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CBTis

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PRUEBAS TRANSFUSIONALES
CUADERNILLO DE PRACTICAS DE LABORATORIO

ESPECIALIDAD LABORATORISTA CLINICO V SEMESTRE ALUMNO:____________________________________________

CONTENIDO Objetivo Fundamentación Practica 1 Práctica 2 Práctica 3 ASEPSIA Y VENOPUNCIÓN A DONADORES DETERMINACION DE LA FORMULA ROJA DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS SISTEMAS ABO Y RH (MÉTODO DIRECTO EN TUBO) Práctica 4 Práctica 5 DETERMINACION DE SUBGRUPOS A1 Y A2 DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO

SISTEMA ABO (MÉTODO: INVERSO) Práctica 6 Práctica 7 Práctica 8 Práctica 9 Práctica 10 Práctica 11 Práctica 12 DETERMINACION DE LA VARIEAD DU REACCIONES FEBRILES DETERMINACIÓN DE V.D.R.L. Y R.P.R. DETERMINACION DE VIH Y HEPATITIS C PRUEBA DE COOMBS DIRECTA PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (PRUEBAS CRUZADAS) Bibliografía

OBJETIVO

El alumno conoce y aplica las técnicas adecuadas para: la selección de donadores de sangre segura y las técnicas de recolección de sangre, además realiza las diferentes pruebas pretransfunsionales para una compatibilidad sin riesgo; de igual forma se busca que el alumno tenga los conocimientos, habilidades y destrezas necesarios para que pueda obtener y clasificar los diferentes hemoderivados de la sangre para su conservación, transporte y utilización.

. cirugías o por enfermedades sistémicas. conservarlos adecuadamente para tenerlos disponibles para los pacientes que tienen deficiencia de alguno de ellos o perdidas por accidentes. así como sus funciones. en particular los celulares. recolectar la sangre. Por lo tanto.FUNDAMENTACION La sangre hasta hoy es irreemplazable. son demasiado complejos para ser "fabricados". estudiarla. la transfusión sanguínea es la única alternativa para ciertos pacientes. Varios componentes sanguíneos. separarla en sus componentes. Con este submódulo el estudiante conoce y aplica los procedimientos y técnicas para seleccionar a los voluntarios sanos para donar. no existe en forma artificial.

Dos pinzas de Nelly .Tijeras . domicilio y teléfono del establecimiento . FUNDAMENTO: La contaminación bacteriana de la sangre y sus componentes es un problema significativo en la práctica transfusional. Se debe tomar como rutina una técnica en especial para la desinfección del brazo de los donadores para que de esta manera se reduzca la posibilidad de contaminación bacteriana.Torundas con alcohol . doble o triple) . La desinfección inadecuada del sitio de venopunción puede aumentar la probabilidad de contaminación.Bolsa recolectora de sangre (sencilla.Jabón líquido e isodine espumoso (cutáneo) .Gasas estériles y cinta adhesiva . materiales y cuidados que se deben tener durante una flebotomía a donadores a fin de robustecer su desempeño en el banco de sangre.PRACTICA: 1 ASEPSIA Y VENOPUNCIÓN A DONADORES OBJETIVO: Que el alumno conozca el procedimiento.Nombre del donador y anotar el tipo de donación: familiar o altruista . que puede ocasionar infección y en casos graves la muerte del paciente a transfundir. MATERIAL Y EQUIPO: .Tubos de ensaye con y sin anticoagulante (EDTA) . de la sangre y sus componentes.Fumarato Ferroso CARACTERISITICAS DE LOS MARBETES (ETIQUETAS) EN LAS BOLSAS RECOLECTORAS DE SANGRE Y SUS FRACCIONES Nombre. La sangre y sus componentes pueden contaminarse de manera exógena y endógena.Identificación del grupo sanguíneo ABO con letras de 3X3 cm siguiendo las indicaciones del “CODIGO INTERNACIONAL DE COLORES” - .

anotar el nombre completo del paciente. señalarlo claramente en la etiqueta con la leyenda “BAJA. NO USAR”.Indicación del factor Rh (con palabras POSITIVO O NEGATIVO) .Dibujar una bolsa de donación y especificar sus componentes.Señalar el volumen y producto conservado .Investigar la utilidad de las bolsas satélites de las unidades de donación.Fecha de extracción y caducidad de acuerdo al anticoagulante Empleado..Llevar la leyenda consérvese entre 4 – 6 ºC . número de cama.• Amarillo para el gurpo A • Azul para el gurpo B • Rojo para el grupo AB • Negro para el grupo O . . 3. ACTIVIDAD: 1. . 2..En caso de que el producto se encuentre preparado para un receptor determinado..Consultar porqué son los citratos los anticoagulantes utilizados para almacenamiento de las unidades de donación.Si el producto está pendiente de ser dado de baja. .Se inscribirá el resultado de las pruebas de laboratorio efectuadas . servicio y resultado de las pruebas de compatibilidad pretransfusionales.

