos o negativos. Las Mycobacterias son teidas adecuadamente por el mtodo de Ziehl-Neelsen (Tincin Acido-

Rpida o Acid-Fast Stain) que utiliza como solucin decolorante una mezcla de etanol y cido clorhdrico. Estos microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloracin cido-alcohlica y por eso se denominan Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

Los microorganismos del gnero Mycobacterium contienen una membrana citoplasmtica formada por una bicapa lipdica similar a las restantes eubacterias. Por encima de esta membrana se encuentra el rgido peptidoglicano que contiene N-glucolilmurmico en lugar de Nacetilglucosamina. Por medio de una unin fosfodister, el peptidoglicano se halla unido covalentemente al arabinogalactano, un polmero de arabinosa y galactosa. En la porcin ms distal y externa de los arabinogalactanos se hallan fijados los cidos miclicos que tienen cadenas carbonadas largas (C60 a C90). Los glucolpidos son un grupo de compuestos (micolatos de trealosa, sulfolpidos, micsidos, etc.) que se encuentran asociados no covalentemente a los cidos miclicos y se ubican perifricamente en la pared. Los micolatos de trealosa (llamados factores de cordn porque su presencia produce cultivos que tienen forma de cordones serpenteantes) y sulfolpidos se encuentran principalmente en las cepas de Mycobacterias ms virulentas. El lipoarabinomanano (LAM) es un compuesto que se halla

anclado en la membrana citoplasmtica. El LAM es considerado como el equivalente mycobacteriano del lipopolisacrido de las Gram negativas debido a que provoca una importante respuesta antimicrobiana en macrfagos. En las cepas de Mycobacterias ms virulentas la arabinosa terminal del LAM est recubierta con residuos de manosa (manLAM) a diferencia de las cepas no virulentas no estn recubiertas (AraLAM). Adems, el LAM tambin podra servir como poro para el paso de los nutrientes a travs de la pared celular. En la pared celular tambin se encuentran protenas inmunoreactivas que son utilizadas con fines diagnsticos (PPD). El Mycobacterium tuberculosis es el agente etiolgico de la tuberculosis, una enfermedad que primariamente produce lesiones en los pulmones y que puede causar la muerte si nos es tratada en forma adecuada. Existen otras Mycobacterias capaces de producir infecciones en el hombre. El M. bovis tambin causa tuberculosis, mientras que las infecciones producidas por M. avium, M. kansakii,M.

fortuitum y M.

consideradas oportunistas y no tuberculosas. La lepra es una infeccin causada por el Mycobacterium leprae que es un parsito intracelular obligado que se multiplica lentamente en clulas fagocitarias mono nucleares como los histiocitos de la piel y en las clulas de Shwan de los nervios. La tuberculosis es una enfermedad de distribucin mundial pero con consecuencias devastadoras en los pases en desarrollo. En el ao 1993 la Organizacin Mundial de la Salud (OMS-WHO World Health Organization) declar a la tuberculosis una "Emergencia Global". Se estima que un tercio de la poblacin mundial est infectada con el M. tuberculosis, y que en la prxima dcada sern infectadas ms de 300 millones de personas de las cuales 90 millones desarrollarn la enfermedad y 30 millones morirn por ella.

chelonei son

Esquema de las envolturas de una eubacterias Acido-Alcohol Resistente Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgicos Micobacterias Micobacterias

Taxonoma Las Micobacterias son microorganismos distribuidos ampliamente en la naturaleza. Se conocen ms de 50 especies, de las cuales casi la mitad se han aislado en procesos infecciosos humanos. Tienen inters especial debido a su alto contenido en lpidos (hasta un 40% del peso seco de la clula) Desde el punto de vista clnico, las Micobacterias pueden agruparse en tres grupos: - Especies que nunca son patgenas. - Especies saprfitas que pueden convertirse en patgenas (Micobacterias atpicas). - Especies que siempre son patgenas y producen tuberculosis humana y lepra. Las que vamos a ver son las de este ltimo grupo, destacando por su importancia las siguientes: - Mycobacterium tuberculosis o bacilo de Koch Mycobacterium bovis - Mycobacterium leprae (ser vista aparte)

Recogida de muestras

Para el diagnstico de tuberculosis pulmonar la muestra idnea es el esputo obtenido por la maana, en ayunas, antes de la utilizacin de ningn medicamento. Para la tuberculosis renal la muestra ms adecuada es la primera orina de la maana, recogida en ayunas, previo lavado de genitales externos y despreciando la primera parte de la miccin. Las muestras de orina de 24 horas son menos rentables y proporcionan una mayor tasa de contaminaciones. La tuberculosis genital se puede determinar investigando la presencia de micobacterias en la sangre menstrual, aunque la muestra ms adecuada es la obtenida mediante legrado de endometrio. En el hombre se pueden recoger muestras de semen, biopsia de epiddimo o exudados de fstulas escrotales.

La meningitis tuberculosa utiliza L.C.R., que puede mantenerse a temperatura ambiente de 24 a 48 h. a la espera de formacin de un retculo para observacin de BAAR. Para el diagnstico de tuberculosis intestinal se pueden utilizar heces, aunque es preferible la biopsia mediante endoscopia. Otros tipos de muestras pueden ser estudiadas mediante el machacado previo en mortero con arena estril o en aparatos mecnicos si las muestras son slidas. Si son lquidas las muestras se centrifugan a 3000 rpm durante 30' y se trabaja con el sedimento obtenido.

Procesamiento de las muestras para estudio de micobacterias En el procesamiento analtico microbiolgico de una muestra para cultivo, aislamiento e identificacin de micobacterias, (sobre todo esputo y orina) hay un dato muy importante a tener en cuenta: las micobacterias clnicamente importantes son microorganismos de crecimiento muy lento, dando por lo general colonias visibles en medios de cultivo apropiados no antes de siete das; lo cual permite que el

crecimiento de otros microorganismos de crecimiento normal enmascare e inhiba el crecimiento de las micobacterias. Para evitar esto, todo proceso de cultivo de micobacterias lleva asociado un procedimiento previo de descontaminacin en el que eliminamos microorganismos no deseados. La descontaminacin puede llevarse a cabo con un cido, un lcali o cualquier compuesto descontaminante. La sosa, a concentraciones del l al 4% es uno de los ms utilizados. A pesar de que las micobacterias son muy resistentes a estos agentes, tras un proceso de descontaminacin solo quedan viables de un 10 a un 20% de la poblacin inicial de micobacterias. De la misma forma, al ser las micobacterias microorganismos de crecimiento intracelular y quedar en muchas ocasiones englobadas en el espesor de la secrecin mucosa a que dan lugar (sobre todo la bronquial), es necesario un procedimiento de fluidificacin y homogeneizacin del producto estudiado para garantizar una ptima recuperacin de dichos microorganismos en caso de que se encuentren presentes. Para esto se

utilizan sustancias mucolticas como la N-acetil cistena o detergentes como el lauril sulfato sdico. Los lquidos normalmente estriles (LCR, lquidos articulares, pleurales, etc.) no necesitan proceso de homogeneizacin ni descontaminacin. nicamente sera necesario un proceso de concentracin previo a la siembra. En ocasiones puede utilizarse una tcnica conjunta que combine homogeneizacin con descontaminacin en un solo paso. Una de las tcnicas ms utilizadas es la de Tacquet-Tison o mtodo del lauril sulfato de sosa. Vamos a verla a continuacin.

agitacin, tras lo cual se deja reposar a temperatura ambiente durante media hora. Pasado ese tiempo se neutraliza la alcalinidad con un reactivo B (compuesto por un cido y un indicador) hasta el cambio de color a amarillo plido persistente. Despus de una centrifugacin intensa (3000 rpm durante 20 minutos) se decanta y se siembra el sedimento.

