Los polimerosomas se presentan como candidatos útiles en la nanomedicina, debido a su tamaño subcelular y su capacidad de cargar moléculas diagnósticas y terapéuticas. Informamos sobre la incorporación selectiva de nanopartículas de oro dentro de la membrana de polimerosomas, según caracterizado por las investigaciones de Microscopía Electrónica de Transmisión y Dispersión de Luz Dinámica. Los polimerosomas, con un diámetro de 147 nm, fueron fabricados a partir de copolímero de dibloque de polibutadieno–bloque–poli(óxido de etileno) empleando un proceso de doble emulsión. Los resultados demuestran que la inclusión mecánica durante la evaporación del disolvente orgánico y la interacción hidrófoba entre el 1–mercapto–(trietilenglicol)metiléter de las nanopartículas de oro y el bloque de poli(óxido de etileno) del copolímero es suficiente para guiar la posición de las nanopartículas (con un tamaño promedio de 4,2 nm) dentro de la bicapa del polimerosoma (de espesor 18 nm). El proceso de incorporación de las nanopartículas en el polimerosoma es relevante y permite obtener un control preciso sobre estas nuevas nanoestructuras de nanopartículas integradas en polimerosomas, las cuales tienen una aplicación potencial en el suministro de medicamentos, junto con capacidades de formación de imágenes.
Los polimerosomas se presentan como candidatos útiles en la nanomedicina, debido a su tamaño subcelular y su capacidad de cargar moléculas diagnósticas y terapéuticas. Informamos sobre la incorporación selectiva de nanopartículas de oro dentro de la membrana de polimerosomas, según caracterizado por las investigaciones de Microscopía Electrónica de Transmisión y Dispersión de Luz Dinámica. Los polimerosomas, con un diámetro de 147 nm, fueron fabricados a partir de copolímero de dibloque de polibutadieno–bloque–poli(óxido de etileno) empleando un proceso de doble emulsión. Los resultados demuestran que la inclusión mecánica durante la evaporación del disolvente orgánico y la interacción hidrófoba entre el 1–mercapto–(trietilenglicol)metiléter de las nanopartículas de oro y el bloque de poli(óxido de etileno) del copolímero es suficiente para guiar la posición de las nanopartículas (con un tamaño promedio de 4,2 nm) dentro de la bicapa del polimerosoma (de espesor 18 nm). El proceso de incorporación de las nanopartículas en el polimerosoma es relevante y permite obtener un control preciso sobre estas nuevas nanoestructuras de nanopartículas integradas en polimerosomas, las cuales tienen una aplicación potencial en el suministro de medicamentos, junto con capacidades de formación de imágenes.
Los polimerosomas se presentan como candidatos útiles en la nanomedicina, debido a su tamaño subcelular y su capacidad de cargar moléculas diagnósticas y terapéuticas. Informamos sobre la incorporación selectiva de nanopartículas de oro dentro de la membrana de polimerosomas, según caracterizado por las investigaciones de Microscopía Electrónica de Transmisión y Dispersión de Luz Dinámica. Los polimerosomas, con un diámetro de 147 nm, fueron fabricados a partir de copolímero de dibloque de polibutadieno–bloque–poli(óxido de etileno) empleando un proceso de doble emulsión. Los resultados demuestran que la inclusión mecánica durante la evaporación del disolvente orgánico y la interacción hidrófoba entre el 1–mercapto–(trietilenglicol)metiléter de las nanopartículas de oro y el bloque de poli(óxido de etileno) del copolímero es suficiente para guiar la posición de las nanopartículas (con un tamaño promedio de 4,2 nm) dentro de la bicapa del polimerosoma (de espesor 18 nm). El proceso de incorporación de las nanopartículas en el polimerosoma es relevante y permite obtener un control preciso sobre estas nuevas nanoestructuras de nanopartículas integradas en polimerosomas, las cuales tienen una aplicación potencial en el suministro de medicamentos, junto con capacidades de formación de imágenes.
Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012
Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
130 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) POLIMEROSOMAS DE POLI(BUTADIENO)BLOQUEPOLI(XIDO DE ETILENO) CARGADOS CON NANOPARTCULAS DE ORO
Emilio Castro, Pablo Taboada, Vctor Mosquera Grupo de Fsica de Coloides y Polmeros. Departamento de Fsica de la Materia Condensada. Facultad de Fsica. Universidad de Santiago de Compostela. 15782. Santiago de Compostela. Espaa. Correo electrnico: emilio.castro@usc.es
Recibido: Diciembre 2011; Marzo de 2012 RESUMEN Los polimerosomas se presentan como candidatos tiles en la nanomedicina, debido a su tamao subcelular y su capacidad de cargar molculas diagnsticas y teraputicas. Informamos sobre la incorporacin selectiva de nanopartculas de oro dentro de la membrana de polimerosomas, segn caracterizado por las investigaciones de Microscopa Electrnica de Transmisin y Dispersin de Luz Dinmica. Los polimerosomas, con un dimetro de 147 nm, fueron fabricados a partir de copolmero de dibloque de polibutadienobloquepoli(xido de etileno) empleando un proceso de doble emulsin. Los resultados demuestran que la inclusin mecnica durante la evaporacin del disolvente orgnico y la interaccin hidrfoba entre el 1mercapto(trietilenglicol)metilter de las nanopartculas de oro y el bloque de poli(xido de etileno) del copolmero es suficiente para guiar la posicin de las nanopartculas (con un tamao promedio de 4,2 nm) dentro de la bicapa del polimerosoma (de espesor 18 nm). El proceso de incorporacin de las nanopartculas en el polimerosoma es relevante y permite obtener un control preciso sobre estas nuevas nanoestructuras de nanopartculas integradas en polimerosomas, las cuales tienen una aplicacin potencial en el suministro de medicamentos, junto con capacidades de formacin de imgenes. Palabras clave: Oro, nanopartcula, vescula, copolmero dibloque, polimerosoma
ABSTRACT Polymersomes are presented as useful candidates in nanomedicine because of their subcellular size and ability to load diagnostic and therapeutic molecules. We report the selective incorporation of gold nanoparticles into the membrane of polymersomes as characterized by Transmision Electron Microscopy and Dynamic Light Scattering investigations. Polymersomes of 147 nm in diameter were fabricated from the diblock copolymer polybutadieneblockpoly(ethylene oxide) using a double emulsion process. Results show that the mechanical entrapment during the evaporation of the organic solvent and the hydrophobic interaction between the 1Mercapto(triethylene glycol) methyl ether of the gold nanoparticles and the poly(ethyelene oxide) block of the copolymer is enough to guide the location of the nanoparticles (average size 4.2 nm) inside the bilayer (18 nm thickness) of the polymersome. The process of the incorporation of the nanoparticles into the polymersome is relevant and allows a fine control over these new polymersomeembedded nanoparticle nanostructures that has potential application in drug delivery coupled with imaging capabilities. Keywords: gold, nanoparticle, vesicle, diblock copolymer, polymersome
1. INTRODUCCIN
Uno de los campos de investigacin ms activos en el mbito de la materia condensada se refiere al ensamblaje de complejos y sistemas funcionales. Las observaciones del autoensamblaje de materia blanda han mostrado que los copolmeros de bloque tienen propiedades interesantes. La combinacin de un bloque hidrfilo con un segundo bloque hidrfobo les confiere propiedades interesantes y tiles, tales como actividad superficial y agregacin en disolucin diluida, as como gelificacin en disoluciones concentradas. La variacin de los parmetros caractersticos del copolmero, tales como la longitud o la arquitectura de los bloques, permite un control preciso de Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