se escoge una vena grande de la región antecubital generalmente la vena media.Se efectúa un nudo flojo en el tubo de hule de la bolsa. . no se incline. Posteriormente se punciona con el bisel hacia arriba y siguiendo el curso de la vena. como tubos pilotos.Colocar la bolsa recolectora a un nivel inferior al brazo del donador. fijar la aguja con cinta adhesiva. uno con anticoagulante y otro sin el. se pinza y se retira el protector de la aguja.Es importante que el donador se encuentre en ayuno. eliminar el jabón con una torunda con alcohol y posteriormente aplicar una solución desinfectante por dos minutos. .El donador debe de estar recostado en una posición elevada para que el técnico que realice la venopunción. la sangre debe fluir libremente. . . .Una vez terminada la recolección. . y en casos urgentes con mínimo de cuatro horas. . para asegurar la mezcla con el anticoagulante.Inspeccionar continuamente la posición de la aguja y observar que no se presenten coágulos. Una vez realizada la asepsia . se utiliza el isodine espumoso (solución yodada). quitar el isodine con una torunda con alcohol.Llenar dos tubos. Una vez seleccionada se procede a realizar la asepsia. colocar dos pinzas Nelly en el tubo de Hule inmediatamente después de la región de punción y cortar con unas tijeras en medio de ellas. . .Asepsia: Limpiar una zona en circulo de aproximadamente 8 a 10 cm de diámetro con jabón líquido (vigorosamente).Mezclar la bolsa con movimientos continuos de arriba hacia abajo hasta terminar el sangrado.POSICION DEL DONADOR Y FLEBOTOMIA .Para realizar la flebotomía (técnica de venopunción). .Retirar las pinzas y al aparecer el flujo de sangre con velocidad constante. aflojar el torniquete ( no lo quite ) para que la sangre fluya por gravedad. . . ESTA REGION NO SE DEBE TOCAR. esto se realiza despinzando el trozo de tubo de hule que aun permanece insertado en el brazo.Colocar el torniquete en el brazo indicando al paciente que cierre el puño.

3.Volver a pinzar y retirar el torniquete y las cintas adhesivas.. almacenarla en el refrigerador de 4 – 6 ºC.¿Que complicaciones se pueden presentar cuando se rebasa el tiempo de sangría del dondaor?.¿Cuales son las concentraciones indicadas para los antisépticos utilizados en la flebotomía a donadores? 4. . se le proporciona una dieta principalmente rica en líquidos y se le administran pastillas de Fumarato ferroso (se le indican 20 comprimidos para que tome una pastilla después de cada alimento).¿Cuanto es el tiempo estimado para la sangría de un donador? 2.Después de permanecer 10 minutos en reposo. el donador.A la unidad de sangre recolectada.¿Cual es la finalidad de seccionar la manguera de la unidad de sangre con nudos o con sellos durante su almacenamiento? PRACTICA: 2 DETERMINACION DE LA FORMULA ROJA .... extraer las burbujas de aire y cerrar el tubo de hule con nudos o utilizando un sellador eléctrico. . Extraer la aguja lentamente y colocar una torunda con alcohol.En caso de desmayo. doblar el brazo indicando al donador que permanezca en reposo durante 10 min. ACTIVIDAD: 1. coloque los pies del donador a un nivel superior y que aspire una torunda con alcohol.. .

4.Mechero Bunsen .Boquilla ..Tubos de ensayo .Registrar el resultado...Gradilla para tubos . HEMOGLOBINA (CIANOMETAHb) .Capilares . el hematocrito y los índices hemáticos (o eritrocitarios). 5.Homogeneizar la muestra y llenar un tubo capilar a 2/3 partes de su capacidad.Solución de Drabkin .Obtener el % de Hematocrito con una tabla o por cálculo.Tubos con anticoagulante EDTA .Pipetas serológicas de 10 ml . Con el surgimiento de los contadores electrónicos de células se ha incluido el recuento total de eritrocitos MATERIAL Y EQUIPO: .000 r. FUNDAMENTO: La fórmula roja consiste generalmente en la determinación de la concentración de hemoglobina.p..Centrifugar durante 5 minutos a 11.Tabla de lectura para hematocrito . 2.MÉTODOS DETERMINACION DE HEMOGLOBINA POR CIANOMETAHEMOGLOBINA Y DETERMINACION DEL MICROHEMATOCRITO OBJETIVO: El alumno realiza la determinación de Hemoglobina y hematocrito para valorar en un primer plano el estado de la sangre de un posible donador dentro del banco de sangre..Centrífuga .Sellar con plastilina o al calor uno de los extremos del capilar 3.Pipeta de Salí .m.Espectrofotómetro PROCEDIMIENTO: MICROHEMATOCRITO 1.

0 – 15.En la actualidad ¿que procedimientos realizan los bancos de sangre para determinar la formula roja de los donadores? 2.. 2.5 gr/dl Mujeres: 12.. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS: Dependiendo de los valores obtenidos para Hb... de Drabkin 3.¿Que ventajas ofrecen éstos procedimientos? .5 gr/dl ACTIVIDAD: 1..Leer Absorbancia en espectrofotómetro a 540 nm 5.5 – 17.Homogeneizar la muestra y con pipeta de Salhi recoger 20μl (λ) de sangre.Interpretar con la curva correspondiente o un factor..1.Mezclar y dejar reposar durante 10 minutos 4. se valorará al donante para su aceptación o rechazo de acuerdo a los requisitos de donación establecidos por el Sector Salud. Hto e IE.Colocar la muestra en un tubo de ensaye preparado con 5 ml de Rvo.. VALORES DE REFERENCIA HEMATOCRITO: HEMOGLOBINA: Hombres Mujeres 40 – 54 % 37 – 47 % Hombres: 13.

