Yessenia

Len Alexis Ortega Horacio Santiago Guillermo Mndez Eduardo Guzmn

CULTIVO DE PROTOPLASTOS

Protoplasto:

Clula vegetal desprovista de pared celular, por proceso mecnico o enzimtico. Membrana plasmtica completamente expuesta. Estado transitorio, permite manipulacin de esas clulas. Mantiene potencialidades de clulas vegetales completas. Clulas vegetales que han sido separadas de su pared celular mediante un tratamiento enzimtico o mecnico y adoptan forma esfrica en el medio de cultivo.

1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por mtodos mecnicos. 1960 Aislamiento de protoplastos de plantas superiores con degradantes de pared celular. 1971 Regeneracin de plantas a partir de protoplastos.

Sabias que!!

APLICACIONES
Produccin

protoplastos. Manipulaciones genticas. Estudio de procesos fisiolgicos y bioqumicos. Pueden multiplicarse y desarrollar estructuras similares a embriones y desde ellos, plantas adultas.

de hbridos por fusin de

Para el xito del cultivo

Tipo

y edad del material de origen de los protoplastos. Sistema de cultivo y la densidad de los protoplastos contenidos en l. Adecuada composicin del medio.

 En

clulas jvenes es posible manejar fcilmente la induccin y el mantenimiento de la actividad mittica que en las clulas altamente especializadas.

SISTEMAS DE CULTIVO

MEDIO

LQUIDO MEDIO SLIDO

MEDIO LQUIDO

MEDIO SLIDO

Se

usa colocndolo en capas delgadas de un medio de 50 a 250 uL.

Se usa mezclando en l los protoplastos cuando tenga de 3540C, depositndolo, en capas delgadas, en las cajas petri.

Frecuentemente

los protoplastos se cultivan en medio lquido y las clulas en divisin o las microcolonias derivadas se cultivan en medios slidos.

ESTABILIZADORES OSMOTICOS y REGULADORES DE CRECIMIENTO

Para evitar el estrs celular y como resultado una baja eficiencia del cultivo. Se usan generalmente azcares. Generalmente requieren auxinas citocininas, para la divisin celular. y

Las auxinas tambin pueden ocasionar la vacuolizacin y ruptura de los protoplastos.

METODOLOGA
1. Aislamiento y factores que lo afectan 2. Purificacin 3. Determinacin de viabilidad 4. Cultivo 5. Regeneracin

1. Aislamiento de protoplastos

Mtodo mecnico: Posee un bajo rendimiento, es un procedimiento tedioso y presenta una aplicabilidad limitada. Consiste bsicamente en un choque osmtico para producir plasmlisis celular y ruptura de la pared. Los protoplastos se liberan de las clulas rotas mediante el restablecimiento de su nivel osmtico. Mtodo enzimtico: Consiste en la incubacin de las clulas en una mezcla de enzimas que degradan la pared celular: celulasas, hemicelulasas y pectinasas. Las preparaciones comerciales de dichas enzimas contienen adems proteasas, nucleasas y lipasas.

Factores que afectan la produccin y viabilidad de los protoplastos

El tipo de enzimas que se usaran. La composicin del medio en que actuarn. El material de origen de los protoplastos. Tratamientos pre-enzimticos Osmolaridad

2. Purificacin
Es

la recuperacin de los protoplastos, incluye la eliminacin de los enzimas por lavado y el paso a un medio de cultivo para la recuperacin de la pared y la promocin de las primeras divisiones celulares de las clulas individuales obtenidas de los protoplastos.

Hibridacin somtica

En biotecnologa, la hibridacin somtica es el proceso por el cual se obtienen plantas hbridas que contiene ambos ncleos y ambos citoplasmas a partir de la fusin de clulas o de protoplastos. Los protoplastos son capaces de regenerar su pared celular despus de algunos das de cultivo del medio adecuado.

3. Determinacin de la viabilidad
Toma

de oxigeno, Actividad fotosinttica Tinciones Medio de cultivo especfico y complejo Se incuba el material a 25C en condiciones de oscuridad de 5 a 7 das. Se realizan tratamientos y la seleccin del material frente a diversos agentes.

4. Cultivo

Medio de cultivo: MS, B5 (lquido o slido) Osmolaridad Densidad de plaqueo Condiciones de almacenamiento Material vegetal

Sales inorgnicas; Estabilizadores osmticos; Reguladores del crecimiento; Extractos naturales como:

Extracto de levadura Aminocidos Vitaminas cidos orgnicos Azucares

 Se

cultivan los microcallos obtenidos tras la divisin celular, se cambia en ella la densidad poblacional, la composicin del medio de cultivo, se hace menos exigente y la incubacin se hace con luz.

5. Regeneracin

Regeneracin de plntulas a partir del tejido de callo, mediante modificaciones de la composicin hormonal-mineral del medio de cultivo. Por ultimo se trasplantan y aclimatan las plantas obtenidas en invernadero.

*GRACIAS POR SU ATENCIN*

Referencias
Daniel

V. Hurtada, et al (2001) Cultivos de tejidos vegetales: Mxico, Editorial Trillas. de protoplastos capitulo 10, http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology /cultivo_tejidos/capitulo10_parte1y2.pdf

Cultivo