BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediacin Monitoreo Control de la ambiental polucin

AGROPECUARIO

Rendimiento de Calidad de cosechas alimentos Salud animal

APLICACIONES UTILES Diagnstico

Vacunas

MEDICINA

Teraputica

Biosensores Bioprocesos

Cultivo de clulas y tejidos Ingeniera gentica Anticuerpos monoclonales

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Ingeniera de protenas

Bioqumica
Ingeniera Bioqumica Microbiologa

Biologa Celular
Inmunologa

CONOCIMIENTO Computacin CIENTIFICO

Gentica Fisiologa

Biologa Molecular

Nos encontramos frente a una nueva Revolucin Industrial llamada Biotecnologa, no basada en hierro y acero sino en microbios que, en manos de cientficos, se convierten en minsculas fbricas para producir frmacos, compuestos qumicos industriales, combustibles o alimentos.

El prefijo BIO se refiere a bacterias, levaduras y otras clulas vivas, as como a componentes de estas clulas.
La TECNOLOGIA consiste en relucientes depsitos de acero, llenos de microbios, conectados a sus fuentes de alimentacin y oxgeno mediante una intrincada red de vlvulas que se cierran y abren segn los ritmos que marca una computadora.

DEFINICION

Segn la Organizacin de Cooperacin y Desarrollo Econmicos:

Es la aplicacin de los principios cientficos y de la ingeniera al procesamiento de materiales por agentes biolgicos para proveer bienes y servicios.

PRINCIPIOS CIENTIFICOS Y DE LA INGENIERIA:

Conjunto muy amplio de disciplinas que ponen especial nfasis en la Microbiologa, Bioqumica, Biologa Molecular, Gentica, Inmunologa e Ingeniera Bioqumica y Qumica.

MATERIALES: Incluye a aquellos orgnicos e inorgnicos, en tanto los agentes biolgicos son, en general, catalizadores biolgicos; en particular, microorganismos, clulas animales, clulas vegetales, virus y enzimas.

BIENES: Todos los productos (alimentos, productos farmacuticos, recuperacin de metales, etc.) SERVICIOS: Lo relacionado especficamente con las prestaciones tales como purificacin de agua o tratamiento de efluentes y extraccin de derrames de petrleo.

AREAS TEMATICAS PRIORITARIAS

SALUD: Vacunas (desarrollo de vacunas por procedimientos que utilicen ingeniera gentica). Reactivos de diagnstico: Desarrollo de reactivos por tcnicas inmunolgicas (enzimo-inmunoensayos o por ingeniera gentica).

AREA AGRICOLA: Diagnstico de fitopatgenos en plantas de inters econmico. Desarrollo de agentes de control biolgico y plantas. Desarrollo de plantas transgnicas resistentes a las plagas, enfermedades y herbicidas. Modificacin del contenido celular en macromolculas. Mtodos de mejoramiento de especies a travs de tcnicas no convencionales.

Aceleracin en la obtencin de hbridos.

Utilizacin de marcadores moleculares. Identificacin y caracterizacin de genes de inters.

AREA PECUARIA:

SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para el diagnstico de enfermedades animales. Produccin de nuevas vacunas virales, bacterianas y parasitarias por tcnicas de avanzada. PRODUCCION ANIMAL: Manipulacin y sexado de embriones. Hormonas para el mejoramiento de la produccin animal.

PRODUCCION DE INSUMOS INDUSTRIALES: Mejoramiento y control de calidad de las industrias de alimentos, incluyendo derivados lcteos, vinos y cervezas. Tratamiento biolgico de efluentes.