Caractersticas microscpicas y de tincin

Mtodo del Lauril sulfato de sosa Es uno de los menos nocivos para las Micobacterias, porque se utiliza menor concentracin de sosa que en otros. Son necesarios 2 reactivos, que denominaremos A y B. El reactivo A es una solucin de lauril sulfato de sodio e hidrxido sdico que har las funciones de descontaminante y fluidificante. Tras mezclar la muestra con el reactivo A, se homogeiniza por

de Gram no se tien o se comportan como Gram positivos dbiles. La presencia de cido miclico en su pared les confiere una resistencia a la solucin de alcohol cido que los diferencia del resto de las bacterias. Aprovechando esta propiedad se desarroll una tincin especfica para bacterias cido alcohol resistente. Con la tincin de Ziehl-Neelsen las micobacterias se observan como bacilos de color rojo. Aparecen individualmente o formando pequeos grupos. Otras tinciones utilizadas para poner de manifiesto estos microorganismos son la tincin de Kinyoun, la de Tan-Thiam-Hok o la tincin fluorescente de auramina-rodamina. Baciloscopias Todas las muestras deben ser examinadas mediante tincin de Ziehl-Neelsen antes de proceder a su descontaminacin. Aunque el hallazgo de BAAR en un frotis no es un diagnstico definitivo de infeccin micobacteriana, permite un diagnstico presuntivo muy precoz de tuberculosis, un

Las micobacterias son bacilos rectos o ligeramente curvados. Son inmviles y no esporulados. Con la tincin

seguimiento de los pacientes en tratamiento y una confirmacin de que los aislamientos obtenidos son BAAR. Una buena baciloscopia comienza con la realizacin de un buen frotis. Debe realizarse a partir de la parte ms purulenta del esputo, efectundose una extensin de grosor adecuado. La fijacin debe hacerse durante 30 minutos al calor seguido de alcohol metlico. La observacin debe hacerse siempre con objetivo de inmersin, recomendndose hacer una valoracin cuantitativa de los bacilos presentes en la muestra. Se observar todo un largo de la extensin finalizando el recuento si hay ms de 10 bacilos por lnea. Si hay menos de 10 bacilos por lnea se efectuar el recuento en dos lneas ms y se expresar el resultado como bacilos x 3L Si en la primera lnea realizamos un recuento de ms de 50 bacilos, no se continua el recuento y se informa como ms de 50 BAAR / 1 L Otra forma de informar los recuentos cuantitativos de BAAR es la siguiente:

Ausencia de BAAR 0 De 1 a 9 BAAR / 1L N de bacilos De 10 a 99 BAAR /1L + De 1 a 10 BAAR / campo ++ Ms de 10 BAAR / campo +++

Caractersticas de cultivo

Las Micobacterias son muy exigentes desde el punto de vista nutritivo y se cultivan con relativa lentitud y dificultad en el laboratorio. Los bacilos de la tuberculosis son aerobios estrictos, aunque M. bovis puede ser microaerfilo en aislamientos primarios. Crece mejor a 37C, y el crecimiento es nulo por debajo de 30C o a temperaturas superiores a 42C. La presencia de cidos miclicos en la pared celular les confiere una

resistencia a la accin de determinados colorantes (como verde de malaquita) o antimicrobianos (penicilina), cualidades que se utilizan para evitar contaminaciones de los medios de cultivo por microorganismos sensibles a dichos agentes. Los medios pueden ser lquidos o slidos; los medios lquidos tienen poco inters para especmenes muy contaminados como esputos y orinas. Se podran utilizar, siempre junto con los medios de base de huevo, en muestras poco contaminadas tales como lquido pleural, sinovial, L.C.R. o en determinados especmenes como mdula sea o biopsias. Otra utilidad de este tipo de medios es el mantenimiento de cepas o estudios de CMI de drogas.

Para el cultivo y aislamiento de Micobacterias pueden utilizarse diferentes tipos de medios: - Medios enriquecidos: (LowensteinJensen, Coletsos, Middlebrock, Caldo 7H9...) Medios selectivos: 7H11 - Medios diferenciales, que permiten

la diferenciacin entre Micobacterias atpicas y Mycobacterium tuberculosis (PNB, Sauton)

Los medios ms utilizados son los enriquecidos, que pueden tener base de huevo como el LowensteinJensen o base de agar como el Middlebrock. La ventaja de los medios con agar es que permiten una deteccin precoz de las Micobacterias; la de los medios con huevo es que ofrecen un mayor nmero de resultados positivos. Es conveniente usar siempre un medio enriquecido no selectivo, ya que algunas Micobacterias pueden resultar inhibidas por los antimicrobianos presentes en el medio. Despus del aislamiento primario, las Micobacterias son menos exigentes en los subcultivos y crece con mucha ms rapidez y en medios ms simples, hacindolo incluso en agar nutritivo. Actualmente existen sistemas automatizados que detectan el crecimiento de Micobacterias de una forma mucho ms precoz, utilizando sustratos marcados

radiactivamente (BACTEC). El cultivo de Micobacterias en medio slido debe hacerse en tubo para evitar la desecacin del medio durante el largo perodo de incubacin. Los tubos se incuban casi en horizontal, a 35 C, en oscuridad y en atmsfera hmeda con un 5 - 10% de CO2 durante la primera semana, para luego pasar a una atmsfera normal. Es conveniente que los tapones estn desenroscados hasta que se evapore el agua que contienen los tubos, ya que sta puede impedir la aparicin de la morfologa colonial tpica de las Micobacterias. Mycobacterium tuberculosis crece en medio de L-J dando lugar a colonias rugosas, de aspecto cerebroide, excrecentes y de color marfil; M. bovis da lugar a colonias lisas.

No pigmentadas - Relacin entre la luz y la produccin de pigmento: Fotocromgenas: producen pigmento en presencia de luz. Escotocromgenas: producen pigmento en la oscuridad.

Pruebas para identificacin especies de Mycobacterium

de

Las principales caractersticas que definen a las Micobacterias son las siguientes: - Velocidad de crecimiento: Rpido (menos de 7 das) Lento (ms de una semana). - Pigmentacin de las colonias: Pigmentadas

tabla Las caractersticas ms importantes de las Micobacterias tuberculosas son:

siguiente:

Tabla I: Caractersticas diferenciales de las Micobacterias tuberculosas

Sensi Red. bilida Niaci de d a na nitra Piraz to inami da

Sensibilid ad a Hidracin a

M. Tub + ercu losis M. Bovi s

Gran poder patgeno - Crecimiento lento de las colonias (ms de siete das) No producen pigmento - No dan positiva la prueba de la catalasa a 68 C

Adems de las pruebas convencionales para identificacin de Micobacterias, se han desarrollado nuevas tcnicas que permiten la identificacin de la especie en pocas horas, acortando as el tiempo de diagnstico. Ejemplos de estas tcnicas son la utilizacin de sondas genticas marcadas, con o sin reaccin en cadena de la polimerasa y el anlisis cromatogrfico de los lpidos de la pared celular.

le introduce subcutneamente un extracto tuberculoso inactivado (tuberculina). Existen dos tipos de tuberculina: la clsica (OT), que no se utiliza actualmente debido al alto grado de impurezas que contiene y los derivados protenicos purificados (PPD) que son utilizados hoy para la inoculacin intradrmica. La reaccin de Mantoux se hace mediante inyeccin subcutnea de 25 unidades de PPD en la cara anterior del antebrazo, produciendo una ppula sobre elevada. Tras marcar la zona de inyeccin con marcador graso se espera de 48 a 72 horas para valorar el dimetro del rea de induracin producida, considerndose positiva la prueba si sta es mayor de 5 mm.