131 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) las propiedades; pudindose controlar la formacin de micelas esfricas o cilndricas [1]. Observaciones recientes en el autoensamblaje de materia blanda han demostrado que la formacin de vesculas puede ocurrir en muchos sistemas. Las vesculas son estructuras esfricas que comprenden una bicapa de molculas anfflicas, que pueden ser copolmeros de bloque [2]. Dependiendo de los parmetros del copolmero tales como la fraccin de volumen de cada bloque, o la energa de interaccin entre los monmeros en los bloques, la membrana de la bicapa puede cerrarse espontneamente en una vescula, en lugar de formar una estructura laminar plana [3]. Los primeros trabajos sobre vesculas de copolmeros de bloque fueron publicados por Zhang y colaboradores [4,5]. Ellos observaron vesculas entre otras morfologas estables diferentes en agregados de copolmeros de poliestirenobloquepoli(cido acrlico) altamente asimtricos. Disher y colaboradores [6] acuaron la notacin de polimerosomas (vesculas basadas en polmeros) cuando estudiaron el copolmero de poli(xido de etileno)bloquepolietiletileno (PEO 40 bPEE 37 ). La mayora de los mtodos tradicionales para la formacin de polimerosomas implican el uso de disolventes orgnicos tales como el tetrahidrofurano, la N, Ndimetilformamida o el dioxano que requieren extensos procesos de purificacin, los cuales pueden resultar muy consumidores de tiempo y problemticos cuando el objetivo son las aplicaciones biomdicas [7]. Otro enfoque para la formacin de polimerosomas, empleado en el presente trabajo, consiste en usar el as llamado mtodo de doble emulsin [7,8]. En dicho mtodo, la concentracin de polmero en la fase orgnica es una variable clave: si la misma es menor que la cantidad requerida para revestir completamente las interfases oleosas de la emulsin, los polimerosomas no sern estables. En la prctica, es conveniente trabajar con un exceso de concentracin; de hecho, esta concentracin puede ser utilizada para ajustar el espesor y la estructura de las paredes del polimerosoma a travs de la formacin de interfases de copolmero de capas mltiples [7]. Por otra parte, las partculas metlicas ultra finas han recibido gran atencin recientemente, debido a sus caractersticas pticas y optoelectrnicas especiales. Ms concretamente, se pueden usar nanopartculas de oro (Au NPs) como agente marcador en histoqumica y citoqumica, o como catalizadores para la formacin de hidrgeno o en procesos de oxidacin. Las nanopartculas, con un dimetro situado en el rango de tamaos entre 1 y 100 nm, tienen una mayor energa superficial que el material masivo equivalente. Por lo tanto, las nanopartculas tienen propiedades fsico qumicas nicas en comparacin con su material masivo, prometiendo una amplia gama de nuevas aplicaciones en el campo de la nanotecnologa que se encuentra en un proceso de rpido desarrollo. La inclusin de nanopartculas metlicas dentro de cpsulas artificiales de forma, tamao y morfologa definida, es un tema importante en la ciencia mdica, la nanotecnologa y la industria, ofreciendo una extensa gama de aplicaciones en catlisis, suministro de medicamentos y tecnologa Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
