CARRERA DE INGENIERIA AMBIENTAL LABORATORIO DE FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA

PRACTICA N.- 1 NOMBRE: KATHERINE VARGAS EQUIPO N.-C FECHA: 4 JULIO DEL 2012 NOTA INDIVIDUAL:

TEMA: BIOSEGURIDAD Y PREPARACIN DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO. **OBJETIVO: 1.- Concientizar al alumno la importancia de la Bioseguridad en el Laboratorio. 2.- Conocer los equipos y materiales que se utilizan en el Laboratorio de Microbiologa. 3.- Aplicar la tcnica adecuada para preparar el rea de trabajo y evitar contaminantes. 4.- Aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiologa as como el procedimiento de la esterilizacin por el valor seco y calor hmedo. 5.- Organizar el material para su fcil manejo de identificacin. 6.- Preparacin de medios de cultivo, y manipular adecuadamente los cultivos puros.

**GRFICOS Y RESULTADOS: MATERIALES: CMARA DE FLUJO LAMINAR. -Cabinas de flujo laminar: Las cabinas de flujo laminar horizontal son adecuadas para una buena proteccin del producto, pero no para el trabajo con materiales peligrosos o con algn tipo de riesgo pues el operador queda completamente expuesto. En las cabinas de flujo laminar vertical, se consigue una buena proteccin del producto, y, dependiendo de su diseo se puede En el caso de que el proceso no requiera una laminaridad en el flujo de aire pero s un correcto barrido de una zona localizada, se puede optar por un mdulo de flujo turbulento, con un importante ahorro en el coste inicial

MICROSCOPIO.
El microscopio (de micro-, , pequeo, y scopio, , observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa.

BALANZA ANALTICA.
La balanza analtica es un instrumento utilizado en el laboratorio, que sirve para medir la masa. Su caracterstica ms importante es que poseen muy poca incertidumbre, lo que las hace ideales para utilizarse en mediciones muy precisas. Las balanzas analticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la informacin en distintos sistemas de unidades. Por ejemplo, se puede mostrar la masa de una sustancia en gramos, con una incertidumbre de 0,00001g. (0,01 mg)

ESTUFA.
Armario metlico, aislado trmicamente, que se calienta mediante resistencias elctricas reguladas por un termostato. Se utiliza para el secado de slidos y de objetos.

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO. -Antes de prepara cualquier medio leer cuidadosamente el rtulo del envase y fijarse la fecha de vencimiento. -Calcular la cantidad de polvo, de acuerdo a las instrucciones del rtulo del envase y el volumen total que se desee preparar. -De acuerdo a las instrucciones indicadas, preparar: MEDIOS SLIDOS: Se preparan aadiendo un agar a un medio. El agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Estos medios hay que Esterilizar o calentar a una temperatura considerable. Y los que se necesite se calienta con el agitador para disolver el polvo a su mxima expresin, y as no se sedimenten. Luego estos pueden ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias,estos procesos antes no eran posibles en medios lquidos. Mc Conkey: Sabur: Agar nutriente: Volumen: 120 mL. Volumen: 60 mL. Volumen: 60mL. Dato del envase: 50g 1 L Dato del envase: 65 g 1 L Dato del envase: 23g 1 L

MEDIOS LQUIDOS: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa. Verde Brillante Bilis: Volumen 135 mL. Dato del envase: 40g - 1 L Caldo de Peptona: Volumen: 144 mL Dato del envase: 25,5g 1 L -Pesar sobre papel de aluminio loa cantidad de medio a preparar y se vuelca en el recipiente en el que ser preparada. -Medir el volumen de lquido en otro recipiente auxiliar limpio y graduado, y verter sobre el recipiente con el medio pesado. -Agita vigorosamente hasta obtener una suspensin o solucin (si es caldo) homognea. Los caldos suelen dar soluciones transparentes que no necesitan calentamiento ni ninguna otra manipulacin antes de ser llevados al autoclave. Las soluciones con agar sin embargo, requieren calentamiento casi hasta ebullicin con agitacin constante y a fuego suave (o bao Mara o microondas) para lograr su solubilizacin completa. -Observar la solucin durante el calentamiento ya que una vez que aparecieron las primeras burbujas tiende a desbordar por ebullicin. -Dosificar los medios preparados teniendo en cuenta el uso que se les dar. Los caldos se dosifican en los tubos, colocando 9 mL en cada uno de ellos y, 90 mL en los frascos con tapa esterilizada. -Los medios slidos se esterilizan en el mismo envase que se los prepar.