Intradermorreaccin de Mantoux o prueba de la tuberculina.

Las pruebas bioqumicas que nos permiten diferenciar estas dos especies quedan resumidas en la

La prueba de la tuberculina consiste en la comprobacin de una reaccin cutnea como consecuencia de una activacin de la inmunidad celular cuando a un individuo infectado se

Vacunacin Calmette atenu la virulencia de una cepa de M. bovis subcultivndola repetidamente durante un perodo de 13 aos. A esta cepa se le llam bacilo de Calmette-Guerin (BCG) y tiene especial inters en relacin con la inmunizacin activa contra la tuberculosis, puesto que establece

la infeccin en el husped humano o animal, pero no da lugar a una enfermedad clnicamente aparente.

Sensibilidad antituberculosos.

agentes

Epidermiologa. Cien aos despus de su descubrimiento por Roberto Koch, la tuberculosis sigue siendo la enfermedad contagiosa ms importante del mundo. Cada ao aparecen 10 millones de nuevos casos y mueren ms de 3 millones de personas debido a esta enfermedad. En los pases desarrollados, la tuberculosis es debida fundamentalmente a M. tuberculosis mientras que M. bovis ha desaparecido prcticamente como consecuencia de las medidas de control dirigidas contra las infecciones en el ganado vacuno. La tuberculosis es una enfermedad de declaracin obligatoria en Espaa. La incidencia de tuberculosis en Espaa no es muy fiable, debido a una endmica infradeclaracin, pero las cifras que se manejan oscilan entre 26 y 50 nuevos casos por cada 100.000 habitantes.

La terapia antituberculosa exige un tiempo muy largo de tratamiento (de 6 a 18 meses). Desde el comienzo del tratamiento el paciente deja de ser contagioso y el aislamiento prolongado se vuelve innecesario. Sin embargo, un factor muy importante a tener en cuenta es el alto grado de mutagenicidad y resistencia que presentan los bacilos durante el tratamiento, lo que hace necesaria la poli terapia para disminuir la frecuencia de recidivas. Atendiendo a esta forma de comportamiento de las Micobacterias, se establece que el adecuado tratamiento debe constar de dos fases: A) una fase inicial en la que se persigue eliminar lo ms rpidamente el mayor nmero de bacilos de

multiplicacin rpida (accin bactericida), para lo cual deben emplearse al menos tres frmacos para evitar la seleccin de mutantes. B) una fase de consolidacin que permitir eliminar los microorganismos de crecimiento lento e intermitente. Clsicamente, los frmacos utilizados para el tratamiento han sido divididos en agentes de primera y de segunda lnea. Los frmacos antituberculosos de primera lnea que se usan habitualmente son:

ISONIACIDA: Es el frmaco clave en el tratamiento antituberculoso. Es bactericida a nivel intra y extracelular y se utiliza tambin como terapia preventiva. RIFAMPICINA: Tiene efecto bactericida sobre microorganismos intra y extracelulares. Es ms eficaz que Isoniacida frente a microorganismos de crecimiento lento. PIRAZINAMIDA: Efecto bactericida sobre microorganismos intracelulares. Altamente eficaz en la fase inicial del tratamiento. ETAMBUTOL: Efecto

bacteriosttico intra y extracelular. Pude ser bactericida intracelularmente a concentraciones elevadas. ESTREPTOMICINA: Es un agente bactericida sobre bacilos extracelulares, aunque elevando la dosis puede ser bacteriosttico a nivel intracelular.

Entre los tuberculostticos de segunda lnea tenemos: PAS, cicloserina, kanamicina, viomicina, amikacina, capreomicina, tiacetazona, rifabutina, ofloxacino y clofazimina.

Antibiograma

El procedimiento para la realizacin del antibiograma de M. tuberculosis ms utilizado en todo el mundo es el de Canetti, Rist y Grosset. Consiste en determinar la proporcin de bacilos resistentes a una determinada droga que existe en la poblacin bacteriana inicial (cepa). Para ello, se dispone de una serie de tubos con medios de Lwenstein y las diversas drogas, incorporadas a unas concentraciones previamente establecidas. Se inoculan dos series de tubos, con dos diluciones de una suspensin bacilar, as como unos tubos testigo sin drogas incorporadas. En los tubos testigo se obtiene el crecimiento correspondiente al total de la poblacin bacteriana inoculada. Las colonias crecidas en los tubos que contienen droga indicarn el nmero de bacilos resistentes a dicha droga en la poblacin analizada. La suspensin bacteriana se prepara tomando unas colonias representativas de la mayor parte de la cepa a estudiar, se depositan en un tubo conteniendo perlas de vidrio, y se aade agua destilada hasta obtener una turbidez

equivalente a la proporcionada por una suspensin de BCG de 1 mg/ml. A partir de aqu se preparan dos diluciones en agua destilada estril al 1/1000 y al 1/100000. Se inoculan en los tubos correspondientes 0,2 ml de las diluciones as preparadas. Los tubos se depositan en posicin horizontal en la estufa a 37C y se leen a los 21 y los 28 das. Se cuentan las colonias aparecidas en los tubos testigo y, si existen, en los tubos conteniendo las drogas. Si el crecimiento en los tubos con drogas es superior a la proporcin crtica en relacin con el crecimiento en los testigos, la cepa se considera resistente, y si es inferior, sensible. Patogenicidad

Los bacilos de la tuberculosis son relativamente resistentes a la desecacin y los factores ambientales, probablemente como consecuencia de su alto contenido en lpidos. Los bacilos pueden permanecer viables en el esputo durante semanas o meses. Si se desecan completamente, de manera que los bacilos puedan permanecer

suspendidos en el aire, pueden ser infecciosos durante ms de una semana. Mycobacterium tuberculosis accede a los alvolos pulmonares por inhalacin de los microorganismos. Es posible que se desarrolle infeccin en una persona tras inhalar nicamente 1 o 2 bacilos viables, aunque el riesgo de desarrollar infeccin tras una nica exposicin es muy bajo (3-5%). Son necesarias exposiciones repetidas a los bacilos, junto a una inmunidad deteriorada del husped para que aumente esa probabilidad. La patologa ocasionada por el gnero Mycobacterium puede estar bacilios de koch infecciones tuberculosa limitada a determinados rganos o sistemas: formas pulmones renales, osteoarticulares, menngeas, cutneas, ganglionares, o bien pueden originarse diseminaciones dando lugar a formas generalizadas. Por todo ello comprenderis la razn

de no trabajar en este Instituto con cepas de Micobacterias.