132 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) de sensores. Las propiedades pticsas de los nanocompuestos, por ejemplo, es muy sensible a la ubicacin especfica de las nanopartculas dentro de la matriz y la separacin en microfases de los copolmeros de bloque, puede utilizarse con grandes ventajas [9,10]. Entre muchos tipos de cpsulas, las membranas artificiales tales como aquellas derivadas de liposomas o polimerosomas son sistemas modelo bien definidos para proporcionar propiedades hidrfilas en su interior hueco, as como propiedades hidrfobas dentro de su membrana, haciendo posible as que se pueda guiar la ubicacin de las nanopartculas hacia dentro de sus respectivos compartimientos a travs de procesos de autoensamblaje, principalmente por va de interacciones interfaciales. Mientras que las vesculas lpidas se construyen a partir de pequeas molculas lpidas, la membrana de los polimerosomas consiste de copolmeros di y tribloque, en donde las dimensiones y las propiedades qumicas de la membrana pueden ser ajustadas dentro de un rango mucho ms amplio que en el caso de las membranas lpidas [11]. Los polimerosomas son de inters debido a su capacidad de carga y liberacin de ingredientes activos. Ellos ofrecen una estabilidad mayor y una menor permeabilidad en comparacin con las vesculas lpidas; y la versatilidad de la qumica polimrica sinttica proporciona la capacidad de ajustar propiedades tales como el espesor de la membrana, la funcionalidad superficial y la cintica de degradacin [12]. Los estudios sobre la manera de guiar la ubicacin de las nanopartculas hacia dentro de las membranas vesiculares han mostrado dos enfoques diferentes [13,14]: (a) la formacin in situ de nanopartculas dentro de un compartimiento especfico de la vescula, bien sea dentro del interior hidrfilo de la vescula o directamente dentro de su membrana, y (b) la incorporacin de nanopartculas durante la formacin de la estructura vesicular. Este ltimo enfoque es ms compatible con los argumentos de termodinmica de equilibrio y no presenta las restricciones de los medios qumicos in situ para la sntesis de nanopartculas. Debido a su relevancia tecnolgica para los materiales de ingeniera de alto rendimiento y su aplicabilidad a una variedad mucho mayor de nanopartculas importantes (magnticas, puntos cunticos, etc.), nos concentraremos en dicho segundo enfoque. El proceso de coensamblaje autoorganizado implica la interaccin entre el tamao y forma de las nanopartculas en relacin al tamao y forma de los dominios hospedantes, la configuracin de la cadena copolimrica, la funcionalizacin de las nanopartculas, as como las interacciones nanopartcula nanopartcula, al igual que las interacciones nanopartculacopolmero [14]. En el presente trabajo hemos utilizado puntos cunticos metlicos inertes basados en nanopartculas de oro funcionalizadas con 1mercapto(trietilenglicol)metilter. La naturaleza metlica de las nanopartculas de oro ofrece suficiente contraste para la formacin de imgenes mediante microscopa electrnica [15,16]. El uso de Au NPs en lugar de fluorforos circunvala las desventajas del fotoblanqueo y la intermitencia. Informamos aqu sobre las estructuras formadas por Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
133 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) un copolmero dibloque de poli(butadieno)bloquepoli(xido de etileno), PB 172 bPEO 208 , y Au NPs funcionalizadas en disolucin acuosa. Entre las estructuras hbridas, se encuentran vesculas huecas esfricas [1723]. Hasta donde alcanza nuestro conocimiento, esta es la primera vez que se han encapsulado nanopartculas de oro de 5 nm dentro del polimerosomas formados por doble emulsin con un copolmero dibloque.
2. SECCIN EXPERIMENTAL
El copolmero dibloque polibutadienobloquepoli(xido de etileno) (PB 172 bPEO 208 ) [M n
= 10.500 g/mol y M w /M n = 1,05] fue comprado a Polymer Source (Dorval, Quebec, Canad). Una disolucin en etanol al 2% p/v de nanopartculas de oro funcionalizadas con 1mercapto (trietilenglicol)metilter fue obtenida de Sigma Aldrich (Esquema 1). Las imgenes de TEM de las nanopartculas de Au funcionalizadas con 1mercapto(trietilenglicol)metilter mostraron un dimetro promedio de las partculas de 4,2 + 2,2 nm en etanol. Todas las disoluciones fueron preparadas con agua doblemente destilada y desionizada, etanol de grado analtico y cloroformo.