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA

6000 AC: Arte de fermentar. Los sumerios y babilonios usaban levaduras para fabricar cerveza. 4000 AC: Los egipcios descubrieron la manera de fermentar pan con la levadura cervecera. Libro del Gnesis (9: 20,21): No se dedic a la labranza y plant una via. Bebi del vino, se embriag

Siglo XIV DC: Destilacin de bebidas alcohlicas. Uso de bacterias de cido actico para fabricar vinagre, de bacterias de cido lctico para conservar la leche (yogur, por ejemplo). Siglo XVII: Anthony von Leeuwenhoek (1632-1723) descubre el mundo microbiano con sus microscopios primitivos. Siglo XIX: El desarrollo tcnico de los microscopios permite demostrar el origen de los microbios y vencer la creencia de la generacin espontnea.

Hablando de generacin espontnea, veamos algunas recetas interesantes

Ambroise Par (1517-1590), el ms clebre cirujano de su siglo, escribe: Hallndome en una via de mi propiedad, prxima al pueblo de Meudon, hice romper una enorme cantidad de grandes piedras slidas. Dentro de una de ellas se encontr un grueso sapo vivo, sin que hubiera en la piedra la menor apariencia de abertura

Me maravill el hecho de que este animal hubiese podido nacer, crecer y vivir all. Pero el cantero me dijo que no haba por qu asombrarse, pues varias veces haba hallado animales de sta y de otras clases en lo ms recndito de las piedras, sin que existiese el menor indicio de una abertura. Se puede explicar as el nacimiento y la vida de estos animales: son engendrados a partir de alguna sustancia hmeda de las piedras, cuya humedad, al entrar en putrefaccin, produce tales seres.

Van Helmont (1577-1644), el ms grande fisilogo de la poca, indica lo siguiente para la obtencin de ratones: un vaso lleno de trigo se cubre con una camisa sucia, preferentemente de mujer. Un fermento originado en la camisa y transformado por el olor de los granos, convierte el trigo mismo en ratones. Esta metamorfosis dura cerca de veintin das, o sea el tiempo de gestacin de ratn y nuestro naturalista se asombre de su notable rapidez

Ello, nos dice, es tanto ms admirable cuanto que los ratones originados por el trigo y la camisa no son pequeos ni lactantes, ni minsculos, ni deformes, sino muy bien formados y pueden saltar.

Francesco Redi (1626-1697): Mdico italiano que demostr que los gusanos de la carne son larvas de mosca y que no aparecen si la carne se guarda bien tapada (fiambrera). Lzaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano, demostr que los microbios son transportados por el aire; los mismos no invaden los frascos cerrados hermticamente. Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros procedimientos de enlatado.

Louis Pasteur (1822-1895): Fue quien sent las bases de la futura industria biotecnolgica al demostrar que todos los procesos de fermentacin eran el resultado de la actividad microbiana.
Edward Buchner (1860-1917): Descubre, dentro de las clulas microbianas, las sustancias vitales responsables de todas las transformaciones qumicas: las enzimas.

Hasta la primera guerra mundial, apenas progres la idea de utilizar bacterias y levaduras para fabricar otra cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones impuestas durante el conflicto anunciaron lo que puede llamarse como segunda era biotecnolgica.

La Guerra Mundial (1914-1918) supuso demandas biotecnolgicas: Proceso Neuberg para producir glicerol (para nitroglicerina) mediante la fermentacin dirigida de Saccharomyces cerevisiae. Agregando lcali y bisulfito de sodio al depsito de fermentacin alcohlica se fomentaba la produccin de glicerol. Proceso Weizmann, usando Clostridium acetobutylicum, para la produccin de disolventes como la acetona (fabricacin de cordita).

Los descubrimientos de Pasteur, Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming (1928) revolucionaron el tratamiento de las enfermedades infecciosas con el descubrimiento de los antibiticos.
Durante la Segunda Guerra Mundial comienza la tercera era biotecnolgica, por la necesidad de contar con ciertos medicamentos para que las vctimas no murieran de sepsis bacteriana.

Puede decirse que la cuarta era biotecnolgica comienza a principios de la dcada de 1970, con el advenimiento de la Ingeniera Gentica. El descubrimiento de los sistemas de restriccin y modificacin en bacterias y la aplicacin de las endonucleasas. Los trabajos de Milstein y Kohler sobre la formacin de hibridomas con la posterior utilizacin para la produccin de anticuerpos monoclonales (1975).