Micobacterias atpicas

La presencia de Micobacterias diferentes a las tradicionalmente productoras de tuberculosis fue considerada durante mucho tiempo como una contaminacin accidental,

Sin darle nunca un verdadero valor patgeno. Sin embargo, en estos ltimos aos se han aislado con mayor frecuencia y se ha llegado a establecer su relacin causal con los procesos tuberculosos que producan. Al no ser tpica la etiologa de estas tuberculosis, empez a denominrselas con el apelativo de atpica, trmino que aunque no es el ms idneo, ha alcanzado un uso tan general que es el que actualmente se aplica a todo este grupo de micobacterias.

Las micobacterias atpicas se encuentran en el hombre en ausencia de enfermedad, aunque tambin se aslan me

En la mayora de las ocasiones son causantes de patologa solo si hay una lesin previa de los tejidos o la inmunidad celular est muy alterada. Las Micobacterias atpicas difieren de los bacilos de la tuberculosis en que no son patgenas para el cobaya, generalmente son resistentes a los agentes quimioterpicos antituberculosos habituales, crecen con ms rapidez y con frecuencia estn pigmentados. Runyon clasific las Micobacterias atpicas en cuatro grupos, basndose fundamentalmente en la produccin de pigmentos y en la velocidad de crecimiento, segn se muestra en la siguiente tabla:

Grupo

Caractersticas

Especies de Mycobacterium

Fotocromgenos M. Pigmento amarillo-claro M. Colonias rugosas M. Crecimiento lento (14-21 das)

kansasii marinum simiae

II

III

Escotocromgenas Pigmento naranja-rojizo Colonias lisas Crecimiento lento (10-14 das) No pigmentados Crecimiento lento (14-21 das)

M. M- szulgai

scrofulaceum

M. M. M.

xenopi

avium intracelulare

IV

Pigmentacin variable M. Crecimiento rpido (5-7 das) M. M.

ulcerans

fortuitum chelonei

PRUEBA DE ESPIROQUETAS Y VIBRIOS Preparacin hmeda: es la forma ms simple de examinar las bacterias y otros microorganismos vivos, y consiste en la suspensin de un inoculo de cultivo en agua u otro lquido, colocando una gota de sta suspensin en un portaobjeto comn y cubrirlo con un cubreobjetos. Este procedimiento requiere utilizar microscopa de contraste de fase.

Esta prueba se realiza en medios semislidos o con bajas concentraciones de agar (0.4% o menos) para permitir que los microorganismos mviles se dispersen libremente. La motilidad bacteriana es otros determinantes de importancia en una identificacin final de especie. La motilidad bacteriana puede observarse directamente en un microscopio colocando una gota de caldo de cultivo en un portaobjetos de gota pendiente para bacterias que no crecen bien en medios semislidos. Sin embargo, para las entero bacterias es ms comn emplear medios de cultivo semislidos. Los medios combinados ms empleados son el SIM y el MIO ya que permiten evaluar ms de una caracterstica a la vez, por ejemplo en SIM podemos evaluar motilidad, produccin de H2S o indol. Dado que este

medio tiene un fondo levemente turbio, la interpretacin de resultados de motilidad se hace un poco complicada, sobre todo si el analista no est suficientemente entrenado y ms aun cuando hay produccin de H2S en el medio o se revela la prueba de indol primero lo cual puede afectar el color del medio. En estos casos se recomienda el uso de medios de motilidad especficos ya que permiten el crecimiento de bacterias muy exigentes y tiene aspecto cristalino. La prueba de motilidad se interpreta por medio de un examen microscpico del medio en busca de zonas de difusin del crecimiento sobre la lnea de puncin. Se h a aconsejado el uso de sales de tetrazolio en estos medios ya que estas sales incoloras se toman rosadas por la conversin a complejos de

formarn rojos e insolubles por las propiedades reductoras de las bacterias en crecimiento sin embargo, presentan una desventaja para las bacterias exigentes ya que pueden inhibir su crecimiento. Fundamento 1. Propsito: Usadas para determinar la motilidad de aislamientos o cultivos sospechosos; B. anthracis no presenta motilidad. Se proporcionan dos mtodos para la determinacin de la motilidad: el montaje en hmedo y el cultivo en medio para prueba de motilidad. 2. Procedimiento de montaje hmedo a. Coloque 2 gotas (aproximadamente 0.1 ml) de TSB o medio de cultivo equivalente, en un tubo de vidrio estril. Usando un asa de inoculacin, transfiera una

porcin sospechosa 20 horas suspndase (Caldo).

de la colonia de un cultivo de 12de incubacin y en un medio lquido

Laboratorio, tal como el tratamiento en una solucin al 0.5% de hipoclorito de sodio. 3. Procedimiento para la prueba de motilidad en medio de cultivo

b. Alternativamente se puede tomar un asa (asa con punta de anillo) de un cultivo fresco en caldo. c. Transfiera 10 l de la suspensin a un portaobjetos y cubra con un cubreobjetos. d. Observe el frotis bajo el microscopio usando el objetivo de 40X (para producir un aumento total de 400X considerando el aumento del ocular; se puede utilizar tambin el objetivo de inmersin de 1000X). e. Deseche las preparaciones en portaobjetos siguiendo los procedimientos estndares de

a. Utilizando una aguja de inoculacin estril, tome una porcin de material bacteriano perteneciente a una colonia sospechosa de un cultivo aislado, despus de 18-24 horas de incubacin. b. Inocule el medio de motilidad, insertando cuidadosamente la aguja a 3-4 cm dentro del medio y

retirando la aguja directamente hacia afuera, de tal manera que una sola lnea de inculo se pueda observar. c. Incube el tubo de 35-37 C en atmsfera ambiental por 18-24 horas.

PRUEBA DE FORMAS PLEOMORFICAS. Fundamento terico

4. Interpretacin del resultado de motilidad: La falta de motilidad es inusual entre las especies de Bacillus y por lo tanto esta caracterstica es til en la identificacin preliminar de cultivos aislados de B. anthracis.

(1) Resultado positivo: Los organismos motiles se observarn desplazndose a travs de la suspensin. Observe que el movimiento puede ser ms lento que el que se observa en los controles positivos.

La teora que estoy compartiendo es lo que actualmente se conoce como la teora pleomrfica, desarrollada desde fines del 1800 a comienzos del ao 1900 por varias personas que han influido en mi comprensin de

la salud holstica. La primera es Antoine Bchamp (1816-1908), quien era mster en farmacia, doctor de ciencias, doctor en medicina, profesor de farmacia qumica mdica, profesor de fsica y toxicologa, y profesor de qumica biolgica. Lo que descubri fue el proceso de fermentacin, lo cual describi el proceso de la digestin por fermentos o formas de vida microscpicas. Como un genio en su campo, vio que la sangre no es un lquido que un tejido fluyendo. En su trabajo, descubri lo que llam "microzimas" o fermentos en la sangre. El microzimas son elementos vivos microscpicos y coloidales capaces de fermentar el azcar en nuestro sistema. La microzima es la unidad viviente ms pequea que vive en la naturaleza y en nuestros cuerpos, de mucho menor tamao que las clulas.