Esquema 1. Nanopartculas de oro funcionalizadas con 1mercapto(trietilenglicol)metilter
Los experimentos de dispersin de luz dinmica (DLS) se realizaron usando un gonimetro ALV con un lser de HeNe polarizado linealmente (632,8 nm) de 22 mW y un correlador digital mltiple ALV 5000/EPP con un tiempo de muestreo inicial de 125 ns. Todas las mediciones se llevaron a cabo a una temperatura constante de 25 C. Los datos fueron adquiridos mediante un software de control de ALV y el tiempo de conteo fue fijado para cada muestra en 300 s. Las distribuciones de tiempo de relajacin, A(t), fueron obtenidas usando el anlisis Cumulant para la funcin de autocorrelacin, C(q, t). El radio hidrodinmico fue derivado de la relacin de Stokes Einstein [3]:
ap B H D T k r tq 6 = (1)
donde k B es la constante de Boltzmann, T es la temperatura absoluta, q es la viscosidad de la disolucin, y D ap es el coeficiente de difusin aparente. Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
134 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) Los experimentos de SANS fueron realizados en el laboratorio Leon Brillouin (reactor Orphe, Saclay) en el espectrmetro PACE. La muestra, una disolucin de PEO 172 bPB 208 a 10 mg/ml en D 2 O, fue introducida en una cubeta de cuarzo rectangular con espesor de 5 mm. El blanco utilizado fue D 2 O puro. El tratamiento de los datos se realiz con el software Pasidur (LLB). El espectrofotmetro SPECTRAmax M2e utilizado es de Molecular Devices GmbH (Mnich, Alemania). Los monocromadores duales permitieron escaneos de longitud de onda entre 2001.000 nm. Todas las mediciones se hicieron a temperatura ambiente (25 C). Una gota de disolucin (volumen de ~ 20 L) a razn de 0,1 mg/ml de la disolucin acuosa de copolmero de dibloque fue depositada sobre una rejilla de cobre de malla 200 revestida con pelcula Formvar. Se dej que el disolvente se evaporara, a temperatura ambiente y presin atmosfrica. Finalmente, las muestras fueron teidas con una disolucin acuosa de cido fosfotngstico (1% en peso). Las observaciones mediante TEM fueron hechas con un microscopio Hitachi H7650 trabajando a 100 kV. Para la formacin de las vesculas de copolmero dibloque anfiflico empleamos una tcnica que usa emulsiones dobles monodispersas con una estructura de ncleocorteza como plantillas. En el primer paso, se utiliz un dispositivo de microfluidica para generar una doble emulsin de agua en aceite en agua con una fase de aceite voltil (cloroformo) que contiene tanto el copolmero dibloque como tambin las nanopartculas de oro hidrfobas [24]. Debido al parecido de las estructuras de ncleocorteza con las vesiculares, las tcnicas basadas en plantillas de doble emulsin deben ser robustas y directas. La disolucin de copolmero anfiflico forma la corteza de las dobles emulsiones de agua en aceite en agua (W/O/W). Estas gotas de doble emulsin W/O/W estabilizadas por copolmero fueron usadas como compartimientos similares a vesculas para la encapsulacin de las nanopartculas de oro. En el segundo paso, la formacin de los polimerosomas se obtuvo mediante la remocin de la fase de disolvente en aceite a travs de evaporacin con ultrasonidos a 20 kHz. A medida que se evapora el cloroformo, ocurre una distribucin de la fase de aceite sobre la superficie de la fase acuosa continua. La gota interior acuosa restante de la gota de doble emulsin produce la vescula. El mecanismo de dispersin resulta en una formacin extremadamente rpida de la vescula [25]. Las fuerzas de deplecin generadas por el exceso de molculas de copolmero en el disolvente orgnico durante la evaporacin inducen un fenmeno de deshumectacin [26].
RESULTADOS Y DISCUSIN La dispersin de neutrones a bajo ngulo (SANS) ha demostrado la formacin de vesculas a travs del mtodo de doble emulsin y nos permite determinar el espesor de la bicapa que forma la Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
135 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) membrana del polimerosoma. La curva de SANS medida, representada en la Figura 1, tiene una pendiente caracterstica q 2 a valores de q bajos, indica por la lnea recta en el grfico, lo cual es tpico para nanoestructuras en forma de bicapa.
Figura 1. Factor de forma obtenido por SANS para las vesculas PBbPEO preparadas mediante el mtodo de la doble emulsin (el copolmero fue disuelto en D 2 O a una concentracin de 10 mg/ml).
Las imgenes de TEM muestran ms detalles estructurales de las vesculas de PBbPEO (Figura 2). Observamos que el espesor medio de bicapa concuerda bien con los valores obtenidos en los experimentos de SANS.
