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TEMA 10 Bacilos Gram Positivo

TEMA 10 Bacilos Gram Positivo

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REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DEL ZULIA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA

Tema 10: Bacilos Gram positivo Aerobios
Lic. Liliana Gómez Gamboa (M.Sc.)

MARACAIBO, ENERO 2012.

Corynebacterium

Familia Corynebacteriaceae
• • • • Bacterionema Caseobacter Corynebacterium Turicella Género Corynebacterium
• 108 especies • 11 subespecies

Taxonomía
• Géneros relacionados:
• • • • • • • • • • • Corynebacterium Actinomyces Actinobaculum Propionibacterium Propioniferax Arcanobacterium Gardnerella Listeria Erysipelothrix Clostridium Lactobacillus

Corynebacterium diphtheriae
• Produjo grandes epidemias en los siglos XVI y XVII, pero en esta época no se diferenciaba con claridad la difteria de otras enfermedades respiratorias altas denominadas comúnmente "catarro". • 1821  Pierre Bretonneau (anátomo patólogo) describió las características clínicas particulares de la difteria para poderla diferenciar de otras enfermedades respiratorias. • En 1883 Klebs descubrió cocos y bacilos en cadenas en los cortes microscópicos de membranas diftéricas.

Corynebacterium diphtheriae

• Aisló por primera vez el bacilo diftérico en cultivo puro, con la ayuda de un medio de cultivo de su propia creación que todavía se usa en la actualidad.
• Demostró que el microorganismo podía reproducir la enfermedad en cobayos (postulados de Koch) y que se trataba del agente etiológico de la difteria.

Corynebacterium diphtheriae

• Estableció que el estado de portador era un fenómeno importante en el mantenimiento y diseminación de la enfermedad utilizando su medio de cultivo, demostró que los individuos sanos podían transportar los microorganismos en su garganta de forma asintomática.

• Demostró que el microorganismo permanecía en la membrana sin invadir los tejidos adyacentes o sitios más lejanos y postuló que las manifestaciones neurológicas y cardíacas de la enfermedad eran causadas por una sustancia tóxica elaborada por el germen.

Corynebacterium diphtheriae
• En 1888 Roux y Yersin (Institutito Pasteur) confirmaron el postulado de Löeffler al demostrar que filtrados libres de bacterias de los cultivos de bacilos diftéricos eran capaces de matar a los cobayos. • En 1890 Von Berhing (Laboratorio de Koch) demostró que luego de la infección, el antisuero contra la toxina podía proteger a los animales infectados de la muerte. • En 1894 Roux demostró que la administración de antitoxina había reducido la mortalidad por difteria entre los huerfanos de Paris del 51% al 24%.

Corynebacterium diphtheriae

• En 1913 Teobald Smith y Von Berhing vacunaron exitosamente a niños con una mezcla de toxina y antitoxina. • En 1923 el instituto Pasteur comprobó que la exposición de la toxina a la formalina y su calentamiento la volvían atóxica para los receptores, sin que por ello perdiera su capacidad para inducir respuesta de anticuerpos.

Corynebacterium diphtheriae
• En 1924 trabajos clínicos demostraron que la inyección de este toxoide inducía un nivel elevado de protección entre los receptores. • Durante la década de 1950 Freeman, Groman, Barksale, Pappenheimer y otros demostraron que la producción de toxina por Corynebacterium diphtheriae dependía de la presencia de un fago ß-lisogénico y durante la década siguiente quedó esclarecido el mecanismo por el cual la toxina inhibía la síntesis proteica.

Género Corynebacterium
• Está compuesto por 108 especies, de las cuales 36 tienen importancia clínica.
• Especies importantes clínicamente:
– – – – – – – – – – – – C. amoniagenes C. auriscanis C. bovis C. callunae C. camporealensis C. capitovis C. casei C. cystitidis C. efficiens C. felinum C. flavescens C. glutamicum – – – – – – – – – – – C. kutschery C. mastitidis C. mooreparkense C. mycetoides C. phocae C. pilosum C. renale C. testudinoris C. terpenotabidum C. variabile C. vitaeruminis

Género Corynebacterium
• La pared celular contiene ácido meso-diaminopimélico como diaminoácido y cadenas cortas de ácidos micólicos de 22 a 36 átomos de carbono. El contenido G+C varia de 46 a 76 mol%. Al colorearse con Gram, se observan como bacilos Gram positivo ligeramente curvos, sus lados no son paralelos y sus extremos pueden ser ligeramente más anchos, dándoles en ocasiones forma de raqueta, esta morfología se observa en los verdaderos Corynebacterium. En medios líquidos se pueden observar como células aisladas, en pares, en forma de V, formando empalizadas o en grupos formado letras chinas. Son catalasa positiva y las especies médicamente relevantes son no motiles

• •

Hábitat Natural
• La mayoría de las especies de Corynebacterium forman parte de la flora normal de piel y mucosas de humanos y mamíferos. • C. diphtheriae puede aislarse de la nasofaringe y de lesiones en piel, lo que actualmente representa el principal reservorio para la diseminación de la difteria. • Las bacterias corineformes que predominan en la orofaringe son C. durum y Rothia dentocariosa.