Un hito que merece resaltarse ocurri en 1982 cuando la compaa Eli Lilly consigui la aprobacin de la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamrica para la utilizacin de insulina humana clonada y producida en Escherichia coli. A esto siguieron los interferones, hormonas de crecimiento humana y bovina, el antgeno de superficie del virus de la hepatitis B, etc.

Entrando ya en tema

El desarrollo de un proceso de produccin a gran escala, en forma exitosa, es el resultado de acelerar e intensificar un concepto original, generalmente un procedimiento de laboratorio o a pequea escala.

La actividad de desarrollo se concentra en tres reas principales:

Desarrollo de los organismos. Desarrollo del medio de cultivo.

Ingeniera de fermentacin.

EL FERMENTADOR

DEFINICION OPERATIVA:

Contenedor en el que se mantiene un medio ambiente favorable para la operacin de un proceso biolgico deseado.

En cuanto al biorreactor:

Para cada proceso biotecnolgico, el sistema de contencin ms apropiado debe disearse para brindar el mejor medio ambiente, optimizado para el crecimiento celular y actividad metablica.

Equipos accesorios.
Vlvulas de seguridad
Manmetros Vlvulas de control Tuberas Control de temperatura Control de pH Control de espumas Puntos de muestreo

El medio ambiente puede considerarse en tres aspectos:

BIOLOGICO QUIMICO

FISICO

AIREACION Y AGITACION. La agitacin es necesaria para: 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxgeno desde las burbujas de aire al medio lquido; los microorganismos no pueden utilizar oxgeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolucin.

2- aumentar la velocidad de transferencia de oxgeno y nutrientes desde el medio a las clulas. Debido al movimiento se evita que las clulas creen reas estancadas con bajos niveles de oxgeno y nutrientes. 3- impedir la formacin de agregados celulares.

4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metablicos de las clulas al medio.

5- aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeracin del fermentador.

Tipos de fermentador: Crecimiento en suspensin.

Crecimiento con soporte.

En el crecimiento en suspensin, los organismos estn sumergidos y dispersados en el medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio.

En los sistemas con soporte,los organismos crecen como una monocapa o pelcula sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo.
En la prctica, sin embargo, los sistemas en suspensin poseen una pelcula de organismos en la superficie del contenedor y en sistemas con soporte, encontramos organismos dispersos en el medio nutritivo.

TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS FERMENTACION

Las etapas en la manufactura de productos en la tecnologa de bioprocesos son, esencialmente, similares independientemente del organismo utilizado, del medio elegido y del producto buscado.

En todos los ejemplos, se cultiva gran nmero de clulas en condiciones controladas. Los organismos deben cultivarse y motivarse para formar el producto deseado, mediante un sistema de contencin tcnica y fsica (el biorreactor) y un medio correcto en su composicin y parmetros reguladores del crecimiento, tales como temperatura y aireacin.

PRINCIPIOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento de microorganismos puede verse como el incremento en el material celular, expresado en trminos de masa o nmero de clulas.

El incremento en biomasa puede determinarse gravimtricamente o numricamente para sistemas unicelulares.

Tiempo de duplicacin: Se refiere al tiempo requerido para duplicar el peso de la biomasa.

Tiempo de generacin:
Se refiere al tiempo necesario para duplicar el nmero de clulas.

En un proceso biotecnolgico, existen tres formas de hacer crecer a los microorganismos en un biorreactor: -Por lotes (batch) -Semi-continuo -Continuo

Modos de operacin de los fermentadores:

Operacin por lotes: El reactor se carga con la especie reactiva y, a medida que procede la reaccin, cambian las condiciones en el reactor al consumirse los reactivos y formarse los productos. Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reaccin, se vaca el reactor, se limpia y el proceso se repite. Son procesos que no se encuentran en estado estacionario.