La piedra angular de la teora de Bchamp fue que el mantenimiento de un terreno sano y de una fisiologa biolgica es la clave para la salud. Cuando el terreno biolgico es interrumpido, cuando la gente tiene demasiado cido, entonces el proceso de fermentacin natural en el cuerpo se acelera, y una evolucin patolgica de estas microzimas se lleva a cabo. Ellas se coagulan y polimrficamente se transforman en el tiempo en bacterias, levaduras, hongos, y moho. A medida que estas formas mrbidas pleomrficas de la microzimas van en desarrollo, se alimentan de nuestras sustancias vitales del cuerpo y producen ms toxinas, a lo que llamamos las micotoxinas. Este proceso txico dio lugar a una sintomatologa de la enfermedad degenerativa.

La familia Mycoplasmataceae contiene dos gneros que infectan a humanos: Mycoplasma y Urea plasma, a los que usualmente se les menciona simplemente como mycoplasmas. Aunque hay muchas especies de mycoplasmas, slo cuatro se reconocen como patgenos de humanos: Mycoplasma

Mycoplasma y Ureaplasma

pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, y Urea plasma urealyticum. Aunque hay
muchas otras espcies que han sido aisladas a partir de humanos, su papel en la enfermedad no est bien establecido. Mycoplasmas.

El factor diferenciador es la composicin de la pared bacteriana. Los mycoplasmas carecen de pared bacteriana. Recordemos que las formas L son bacterias que han perdido

la pared bacteriana. La diferencia entre las formas L y las mycoplasmas radica en que la forma L es un accidente, algo espordico: la bacteria, al volver a unas condiciones normales, puede desarrollar de nuevo una pared. Los mycoplasmas son as. En el grupo 30 encontramos 6 gneros, de los cuales veremos el mycoplasma y el urea plasma. Brucella Abortus: Es una bacteria Gram negativa con un lipopolisacrido (LPS) fuertemente inmunodominante, el que junto con la capacidad de sobrevivir en el interior de clulas fagocticas constituyen sus principales factores de virulencia

Caractersticas generales.

Gran necesidad nutritiva de esteroles. Si no encuentran esteroles no son capaces de desarrollarse ni de reproducirse. Cierto grado de anaerobiosis (no mucho). Carecen de pared, pero tienen como sustituto de ella una membrana triestratificada (con 3 capas). Reproduccin bastante compleja. La duplicacin del material nuclear no es paralela a la duplicacin del resto del material celular. Tamao: estn en el lmite del microscopio ptico. Se ven bastante mejor con el electrnico. Son inmviles y jams forman esporas. La ausencia de bacteriana determina: pared

Desincronizacin en la duplicacin gentica y celular. Tinciones de Romanoswky, Castaeda. Giemsa, Dienes,

Comportamiento a los antibiticos: resistentes a las penicilinas. Hbitat, cultivo, bioqumica. Suelen poblar las mucosas del sistema respiratorio, glndulas mamarias, rganos urogenitales y articulaciones. En el sistema respiratorio estn de continuo, de forma normal. Al resto de tejidos llegan en calidad de agentes patgenos. Son capaces de desencadenar infecciones primarias, pero suelen ser agentes secundarios: microorganismos oportunistas. Pueden producir infecciones agudas. Forman colonias cuando son cultivadas en medios semislidos. Son colonias

diminutas, observables al microscopio ptico, que tienden a meterse en el gar haciendo formas abombadas, que reciben el nombre de colonias en huevo frito. Son un cultivo difcil: necesitan en el medio de cultivo protenas animales, NaCl, peptona, esteroles y cidos grasos. Al ser un medio tan rico corre gran riesgo de contaminantes, por lo que requieren de sustancias inhibidoras que a ellos no les afecten, como la penicilina, el cristal violeta, etc. Como son parcialmente anaerobias hay que bajar la presin de oxgeno. Tambin necesitan de un 5 -10 % de CO2 y un cierto grado de humedad. Son bacterias de crecimiento muy lento, entre 1 semana y 10 das. Soportan muy bien la presin osmtica. Son sensibles a los agentes tenso activos (jabn,

detergente), por el contenido en esteroles de los mismos. Antibiticos a los que son sensibles: tetraciclinas, eritromicinas, estreptomicinas. Resistentes a las penicilinas. Poder patgeno Son bacterias con un equipo enzimtico muy potente y variado (p. ej. proteasas). Producen hemlisis (lisis de hemates), endonucleasas (destruyen los cidos nucleicos) y gran cantidad de sustancias txicas celulares: NH3 y H2O2, que destruyen la clula a la que se adhiere. (La bacteria es totalmente extracelular). Diagnstico.

patolgicas tienen un periodo de fiabilidad muy corto (24 h.), por lo que muy pocas veces se har un diagnstico directo.

El sistema inmunitario del individuo tendr anticuerpos de mycoplasmosis, as que se detecta ms fcilmente por aglutinacin, precipitacin, tcnica ELISA.

Casi nunca se usa en laboratorio el diagnstico directo (observacin al microscopio), sino mtodos indirectos. A lo lento que es el aislamiento se aade el hecho de que las muestras

Aves

My. gallisepticum. My. Meleagridis. responsables de (enfermedad Ambos CRD crnica

respiratoria), que afecta a los sacos areos.

Lechones. Inmunidad.

entre granjas, se usan vacunas con virus vivos atenuados.

My. synovial. Afecta articulaciones y tendones. Bvidos

La la

principal uterina.

va En

de aves

My. mycoides. Fue el primero en ser aislado. Es el agente caudal de la perineu-mona bovina (pleuroneomona bovina), mortal. My. bovygenitalium. Tanto en machos como en hembras. Tropismo del tracto urogenital. My. bovis. articulaciones. vidos My. agalactiae. En ovejas lecheras. Responsable de la agalaxia contagiosa ovina (falta de secrecin de leche). Porcino My. hyoneumonae. Neumona enzotica del cerdo. My. hyorginis. Septicemia de Tpico de

CRD (My. gallisepticum, meleagridis). Se usan vacunas inactivadas muy efectivas. Agalaxia contagiosa ovina (My. agalactiae). Vacunas inactivadas. Neumona enzotica porcina (My. hyoneumonae). Vacunas inactivadas. Perineumona bovina (My. mycoides). Tambin usan vacunas, pero no en Europa. En Europa estn prohibidas porque al vacunar despus no se puede diferenciar los individuos vacunados (sanos) de los portadores de la bacteria (enfermos), porque todos tienen anticuerpos. Simplemente, cuando hay animales enfermos se sacrifican. En Australia, donde hay una gran distancia

transmisin es la area y tambin se transmite a travs del huevo. No hay transmisin de mycoplasmas humanos a los animales, ni viceversa. Urea plasma. Hay una especie diversum, de y de interesante: la ureoplasma responsable en terneros

infecciones respiratorias infecciones en vacas. urogenitales

pneumoniae,

el cual es un aerobio estricto. Una caracterstica tpica que distingue al mycoplasma de otras bacterias, es la falta de la pared celular. As, ellos pueden asumir mltiples formas incluyendo formas redondas, en forma de pera e incluso la forma filamentosa. Morfologa y Fisiologa Los mycoplasmas son las bacterias ms pequeas de vida libre. Su tamao va de 0.2 0.8 micrmetros, por lo cual pueden atravesar algunos filtros utilizados para la eliminacin de bacterias. Adems poseen el genoma con el tamao ms pequeo y como un resultado, han sufrido la prdida de algunas rutas metablicas, por lo que se requiere de un medio complejo para su aislamiento. El mycoplasma es un anaerobio facultativo, excepto M. El mycoplasma crece lentamente por fisin binaria y produce colonias en forma de huevo frito en las placas de agar; las colonias de M. pneumoniae tienen una apariencia granular. Debido al lento crecimiento de mycoplasma, las colonias pueden tomar hasta tres semanas para desarrollarse y ser generalmente muy pequeas. Las colonias de Urea plasma son extremadamente pequeas, por lo cual al Urea plasma se les llama tambin tiny strains o cepas-T (T-strains).

