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heterotrofos

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06/16/2012

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Fecha emisión:20-09-2000Revisión: 3
PROCEDIMIENTO RECUENTO DEMICROORGANISMOS HETEROTROFOS ENPLACA. METODO STANDARD METHODSFOR EXAMINATION OF WATER ANDWASTEWATER 
Fecha revisión:06-09-2010Sección Microbiologíade Alimentos
PRT-712.02-072
Página 1 de 12
1.
 
OBJETIVO
1.1
 
Conocer el número de microorganismos heterotróficos viables que contiene una muestra deagua.
 
1.2
 
Verificar la calidad bacteriológica del agua de diálisis especificada en el Decreto Supremo Nº 2357/94 del MINSAL.
 2.
 
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
Aplicar este procedimiento a matrices aguas, incluidas las aguas de diálisis que seanrecepcionadas para análisis microbiológico.
 3.
 
FUNDAMENTO
El método de análisis puede ser en placa en profundidad, en superficie o por membranafiltrante. Para recuento en placa en profundidad o superficie se puede utilizar un agar de altacalidad nutritiva como el agar Plate Count o un agar de baja calidad nutritiva como el agar 
2
A que también es aplicable al método de membrana filtrante. Para membrana filtrante serecomienda el agar m-HPC.Los resultados de este análisis permiten para las aguas en general:
 
Medir los cambios durante el tratamiento y distribución
 
Control de piscinasEn cuanto a las aguas de diálisis los resultados permiten:
Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfección.
Determinar el origen de la contaminación durante el proceso de diálisis.
Verificar condiciones óptimas de almacenamiento y transporte del agua utilizada paraalimentar el sistema de diálisis.El Decreto Supremo Nº 2357/94 especifica que la calidad bacteriológica del agua a usar endiálisis " cada centro de diálisis debe realizar un cultivo semestral del agua teniendo comorecuentos máximos aceptables 200 UFC/mL en agua tratada y 2000 UFC/mL del líquido dediálisis post dializador.
4.
 
REFERENCIAS
4.1
 
Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 21thEd 2005 pag. 9-34 a 9-38.
 
 
Fecha emisión:20-09-2000Revisión: 3
PROCEDIMIENTO RECUENTO DEMICROORGANISMOS HETEROTROFOS ENPLACA. METODO STANDARD METHODSFOR EXAMINATION OF WATER ANDWASTEWATER 
Fecha revisión:06-09-2010Sección Microbiologíade Alimentos
PRT-712.02-072
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5.
 
TERMINOLOGÍA
5.1
 
Heterotroficos: Organismos que se alimentan de sustancias orgánicas.
 6.
 
MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS
6.1
 
MATERIALES Y EQUIPOS
 
6.1.1
 
Placas Petri estériles de vidrio o de plástico de 90 -100 mm de diámetro.
 
6.1.2
 
Tubos de 16 x 160 mm marcados en 9 y 10 mL, que contengan 9 mL de solucióndiluyente estéril.6.1.3
 
Pipetas bacteriológicas estériles de 1 mL
.
6.1.4
 
Incubadora regulada a 25 ± 1°C (rango 20°C a 28°C) o incubadora a 35°C ± 1°C
 
6.1.5
 
Baño de agua termorregulado a 47 ºC ± 2 º C.
 
6.1.6
 
Agitador de tubos
 
6.1.7
 
Contador de colonias, tipo Quebec de campo oscuro o equivalente.6.2
 
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS
6.2.1
 
AGUA RECOMENDADA PARA USO EN MICROBIOLOGIA
 
Para preparar medios de cultivo, reactivos y blancos de dilución sólo se debe usar aguaque ha sido tratada por desionizador, para dejar libre de trazas de metales disueltos ycomponentes bactericidas e inhibitorios.6.2.2
 
DILUYENTE: Agua peptonada estéril 0.1 %, (Straka and Stokes, 1957) pH 7± 0.1 oagua buffer fosfato, distribuida en volúmenes de 9 ± 0,2 mL en tubo tapa rosca marcadoen 9 y 10 mL o en frascos con 99 ± 2 mL.
 