El factor Rh se descubrió en 1940 por Landsteiner y Wiener realizando estudios en monos Rhesus. La isoaglutinación se lleva a cabo a temperatura ambiente (20 – 25 ºC).85%) Anticoagulante EDTA Antisueros A. En conclusión se investigó que en la membrana de los eritrocitos se puede encontrar en la mayoría de las personas un Ag el “D” que es el que designa el Rh.PRACTICA: 3 DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS SISTEMAS ABO Y RH MÉTODO DIRECTO EN TUBO OBJETIVO: Que el alumno aprenda y aplique el método para la identificación de antígenos eritrocitarios como preámbulo a la compatibilidad de una unidad de sangre. B. utilizando antisueros comerciales. FUNDAMENTO: El sistema ABO es el único sistema sanguíneo en que el plasma y el suero contienen aglutininas que reaccionan con los antígenos presentes en los hematíes de otras personas. IgM). AB y D . y las isoaglutininas (Ac responsables de la aglutinación) son del llamado tipo Completo ( Inmunoglobulinas M. Por estas reacciones de antígeno– anticuerpo (Ag-Ac) Landersteiner demostró la presencia de grupos sanguíneos ABO. MATERIAL Y EQUIPO: Tubos de ensayo Pipetas Pasteur Gradilla para tubos Centrífuga Solución salina fisiológica (0.

2. Registrar los resultados. “B”.m..Colocar a cada uno de los cuatro tubos una gota de eritrocitos. 5. ..p.. “AB” y “D”.Si aglutina en tubo “D” Si no aglutina en tubo “D” Rh Positivo Rh Negativo OBSERVACIONES: La presencia de Ag y Ac en el sistema sanguíneo ABO se confirman en la práctica de “GRUPO INVERSO”.AGLUTINACION EN: Tubo A y tubo AB Tubo B y tubo AB Tubo AB No hay aglutinación en tubos A.. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS: SISTEMA ABO.. GRUPO SANGUÍNEO: A B AB O SISTEMA Rh.Mezclar y centrifugar a 1000 r. B y AB.Resuspender las células (el botón) cuidadosamente y observar la presencia de aglutinación macroscópica. a cada tubo respectivamente. 3.PROCEDIMIENTO: 1. previamente lavados y diluidos al 2 -5% en SSF.Rotular cuatro tubos como “A”.Colocar una gota del antisuero. A todos los Rh negativos se les practicará la variedad débil del Ag “D” (Du). 4. durante 15 a 30 segundos.

por 15 segundos y observar la aglutinación.000 r. los Ac investigados son: anti-A. 4. MATERIAL: .Pipetas Pasteur .Tubos de ensaye . 3.Rotular dos tubos de ensayo como A y B respectivamente.Solución salina . agregar dos gotas de suero o plasma del paciente y una gota de glóbulos rojos conocidos “A”. anti-AB o ninguno.m.Gradilla PROCEDIMIENTO: 1.Mezclar. agregar dos gotas de suero o plasma del paciente y una gota de glóbulos rojos conocidos “B”.Al tubo “B”.Centrífuga .Al tubo “A”..Células conocidas “B” . centrifugar a 3. anti-B. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS: AGLUTINACION Eritrocitos A B AB GRUPO SANGUINEO B A O REACTIVOS: . El grupo inverso se determina con los Ac del suero tanto del donador como del receptor. FUNDAMENTO: El grupo inverso también llamado sérico o de confirmación (afirmagén) se determina probando el suero o plasma de una muestra de sangre con eritrocitos conocidos de grupo A y B (al 2–5% en solución salina).. 2.p..PRACTICA 5 DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO MÉTODO: INVERSO OBJETIVO: Que el alumno conozca y aplique el procedimiento para determinar los anticuerpos del sistema ABO presentes en una muestra de suero o plasma utilizando eritrocitos de grupo sanguíneo conocido..Células conocidas “A” .

ANTIGENOS A B AB AUSENTE A. así como las inmunoglobulinas correspondientes a éstos sistemas..B D AUSENTE D ANTICUERPOS anti-B anti-A NINGUNO anti-A y anti-B NINGUNO NINGUNO GRUPO A B AB O Rh POSITIVO Rh NEGATIVO ACTIVIDAD: 1.¿Cual es el origen de las inmunoglobulinas de grupo sanguíneo del sistema ABO en los seres humanos? .Esquematiza los sistemas antigénicos ABO y Rh.CONTROL DE CALIDAD: Es importante comprobar la eficacia de los reactivos principalmente que tanto las células conocidas como el suero o plasma no se encuentren hemolizados ni contaminados.. 2.

PRACTICA 4 DETERMINACION DE SUBGRUPOS A1 Y A2 OBJETIVO: Que el alumno conozca el procedimiento para identificar los subgrupos de A. MATERIAL: . 4.Pipetas Pasteur . B y O (control negativo).Gradilla . Bird en 1952 descubrió un estrato preparado a partir de semillas de Dolichus biflorus que aglutinaba solamente con los hematíes humanos del grupo A1. CONTROLES: La reactividad del producto debe confirmarse cada día antes de usarse mediante el empleo de células conocidas del grupo A1 (control positivo) y células conocidas del grupo A2. El anti-A1 lectina usado con técnicas serológicas apropiadas puede ayudar a distinguir entre los subgrupos anguíneos A1. A2.m. FUNDAMENTO: G. .Añadir una gota de la suspensión de las células al 2 . 6. 2... Registrar los resultados. pero no aglutina con los subgrupos débiles de A.Centrífuga REACTIVOS: . La lectina anti-A1 contiene una fitoaglutinina que aglutina con los hematíes humanos del subgrupo A1.W. Mezclar. 3.y observar la presencia de aglutinación macroscópica.Resuspender las células (el botón) cuidadosamente –deslizando la muestra de forma horizontal.Etiquetar un tubo de ensaye para la identificación apropiada..5%.. A2B y otros subgrupos débiles de A.Preparar una suspensión de células lavadas al 2 – 5% en solución salina. durante 30 segundos.Centrifugar 1000 r. en el tubo etiquetado.Dispensar dos gotas de Lectin-A1.Solución salina fisiológica .. A1B.Lectina anti-A1 PROCEDIMIENTO: 1. 5.p.Tubos de ensaye .. aplicando el método de aglutinación directa utilizando un antisuero comercial.