Patognesis A. Factores de adherencia - Los mycoplasmas son patgenos extracelulares que se adhieren a superficies epiteliales celulares. As, las protenas de adherencia son uno de los factores de mayor virulencia. La protena de adherencia en M. pneumoniae se ha identificado como una protena de 168 kD llamada P1. La adhesina P1 se localiza en la punta de las clulas bacterianas y se une con los residuos de cido silico localizados en las clulas epiteliales del hospedero.

La naturaleza de la adhesinas en las otras especies no ha sido establecida. La colonizacin del tracto respiratorio por M. pneumoniaed como resultado el cese del movimiento ciliar. Los mecanismos normales de despeje del tracto respiratorio no funcionan, lo cual resulta en una contaminacin del mismo y el desarrollo de una tos seca.

tejidos infectados se han encontrado lpidos oxidados del husped. Adems, se ha demostrado que el mycoplasma inhibe la actividad de la catalasa de la clula husped, con lo que se aumentan las concentraciones del perxido. C. Inmunopatognesis Los mycoplasmas pueden activar a los macrfagos y estimular la produccin de citocinas y la activacin de linfocitos (M. pneumoniae es un superantgeno). As, se ha sugerido que los factores del husped pueden contribuir a la patognesis, la evidencia experimental en animales sostiene esta sugerencia. La ablacin de la funcin del timo antes de la infeccin con M. pneumoniae previene el desarrollo de pneumona y en animales en los cuales se restaura la funcin del timo, la neumona se desarrolla en una tasa exacerbada. Datos

epidemiolgicos en humanos sugieren que es necesario que se presenten repetidas infecciones antes de que se observe la enfermedad, de nuevo, sugiriendo que los factores del husped tienen un papel relacionado con la patognesis; la mayora de los nios se infecta entre los 2-5 aos de edad, pero la enfermedad es ms comn en nios de 5-15 aos de edad.

B. Productos metablicos txicos - La ntima asociacin del mycoplasma con las clulas husped proporciona un ambiente en el cual los productos metablicos txicos se acumulan, daando a los tejidos del husped (Figura 1). Ambos, el perxido de hidrgeno y el anin superxido, son productos del metabolismo de micoplasma que han sido implicados en la patognesis de los tejidos infectados, ya que en los

Urealyticum
A. Sndromes clnicos - M. hominis se ha asociado con pelonefritis, enfermedad inflamatoria plvica y fiebre post-parto (fiebre puerperal). El U. urealyticum se asocia con uretritis no gonoccica. B. Epidemiologa La colonizacin con M. hominis y U. urealyticum puede ocurrir durante el nacimiento pero en la mayora de los casos la

infeccin se autolimita. Slo en un pequeo nmero de casos la colonizacin persiste. Sin embargo, las tasas de colonizacin se incrementan cundo los individuos comienzan a ser sexualmente activos. Aproximadamente el 15% se colonizan con M. hominis y entre un 45% - 75% con U. urealyticum. Se trata de portadores asintomticos aunque los microorganismos pueden ser patgenos oportunistas. C. Diagnstico de laboratorio El diagnstico de Laboratorio es a travs de cultivo. D. Tratamiento y Prevencin Tratamiento debido a que los mycoplasma carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas son ineficaces. Los antibiticos de eleccin son tetraciclina (solamente

adultos) y eritromicina . Como medidas de prevencin son apropiadas bien la abstinencia o el uso de barreras fsicas de proteccin. Forma L bacterias

conocidas como clulas de pared bacterias deficientes, son una fase de bacterias que son muy pequeas y la falta paredes celulares. Aunque el tema de una gran cantidad de investigacin en los ltimos 100 aos e implicado en una variedad de enfermedades, las formas L siguen en gran medida malentendida - o por lo menos apreciada, - por la comunidad de investigacin mdica. De acuerdo con la patognesis de Marshall, las formas L son parte de una micro biota meta genmica responsable de la enfermedad crnica. Las especies capaces transformacin forma L de

Como una parte de su ciclo de vida natural, las bacterias pueden transformarse en una variedad de formas. Una de estas fases es la forma L. Forma L-bacterias, tambin

Hasta ahora, los investigadores han identificado ms de 50 especies diferentes de bacterias capaces de transformar en la forma L y es

probable que ms especies se encuentran en los prximos aos. "Probablemente especies ms bacterianas se pueden convertir en las formas L si se tratan con los antibiticos que inhiben la sntesis de la pared celular", afirma investigador Josep Casadesus. Algunas de las especies de bacterias de forma de L que han sido implicados en la enfermedad crnica son el

micras de dimetro. Puesto que son ms pequeos que los virus o partculas de hongos, que no puede ser visto con un microscopio ptico normal. Las formas pequeas e individuales de bacterias forma L se refiere a menudo como cuerpos cocoides. Cuerpos cocoides veces grupo juntos, adoptando el aspecto de un collar de perlas De vez en cuando en forma L bacterias salir de las clulas. En el laboratorio que pueden crecer en filamentos largos y delgados biopelcula que pueden llegar a 60-70 micras de longitud. Los filamentos estn compuestos biofilm de bacterias forma L y una vaina protectora de la protena. Por razones todava desconocidas, las formas L tambin pueden convertirse en grandes "gigante" de los cuerpos. Forma de L-bacterias carecen

Bacillus anthracis, Treponema pallidum, Mycobacterium tuberculosis, infeccin por Helicobacter pylori, Rickettsia prowazekii, y burgdorgeri Borrelia. No todos causan
enfermedades especies. Tamao y forma Forma L es pleomrfica, es decir, que puede cambiar el tamao y forma. Durante gran parte de su vida que son muy pequeas, alrededor de 0.01

de flagelos, apndices largos y delgados que permiten algunas formas de las bacterias para impulsarse hacia delante con un movimiento de ltigo. En su lugar, se deslizan a sus destinos de forma de caracol. Grupos de bacterias en forma L a menudo son encerrados dentro de los tbulos. Tambin se separa del medio ambiente dentro de la clula por una membrana o exoesqueleto que les impide ser digerido por la clula. La replicacin reproduccin y la

yema del cuerpo de la bacteria y dar lugar a pequeas forma Lcolonias. Mecanismos de supervivencia Las formas clsicas de la mayora de las especies bacterianas se pueden encontrar en el torrente sanguneo. Sin embargo la forma L-bacterias han descubierto la manera de infectar con xito y vivir dentro de las mismas clulas del sistema inmunolgico, cuya funcin es matar las bacterias. Una vez dentro de estas clulas, ya no pueden ser detectados por el sistema inmune y son capaces de permanecer en el cuerpo durante largos perodos de tiempo. Forma de L-bacterias pueden infectar muchos tipos de clulas, sino que prefieren infectar a las clulas blancas de la sangre llamadas macrfagos.