El ambiente nutricional dentro del biorreactor cambia en forma continua y, por lo tanto, fuerza cambios en el metabolismo celular. Eventualmente, la multiplicacin celular cesa por desaparicin o limitacin de nutrientes y acumulacin de productos txicos de excrecin.

La naturaleza compleja del crecimiento de microorganismos por lotes, se muestra tal como sigue:

La fase 1 o lag, es un tiempo de aparente no crecimiento, pero estudios bioqumicos demuestran actividad metablica, indicando que las clulas estn en proceso de adaptacin a las condiciones ambientales y que un nuevo crecimiento comenzar, eventualmente.

Existe, luego, una fase de aceleracin transitoria cuando el inculo comienza a crecer que es seguida, rpidamente, por una fase de crecimiento exponencial. En la fase exponencial, el crecimiento microbiano ocurre a la mxima velocidad posible para ese microorganismo, con nutrientes en exceso, parmetros de crecimiento ideales y ausencia de inhibidores.

Sin embargo, en cultivos por lote, el crecimiento exponencial es de duracin limitada y, a medida que las condiciones nutricionales cambian, la velocidad de crecimiento disminuye y se entra en la fase de deceleracin, seguida de la fase estacionaria, donde el crecimiento global no se obtiene, por falta de nutrientes.

La fase final del ciclo es la fase de muerte, cuando la velocidad de crecimiento ha cesado. La mayora de los procesos biotecnolgicos por lotes se detiene antes de esta fase, debido a la disminucin en el metabolismo y a la lisis celular.

Algunos medios para prolongar la vida de un cultivo por lotes: -Adicin gradual de componentes nutritivos concentrados (carbohidratos), aumentando el volumen del cultivo (utilizado para produccin industrial de levadura). -Adicin de medio al cultivo (perfusin) y extraccin de un volumen igual de medio usado, libre de clulas (utilizado para cultivos de clulas animales).

Operacin continua: Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia el reactor y el producto fluye continuamente hacia fuera. En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el lquido fluye a travs del sistema y salen del sistema junto con el medio.

Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el lquido de alimentacin.

En un sistema continuo con mezcla completa, las condiciones son uniformes en todo el reactor, en un equilibrio de mezcla de nutrientes, organismos y productos.
La alimentacin del sistema es medio nutriente libre de organismos y, en algunos casos, un inculo de organismos reciclados.

Esta prctica de cultivo continuo, provee un crecimiento casi balanceado, con pequea fluctuacin de nutrientes, metabolitos, nmero celular o biomasa. Esto consiste en medio fresco entrando un sistema por lotes, en fase de crecimiento exponencial, con una remocin correspondiente de medio ms clulas.

Este mtodo de cultivo continuo, permite a los organismos crecer en condiciones de estado estacionario, en las que el crecimiento ocurre a una velocidad constante y en un medio ambiente constante.

En un sistema de cultivo perfectamente mezclado, se pasa medio estril al biorreactor, a un flujo constante y una mezcla de cultivo (medio, productos de desecho y organismos) emergen del mismo a la misma velocidad, manteniendo el volumen total del cultivo, dentro del biorreactor, constante.

Ventajas de un proceso por lotes:

Las principales son: menor riesgo de contaminacin, flexibilidad operacional cuando los fermentadores se utilizan para distintos productos, un control ms cercano de la estabilidad gentica del organismo, una mejor coordinacin con estadios del proceso entre lotes previos y posteriores.

Desventajas del proceso por lotes:

La principal es la alta proporcin de tiempo improductivo en la operacin del fermentador, dificultad de diseo y la operacin de procesos que no estn en estado estacionario y la variabilidad entre lotes.

Los fermentadores deben ser vaciados, limpiados, esterilizados y recargados antes de cada fermentacin, operaciones todas esenciales pero no productivas. En procesos por lotes, estas operaciones pueden tomar tanto tiempo como la fermentacin misma. En un proceso continuo, por el contrario, una corrida puede durar semanas o meses, es decir que el tiempo no productivo es, en proporcin, pequeo.