Consultar que es una fitoaglutinina 3....Subgrupos A2..Esquematiza la reacción Ag-Ac entre la fitoaglutinina y el Ag eritrocitario .ITERPRETACION DE RESULTADOS: 1.¿Qué es el Dolichus biflorus? 2. El test en portaobjetos debe ser leído en un tiempo no superior a un minuto.Subgrupos A1 y A1B aglutinan 2.. LIMITACIONES DE LA TÉCNICA: No incluir tubos de ensaye a 37 ºC. y otros subgrupos débiles de A no aglutinan. ACTIVIDAD: 1. A2B.

3...Centrífuga PROCEDIMIENTO: 1. MATERIAL: .PRACTICA 6 DETERMINACION DE LA VARIEAD DU OBJETIVO: Que el alumno conozca y aprenda el procedimiento para detectar alguna irregularidad o ausencia del Ag D. agregar una gota del suero anti – D e incubar durante 15 minutos a 37 ºC.Al residuo ya lavado se le agrega una gota del suero de Coombs. que posteriormente reacciona con el Ac “intermedio” antigamma globulina (suero de Coombs) para formar un puente entre la gamma globulina facilitando el acercamiento de los eritrocitos y así provocar la aglutinación en caso de que los eritrocitos contengan el “Du”. 2. FUNDAMENTO: Se basa en la reacción del Ag Du con el Ac “incompleto” gamma globulina.Suero anti .Pipeta Pasteur .Observar la presencia o ausencia de aglutinación: En caso negativo continuar con tres lavados de la muestra con solución salina. expresión que se encuentra regulada genotípicamente y cuyo fenotipo implica una gran importancia en la prevención de reacciones hemolíticas de Recién Nacidos o postrasnfusionales. A 37 ºC. En caso positivo se termina el procedimiento y se reporta Rh POSITIVO.. 4.Tubo con anticoagulante (EDTA) ..Tomar una gota de la suspensión al 5% y colocarla en un tubo de ensaye. mezclar e incubar durante 30 min.“D” .Tubos de ensaye .Suero de Coombs (anti – gamma globulina o anti – globulina humana) . 5. .Preparar una suspensión de eritrocitos problema lavados al 5 %..Observar la presencia de aglutinación.

.Explica la relevancia clínica de ésta prueba 2.INTERPRETACION: Presencia de aglutinación Sin aglutinación Reportar variedad Du Positiva Reportar Variedad Du Negativa ACTIVIDAD: 1..Esquematiza la estructura bioquímica del Ag D 3.¿Qué es el suero de Coombs y que papel juega en ésta determinación? ..

02. 6. OBJETIVO: El Alumno recuerda y aplica la identificación de antígenos bacterianos mediante una reacción de aglutinación como criterio para aceptar o descartar a un donador al comprobar la ausencia o presencia de éstos respectivamente en una muestra de suero.Mezclar el frasco del Ag con movimientos circulares sobre la mesa para homogeneizar la suspensión y agregar una gota (30 μl) de cada Ag en uno de los sueros previamente depositados...Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica de acuerdo a la siguiente tabla de algutinación: . 0..Llevar los reactivos a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.Rotular la placa según el Ag a investigar 3.Depositar en la placa de vidrio 0.... 4. 2. 5. 7.04 ml del suero problema (el cual debe ser totalmente claro para la prueba).005 de forma secuenciada en cada uno de los sitios marcados para cada Ag.01 y 0. 0.PRACTICA 7 DETERMINACION DE ANTIGENOS FEBRILES FUNDAMENTO: La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación macroscópica.Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.Mezclar el Ag y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.. MATERIAL: Tubos de ensaye 13X100 Placa de vidrio Aplicadores Gradilla Pipeta serológica de 1 ml Pipeta Pasteur Tubo al vacío sin anticoagulante Lámpara REACTIVOS: Muestra de suero Tifico O y H Paratifico A y B Proteus OX-19 Brucella abortus PROCEDIMIENTO: 1.

¿Por que se utiliza el Ag OX-19 de Proteus y que bacteria nos permite identificar en ésta prueba? 3.¿Qué tipo de respuesta inmunológica induce la infección por éstos microorganismos? 2.¿Qué es un título de anticuerpos? 5.¿Por qué a la Brucelosis o fiebre de malta también se le denomina Fiebre ondulante? .4+ 3+ 2+ 1+ Neg.0l4 ml 0.01 ml 0.. Aglutinación del 100% de los organismos Aglutinación del 75 % de los organismos Aglutinación del 50 % de los organismos Aglutinación del 25 % de los organismos Aglutinación del 0 % de los organismos INTERPRETACIÓN: El título del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación del 50 % de organismos (2+)..02 m 0.¿Que limitaciones presenta el procedimiento? 6..¿Qué es la reacción de Huddleson y que permite detectar? 4.005ml TITULO 1:40 1:80 1:160 1:320 ACTIVIDAD: 1.. VO LUMEN DEL SUERO 0...