Figura 2. Imgenes de TEM de la encapsulacin de nanopartculas de oro dentro de polimerosomas de PBb PEO (concentracin de 10 mg/ml) hechos por el mtodo de la doble emulsin. Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
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Discher y Eisenberg [2] propusieron una ley emprica general en la que se establece que los copolmeros del bloque que poseen una fraccin en peso hidrfila mayor que un 50%, probablemente formarn micelas esfricas, mientras que aquellos con menos de un 25% se autoensamblan en micelas inversas. A su vez, predicen que los copolmeros del bloque con una fraccin en peso hidrfila situada entre 2550% formarn polimerosomas. De acuerdo con esto, nuestro copolmero dibloque, con una fraccin en peso del 48% de PEO, se autoensamblar preferentemente en forma de vesculas, con una estructura de bicapa. Los resultados para los radios hidrodinmicos, r h , y el ndice de polidispersidad, I.P., obtenidos mediante dispersin dinmica de la luz (DLS) se recogen en la Tabla 1. Usando un mtodo de doble emulsin, la dispersin de neutrones a bajo ngulo confirma la formacin de vesculas con un espesor de membrana (o) de 18 nm y con un radio de 147 nm. Tamaos similares a estos han sido descritos previamente para polimerosomas de copolmeros de dibloque de PBb PEO con diferentes masas molares. Li y colaboradores [26], utilizando copolmeros de PB 33 b PEO 21 y PB 46 bPEO 30 en agua y aplicndoles un tratamiento trmico a 60C durante 5 horas, obtuvieron tamaos de vescula de 189 18 nm y 193 13 nm, respectivamente. Cheng y Tsourkas [17], con PEO (1300)bPB (2500) en agua y empleando el mtodo de rehidratacin de pelculas delgadas a 65C durante 2 horas, obtuvieron polimerosomas de 125 3 nm. Binder y colaboradores [13], con polibutadienobloquepoli(xido de etileno) a 60C y durante 18 horas, obtuvieron polimerosomas en el intervalo de 100200 nm, mientras que Ghoroghchian y colaboradores [18], con PEO 30 bPB 46 y usando la tcnica de disolucin directa en agua a 25C, obtuvieron polimerosomas con dimetros tan pequeos como 50 nm.
Tabla 1. Concentracin de copolmero, c, radios hidrodinmicos, r h , ndice de polidispersidad, P.I., de los polimerosomas del copolmero dibloque PBbPEO en presencia de 0,02 mg/ml de nanopartculas de oro.
c mg/mL Sonicado P.I. r h (nm) 10 100% amplitud 10 minutos 0,415 124,3 + 0,2 (Polimersomas) 480,1 + 0,4 (Agregados de polimerosomas) 10 60% amplitud 30 minutos 0,271 239,4 + 0,1 (Polimerosomas) 782,6 + 0,3 (Agregados de polimerosomas)
Las nanopartculas de oro fueron cargadas en los polimerosomas usando el mtodo de la doble emulsin con ultrasonidos. En este mtodo, un disolvente orgnico voltil que contiene el copolmero dibloque anfiflico se utiliza como la fase intermedia y los polimerosomas se forman al Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
137 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) evaporarse el disolvente. Esta tcnica ofrece las ventajas de una elevada eficiencia de carga, as como tamaos y arquitecturas de vescula controlables [8]. La Figura 3b muestra cmo la resonancia superficial de plasmn (SPR) en el espectro UVVis se desplaza a 530 nm al incorporar las nanopartculas de oro en los polimerosomas. La SPR de las nanopartculas de oro en ausencia de las vesculas (Figura 3a) se sita en 511 nm. Las oscilaciones colectivas de los electrones en las nanopartculas de oro individuales dentro de la membrana del polimerosoma desplazaron la SPR debido a la presencia de interacciones internas entre las nanopartculas y la variacin asociada al cambio de constante dielctrica del medio.
Figura 3. Espectros de absorcin mostrando la resonancia superficial de plasmn para a) nanopartculas de oro en disolucin acuosa en ausencia de vesculas y b) polimerosomas hbridas de Au@PBbPEO.