Esterilizacin:
Esterilizacin de fermentadores. En el laboratorio, el mtodo estndar de esterilizacin es el calor: 120C de calor hmedo durante 15 min o 160C de calor seco durante, al menos, 1 hora. A escala industrial, el calor seco es prohibitivamente caro, salvo en casos muy especiales y se utiliza, habitualmente, la esterilizacin por calor hmedo.

Esterilizacin del fermentador y el medio conjuntamente.

El calentamiento se consigue mediante: Inyeccin de vapor en el medio, por lo que el medio se prepara ligeramente ms concentrado para compensar la dilucin por el vapor condensado. El medio se calienta por conduccin, haciendo pasar vapor por la camisa de termostatizacin.

Esterilizacin por separado del fermentador y el medio.

Este sistema ofrece ventajas ya que reduce el tiempo en el que el recipiente de fermentacin es improductivo: un fermentador vaco se esteriliza con relativa rapidez.

Pasos a tener en cuenta: -Cambio de escala -Diseo de medios para procesos de fermentacin -Fermentacin en sustratos slidos -Tecnologa de cultivos de clulas de plantas y animales -Procesamiento posterior de la muestra

Procesamiento posterior de la muestra. Purificacin.

El diseo y la operacin eficiente de los procesos de purificacin, son elementos vitales para obtener los productos deseados para uso comercial. Deberan reflejar la necesidad de no perder ms que lo absolutamente necesario del producto final.

Este procesamiento final involucrar, principalmente, la separacin inicial de la mezcla de cultivo hacia una fase lquida y una slida, con la subsecuente concentracin y purificacin del producto deseado.

El procesamiento involucrar ms de una etapa: -Destilacin -Centrifugacin

-Filtracin
-Ultrafiltracin -Extraccin con solventes

-Adsorcin
-Tamices moleculares -Electroforesis

-Cromatografa de afinidad
-Liofilizacin

TECNOLOGIA UTILIZANDO ENZIMAS

La tecnologa de enzimas involucra la produccin, aislamiento, purificacin, uso en forma soluble y, finalmente, la inmovilizacin de las enzimas para su utilizacin en gran variedad de biorreactores.

La utilizacin de sistemas enzimticos libres de clulas, presenta ventajas respecto de los procesos qumicos que involucran un nmero de reacciones secuenciales.

En fermentacin, el uso de microorganismos como catalizadores puede presentar las siguientes limitaciones:

1. Una alta proporcin del sustrato ser utilizada para convertirse en biomasa 2. Pueden ocurrir reacciones secundarias intiles 3. Las condiciones para el crecimiento de los microorganismos pueden ser diferentes de las requeridas para la formacin del producto 4. El aislamiento y purificacin del producto deseado, a partir de la mezcla de fermentacin, puede ser dificultoso.

INGENIERIA GENETICA E INGENIERIA PROTEICA DE ENZIMAS

La utilizacin de estas tcnicas ha posibilitado producir enzimas industriales con muy buena calidad y pureza.

Crecimiento de microorganismos conteniendo la enzima de utilidad

Purificacin de la enzima Determinacin de la secuencia parcial de aminocidos Sntesis de oligonucletidos

Purificacin de mARN total

mARN

ADN

Clonacin del ADN en E. coli

Identificacin de clones
Transformacin de microorganismos Produccin industrial de enzima

Objetivos en la preparacin de enzimas modificadas: 1. Aumentar la actividad de las enzimas 2. Mejorar la estabilidad 3. Permitir que funcionen en un ambiente diferente 4. Cambiar el pH o temperatura ptimos 5. Cambiar la especificidad para que utilice un sustrato diferente

6. Cambiar la reaccin catalizada

7. Aumentar la eficiencia de un proceso

ENZIMAS INMOVILIZADAS

El uso de enzimas en forma soluble o libre, debe considerarse como un posible derroche dado que, en general, la enzima no puede recuperarse al final de la reaccin. Una nueva rea de tecnologa enzimtica es la relacionada con la inmovilizacin de las enzimas en polmeros insolubles, tales como membranas o partculas, actuando como portadores de la actividad enzimtica.