R.PRACTICA 8 PRUEBA DE V.Agitar la muestra durante 4 minutos con movimientos ondulatorios.D.L.En pocillos diferentes y previamente marcados colocar una gota de suero control positivo y negativo.R.. Microscopio Pipeta serológica desechable Pipeta Pasteur REACTIVOS: Suero problema Reactivo para V. 5. 21 sin bisel. como criterio para aceptar o descartar a un donador en función del resultado obtenido al analizar una muestra de suero.Añadir una gota del Ag en suspensión estabilizado previamente y resuspendido. 6.. OBJETIVO: El alumno recuerda y aplica el procedimiento de la prueba de V. .D.L.Pasados los 4 minutos leer inmediatamente al microscopio con objetivo de 10X.05 ml del suero con pipeta desechable 3. dispensar 0.D. MATERIAL: Tubo al vacío sin anticoagulante Placa horadada para V. 2. 4.R.. comparable con el control Positivo. en cada una de las muestras utilizando la aguja No.D. Control Positivo y Control negativo.R.L. INTERPRETACIÓN: POSITIVO: Presencia de floculación mediana o grande. extender sobre la superficie del anillo.R. es una prueba de floculación no treponémica microscópica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas.D.. NEGATIVO: Ausencia de floculación.L. un Ac anti-lipídico (cardiolipina y lectina) encontrado en el suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crónicas en otras condiciones aparte de la sífilis.L. PARA IDENTIFICACION DE SIFILIS METODO CUALITATIVO FUNDAMENTO: La prueba de V.-En uno de los pocillos de la placa de vidrio.Rotular los pocillos de la placa como Muestra. PROCEDIMIENTO: 1..

.¿Qué es la floculación? 4..¿Qué métodos son en la actualidad utilizados para el diagnóstico de sífilis...¿Qué otro método nos permite identificar de forma eficaz y rápida ésta enfermedad? .ACTIVIDAD: 1. enlista en orden decreciente de importancia clínica? 3.¿Que es la cardiolipina y por que se utiliza para el diagnóstico de sífilis? 2.

MATERIAL: Tubo al vacío sin anticoagulante Vial de reacción para VIH y HCV Pipeta Pasteur Tubo de ensaye 13X100 Gradilla REACTIVOS: Suero Problema Solución de lavado para VIH y HCV PROCEDIMIENTO: 1. .Sacar el cartucho de su sobre y colocarlo en una superficie seca. La banda control indica que el conjugado de oro coloidal es funcional. Esta banda control es el resultado de la unión del conjugado de oro coloidal al anticuerpo viral (VIH o VIH) inmovilizado en la membrana..Identificar los cartuchos para cada muestra o control.. OBJETIVO: El alumno recuerda y aplica el procedimiento inmunocromatográfico para identificación de virus (VIH y HCV) dentro del proceso de selección del donador. Los Ag utilizados en la prueba de conjugado son proteínas recombinantes altamente inmunoreactivas de VIH-1 y VIH-2..No abrir los sobres sellados hasta que se esté listo para la prueba. 3. Una banda coloreada en la región control aparece al final de la prueba sin considerar el resultado de la prueba.PRACTICA 9 IDENTIFICACIÓN DE VIH Y HCV METODO: INMUNOCROMATOGRAFICO CUALITATIVO FUNDAMENTO: La prueba se basa en poner en contacto una muestra de suero con un conjugado de Ag viral-oro coloidal (VIH o HCV) embebido en el pocillo de muestra el cual reacciona con los Ac presentes en la muestra formando un complejo Ac-Ag-conjugado. Una muestra negativa no produce una banda colorida debido a la ausencia del complejo conjugado de oro coloidal/anticuerpos (anti-VIH o anti-HCV). la mezcla emigra a lo largo de la tira de prueba el cual es captado por un Ag de VIH recombinante inmovilizado en una membrana y formando una banda colorida en la región de prueba. Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente. 2. a fin de dar seguridad a la sangre para donación.

Posteriormente agregar 1 gota del diluyente en el pocillo S (para prueba de VIH) y en el pocillo D (para prueba de HCV).¿Que es un método inmunocromatográfico? 2... C T Positivo C T C T Negativo C T Inválido C T ACTIVIDAD: 1. NEGATIVO: Solo la banda control aparece de color rojo púrpura en la membrana.¿Qué muestras pueden ser utilizadas para éste método? 3.4.¿Cuál es la importancia clínica de realizar éstas determinaciones en una unidad de donación? .. INTERPRETACION: POSITIVO: Tanto la banda de prueba como la banda control se colorea de rojo púrpura..Colocar una gota de muestra o control (con el gotero proporcionado) en el pocillo S. Repetir la prueba empleando un nuevo cartucho. Si la banda control no se observa la prueba se considera inválida. 5.. INVALIDO: siempre tendrá que haber una banda color rojo púrpura en la región de control independientemente del resultado de la prueba.

