1.

3 Mecanismos de absorcin de iones por las clulas de la raz Transporte distancia a Transporte corta distancia floema) a larga (xilema y

1.3.1 Transporte a corta distancia Inicio de Pgina Las sales del suelo no pueden entrar a la clula por difusin simple, pues como la membrana es semipermeable no permite, por definicin, que la atraviesen los solutos, sino slo los solventes; si las sales pudieran pasar por la membrana, atravesndola con el flujo del agua, al cesar la absorcin, por ejemplo en la noche, saldran de la clula segn la ley general de difusin, de la zona de mayor a la de menor concentracin, ya que en la vacuola hay una solucin mucho ms concentrada que en el suelo. Por otra parte, se ha comprobado experimentalmente que las sales no ingresan en proporcin al agua absorbida; si as fuese, una planta en clima caluroso absorbera ms nutrientes que en clima fresco. Al hablar de la absorcin de nutrientes debe distinguirse, desde luego, entre la de molculas y la de iones. La planta toma sus nutrientes minerales en forma inica, pero eventualmente absorbe molculas, sea por la hoja o la raz; este proceso es importante en la aplicacin de ciertos fertilizantes y pesticidas de uso general. El tamao de la molcula, que hasta cierto punto se correlaciona con el peso molecular, afecta la penetracin; las molculas muy grandes tienen muy poca posibilidad de entrar a la clula, pero aun en el caso de molculas pequeas tienen mayor penetracin, en igualdad de coeficiente de particin. Las sales minerales que estn disponibles con mayor facilidad para las races son las que se encuentran disueltas en la solucin del suelo, si bien su concentracin suele ser baja. A excepcin del carbono, las plantas terrestres toman los componentes esenciales de su biomasa del suelo. As, macronutrientes y micronutrientes son incorporados desde la solucin salina del suelo hasta el interior de las clulas, donde son almacenados, metabolizados o

transportados a otras clulas, tejidos u rganos. Una caracterstica que comparten todas las clulas vivas es su capacidad de mantener en su interior iones y molculas notablemente fuera del equilibrio. En gran medida, esa propiedad se debe a las caractersticas estructurales y funcionales de la membrana plasmtica, plasmalema en las clulas vegetales. El plasmalema es algo ms que una doble capa lipdica compuesta por distintos tipos de fosfolpidos y esteroles; contiene distintos tipos de protenas, algunas de ellas con una marcada actividad enzimtica, a travs de las cuales existe un continuo trfico de iones que permite a las clulas incorporar y acumular nutrientes, excluir iones o sustancias txicas, o intervenir en distintas respuestas a estmulos hormonales o medioambientales. No todos los iones se transportan a travs del plasmalema de la misma forma o a travs del mismo tipo de protena. Algunos son transportados y acumulados en condiciones cercanas al equilibrio, otros se transportan y se acumulan muy por encima o muy por debajo del mismo. En el primer caso se habla de transporte pasivo o difusivo; en el segundo, de transporte activo. Un ion se mueve de forma pasiva si lo hace a favor de la fuerza fsica que acta sobre l, denominada fuerza ion motriz. Un ion es transportado de forma activa si su movimiento se realiza en contra de dicha fuerza, para lo cual las clulas vivas emplean energa metablica. Saber calcular la fuerza ion motriz es imprescindible para distinguir ambos tipos de transporte. El transporte de iones, ya sea pasivo o activo, requiere energa, fsica en el primer caso y metablica en el segundo. En una clula, la fuente de energa es el metabolismo, que produce energa qumica y poder reductor. La energa metablica se transforma en energa til para el transporte de iones en las membranas a travs de la actividad de las bombas primarias. Estas bombas son protenas de membrana que mueven iones (masa y carga) en contra de su gradiente de potencial electroqumico, utilizando energa metablica y generando gradientes tanto de concentracin como elctricos. El transporte de iones que tiene lugar a travs de las bombas primarias se denomina transporte primario. Debido a la capacidad de las bombas primarias para generar diferencias de potencial elctrico al tiempo que catalizan la hidrlisis del ATP, las bombas primarias reciben el nombre de electroenzimas.

