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Atlas de Microbiologia

Atlas de Microbiologia

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08/20/2013

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PRUEBA DE CATALASAFundamento
 La catalasa es una enzima quedescompone al peróxido dehidrógeno bajo la Fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. Deesta manera las bacterias seprotegen del efecto tóxico delH2O2, que es un producto final delmetabolismo aerobio de los azúcaresen oxígeno y agua, esta enzima essimilar a la estructura de lahemoglobina. La taxonomía de los cocos Grampositivos. Estos se pueden clasificar,en primera instancia, en cuanto asus requerimientos atmosféricos. Así tenemos los cocos Grampositivos anaerobios estrictosconstituidos por los géneros Peptococcus y Peptoestreptococcus. Por otro lado tenemos los cocos Gram positivosaerobios y anaerobios facultativosque están constituidos por la familiaMicrococacceae (génerosStaphylococcus, Micrococcus, Planococcus Stomacoccus) y los géneros Streptococcus yEnterococcus.El género Staphylococcus esaerobio-anaerobio facultativo, por tanto su crecimiento en tioglicolatoserá en toda la extensión del tubo. Requerimientos nutricionales El género Staphylococcus es noexigente en cuanto a susrequerimientos nutricionales, por lo tanto crece en medios de cultivopobres.Excluyendo al género Streptococcusy algunos otros la mayoría de lasbacterias aerobias y anaerobiasfacultativas tienen catalasa. Estaprueba Se utiliza para comprobar lapresencia del enzima catalasa que seencuentra en la mayoría de lasbacterias aerobias y anaerobiasfacultativas que contienencitocromo. La principal excepciónes Streptococcus.Originariamente, esta prueba erautilizada para diferenciar entre lossiguientes géneros:Streptococcus (-)de Micrococcus (+)y/o Staphylococcus (+). Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/oCorynebacterium (+), con lasexcepciones de C.pyogenes yC.haemolyticum, ambos (-) deErysipelothrix (-)
Procedimiento de la prueba
Una prueba de rutina de la catalasaa temperatura ambiente puedehacerse siguiendo dos técnicas:
Método del portaobjetos(recomendado):
 Con el asa de siembra recoger elcentro de una colonia pura de 18-24
 
horas y colocar sobre unportaobjetos limpio de vidrio. Agregar con gotero o pipeta Pasteuruna gota de H
2
O
2
al 30% sobre elmicroorganismo sin mezclarlo con elcultivo.Observar la formación inmediata deburbujas (resultado positivo).Desechar el portaobjetos en unrecipiente con desinfectante.Si se invierte el orden del método(extender la colonia sobre el aguaoxigenada) pueden producirse falsospositivos.
 
Método del tubo de ensayo:
  Agregar 1ml de H
2
O
2
al 3%directamente a un cultivo puro deagar en slant densamente inoculado.Observar la formación inmediata deburbujas (resultado positivo).
Precauciones:
Si se utilizan paraesta prueba cultivos procedentes deagar sangre, se debe tener laprecaución de no retirar algo deagar con el asa al retirar la colonia yaque los eritrocitos del mediocontienen catalasa y su presenciadará un falso resultado positivo.
LA COAGULASA
 La
coagulasa
es una proteínaproducida por variosmicroorganismos que permite laconversióndelfibrinógenoenfibrina.En el laboratorio, se usa para distinguirentre diferentes tiposdeStaphylococcus.Un resultado decoagulasa positivo indica que lamuestra contiene S.aureus Estaproteína también es producidaporYersinia pestis. La coagulasareacciona con laprotrombinaen lasangre. El complejo resultante sellama staphylothrombina, y permiteque la enzima proteasa convierta elfibrinógeno en fibrina. Esto haceque se coagule la sangre.
Prueba de la Coagulasa
se usa paradiferenciar el Staphylococcusaureus produce 2 formas decoagualasa (por ejemplo, coagulasaligada y coagulasa libre). Lacoagulasa ligada también conocidacomo"factor de Clumping ""factor de Clumping "se puededetectar mediante la realización deuna prueba de portaobjetos y lacoagulasa libre con una prueba decoagulasa de tubo.
Prueba de portaobjetos
  Prueba delportaobjetosse haceconjuntamente con un controlnegativo para descartar autoaglutinación. Se ponen 2 gotas desolución salina en el portaobjetosmicroscópico rotulado con unnúmero de muestra, Test (T) ycontrol (C). Las 2 gotas sonemulsionadas con la prueba deorganismo mediante el uso de uncable de lazo, cable recto, o un palode madera. Se pone una gota deplasma (plasma de conejo conanticoagulante(EDTA)
1
 ) en la gotade solución salina inoculadacorrespondiente a la prueba y semezcla bien con un una varilla de
 
madera. Agitar el portaobjeto concuidado unos 10 segundos.Si es positivo: Se podrá observaraglutinación macroscópica en elplasma en los 10 segundos mientrasque no se observara aglutinamientoen la gota de solución salina.Si es negativo: No se observaraaglutinamiento.NOTA: Si la prueba de la coagulasade portaobjetos fuera negativa,debería hacerse una prueba de tubocomo confirmación. Elaglutinamiento en las dos gotas es unindicativo de auto aglutinación y porlo tanto debemos descartar laprueba de tubo.
Prueba del tubo de ensayo
 Coágulos formados por la reacciónde la coagulasa en un tubo deensayo La prueba se utilizaplasmaque hasido inoculado con una colonia destaphylococcal (por ejemplo, con uncoco grampositivocatalasapositivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsiusen 1½ horas. Si es negativo entoncescontinuamos la incubación por unas18 horas.Si sale positivo (por ejemplo, lacolonia problema es S. aureus), elsuero coagulará, dando comoresultado un coágulo (a veces elcoágulo esta tan desarrollado que elliquido se solidifica completamente).Si sale negativo, el plasma permaneceliquido. Un resultado negativopodría indicar que se podría tratardeS. epidermidispero solo con unaspruebas más precisas se puedeconfirmar este hecho, como porEjemplo elAPIo métodos deBBL CRYSTAL.  Lista de staphylococci coagulasapositivo: Staphylococcus aureussubsp. anaerobius, Staphylococcusaureus subsp. Aureus, Staphylococcus delphini, Staphylococcus hyicus,Staphylococcus intermedius,Staphylococcus lutrae,Staphylococcus schleiferi subsp.coagulans. Lista de' 'staphylococci coagulasanegativo de relevanciaclinica: S.saprophyticus,S.cohnii subsp. cohnii, S.cohnii subsp. urealyticum, S.captitus subsp. cap titus,S.warneri, S.hominis, S.epidermidis, S.caprae.

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