PRACTICA 10 IDENTIFICACIÓN DE HBsAg FUNDAMENTO: Inmunoensayo de oro coloidal cuya reacción es tipo “sandwish”. OBJETIVO: El alumno conoce el procedimiento cualitativo para identificar HBsAg aplicando el método inmunocromatográfico a una muestra de suero. Esta mezcla emigra a través de la membrana por acción capilar y reacciona con el anti.Identificar los cartuchos para cada muestra o control. 2.Interpretar resultados a los 15 minutos exactos.. 5. Durante el ensayo la muestra inicial reacciona con el complejo del Ac monoclonal-conjugado de oro coloidal en el área de la muestra. Si no hay Ag en la muestra no se formará la línea. Si la muestra contiene HBsAg se formará una banda coloreada en ésta región.HBsAg en la región de prueba. con el fin de evaluar a un donador y asegurar la confiabildad de una unidad de donación... MATERIAL: Tubo al vacío sin anticoagulante Vial de reacción para VIH y HCV Pipeta Pasteur Tubo de ensaye 13X100 Gradilla REACTIVOS: Suero Problema Solución de lavado para VIH y HCV PROCEDIMIENTO: 1..No abrir los sobres sellados hasta que se esté listo para la prueba. El anti-HBsAg es inmovilizado en la región de prueba de la membrana de nitrocelulosa.Colocar tres gotas de muestra o control (con el gotero proporcionado) en el pocillo S. . Una banda coloreada siempre se formara en la región control lo que indica que el resultado de la prueba es válido.Sacar el cartucho de su sobre y colocarlo en una superficie seca. 4. 3. suero o plasma. que detecta el Ag de superficie de la Hepatitis B en muestras de sangre total.. Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente. indicando un resultado negativo.

.Describe las variantes del procedimiento de ELISA y esquematiza el Fundamento de cada uno.¿Qué recomendaciones se hace para utilizar sangre total en éste procedimiento? 2.. . Repetir la prueba empleando un nuevo cartucho.INTERPRETACION: POSITIVO: Tanto la banda de prueba como la banda control se colorea de rojo púrpura.. Si la banda control no se observa la prueba se considera inválida.¿Qué ventajas ofrece una técnica de ELISA sobre una inmunocromatografía? 4.¿Qué es el HBsAg? 3. INVALIDO: siempre tendrá que haber una banda color rojo púrpura en la región de control independientemente del resultado de la prueba. NEGATIVO: Solo la banda control aparece de color rojo púrpura en la membrana. C T Positivo C T C T Negativo C T Inválido C T ACTIVIDAD: 1..

con el fin de identificar una muestra de paciente sensibilizado y conozca así como sus implicaciones clínicas. . con un isoanticuerpo incompleto (anti-Rh. anti-Kell. Agregar en un tubo de ensaye rotulado como problema: 7 ml de SSF mas de 5 a 10 gotas de la muestra sanguínea. o de paciente politransfundido). Se prepara en suspensión al 2% de eritrocitos. termo block o termobaño Solución Salina Fisiológica (SSF) Cronómetro Centrífuga MUESTRA PROBLEMA: Eritrocitos lavados (generalmente de un lactante materno sensibilizado. 1:20 Pipeta volumétrica de 10 ml Suero de Coombs Incubadora. los Ac son antiglobulínicos (suero de Coombs) los eritrocitos revestidos IN VIVO. MATERIAL: REACTIVOS: Tubo al vacio con EDTA Muestra problema anticoagulada Tubos de ensaye 13X100 Eritrocitos control Rh pos y neg al 2% Pipeta Pasteur con bulbo Suero anti-D dil. Mezclar y centrifugar a 1500 RPM durante 1 min. Decantar cuidadosa y totalmente el sobrenadante y repetir el lavado 2 veces más. Preparar la suspensión al 2% en medio salino mezclando 2 gotas de los eritrocitos problema lavados mas 5 ml de SSF. anti-Duffy) resulta en una aglutinación de éstos eritrocitos.PRACTICA 11 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA FUNDAMENTO: Los anticuerpos incompletos se unen fácilmente con los sitios antigénicos de los eritrocitos revistiéndolos pero sin dar muestra de aglutinación. OBJETIVO: El alumno aprende y comprende la técnica. REACTIVO ANTI-D DILUCIÓN 1:20: Mezclar 1 gota de Anti-D mas 1 ml de SSF.

.Esquematiza los diferentes tipo de Inmunoglobulinas 2.¿En que pacientes suele dar positiva ésta prueba y por que? 5. centrifugar a 1500 RPM / 2 min y decantar lo mas posible. 1:20 Eritrocitos Rh (-) 2% Eritrocitos Rh (+) 2% 1 gota 2 gotas ------------------- CONTROL POSITIVO 1 gota ------------------2 gotas PROBLEMA ---------------------------------------------------------- Lavar 3 veces el sedimento agregando SSF a la mitad del tubo.. Observar presencia de aglutinación macro y microscópicamente. Suero de Coombs 2 gotas 2 gotas 2 gotas Eritrocitos Problema ----------------------------------2 gotas al 2 % Mezclar y centrifugar a 1000 RPM / 1 min.PROCEDIMIENTO: CONTROL NEGATIVO Anti-D Dil..¿Antes de realizar un Coombs Directo que es lo primero que se debe verificar? .Esquematiza la reacción Ag-Ac en la prueba de Coombs directa e indirecta 3. INTERPRETACION: Coombs Directo Positivo: Presencia de Aglutinación Coombs Directo Negativo: Ausencia de Aglutinación ACTIVIDAD: 1...¿Que clase de Inmunoglublinas son las que se encuentran presentes en el suero de Coombs? 4.