Las clulas vegetales no tienen bombas Na+-K+ La bomba primaria del plasmalema es una bomba de protones que los saca del citoplasma y los vierte al exterior consumiendo ATP (ATP fosfohidrolasa de protones o H (Fig.). La energa metablica, en el caso de las membranas vegetales, se acumula en forma de asimetra en la concentracin de H+ y como diferencia de potencial elctrico entre el citoplasma y el exterior, es decir, como gradiente de potencial electroqumico de protones o fuerza W motriz:

En el caso de las clulas vegetales, el componente elctrico es mucho ms importante que la asimetra de concentracin por dos razones. En primer lugar, en el funcionamiento de la H no existe un flujo aso ciado de otro ion que compense, ni siquiera parcialmente como en clulas animales, el dficit de carga positiva del citoplasma. Esto hace que el potencial de membrana de las clulas vegetales sea muy negativo, entre 160 y -250 mV segn la especie. En segundo lugar, la asimetra de protones que genera la bomba se disipa parcialmente debido a la capacidad amortiguadora del me dio externo, por un lado, y a los mecanismos de homeostasis del pH del citoplasma, por otro (Fig.). En la literatura bioqumica, las H+ ATPasa del plasmalema se denominan de tipo P porque forman una unin covalente con el fosfato, proveniente del ATP, durante cada ciclo de bombeo de W al exterior. Debido a la particular unin con el Pi durante la catlisis, las H+-ATPasas del plasmalema son sensibles a la presencia de ortovanadato, ya que este ion bloqueara el lugar de unin para el fosfato. En vesculas aisladas del plasmalema, la presencia de concentraciones de este ion del orden micromolar (mM) inhibe la actividad de

Figura. Bomba Na de clulas animales y bomba de H (H en clulas vegetales. En las clulas animales la salida de carga positiva asociada al Na se compensa parcialmente por la entrada de K En clulas vegetales, el bombeo de H no est acoplado al flujo de ningn otro ion.

Figura. Flujo de protones y regulacin del pH citoplasmtico de una clula vegetal. 1) H de tipo P, bomba primaria que transforma energa metablica (ATP) en fuerza protn motriz (A en el plasmalema. 2) H ATPasa, tipo V, del tonoplasto. 3) Pirofosfatasa. 4) Sistema de cotransporte (simporte). 5) Sistema de transporte invertido o antiporte.

6) Canal aninico permeable al malato. 7)Fosfoenolpiruvato carboxilasa. 8) Enzima mlica. La bomba, si bien in vivo la inhibicin es mucho ms pequea debido probablemente a la escasa permeabilidad de las membranas a este ion. Por esta razn, cuando se pretende una inhibicin de la bomba se usan inhibidores de la respiracin, cianuro o azida por ejemplo, que cortan el suministro de ATP a la bomba, incluso en clulas foto- sintticas iluminadas. Es importante destacar que la actividad de la H -ATPasa y, en consecuencia, el Em de las clulas vegetales, sean fotosintticas o no, se mantiene en oscuridad; por tanto, igual que en las clulas animales, el ATP que usan proviene mayoritariamente del metabolismo respiratorio. Adems de la H -ATPasa, las plantas poseen en el plasmalema un segundo tipo de bomba primaria. Se trata de una Ca -H ATPasa, que saca Ca del citoplasma al tiempo que incorpora H en un proceso igualmente dependiente de ATP. Esta bomba es tambin del tipo P ya que el bombeo de Ca requiere la formacin de un intermediario fosfatado durante la catlisis. La contribucin de esta bomba a la acumulacin de energa en el plasmalema es muy pequea ya que, adems de ser menos electrognica que la H ATPasa, es mucho menos activa que sta. Su funcin es evacuar Ca del citoplasma, para mantener su concentracin en tomo a 0.1 MM en este compartimento celular. El transporte secundario consume la energa acumulada en las membranas por las bombas primarias. El consumo de energa debido a la actividad del transporte secundario se refleja en la despolarizacin de la membrana. A diferencia del transporte primario, que genera una diferencia de potencial elctrico y es, por tanto, electro gnico, el transporte secundario disipa la diferencia de potencial acumulada en la membrana y es, por tanto, electrofortico. El transporte secundario de iones se establece a travs de dos tipos de protenas de membraa: canales inicos, en el caso del transporte pasivo, y transportadores (carriers), en el caso del transporte activo. Los canales son protenas que funcionan como poros selectivos en la membrana. Su distribucin es prctica mente universal en las membranas de todas las clulas y orgnulos celulares. En plantas se han descrito hasta la fecha distintos tipos de canales para K para Ca y para CL . Recientemente se han descubierto canales para el agua, denominados