- En las pipetas graduadas de 1ml,2mL y 5mL,colocar en la punta superior algodn luego empacar estas pipetas. GRFICOS:

1.-Pesando la cantidad de agar.

2.-Medios de Cultivo y Caldos.

3.-Dosificados los medios tanto de: Peptona, verde Brillante bilis, agar nutritivo, sabur.

4.-Esterilizados los medios slidos y dosificados los medios lquidos.

**CLCUOS MEDIOS SLIDOS: *MACONQUI. Dato: 50 g 1 L Preparar: 120 mL. 50 g *0,12 L = 6 g de soluto. 1L

*SABUR: Dato: 65,0 g 1 L Preparar: 60 mL 65 g *0,60 L = 3,9 g de soluto. 1L

MEDIOS LQUIDOS: *PEPTONA. En 6 tubos colocar 9 mL. Y 90 mL en un vaso de precipitacin. Dato: 25,5 g 1L Preparar: 144 mL 25,5 g * 0,144 L = 3,672 g de soluto 1L

*VERDE BRILLANTE BILIS. En 15 tubos colocar 9 mL. Dato: 40g- 1L Preparar: 135 mL 40 g * 0,135 L = 5,4 g de soluto 1L

CONCLUSIONES 1.-

2.-

3.-

4.CUESTIONARIO

1.- Investigue sobre las seales de seguridad y su importancia. Realice un cuadro sobre ellas. ROMBO DE SEGURIDAD. Es el empleado por norma para identificar el tipo de sustancia y riesgos que representa

2.- Clcule cuantos gramos de agar-agar se necesitan para preparar 125 mL de medio de cultivo slido. Qu porcentaje P/V se utiliz? Dato del envase: 23g -1L Preparas: 125mL 125mL * 1L =0,125 L 1000mL 23 g * 0,125 L = 2,875 g de soluto 1L %P = m soluto * 100% V V solucin %P = 2,875 g soluto * 100% V 0,125 L %P = 2300% V

3.- Por qu el medio MC Conkey puede ser considerado un medio selectivo y diferencial? Para el aislamiento de qu tipo de bacterias se lo emplea?.Anote la composicin y diga que funcin cumple el rojo neutro.

4.- En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y porqu?

Una vez preparada los medios de cultivo se procede a esterilizar.
Esterilizacin significa

la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier tipo. Mtodos de esterilizacin Los mtodos de esterilizacin pueden ser de 3 tipos: *Por destruccin total de microrganismos. *Por muerte o inactivacin; y *Por eliminacin con medios fsicos. Por destruccin total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre implica calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicacin de una llama, que es lo que hacemos en el laboratorio cuando flameamos un ansa de platino o las bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de destruir contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por supuesto sta metodologa, aunque es efectiva, est muy restringida en su empleo. La muerte o inactivacin significa la eliminacin de microrganismos sin que exista necesariamente desintegracin de las clulas. Se puede efectuar por calentamiento, seco o hmedo, por radiaciones o por agentes qumicos. El calor hmedo, generalmente en forma de vapor bajo presin, es muy til y de gran valor en la esterilizacin en el laboratorio, que se efecta en autoclave, o en la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los equipos de fermentacin. La eliminacin fsica est restringida a la esterilizacin de gases lquidos, y es fundamentalmente llevada a cabo por filtracin mediante filtros absolutos o filtros fibrosos. Los filtros absolutos son de materiales cermicos, de vidrio o de metal sinterizado con poros tan pequeos que la penetracin de los microrganismos no es posible. Los filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un dimetro variable de 0.5 a 15 micrones. 5.- Antes del agaragar se utiliz otro componente para solidificar los medios de cultivo. de qu componente se trata y qu inconvenientes presentaba su uso? 6.- Por qu es importante conocer medidas de seguridad para el trabajo en un laboratorio? Indique 5 medidas que adoptara para un accidente en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA 1.- Departamento de Qumica Analtica http://www.uv.es/=gammmm/Subsitio%20Operaciones/3%20material%20de%20uso%20frecu ente%20COMPLETO.htm, 2 Julio del 2012,14:30. 2.-TORTORA,G.( 30/06/2007).Introduccin a la Microbiologa.Buenos Aire:Editorial: Mdica Americana. 3.4.-