6.2.3
 
AGAR PARA RECUENTO EN PLACA: Es recomendable usar un agar pobre ennutrientes como el agar R 
2
A pH 7.2 con el cual se obtienen recuentos mas altos que conagar Plate Count. En caso de no contar con este agar se puede usar Agar Plate Count Agar o Standard Methods Agar estéril, pH 7±0.1, distribuido en frasco Schott con 200 mL. Laformulación de Merck código 1.00416 es idéntica a la descrita en Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 21thEd 2005.
 
(Fórmula agar R 
2
A: extracto de levadura 0,5 g, proteosa peptona 0,5 g, casamino ácido0,5 g, glucosa 0,5 g, almidón soluble 0,5 g, dipotasio hidrógeno fosfato 0,3 g, sulfato demagnesio heptahidrato 0,05 g, piruvato de sodio 0,3 g, agar 15 g, agua 1 L pH 7.2,esterilizar a 121 ºC por 15 minutos).
 
 
Fecha emisión:20-09-2000Revisión: 3
PROCEDIMIENTO RECUENTO DEMICROORGANISMOS HETEROTROFOS ENPLACA. METODO STANDARD METHODSFOR EXAMINATION OF WATER ANDWASTEWATER 
Fecha revisión:06-09-2010Sección Microbiologíade Alimentos
PRT-712.02-072
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7.
 
DESARROLLO
7.1
 
PROCEDIMIENTO RECUENTO EN PLACA EN PROFUNDIDAD
 
7.1.1
 
Recibir en el Laboratorio de Recuentos, las muestras enumeradas en el Laboratorio deRecepción de Muestras de esta sección. Estas muestras son procesadas según el PRT-712.01-001 de "Procedimiento de Recepción de las muestras" y el PRT-712.01-002 de"Procedimiento de procesamiento de muestras de alimentos y agua".
 
7.1.2
 
Es importante que una vez recolectada la muestra el análisis se inicie lo más pronto posible para minimizar los cambios en la población bacteriana.
 
7.1.3
 
Se recomienda que el tiempo máximo entre la recolección de muestras y el análisis nosupere las 8 h (tiempo máximo de transporte 6 h y tiempo máximo para el proceso deanálisis 2 h). Si no se puede analizar dentro de las 8 h mantener refrigerado a < 4ºC sincongelar. En estas condiciones el tiempo máximo entre la recolección de muestra y elanálisis no debe superar las 24 h.
 
7.1.4
 
Anotar en cuaderno de inscripción el número que identifica las muestras a sembrar.
 
7.1.5
 
Verificar que el volumen de cada tubo de dilución marcado, contengan 9 mL.
 
7.1.6
 
Agitar la muestra 25 veces en arco de 30 cm por 7 segundos o en vórtex por 15segundos.
 
7.1.7
 
Preparar diluciones decimales de 10‾ 1, 10‾², 10 ‾³, etc. a partir de la muestra líquidadirecta 1 mL a un tubo con 9 mL de diluyente o 1 mL en 99 mL de diluyente (dil 10‾²).Agitar y proceder de igual forma para las diluciones siguientes.
 
7.1.8
 
Identificar las placas Petri con lápiz azul las que se incubarán a temperatura entre elrango 20 ºC y 28° por 5 a 7 días o a 35ºC por 48 h, dependiendo del propósito delanálisis. Para el monitoreo de los cambios de la calidad del agua, los más altos recuentosserán obtenidos de incubaciones entre 5 a 7 días y entre 20 a 28 ºC. Colocar, número dela muestra y dilución a cada una de ellas.
 
7.1.9
 
Sembrar 1 mL por duplicado de la muestra directa y cada dilución en placas estériles previamente identificadas. Sembrar como mínimo dos diluciones consecutivas.
 
7.1.10
 
También se pude sembrar 1 mL en duplicado de la muestra directa y 0,1 mL enduplicado de la muestra directa. A continuación diluir 10‾² tomando 1 mL de la muestradirecta en 99 mL de diluyente y sembrar de esta dilución 1 mL en duplicado y 0,1 mLen duplicado. Sembrar como mínimo 2 diluciones consecutivas.
 

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