acuaporinas, especialmente abundantes en membranas sometidas a un flujo grande de agua. Los canales inicos no slo aparecen en el plasmalema, sino que tambin estn presentes en el tonoplasto, retculo endoplsmico, mitocondria, membrana interna del cloroplasto y membrana tilacoidal. Un canal de K tpico estara constituido por cuatro subunidades de entre 65 y 100 kDa que formaran el poro y que contendran un filtro de selectividad y sensores a distintos tipos de estmulos. A finales de los aos setenta, dos investigadores ale manes, Neher y Sakmann, usaron una tcnica nueva para el estudio de los flujos inicos en las membranas. Se trataba de, en vez de insertar electrodos muy finos dentro de las clulas, adherir un electrodo de punta roma a la superficie de stas. La tcnica se denomin patch-clamp y su aplicacin a clulas vegetales requie re disgregar las clulas del tejido y eliminar la pared celular mediante un tratamiento con diversas enzimas celulolticas. Se obtiene entonces una clula vegetal sin pared que se denomina protoplasto. La adhesin firme del electrodo a la superficie del protoplasto se llama sellado y se detecta por la alta resistencia que presenta al paso de la corriente elctrica, que se sita alrededor de lO ohmios ( ). Mediante esta tcnica es posible medir la corriente asociada al flujo de iones a travs de la pequea superficie que queda sellada por el electrodo y que se debe a la actividad de unos pocos canales. Tambin es posible, haciendo un agujero en la membrana del protoplasto, registrar el paso de la corriente a travs de todo el plasmalema (Fig). Los experimentos de patch-clamp revelan que los canales estn abrindose y cerrndose continuamente a una velocidad altsima (Fig.). A esta propiedad de abrirse y cerrarse se denomina gating y la probabilidad de apertura refleja la actividad del canal. El flujo de iones a travs de los canales es, pues, un proceso discontinuo. La cantidad de iones que fluyen a travs de un canal cuando est abierto, est determinada por su conductancia y por la magnitud de la fuerza ion motriz.

Figura. Esquema de la configuracin de la pipeta y del protoplasto en un experimento de patch-clamp. La pipeta debe quedar firmemente adherida al exterior de la clula (sellado) tras lo cual, succionando o tirando, se puede acceder al interior de la clula (A) o retirar una pequea porcin del plasmalema (B). En el primer caso se registra la actividad de los sistemas de transporte de toda la clula y, en el segundo, la actividad de los que se encuentran incluidos en el pequeo trozo que se retira. La representacin grfica de la intensidad de corriente que atraviesa los canales en funcin del voltaje que se aplica da lugar a las denominadas curvas I-V (intensidad voltaje), cuya pendiente es una medida de la conductancia del canal (Fig.). Asumiendo que el flujo de iones a travs de la doble capa lipdica de las membranas es prcticamente nulo, la permeabilidad de una membrana para un determinado ion es un valor integrado del nmero de canales, su conductancia y su actividad (gating). Tanto en el plasmalema como en el tonoplasto, los canales ms abundantes son los de K+ A diferencia de los canales de K+ de clulas animales, los de las plantas son permeables a un gran nmero de cationes monovalentes. Por ejemplo, en Nitella, en orden decreciente, los canales de K son permeables a Rb+ NH Na4+ Li+ y Cs+.

La actividad de los canales es sensible a una serie de estmulos ambientales o fisiolgicos. En el plasmalema existen canales aninicos que responden a la turgencia y a la hiperpolarizacin, de forma que cuando la membrana sobrepasa un determinado valor negativo de Em o la turgencia es demasiado alta, los canales aninicos se abren, dejan escapar una cierta cantidad de CI- que despolariza la membrana, se libera K y, como consecuencia, se elimina agua. La concentracin de Ca2+ en el citoplasma es determinante para la regulacin de los canales tanto del plasmalema como del tonoplasto. Un incremento en la concentracin de Ca2+ libre en el cito plasma de las clulas oclusivas, como respuesta a oscuridad o al ABA, induce el cierre de canales de entrada de K+ y la apertura de canales de salida de K+ y de canales aninicos, lo que determina la prdida de turgencia de las clulas oclusivas y, en consecuencia, el cierre del estoma. El mximo de Ca2+ que induce el cierre de los estomas puede estar ocasionado por la activacin de protenas G, inositol 1 ,4,5-trifosfato (IP3) o ABA, ya que inducen la entrada de Ca2+ en el citoplasma y, en el caso del IP3 la liberacin de Ca2+ de la vacuola (vanse Captulos 18 y 22). Los iones alcanzan la zona de absorcin de la raz por difusin a travs de la solucin salina del suelo, son arrastrados por el movimiento del agua hacia la raz o entran en contacto con las zonas de absoicin a medida que la raz creee. Los nutrientes minerales se distribuyen por toda la planta a travs del xilema. impulsados por la corriente ascendente de agua que genera el (lujo de transpiracin (vase Captulo 3). As. tic la misma forma que el agua debe tntnsportarse radialmente en la raz para alcanzar el xilema. los iones siguen un camino similar. Al igual que el agua. el transporte radial de iones por la raz tiene lugar a travs del apoplasto y del simplasto .