Al adicionar suero con anticuerpos antiglobulínicos (suero de Coombs) estos forman un puente con los anticuerpos (globulinas) de los eritrocitos revestidos IN VITRO. anti-Kell. termo block o termobaño Cronómetro Centrífuga REACTIVOS: Muestra del suero problema Eritrocitos Rh pos al 2% Suero anti-D dil. Mezclar y centrifugar a 1500 RPM durante 1 min. Preparar la suspensión al 2% en medio salino mezclando 2 gotas de los eritrocitos control lavados más 5 ml de SSF. a fin de identificar una sensibilización in-vivo por una reacción de incompatibilidad previa al proceso. con isoanticuerpos completos (anti-Rh. ERITROCITOS CONTROL: Eritrocitos lavados Rh pos. Agregar en un tubo de ensaye rotulado como problema: 7 ml de SSF más de 5 a 10 gotas de la muestra sanguínea. 1:20 Suero de Coombs Solución Salina Fisiológica (SSF) MUESTRA PROBLEMA: Suero de la madre o del paciente politransfundido. anti-Duffy) presentes en el suero de la madre o eritrocitos transfundidos resultando la aglutinación de los eritrocitos revestidos. Se prepara en suspensión al 2% de eritrocitos. Decantar cuidadosa y totalmente el sobrenadante y repetir el lavado 2 veces más. OBJETIVO: El alumno aprende y comprende la técnica para realizar la prueba de Coombs indirecta. . MATERIAL: Tubos de ensaye 13X100 Pipeta Pasteur con bulbo Pipeta volumétrica de 10 ml y 1 ml Incubadora.PRACTICA 8 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA FUNDAMENTO: Los anticuerpos incompletos conocidos o desconocidos se unen fácilmente con los sitios antigénicos de los eritrocitos revistiéndolos pero sin dar muestra de aglutinación. incrementando con esto sus conocimientos confirmando su desempeño en el banco de sangre.

preparar la dilución en razón progresiva doble tomando 0. Tubos problema Control Positivo Control Negativo (del 1 al 10) Eritrocitos Rh (+) 0. del cual se desechara el volumen correspondiente a 0.1 ml de la mezcla del tubo 2 y pasarlo al 3. INTERPRETACION: COOMBS INDIRECTO NEGATIVO: Sin aglutinación en la 1ª y 2ª observación COOMBS INDIRECTO POSITIVO: Con aglutinación en la 2ª observación.1 ml de la mezcla.Deposite 0. mezclar y tomar nuevamente 0. PROCEDIMIENTO: Numere del 1 al 12 tubos 13X100.1 ml de suero problema a los tubos 1 y 2.Añadir 0. 4. Decantar lo más posible. . Suero de Coombs 1 gota 1 gota 1 gota Mezclar y centrifugar 1 min / 1000 RPM..1 ml de la mezcla del tubo 3 y pasarlo al tubo 4 y así sucesivamente hasta el tubo 10. ANTICUERPOS SALINOS POSITIVOS: Con aglutinación en la 1ª observación. Centrifugar 1 min / 1500 RPM.1 ml de SSF en los tubos del 2 al 10. 3. 1:20 ---------------2 gotas ----------------Mezclar e incubar 60 min / 37 º C los 12 tubos. realizar la segunda observación buscando la presencia de aglutinación.1 ml a cada tubo 2 gotas 2 gotas Anti-D dil.. Lavar 3 veces con SSF.REACTIVO ANTI-D DILUSIÓN 1:20: Mezclar 1 gota de Anti-D más 1 ml de SSF. centrifugando 1 min / 1000 RPM.-A partir del tubo 2. realizar la primera observación para verificar la presencia de aglutinación o hemólisis. 2.

..¿Qué diferencia hay en la interpretación de un Coombs directo y uno Indirecto? 3.¿A que hace referencia una prueba de Coombs Indirecta positiva? 2..¿Para que utilizas el suero Anti-D diluido 1:20 en ésta prueba? .ACTIVIDAD: 1.

Una segunda técnica puede ser un medio hiperproteico como albúmina. o enzimas como bromelina o LISS. por lo que debe ser capaz de detectar anticuerpos activos a bajas temperaturas y diferenciar entre reacciones positivas verdaderas y falsas. el cual nos permitirá verificar todos los procesos y etapas que influirán en la detección de los anticuerpos. Prueba de compatibilidad La prueba cruzada mayor incluye técnicas que permiten demostrarla ausencia de anticuerpos regulares e irregulares de importancia clínica en el suero del receptor contra eritrocitos del donador. particularmente cuando se pretende transfundir sangre total proveniente de un donador con antecedentes propiciadores de aloinmunizaciòn. Las pruebas cruzadas normalmente se llevan a cabo en cuatro fases: lectura rápida. siendo esta última la más eficaz. nos ayudan a prevenir la transfusión de sangre incompatible. Antes de realizar cada procedimiento es muy importante contar con un excelente control de calidad. (embarazos o transfusiones previas). lectura de 37º.PRACTICA 9 PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD: PRUEBAS CRUZADAS Importancia de las pruebas cruzadas y de la búsqueda de anticuerpos RESUMEN Las pruebas cruzadas y la búsqueda de anticuerpos son de suma importancia. El medio que rodea la prueba está muy relacionado con los potenciadores y con la fuerza iónica que favorece la reacción antígeno-anticuerpo. y proveen al paciente de máxima seguridad y beneficio. lectura 37º/Coombs. ya que permiten que los antígenos y anticuerpos puedan ser detectados y estudiados en el laboratorio. . La prueba cruzada menor detecta anticuerpos en el suero del receptor. validación con eritrocitos sensibilizados. La investigación de anticuerpos irregulares libres en suero se debe realizar por lo menos con dos técnicas.