Varios estudios muy recientes han confirmado el hecho de que las bacterias pueden vivir dentro de las clulas del sistema inmune. PRUEBA DE BACTERIAS INTRACELULARES

Forma de L-bacterias se replican en varias formas, incluyendo el crecimiento en ciernes, filamentosas y la fisin binaria. Algunas especies de las formas L como Proteus pueden formar grandes cuerpos que se reproducen por divisin. En otros casos, los grnulos de

En general, las bacterias intracelulares se caracterizan por producir con mayor frecuencia infecciones persistentes, ya sean crnicas, latentes o lentas, por intervenir de manera importante factores

de inmunidad celular y porque en esta situacin los microorganismos se encuentran protegidos y son ms resistentes a los anticuerpos y tambin a los antimicrobianos. Este tipo de bacterias tienen las siguientes caractersticas: Capacidad para sobrevivir y multiplicarse en el interior de los fagocitos. Son poco toxicas y las clulas infectadas sobreviven. Se pueden adquirir por aire, sangre, alimentos. Incubacin larga y enfermedad persistente. Son inaccesibles a anticuerpos y buscan fagocitosis. los la

Fundamento El gnero Rickettsia pertenece a la familia Rickettsiaceae (tambin incluye Coxiella, Erlichia y Bartonella), dentro del orden de los Rickettsiales (5), est constituido por diferentes especies de bacterias gram negativas y todas tienen en comn la necesidad de ser parsitos intracelulares obligados debido a su corta viabilidad fuera de sus reservorios y vectores (3). Las Rickettsias son bacterias intracelulares obligadas transmitidas por artrpodos que infectan, principalmente, las clulas endoteliales de los vasos sanguneos. Estas bacterias tienen una distribucin global (6, 7) y causan enfermedades agudas con compromiso sistmico que pueden ser letales si no reciben tratamiento antibitico adecuado y oportuno. Tienen como caractersticas biolgicas una gran estabilidad en el ambiente, pequeo tamao, transmisin a travs de aerosoles, persistencia en los hospederos infectados, baja dosis de infeccin y una alta asociacin con morbilidad y mortalidad, estas caractersticas las hacen deseables especialmente R. prowazekii como armas para bioterrorismo (7). Causan enfermedades de severidad variable en humanos y son un buen ejemplo de enfermedades que no son apreciadas excepto para los

Afectan a especies especficas.

que as padecen y aun en muchos de los casos nunca son diagnosticados. Su ciclo vital se mantiene al infectar distintas especies de hospedadores (en general mamferos) y vectores en donde desarrollan focos de endemicidad y brotes espordicos o estacionales (7). Algunas especies de Rickettsia se ven involucradas en ciclos estables de mantenimiento a travs de la infeccin transovrica en sus artrpodos hospederos (8). La transmisin horizontal es fundamental para el mantenimiento de estas especies, y explica la baja frecuencia de presentacin en la naturaleza (Menos del 1%) (8).Las Rickettsias, al contactar con las clulas endoteliales, inducen su propia fagocitosis y, una vez dentro del citosol, escapan del fago soma y proliferan por fisin binaria simple, siendo finalmente

expulsadas por exocitosis para seguir infectando clulas contiguas (3). El deterioro a las clulas endoteliales causado por las Rickettsias se ve reflejado en las caractersticas clnicas, por ejemplo, en los pulmones y el cerebro causan las manifestaciones ms graves de la Rickettsiosis: Inclusiones basfilas. citoplasmticas

protenas no plegadas. En mamferos se han descrito numerosas infecciones virales asociadas a inclusiones intranucleares, citoplasmticas, bas filas y acid filas tales como Rabia, Viruela, herpes simplex virus y Varicela zoster virus.

Los cuerpos de inclusin citoplasmticos y nucleares corresponden a cmulos de sustancias, habitualmente protenas. Estas pueden representar sitios de replicacin viral y normalmente consisten en protenas de la cpside, aunque tambin se ha descrito la presencia en condiciones no infecciosas. La composicin de las inclusiones corresponde generalmente a

Las inclusiones intranucleares y citoplasmticas son agregados de sustancias, normalmente protena. Estas representan sitios de replicacin viral o bacteriana, y en el primer caso corresponden generalmente a protenas de la cpside. Adicionalmente las inclusiones pueden ser relacionadas con

patologas genticas y desordenes metablicos. Las Inclusiones pueden ser clasificadas en acidfilas o basfilas, de acuerdo a su afinidad tintorial. Los cuerpos de inclusin intranucleares se presentan en diversos rganos (hgado, rin, bazo y corazn) y en mamferos se han relacionado a infecciones virales. Ejemplos de infecciones virales inclusiones intranucleares acidfilas son inclusiones intranucleares acidofilas de Crowdy tipo A en infecciones por Herpes simplex virus y Varicella zoster virus e inclusiones de Crowdy tipo B en Polio. Inclusiones intranucleares acidfilas en Salmnidos La interpretacin de la presencia de inclusiones intranucleares en el miocardio en salmnidos debe ser

realizada considerando anlisis complementarios con el fin de considerar como diagnstico diferencial cardiomiopatas primarias e infecciones virales y bacterianas. El historial clnico, uso de PCR especficos para virus y perfiles bioqumicos pueden contribuir a identificar la etiologa particular de cada caso.

Forma de las citoplasmticas

inclusiones

Algunas pueden tener una forma definida, y tener una membrana, pero otras no poseen ninguna de estas caractersticas, lo que si presenta todas son propiedades tintoriales y que se encuentran sin vida, Las inclusiones son estructuras citoplasmticas o nucleares con propiedades tintoriales caractersticas que se forman a partir de los productos metablicos de la clula. Se las considera componentes celulares sin capacidad de movimiento y sin vida. Algunas de ellas, estn rodeadas por una membrana plasmtica, otras no lo estn y se encuentran en la matriz citoplasmtica o nuclear.

PROCEDIMIENTOS Toma demuestra

Taxonmicamente son complejas. Tienen 3 familias: Familia Rickettsiaceae. Familia Anaplasmataceae. Familia Bartonellaceae. Familia Rickettsiaceae. Caractersticas generales.

El momento ideal para la toma de la muestra papanicolau, es cuando la paciente termina de menstruar completamente, ya que el moco que cubre el cuello de la matriz es claro y trasparente, lo que permite visualizar mejor las estructuras, sin embargo puede ser tomado en cualquier dase del ciclo siempre que no haya sangrado debe evitarse tener relaciones sexuales la noche previa, a si como el uso de vulos vaginales. COMO SE REALIZA Mediante un instrumento estril, llamado especuloscopios (especulo) que es introdujo en la vagina y permite abrir delicadamente las paredes de esta, el mdico o la enfermera puede observa el estado general del cuello uterino y tomar las muertas de sus clulas, el procedimiento no demora ms de 1 minuto en el inodoro.