• C. auris y Turicella otitidis poseen una preferencia casi exclusiva por el conducto auditivo externo.
• C. glucuronolyticum se aísla casi exclusivamente de muestras genitourinarias de humanos.

• La importancia clínica de las bacterias corineformes aisladas de muestras clínicas frecuentemente es confusa, debido principalmente al hábitat natural de estos microorganismos, que puede conducir a su aislamiento en muestras mal tomadas.
• Los corineformes aislados deben ser identificados hasta el nivel de especie :
 De sitios anatómicos normalmente estériles.  De muestras clínicas tomadas adecuadamente si son el microorganismo predominante.  De muestras de orina en cultivo puro con un contaje > 104 UFC/ml, o como microorganismo predominante con un contaje > 105 UFC/ml.

Importancia Clínica
• El significado clínico de los corineformes está fuertemente relacionado a los siguientes hallazgos:
 Múltiples muestras positivas para el mismo corineforme.  En el examen directo con Gram de la muestra se observa el corineforme y también está presente una fuerte respuesta leucocitaria.  Los otros microorganismos aislados de la muestra son de baja patogenicidad.

Corynebacterium diphtheriae
• Es un bacilo pleomorfo (0,3 a 0,8 x 1 a 8 µm) que se tiñe de manera irregular (gránulos metacromáticos). • Esta especie se subdivide en cuatro biotipos en función de la morfología de sus colonias y sus propiedades bioquímicas. C. diphtheriae es un modelo clásico de virulencia bacteriana. La toxicidad que se observa es atribuida directamente a una exotoxina secretada por las bacterias en el foco de la infección. El microorganismo no necesita penetrar en la sangre para producir los síntomas sistémicos de la enfermedad.

Corynebacterium diphtheriae
• El gen tox que codifica la exotoxina, se introduce en las cepas mediante un bacteriófago lisogénico. • Son necesarios dos pasos para que se secrete el producto activo del gen: 1) escisión proteolítica de la secuencia adelantada de la proteína tox durante la secreción desde la pared bacteriana, y 2) escisión de la molécula de la toxina en dos polipéptidos (A y B) que permanecen unidos mediante un enlace disulfuro. Esta proteína de 58.300 Da es un ejemplo de la clásica exotoxina A-B.

Corynebacterium diphtheriae
Existen tres regiones funcionales en la molécula de toxina, una región de unión al receptor, una región de translocación en la subunidad B y una región catalítica en la subunidad A. El receptor de la toxina es el factor de crecimiento epidérmico de unión a la heparina, que está presente en la superficie de muchas células eucariotas, fundamentalmente en el corazón y en las células nerviosas; su presencia explica los síntomas cardíacos y neurológicos que se observan en los pacientes con difteria grave.

Corynebacterium diphtheriae
La región de la translocación se inserta en la membrana endosomal y facilita el movimiento de la región catalítica hacia el citosol tras la unión de la toxina a la célula del organismo anfitrión. La subunidad A finaliza la síntesis de proteínas de dicha célula al inactivar el factor de elongación 2 (EF-2), factor necesario para el movimiento de las nuevas cadenas peptídicas que se están formando en los ribosomas.

Corynebacterium diphtheriae
Debido a que el recambio de EF-2 es muy lento y a que sólo existe alrededor de una molécula por ribosoma en cada célula, se ha estimado que una única molécula de exotoxina puede inactivar todo el contenido de EF-2 en una célula para interrumpir por completo la síntesis de proteínas en la célula del organismo anfitrión.

Corynebacterium diphtheriae
La síntesis de la toxina está regulada por un elemento codificado en un cromosoma, el represor de la toxina diftérica (DTxR). Esta proteína, que se activa en presencia de concentraciones elevadas de hierro, se puede unir al operador del gen de la toxina y evitar la producción de la misma.