Figura. Esquema de las vas simplstica y apoplstica para la incorporacin de nutrientes a travs de la raz. En la primera, los iones son incorporados a travs de los pelos radicales u otras clulas de la epidermis y transportados clula a clula hasta los elementos conductores del xilema. La va apoplstica contempla la posibilidad de un transporte extracelular de los iones hasta la endodermis, donde la existencia de una banda impermeable en el apoplasto, la banda de Caspari, obliga al paso a travs del plasmalema. Una vez en el periciclo, los iones pueden seguir la va extracelular hasta los elementos conductores del xilema. Las clulas vegetales estn separadas por la pared celular, que forma una matriz porosa continua denomina da espacio libre aparente, espacio periplsmico o apoplasto. Agua, iones y molculas de pequeo tamao pueden difundir libremente a travs del apoplasto, de forma que, en teora, un ion puede viajar radialmente en la raz por esta va (Fig.). A lo largo de este recorrido, los iones pueden ser absorbidos por las clulas tanto de la epidermis como del crtex. La existencia de la banda de Caspari en las clulas de la endodermis supone una barrera infranqueable en el camino hacia el xilema: tanto agua como nutrientes deben obligatoria mente atravesar el plasmalema de las clulas que componen la endodermis. La permeabilidad, selectividad y afinidad de los canales y transportadores localizados en el plasmalema de las clulas de la endodermis determinan, en ltima instancia, qu solutos y a qu velocidad se incorporan o se liberan.

Otra va posible para la entrada de iones es la sim- plstica (Fig.). En este caso, los iones son primero incorporados a las clulas de la epidermis o, incluso, del crtex y luego son transportados, clula a clula, a travs del crtex, la endodermis y el periciclo hasta el xilema. El transporte de una clula a otra incluira el paso a travs del plasmalema, la pared celular, la lmina media que comparten ambas clulas o, de forma alternativa, los iones pueden transportarse de una clula a otra a travs de los plasmodesmos, que son conexiones tubulares (de 20 a 60 nm de dimetro) entre clulas, que atraviesan la pared celular y la lmina media y que ponen en contacto los citoplasmas de dos clulas adyacentes en la mayora de las plantas. Dentro de los plasmodesmos hay otro tubo que parece estar ocluido, de nominado desmotbulo, formado por membranas del retculo endoplsmico, que se extendera as de una clula a otra. La densidad de plasmodesmos es muy alta, unos 15 por im y, cuantitativamente, parecen ser la va principal para el transporte transcelular de agua e iones. La existencia de micorrizas confiere a las plantas cierta ventaja para la absorcin y el transporte de iones. En primer lugar, los sistemas de transporte del hongo tienen, con frecuencia, una mayor afinidad para determinados iones. En tal caso, una plan ta con micorrizas puede extraer del suelo algunos nutrientes a concentraciones ms bajas de lo que sera capaz una raz sin ellas. Tal es el caso del fosfato. En segundo lugar, las micorrizas representan una considerable extensin de la zona de absorcin, que no quedara ya reducida a la porcin subapical, con pelos radiculares, de la raz. Por ltimo, la distribucin intrarradical de las hifas del hongo, especialmente en el caso de las endomicorrizas, proporciona una va rpida de trans porte de agua e iones hasta el xilema como alternativa a la simplstica y la apoplstica. Inicio de Pgina 1.3.2 Transporte a larga distancia

Transporte a travs del Transporte por el floema xilema Transporte lateral Circulacin