Las ventajas de los catalizadores inmovilizados:

1. Permite el reuso de las enzimas 2. Ideal para operaciones continuas 3. Los productos estn libres de enzima 4. Permite un mejor control de los procesos catalticos 5. Mejora la estabilidad de las enzimas 6. Permite el desarrollo de sistemas de reaccin multienzimticos 7. Ofrece un potencial considerable en uso mdico e industrial 8. Reduce los problemas de tratamiento de efluentes

ESTERILIZACION Y ESTERILIDAD

La esterilizacin es el proceso de conseguir la esterilidad, para la que no existen grados: un objeto, superfcie o sustancia es, o no es, estril.

Si es estril no contiene organismos viables o clulas presentes y, si se le protege contra la contaminacin, la condicin estril permanecer indefinidamente.
La desinfeccin implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patgenos, pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados.

La esterilizacin se utiliza para:

1. Asegurar que un proceso se lleva a cabo solamente con el organismo deseado

2. Permitir la utilizacin segura de los productos 3. Evitar la contaminacin ambiental 4. Impedir el deterioro de un producto

La esterilizacin se lleva a cabo: Eliminando los organismos viables como en la filtracin Matndolos de una de las siguientes formas: 1. Calentando en presencia o ausencia de agua 2. Irradiando con radiaciones ultravioleta, gamma o X 3. Tratando con productos qumicos en solucin o en forma gaseosa

Las esporas bacterianas resisten el calor (termfilas: 200 kPa a 134oC, 1-10 min, vapor de agua o calor seco a 180oC, 15 min) y, algunas, las altas dosis de radiacin (Deinococcus radiodurans: 6000 krad). La esterilizacin debe ser capaz de eliminar las esporas ms resistentes de las especies ms resistentes.

Muerte por calentamiento: En la esterilizacin hmeda, el vapor a presin tiene dos funciones importantes: 1. Condensndose sobre el material permite que el calor se transfiera rpidamente causando un aumento rpido de la temperatura 2. Las propias molculas de agua aumentan, o al menos mantienen el nivel de hidratacin dentro de la espora.

En la esterilizacin por calor seco, el calor es transferido muy lentamente y la tendencia es reducir ms el nivel de hidratacin y, de esta forma, se protegen las protenas de las esporas.

Las esporas son considerablemente ms resistentes al calor seco que al calor hmedo.

Radiacin La radiacin ultravioleta no es muy penetrante y no se puede confiar en ella como agente esterilizante, a menos que se pueda garantizar la exposicin directa del organismo contaminante. Los rayos gamma y X son ms tiles debido a su alto poder de penetracin.

Determinacin de la destruccin de microorganismos: Tiempo trmico letal: tiempo ms corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada Punto trmico letal: temperatura ms baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. Para ambos se necesita saber el tamao inicial de la poblacin y las condiciones precisas. No son particularmente tiles.

Un parmetro ms til es: Tiempo de reduccin decimal o valor D: tiempo en minutos, a una temperatura determinada, que se requiere para reducir la poblacin viable al 10% de su valor previo. Valor-Z: es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.

Mtodos prcticos: Calentamiento:

Para comparar las capacidades relativas de esterilizacin de los diferentes procesos de calentamiento, se requiere una unidad de letalidad. La unidad escogida es el efecto letal de un minuto de calentamiento, a la temperatura de 121oC.

F = t * 10(T-121)/z
Donde t= tiempo de aplicacin del tratamiento letal; T= temperatura en oC y z= aumento de temperatura requerido para reducir el perodo de calentamiento en un 90% (es decir el valor z).