Patogenia de

C. diphtheriae

Epidemiología de C. diphtheriae
• La difteria es una enfermedad de distribución universal, fundamentalmente en las zonas urbanas desfavorecidas donde existen condiciones de hacinamiento y el nivel de inmunidad inducido por la vacuna es bajo.

• C. diphtheriae se mantiene en la población como consecuencia del estado de portador asintomático en la orofaringe o en la piel de las personas inmunizadas (por la exposición a C. diphtheriae o vacunación). Se transmite de una persona a otra a través de gotitas respiratorias o mediante contacto cutáneo. El ser humano representa el único reservorio conocido de este microorganismo.

Enfermedades clínicas de

C. diphtheriae

La presentación clínica de la difteria determinada por: 1) el lugar de la infección; 2) el estado inmunitario del paciente y 3) la virulencia del microorganismo.

viene

La exposición a C. diphtheriae puede originar colonización asintomática de las personas con inmunidad completa, enfermedad respiratoria leve en las personas parcialmente inmunizadas o enfermedad fulminante, y algunas veces mortal, en los pacientes no inmunizados.

DIFTERIA RESPIRATORIA DIFTERIA CUTÁNEA

Enfermedades clínicas de

C. diphtheriae

Enfermedades clínicas de

C. diphtheriae

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Microscopía

Cultivo

Pruebas de toxigenicidad

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Aislamiento e Identificación
• Muestras: nasofaringe y garganta. • Pruebas para la Identificación de Género:
– – – – – – – – – Catalasa Metabolismo Fermentativo/Oxidativo Reducción de Nitratos Ureasa Hidrólisis de la Esculina Lipofilismo Pirazinamidasa Reacción de CAMP Producción de ácido a partir de:
• • • • • Glucosa Maltosa Sucrosa Manitol Xilosa

Aislamiento e Identificación
• PRUEBAS DE TOXIGENICIDAD Prueba de Elek  análisis de inmunodifusión in vitro. Ensayo de neutralización de cultivo tisular que emplea una antitoxina específica. Ensayo de neutralización in vivo (cobayos). Prueba de amplificación de ácidos nucleicos (detección del gen tox en cepas y muestras clínicas).

No se deben pasar por alto las cepas no toxigénicas de C. diphtheriae, ya que se pueden asociar a diversas enfermedades con significación clínica, como septicemia, endocarditis, artritis séptica, osteomielitis y la formación de abscesos.

Pruebas de Susceptibilidad
• La susceptibilidad a los antimicrobianos en los corineformes no es predecible, por lo que deben realizarse pruebas de susceptibilidad únicamente a los aislados clínicamente significantes. • Debido a la emergencia de la resistencia a vancomicina en Gram positivos, se hace inapropiado recomendar glicopéptidos como drogas de primera línea para el tratamiento de infecciones causadas por corineformes. • Algunos corineformes poseen resistencia vancomicina (Microbacterium resistens). intrínseca a

• El CLSI no posee lineamientos para la realización de pruebas de susceptibilidad para este grupo de microorganismos.

Pruebas de Susceptibilidad
• La CIM puede determinarse por E-Test o por dilución en agar o caldo por el método de microdilución. • Los resultados del E-Test para Corynebacterium spp. poseen una buena correlación con los métodos de dilución en agar y microdilución en caldo.

• La CIM debe reportarse sin criterios de interpretación, si los criterios son requeridos por el médico se debe indicar el criterio utilizado y la nota de “No existen criterios de interpretación para bacterias corineformes”.

Tratamiento, prevención y control
ASPECTO MÁS IMPORTANTE DEL TRATAMIENTO DE LA DIFTERIA  administración precoz de la antitoxina diftérica con el fin de neutralizar de forma específica la exotoxina antes de que esta se una a la célula del organismo anfitrión. La muerte celular es inevitable tras la internalización de la toxina. TRATAMIENTO ANTIBIÓTICO  penicilina o eritromicina para destruir las células de C. diphtheríae e inhibir la producción de exotoxina. TAMBIÉN ES IMPORTANTE: reposo en cama, el aislamiento para evitar una diseminación secundaria y, en los pacientes con difteria respiratoria, el mantenimiento de la permeabilidad de la vía aérea.

Tratamiento, prevención y control
La vacunación con el toxoide es necesaria tras la recuperación del paciente, ya que un gran número de sujetos no logra fabricar anticuerpos protectores con posterioridad a una infección natural. La difteria sintomática se puede prevenir mediante la vacunación activa de las personas con toxoide diftérico. El toxoide, no tóxico e inmunogénico, se prepara tratando la toxina con formalina. Inicialmente, los niños reciben cinco inyecciones de esta preparación con antígenos del tétanos y de la tos ferina (vacuna DPT) a los 2, 4, 6,15 y 18 meses de vida, así como a las 4 y 6 años. Después de esta edad, se recomienda la administración de vacunaciones de recuerdo con el toxoide diftérico combinado con el toxoide tetánico cada 10 años. Se puede determinar la concentración de anticuerpos antitoxina sérica por medio de una prueba de neutralización de piel de conejo o célula Vero.