No son ni cocos ni bacilos, ya que son demasiado largos para unos y cortos para otros. Son polimrficos. La mayora son inmviles (no tienen flagelos) y no forman esporas. Tienen una pared con estructura gram -. A pesar de ser gram - no se aconseja la tincin de Gram, sino tinciones de Giemsa, Stamp y Macchiavello. Dimensiones: son muy pequeos, ya que son parsitos intracelulares. Tienen menos

Su caracterstica diferencial es que son de obligado parasitismo intracelular. Ambas estn en el grupo 9. Rickettsias. Toman nombre de un bilogo estadounidense.

de 1 m. Por su pequeo tamao se les tom en un principio por virus. La caracterstica que ms les define es que son parsitos intracelulares. Parasitan clulas de los endotelios de los vasos, produciendo lesiones que provocan hemorragias, manchas cutneas, etc. Las rickettsias utilizan la actividad metablica de la clula y se multiplican en el citoplasma, hasta que provocan su lisis haciendo que estalle. No actan para nada sobre el ncleo, y tampoco influyen en el metabolismo celular.

Se transmiten a travs de un intermediario (artrpodos: garrapatas). Producen enfermedades febriles con tendencia a la cronicidad. Son muy difciles de cultivar, ya que al ser parsitos intracelulares necesitan de cultivos celulares. Un factor esencial es el glutamato, que est presente en el ciclo de Krebs. Esta familia tiene 8 gneros. Algunos son:

resistencia a los agentes fsicos externos (calor, congelacin, desinfectantes, radiacin).

Gnero Rickettsia. Tiene poco inters en animales. R. prowazekii. Causante del tifus exantemtico. R. rickettsii. Causante de las fiebres de las montaas rocosas. R. conori. Causante de la fiebre botonosi. Gnero Coxiella. Se caracterizan por una alta

C. burnetti. Causante de la fiebre Q. Afecta sobre todo a los rumiantes, preferentemente hembras en gestacin. Es un proceso neumnico. La bacteria parasita los monocitos. Es una zoonosis transmisible a los humanos, mediante consumo de leche, saliva, orina y heces. El diagnstico puede ser directo, aunque se usa ms el indirecto mediante tcnicas serolgicas. Son sensibles a las tetraciclinas y las sulfamidas. Todos los tratamientos a agentes parasitarios intracelulares son muy largos y de resultado incierto, por lo que en animales no sale rentable medicarlos. Para la prevencin de la fiebre Q se han hecho ensayos con vacunas

atenuadas, pero los resultados no son claros.

Gnero Ehrlichia. Parasitan leucocitos. E. canis. En perros. E. phagocytophila. En rumiantes. E. equi. En quidos. Gnero Cowdria. C. ruminantium. Es un tropismo tpico de los vasos sanguneos, en especial de la zona cardiaca. Provocan un acumul de lquido en el pericardio, por lo que recibe el nombre de corazn acuoso. Es una infeccin generalizada. Gnero Neorickettsia. N. helmilthoeca. Infecta peces del tipo de los salmones. Familia Anaplasmataceae. Tiene 4 gneros.

Gnero Anaplasia. Comprende las especies ms pequeas de todas. Son parsitos tpicos de los eritrocitos. Producen anaplasmosis (destruccin de parte de la poblacin de clula de la serie roja, lo que provoca una anemia). A. marginales. En rumiantes. A. ovis. Familia Bartonellaceae.

Tiene 2 gneros. Al igual que los anteriores parasitan hemates, pero tiene un mayor y variado equipo enzimtico. Son las nicas que se han podido cultivar en laboratorio, con presencia de sangre. El diagnstico se hace por mtodos indirectos: fijacin del complemento, aglutinacin. Gnero Bartonella. Responsable de la bartonelosis humana. Gnero Grahamella. G. talpae. En topos Chlamydias. (Bedsonias) A diferencia de las rickettsias, las chlamydias son mucho ms sencillas taxonmicamente. Slo tienen una familia, Chlamydiaceae, con un gnero: chlamydia.

Caractersticas generales.

Son bacterias parsitas obligadas. Al igual que las rickettsias fueron consideradas virus. Tienen un alto poder de multiplicacin en el citoplasma de la clula hospedadora. Morfologa: tienen aspecto cocoide. No tienen flagelos, ni forman esporas. Paredes gram -. Tinciones de Giemsa, Stamp y Macchiavello. Carecen de glucopptido, pero tienen una pared poli estratificada.

Lo que tienen en comn con las rickettsias es que ambas son parsitas. Lo que la diferencia es el mecanismo de lesin del organismo hospedador: las rickettsias producen toxinas y endotoxinas, mientras que las chlamydias nunca forman toxinas, sino que hacen dao por su capacidad de multiplicacin, que termina por destruir la clula hospedadora. Provocan enfermedades latentes (el individuo es portador pero la enfermedad no se manifiesta hasta que no se cumplen unas determinadas condiciones, p. ej. aprovecha que est bajo de defensas). Las manifestaciones de las enfermedades son reacciones inflamatorias y alrgicas, tambin pueden provocar abortos. Su cultivo slo es posible en el interior de clulas. La actividad metablica es muy limitada.

Resisten agentes fsicos externos: calor, bajas temperaturas, radiaciones, desinfectantes. Son sensibles a las tetraciclinas y las sulfamidas, aunque su tratamiento en animales no es efectivo porque no resulta rentable. Las chlamydias de origen avcola son las ms virulentas. Adems, no slo afectan a las aves.

C. psittacii. Su hbitat natural es la familia de los sindctilos: cacatas, loros, papagayos. Producen unas conjuntivitis muy serias, y otros tropismos a los que son afines los rganos genitales, adems de psittacosis en humanos. C. trachomatis. Producen ornitosis en las aves domsticas de granja. Lo que diferencia la psittacci de la trachomatis es que la psittacii afecta a aves tropicales,

mientras que la trachomatis afecta a aves domsticas. La principal va de transmisin es a travs de heces: en el intestino son excretadas en grandes cantidades, abandonndolo en forme de heces. Estas heces al perder el agua y desecarse hacen que los microorganismos pasen al ambiente. Como se ve, las chlamydias tambin tienen una marcada tendencia por el intestino. Esto hace que pueda haber portadores de chlamydia intestinal (no enfermos). La inmensa mayora de los quidos son portadores de chlamydias. El hecho de que desarrollen clamidiasis o no depende del potencial de su sistema inmunitario. Las clamidiasis afectan sobre todo al ganado ovino y al equino.

inflamacin que provocan las chlamydias afecta a la fisiologa del saco embrionario y la placenta, de manera que el feto es expulsado.

Vacuno.- Responsables de mamitis. (No slo en bvidos). quidos.- Desarrollan neumonas. Todas las especies son susceptibles de clamidiasis: enteritis, conjuntivitis, artritis, encefalitis; excepto carnvoros y felinos, que parecen ser resistentes a ellas. Produccin de glucgeno

de almacenamiento de carbohid ratos tanto en animales como en las plantas. Cuando existe una disminucin significativa de glucosa en sangre, el glucgeno es degradado por medio de una serie de enzimas para cubrir las necesidades energticas de nuestro organismo. Las glucognesis son enfermedades en donde existen deficiencias congnitas de la mayora de las enzimas relacionadas con el metabolismo del glucgeno, en donde los rganos ms afectados son: el hgado y el msculo esqueltico

Ovino.- Son agente causal del aborto enzotico ovino. La

El glucgeno principal

representa la forma