En la industria alimentaria el peligro ms serio para la salud es la presencia de Clostridium botulinum, el formador de esporas patognico ms resistente al calor, as como el agente ms txico.
En esterilizacin clnica: Calor hmedo: Vapor a 134oC (30 psi), 3 min Vapor a 126oC (20 psi), 10 min Vapor a 121oC (15 psi), 15 min Vapor a 115oC (10 psi), 20 min

Como los valores de D para las esporas son, a 121oC, del orden de 0,2 min, un tiempo de mantenimiento de 15 min de vapor a 121oC equivale a 75xD, lo que hace la probabilidad de fallo en relacin a la supervivencia de C. botulinum casi imposiblemente remota.

Procesos discontinuos: Autoclaves:

Todo el aire debe ser eliminado antes del ciclo de calentamiento, ya que mezclas de aire y vapor a una presin determinada alcanzarn una temperatura ms baja que la del vapor puro a la misma presin.

Inyeccin directa del vapor: Si se utilizan inyecciones directas de vapor se debe tener en cuenta que entre el 10 y el 20% del volumen final se debern a condensacin. Mientras la eficiencia trmica de este proceso es alta, la fuerte formacin de espuma durante el burbujeo puede limitar la transferencia del calor.

Calentamiento indirecto: Pasando vapor de agua a travs de una espiral de intercambio de calor o de una camisa. El calor en este procedimiento es menos eficiente que por inyeccin directa y, en ambos casos, permanecen los problemas de enfriamiento, generalmente conseguido mediante espirales.

Esterilizacin por flujo continuo: En el diseo del equipo deben considerarse las tres etapas del ciclo, para conseguir: 1. Un rpido calentamiento 2. Un tiempo de mantenimiento a la temperatura de esterilizacin 3. Un rpido enfriamiento

Esterilizacin por radiaciones:

Normalmente se lleva a cabo con una fuente de cobalto-60 o de cesio-137. El efecto letal es siempre mayor en presencia de oxgeno y alto contenido en agua. La unidad de medida de la dosis de radiacin es el rad, equivalente a una energa de absorcin de 100 ergs/g de aire. El Roentgen (R) es 83 ergs/g de aire.

Esterilizacin qumica:

Formaldehdo: solamente efectivo si se puede garantizar que entre en contacto con los organismos contaminantes. Pobre difusibilidad y poder de penetracin. Olor picante y duradero. Solamente en casos especiales.
Perxido de hidrgeno: poderoso agente oxidante que mata clulas vegetativas y esporas con actividad creciente con la concentracin, temperatura y normalmente pH. Sus productos de degradacin son inocuos.

Oxido de etileno y de propileno: pueden utilizarse en forma gaseosa. El de etileno es ms efectivo pero altamente txico, irritante y violentamente explosivo en mezclas con aire. Su efecto letal sobre las bacterias depende de la humedad; las condiciones ptimas incluyen 40-80% de humedad relativa y temperatura de 60oC durante 3-4h, para una concentracin de gas de 8001000 mg/l. El proceso se utiliza cuando el equipo puede ser daado por altas temperaturas.

Esterilizacin por filtracin: Filtros profundos: capa relativament gruesa de fibra de vidrio, algodn, lana mineral, celulosa moldeados como planchas, tapones o cilindros. Filtros de pantalla: membranas hechas de steres de celulosa u otros polmeros

Evaluacin de la eficiencia de esterilizacin:

1. Termosensores
2. Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0,15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor 3. Tiras de papel impregnadas con esporas: bioindicadores. Se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia

4. Tiras indicadoras: responden al calor hmedo entre 115-123oC. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5. Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor, a un mnimo de 120oC, alcanz la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor.

Pruebas de eficiencia de filtracin: 1. Prueba del azul de metileno: para distribucin de partcula de 0,02-0,2 micrones 2. Prueba del cloruro sdico: para que haya esterilizacin, el filtro debe retener el 99,997% 3. Esporas de Bacillus: rango de tamao 0,7-1 micrn 4. Prueba del bacterifago T3: 0,03 micrones. Un filtro con penetracin de llama de sodio de 0,001% tiene un equivalente de 0,000005% B. Subtilis y de 0,00005% de T3.