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LA PRUEBA DE ELISA La técnica ELISA se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que

directa o indirectamente producen una reacción marcada enzimáticamente cuyo producto, puede ser medido espectrofotométricamente. La cantidad de antígeno se determina comparando la curva estándar generada con cantidades conocidas del antígeno. Ventajas: versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre, es fácil de adaptar a analizadores automáticos. Este se caracteriza por ser un método cuantitativamente exacto por la medición de la velocidad de la reacción y la duración de la reacción en un instante fijo único. Desventajas: para adaptarlo a analizadores automáticos se necesitan de reactivos muy purificas, lo que aumenta el costo de las pruebas.

OBJETIVOS - Conozca los principios en los que se basa la prueba de ELISA - Se familiarice con el equipo utilizado para la elaboración del la prueba de ELISA. - Conozca la importancia de este tipo de pruebas y su aplicación en el ámbito de la medicina. Aplicaciones: Este método ha tenido una enorme aplicación en todos aquellos campos en los que se precisaba la cuantificación de productos mediante anticuerpos: diagnóstico clínico, detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales, etc. 1. MATERIALES Alcohol al 70% Algodón Beaker con cloro al 5% Cloro al 5% Kit de reactivos para ELISA

2. PROCEDIMIENTO - Agregar 100 uL (4 gotas) de control positivo, control negativo y suero del paciente en los pozos siguientes: o Control positivo A1 y B1 o Control negativo C1 y D1 o Muestra de paciente E1 y F1 - Agregar 100 uL (4 gotas) de reactivo de conjugado en todos los pozos (A1 al F1) - Incubar durante 20 minutos - Lavar tres veces cada pozo con solución buffer de lavado - Agregar 100 uL (4 gotas) de reactivo de cromógeno (sustrato) - Incubar durante 20 minutos - Interpretación: o Positivo: cambio de color amarillo o Negativo: cambio de color a azul

con una discusión de los mismos. Presentar los resultados en forma escrita.3. RESPONSABILIDAD DE ENFERMERIA    Recuerde que las muestras de pacientes son potencialmente infectivas. Aplique también las medidas de bioseguridad en el descarte de los materiales. por lo que debe observar las medidas universales de bioseguridad. .

HSV IgG (Prueba de ELISA para detección de anticuerpos IgG anti-Herpes simplex 1 en suero humano) . P. 254 – 257).917 (Pág. Inmunología básica y clínica 10 Ed. Stites d et al. . Editorial El manual moderno México. 2002.BIBLIOGRAFÍA Parslow t.