1.3.2.1 Transporte a travs del xilema Los estudios realizados por Scout y Hoagland (1939), en los que se utilizo potasio radioactivo para que la planta lo absorbiera y luego observar a que sectores de la planta se haba trasladado y a travs de que tejido, se demostr claramente como el potasio es transportado a travs del xilema en direccin ascendente. Los iones son transportados disueltos en el flujo de agua producido cuando la planta transpira, aunque la movilidad de los iones pueda estar fuertemente influenciada por fuerzas de adhesin a las paredes de los vasos, o por gradientes de potencial entre sectores internos del sistema de flujo, se considera que el transporte de iones es pasivo a la corriente transpiratoria. Por otro lado cuando en plntulas la transpiracin es insuficiente para producir el flujo de agua, y cuando en las plantas se interrumpe la transpiracin, los solutos son transportados con direccin a los rganos de asimilacin, de aqu parte la idea de que la transpiracin no es esencial para el transporte de iones. Sin embargo Lophusinsky observo que cuando se incrementa la tasa transpiratoria, se incrementa la absorcin y el transporte de iones, aunque el flujo de nutrientes no incrementa de la misma forma que el flujo de el agua. Aun no se a podido explicar esta respuesta; no se sabe si solamente se debe a que aumenta el arrastre del solvente, o si se crea un gradiente de potencial entre el suelo y la estela, que incrementara la difusin de solutos al interior de la planta. Inicio de Pgina Transporte a larga distancia

1.3.2.2 Transporte lateral

En el experimento de Scout y Hoagland (1939) se observo un movimiento lateral de iones entre el xilema y el floema a travs del cambium, segn Biddulph (1959) esto se produce debido a la acumulacin de iones en las clulas de el cambium, obstruye el arrastre pasivo de iones en el xilema, arrastrando los iones a travs de el cambium, si hay diferencia de concentraciones entre el floema y el cambium, hay flujo de iones, mientras que si no hay diferencia, no se produce el flujo. Inicio de Pgina Transporte a larga distancia

1.3.2.3 Transporte por el floema Estudios con marcadores radioactivos, muestran como el transporte descendente de iones es realizado a travs del floema, y tambin un transporte ascendente aunque muy poco. Biddulph y Markle (1944) estudiaron la procedencia de estos iones y concluyeron que los iones que son movilizados a travs del floema no tienen relacin la absorcin de la raz, sino que proceden de las hojas que movilizan los nutrientes para ser reutilizados por hojas jvenes, inmediatamente antes de que comiencen a caer.

Inicio de Pgina Transporte a larga distancia 1.3.2.4 Circulacin Generalmente los iones bsicamente se movilizan de manera ascendente por el xilema (los provenientes de la absorcin) y en menor medida por el floema (los provenientes de las hojas viejas), descienden por el floema (iones que salen de las hojas), y su movimiento lateral (entre xilema y floema) a travs del cambium. Esta circulacin como patrn general de la forma como los nutrientes circulan en la planta, esta sustentada en los resultados obtenidos durante dcadas de experimentacin, lo que ha contribuido a establecer esta teora como un principio natural y general en las plantas 1.4 Toma de nutrientes por las hojas y otras estructuras areas Los nutrientes generalmente se aplican al suelo para ser absorbidos por la raz, pero la planta tambin lo hace por la hoja lo que tiene ciertas ventajas: economa, para evitar algn factor edfico, para tener una respuesta ms rpida, etctera, Ej. cuando la deficiencia del suelo en N o P es muy grande, no puede darse la cantidad total del elemento en aspersin foliar, pues resultara una solucin con excesiva presin osmtica y provocara efectos nocivos; pero en concentraciones menores y adiciones parciales de N, P y K pueden darse. La entrada de los fertilizantes en aspersin foliar ocurre a travs de los estomas y la cutcula, pero se discute cul camino es ms importante. Un factor importante es el ngulo de contacto con la solucin aplicada y la superficie mojada; en cambio, no juega papel importante la adicin de

emulsionantes o humectantes, a diferencia de lo que ocurre con la entrada de molculas de pesticidas. En general, las hojas jvenes absorben mejor que las viejas. El N de la urea es absorbido y transportado rpidamente. Aunque sta es una aspersin muy usada, se conoce poco de sus mecanismos.El transporte de los iones absorbidos foliarmente no se hace por el xilema sino por el floema. Respecto a la respuesta de los cultivos con aspersin foliar; en pia, es tan efectiva como la aplicacin al suelo. La caa de azcar absorbe bien la urea, P y sacarosa. En rboles frutales vara la reaccin: en ctricos, las aplicaciones de urea, Mg y oligoelementos son muy efectivas: en manzano son eficaces, pero no por igual en todas las variedades; en perales y drupceos o frutos de hueso, la aplicacin de urea es inefectiva, sin conocerse la causa. En los frutales no se puede aplicar potasio, pues habra que aspersar con soluciones muy concentradas para dar la cantidad requerida. En hortalizas y otros cultivos se evitan deficiencias de Ca y Mn; los elementos N, P y K pueden darse, pero no parece ser ventajoso con respecto a la aplicacin al suelo; sin embargo, la aspersin foliar es til si se aplica al empezar la floracin o fructificacin.