Para albumina y bromelasa centrifugar 45 segundos. a fin de evidenciar las reacciones de incompatibilidad entre el donador y receptor y de ésta manera dar un servicio de calidad aportando una unidad de sangre segura.Lavar los eritrocitos 3 veces con solución salina 3 minutos a 3400 rpm 3. OBJETIVO: Que el alumno aprenda el procedimiento y comprenda el fundamento de la técnica para las pruebas cruzadas.. mb ---2g 2g ------3g AT ---2g ---2g ------- .Verificar que las muestras estén etiquetadas: Donador y Receptor 2. MATERIAL: REACTIVOS: Tubos al vacío sin anticoagulante Sangre del Donador Tubos al vacio con EDTA Sangre del Receptor Gradilla Albúmina 22% Tubos de ensaye 13X100 Bromelasa Pipeta Pasteur Suero de Coombs Pizeta con SSF Incubadora PROCEDIMIENTO: 1.incubado y leído con los mismos pasos de la prueba cruzada.Se rotulan los tubos para llevar acabo las pruebas. Fase I Ms Ma Mb ms ma gR donador 2g 2g 2g ------gR receptor ---------2g 2g Suero/Plasma ---------2g 2g donador Suero/Plasma 2g 2g 2g ------receptor Albumina al 22% ---3g ------3g Bromelasa ------3g ------Mezclar y centrifugar 15 seg a 3400 rpm. Observar presencia de aglutinación o hemólisis..El auto testigo cosiste en poner en un tubo debidamente identificado suero del paciente y suspensión de glóbulos rojos del mismo al 5%.. FUNDAMENTO: Las pruebas de compatibilidad son un procedimiento de Laboratorio que permite conocer si existe compatibilidad serológica entre la sangre de una persona donante y la de un receptor.

Observar presencia de aglutinación. se agrega a cada tubo una gota de células sensibilizadas para verificar el consumo. por débil que sea. Lavar los eritrocitos de todos los tubas 3 veces con SSF 3 min a 3400rpm Suero de Coombs 2g 2g 2g 2g 2g 2g 2g Mezclar y centrifugar 15 segundos a 3400 rpm. se debe deshacer completamente el botón celular. Observar presencia de aglutinación. después agitando suavemente e inclinando el tubo para apreciar cualquier aglutinación. OBSERVAR: Se observa el sobrenadante en busca de hemólisis.Fase II Fase III Se dejan a Ta de    15 a 30 min Se incuba a 37ºC     de 15 a 30 min. Para albumina y bromelasa centrifugar 45 segundos. Si no hay aglutinación o hemólisis. Mezclar y centrifugar 15 segundos a 3400 rpm. INTERPRETACION: .

plasmas frescos-congelados. de no ser así la prueba no se puede dar por válida y tendrá que repetirse. y concentrados plaquetarios. (Pero se debe proceder a determinar el porque de la incompatibilidad). se les deberá correr la prueba menor.INCOMPATIBLE: En caso de observarse hemólisis o aglutinación en cualquiera de las fases. NOTA: Después de agregar las células control. VALORACION DE LAS REACCIONES CRUZADAS . se deberá apreciar una aglutinación. A los plasmas.

por ejemplo aglutininas en frio de las infecciones virales.-Aglutinacion en todos los tubos. . Este tipo de aglutinación habitualmente carece de importancia siempre y cuando los otros tubos sean negativos.Describe cada una de las reacciones transfuncionales • • • • • Reacciones hemolíticas Reacción transfusional infecciosa Reacciones alérgicas Reacciones pirogénicas Reacción clínica 2. 1.Debe estudiarse el titulo y la especificidad del anticuerpo. c) Contaminación de los glóbulos del donador.  2. Es preciso estudiar el titulo y la especificidad de cualquier hemolisina de este tipo. Casi seguramente se debe a un anticuerpo caliente.Aglutinacion en el tubo de suero a temp...  3.Menciona que tipos de anticuerpos son detectados en las pruebas cruzadas._Positividad de la prueba de Coombs solamente. a) Incompatibilidad ABO: en este caso la aglutinación será particularmente importante en el tubo con suero a temperatura ambiente. ambiente solamente. Indica con toda probabilidad un anticuerpo en frio. b) Presencia en el suero de poliaglutinina.  4.. Lo mas probable es que también se deba a un anticuerpo incompleto caliente (ejemplo anti-Kell) se considera la sangre como incompatible ACTIVIDAD: 1. La sangre debe considerarse como incompatible._Aglutinacion en los tubos de albumina y de coombs.

.3.Identifica las condiciones y los factores que influyen en los resultados de las reacciones Ag-Ac BIBLIOGRAFIA: DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICO por el laboratorio..

. España. España.F. México. D. SALVAT Editores. INTERAMERICANA. editorial EL MANUAL DE MERCK DE DIAGNOSTICO Y TERAPEUTICA. Lynch Raphael. 9ª EDICIÓN. Barcelona. Tood-Sanford. DIAGNÓSTICO CLÍNICO POR EL LABORATORIO. METODOS DE LABORATORIO. 6ª Edición.John Bernard Henrry. Editorial OCEANO/CENTRUM. MASSON-SALVAT. Barcelona.