La encapsulacin de las nanopartculas de oro en la membrana hidrfoba del polimerosoma se llev a cabo con xito mediante el uso del mtodo de la doble emulsin utilizando ultrasonidos. La imagen de TEM de las nanopartculas de oro cargadas en la membrana del polimerosoma de PBbPEO, obtenido por el mtodo de la doble emulsin (utilizando una concentracin de 10 mg/ml de copolmero y 0,9 mg/ml de nanopartculas de oro, respectivamente) utilizando una tincin negativa con cido fosfotngstico, se muestra en la Figura 2. En estas imgenes, el ncleo de las nanopartculas de oro aparece negro oscuro en contraste con el polmero, de un color gris claro en la fotografa. La inclusin de estas nanopartculas de oro dentro de los polimerosomas de PBbPEO se llev a cabo mediante inclusin mecnica durante la evaporacin del disolvente orgnico y es debida a la interaccin hidrfoba entre el 1mercapto(trietilenglicol) metilter de las nanopartculas de oro y el bloque de polibutadieno del copolmero. Este sistema es un ejemplo de carga de la membrana hidrfoba de un polimerosoma debida solamente a las interacciones hidrfobicas entre el copolmero y la nanopartcula metlica funcionalizada. La Figura 4 muestra una imagen de TEM de la agregacin de dos polimerosomas cargados con Au NPs.
( u . a . ) (nm) Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
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Figura 4. Imgenes de TEM de la fusin de dos polimerosomas de PBb PEO cargados con nanopartculas de oro.
Un mecanismo comparable ha sido observado experimentalmente para la incorporacin de puntos cunticos de CdSe revestidos con una corteza de ZnS en polimerosomas de PB 130 bPEO 66
en agua [27]. En este caso, los puntos cunticos se observaron tanto en el interior del ncleo como tambin incluidos dentro de la corteza de polimerosomas. En el ltimo caso, se observ como la corteza de la vescula envuelve a la nanopartcula husped. En definitiva, aqu presentamos como la combinacin de tcnicas de dispersin (DLS y SANS) con observaciones directas por TEM nos ha permitido estudiar la estructura de los hbridos Au NP@PBbPEO en disolucin acuosa. Pero lo cierto es que todava quedan preguntas abiertas para futuros estudios, incluyendo la influencia del tamao de las nanopartculas de oro y la curvatura de la membrana de la vescula de copolmero sobre la eficiencia de encapsulacin.
CONCLUSIONES
En resumen, hemos desarrollado un mtodo de encapsulacin en el que se pueden utilizar copolmeros dibloque anfiflicos de butadieno y xido de etileno. En el hbrido resultante, la membrana minimiza el impacto de las nanopartculas, ya sean estas metlicas, magnticas o puntos cunticos, sobre el sistema biolgico objetivo. Este copolmero forma una membrana gruesa, a la que las biomolculas se pueden unir con facilidad. Usando este mtodo, pequeas nanopartculas de oro (con un tamao promedio entre 4,8 y 6,6 nm) fueron cargadas con buen rendimiento (slo un 4% de nanopartculas de oro quedaron sin encapsular), obtenindose en algunos casos tres o ms Revista Iberoamericana de Polmeros Volumen 13(3), Julio de 2012 Castro et al. Polimerosomas cargadas con nanopartculas
139 Rev. Iberoam. Polim., 13(3), 130-139(2012) nanopartculas de oro por vescula de copolmero. Tambin se ha observado algunas fusiones de vesculas, con nicamente sus capas exteriores en contacto.
Agradecimientos. Los autores agradecen al Ministerio de Ciencia e Innovacin la financiacin de este trabajo a travs del proyecto de investigacin MAT200761604. Emilio Castro adems quiere expresar su agradecimiento a la Xunta de Galicia (Espaa), y al Fondo Social Europeo, por su contrato dentro del programa ngeles Alvario.
BIBLIOGRAFA
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