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06/19/2012

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Universidad de ChilePrograma Académico de BachilleratoBiología C
 Avance Tarea n° 3:
Entrevista a Científicos Destacados.
 
Integrantes
Rafael Hauge A.- Javiera Hernández C.- Daniela Hernández C. - Leonardo Hernández E. - Dania Hernández Q.
Personaje seleccionado
Dr. Kary Banks MullisNació el 28 de diciembre del año 1944 en Lenoir, Carolina del Norte, EE.UU. En 1966 obtuvo la Licenciatura enCiencias en Química en
Georgia Institute of Technology 
; posteriormente en 1972 obtuvo el grado de Ph.D. enBioquímica en
University of California 
, Berkeley, en la cual se desempeñaría como conferencista hasta 1973.Seguidamente desarrolló diversos estudios de postgrado en áreas médica y farmacéutica en otrasuniversidades de EE.UU. En 1979, se une a
Cetus Corporation 
en Emeryville, California como químicoespecialista en DNA, donde desarrolló la técnica biotecnológica
Polymerase Chain Reaction 
(PCR), por la cualfue galardonado con el Premio Nobel en 1993. En la actualidad es un connotado científico que realizaconsejerías a diversas compañías junto al desarrollo investigaciones y técnicas biotecnológicas orientadas alcampo Inmunológico (Ultermune), entre otros. Cabe mencionar, que ha manifestado su oposición con respectovarios postulados científicos actuales, como por ejemplo aquel que dice que el VIH produce SIDA.
Contexto histórico-geográfico.
La biología molecular se consolida como disciplina independiente y de gran desarrollo gracias al fértil, y nomenos controversial, trabajo de muchos investigadores. Desde los trabajos de Mendel en 1865 hacia adelantese han materializado un gran cúmulo de experimentos y observaciones que permitieron establecer, luego de laSegunda Guerra Mundial, que el material hereditario lo constituyen los ácidos nucleicos. Consecuentemente, elinterés por conocer las vías metabólicas de expresión, regulación, infectividad y otros mecanismos fisiológicoslograron establecer las bases de las técnicas biotecnológicas actuales. En particular, el desarrollo en el área deaislamiento, clonación, hibridación y secuenciación de genes, y de macromoléculas asociadas, desde ladécada del 7
0’
, conforman el antecedente más directo que permite comprender el desarrollo de la técnica deamplificación de DNA
Polymerase Chain Reaction 
(PCR), publicada por el Dr. Kary B. Mullis en 1983. Dentrode estos trabajos es de suma importancia mencionar: en 1955 Kornberg, purificó y caracterizó la enzima DNApolimerasa I de
E. coli 
y, a
mediados de los años 70’, Sanger y colaboradores idearon un método de
secuenciación de DNA mediante síntesis enzimática. Ambos trabajos, en suma a la gran cantidad deinvestigaciones en biología molecular, permitieron concebir la técnica de PCR.
Contribución científica del personaje
En particular, se destaca la creación de la técnica de Amplificación de DNA,
Polymerase Chain Reaction 
 (PCR) publicada en 1983, la cual se define como la amplificación
in vitro 
de un segmento diana de DNAflanqueado por oligonucleótidos específicos (secuencias cortas de pares de bases que operan como cebador)gracias a la actividad catalítica de una enzima polimerasa termoestable. El proceso se puede comprender entres pasos, los cuales se desarrollan en función de las variaciones de temperatura: estando la solución a 95º C,
 
Prof. Coord. : Enrique CastellónSección C-1. Grupo 4Lunes 4 de Junio de 2012
 
se provoca la desnaturalización del DNA, lo que implica, la separación de las hebras; seguidamente y graciasal descenso de temperatura a unos 45º C ocurre el Alineamiento de los cebadores con la secuencia moldeespecífica; para luego, a unos 72ºC ejecutar la Extensión de la longitud de los cebadores mediante la adición denucleótidos libres por acción de polimerasa (Rodríguez, 2004). Este procedimiento ocurre de manera cíclica,generando 2
n
copias del segmento de DNA diana (donde n equivale al número de ciclos) al cabo de unas horas.Anteriormente, el análisis de secuencias nucleotídicas especificas resultaba ser un proceso lento y engorroso,dado que la obtención de productos génicos se basaba en la síntesis bacteriana a partir de la inserción dematerial hereditario foráneo, lo que implicaba el desarrollo y mantención de los cultivos y la purificación de losproductos. Por otra parte no todas las muestras de DNA podían ser sometidas a estos procedimientos; porejemplo, muestras de muy baja calidad en cuanto a conservación o aquellas de las que se dispone muy pocacantidad de materia. Gracias a la herramienta PCR bastan microgramos de la muestra para realizar suamplificación. Esta técnica es considerada una de los inventos más importantes en el área técnica de labiología molecular, y en general de la biología, dado que permite la obtención de billones de copias de unsegmento especifico de DNA en horas, con un alto grado fidelidad y sensibilidad. No obstante, ¿por qué sequerrían billones de copias de un segmento de DNA? Dado lo complejo que resulta obtener una moléculaíntegra de DNA de un tejido, contar con muchas copias para su tratamiento abre muchísimas puertas al campodel estudio de los genes (Mullis, 1990). De ahí que existan múltiples aplicaciones de esta técnica, tales como:diagnóstico de enfermedades oncológicas, hereditarias, infecciosas; desarrollo de la investigación bio-antropológica a partir de muestras antiguas; peritaje forense mediante muestras en muy baja cantidad;desarrollo del programa Genoma Humano, y diversas aplicaciones industriales, entre otras (Rodríguez, 2004).
Experimentos clave que le permitieron hacer su contribución
Mullis fue contratado por Cetus para sintetizar oligonucleótidos de prueba. En este contexto, su interés recae enel desarrollo de una técnica que determine fácilmente la identidad de un nucleótido en una posición dada dentrode la molécula de DNA (Mullis, 1990). Tal como lo relata Mullis, la concepción del procedimiento de PCRocurrió en un viaje por la carretera, no obstante, la idea germinal consistió en modificar la técnica desecuenciación de DNA didesoxi propuesta por Sanger. Esta técnica consiste, básicamente, en la síntesis de
una secuencia de nucleótidos didesoxi (ddNTP’s) por acción de una enzima polimerasa, a partir de clones de
una molécula de DNA monocatenaria que sirve de molde, para la cual es necesario añadir un oligonucleótidoespecifico. Mullis, asume no utilizar clones de moléculas dado que su objetivo era que los productos de un ciclode síntesis se convirtieran, al siguiente ciclo, en hebras molde.Otro experimento a considerar fue en respuesta a la pregunta ¿Cómo mejorar la técnica PCR? Mullis, realizópruebas comparativas de eficiencia, rendimiento, sensibilidad y fidelidad de dos enzimas DNA polimerasa:
Klenow 
y
Taq 
; la primera se obtiene de
E.coli 
, mientras que la segunda es aislada de una bacteria termófiladenominada
Thermus aquiaticus 
. La comparación de bandas de productos de DNA mediante técnicas comoElectroforesis, permitieron avalar la efectividad de
Taq DNA polymerase 
, puesto que, dado su resistencia a lasaltas temperaturas, es capaz de replicar con mayor fidelidad y sensibilidad fragmentos de DNA que la enzimaKlenow, y dado que no se inactiva a las altas temperaturas, es necesario añadirla sólo al inicio de la operación,de manera tal que, en conjunto con la automatización de los ciclos de temperatura, el proceso de amplificaciónmediante PCR se hace mucho más simple y eficiente (Mullis,1988) .

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