• No está relacionada genéticamente con ninguno de los géneros tratados, esta remotamente relacionada con Bifidobacterium. • Es la única especie perteneciente al género Gardnerella. • Posee una capa de peptidoglicano similar a la de los Gram positivo, pero esta capa es mucho más delgada. • Lisina es el diaminoácido de la pared celular y su contenido G+C es de 42-44 mol%. • A la coloración de Gram se muestran como bacilos o cocobacilos Gram variable. • Son catalasa negativa, no motiles y un metabolismo fermentativo lento.

Gardnerella vaginalis
• Gardnerella vaginalis forma parte de la flora anorectal de individuos sanos de ambos sexos; también forma parte de la flora vaginal endógena de la mujer en edad reproductiva. • El pH óptimo de crecimiento está entre 6 y 7. • Este microorganismo puede ser recuperado de la uretra de hombres pareja de mujeres con vaginosis bacteriana. • Está asociada con vaginosis bacteriana y su rol en esta entidad clínica es controversial.

• En mujeres embarazadas la vaginosis bacteriana puede conducir a parto pretermino, ruptura prematura de membranas y corioamnionitis.
• También se ha recuperado de sangre de pacientes con fiebre postparto o postabortal y puede ocasionar infecciones en el recién nacido.

Gardnerella vaginalis
• Infecciones serias en otras localizaciones diferentes al tracto genital y complicaciones obstétricas son raras, pero se han reportado. • Muestras clínicas

• Aislamiento e identificación:
– Directo de secreciones vaginales
• Presencia de células clave • Presencia de flora mixta, predominantemente Gram negativos pequeños (Prevotella y Porphyromonas) • Bacilos y cocobacilos Gram variable (G. vaginalis) • Lactobacillus spp. ausentes o muy escasos.

– Test de aminas (KOH 10%)

– Identificación de biotipos (8)

Pruebas de Susceptibilidad
• El metronidazol es la droga de elección. • Las infecciones sistémicas producidas por Gardnerella vaginalis únicamente, pueden tratarse con ampicilina o amoxicilina ya que la producción de betalactamasas no se ha observado hasta el momento. • No se recomienda la realización de pruebas de susceptibilidad y no existen lineamientos para su realización e interpretación.

Listeria
• Pertenece a la Familia Listeriaceae (Brochothrix y Listeria). • Especies:
– L. monocytogenes (hombre) – Listeria ivanovii (animales)
• Listeria ivanovii subsp. ivanovii • Listeria ivanovii subsp. londoniensis

– – – –

L. innocua L. seeligeri L. welshimeri L. grayi

• Bacilos Gram positivo cortos, regulares, no ramificados dispuestos solos o en cadenas. • Móviles a 28 ºC por la presencia de 1 a 5 flagelos peritricos, pero son muy poco motiles a 37ºC

Listeria
• Temperatura óptima de crecimiento: entre 30 y 37 ºC; pueden crecer a 4 ºC. • Son anaeróbicos facultativos, generalmente catalasa positiva y oxidasa negativa, producen ácido a partir de D-glucosa y otros carbohidratos. • Son Voges-Proskauer, rojo de metilo y esculina positiva.

• Son urea, gelatina, indol y H2S negativo.
• Su pared celular posee m-DAP y ácido lipoteicoico, pero no ácido micólico.

• Contenido G+C 36-42 mol%.

Hábitat Natural
• Las especies de Listeria están ampliamente distribuidas en la naturaleza, se ha aislado de suelo, materia vegetal en descomposición, granos, aguas, aguas servidas, alimentos animales, pollos y gallinas frescos y congelados, carnes frescas y procesadas, leche cruda, queso, desechos de mataderos y portadores animales humanos y asintomáticos. • L. monocytogenes ha sido aislada de numerosas especies de mamíferos, aves, peces, crustáceos e insectos. • Debido a su amplia diseminación L. monocytogenes posee muchas oportunidades de entrar en los ambientes de producción y procesamiento de alimentos, y su habilidad de crecer a 4 ºC, le permite producir enfermedad en personas que ingieren alimentos colonizados.

Patogenia e inmunidad

L. monocytogenes es un patógeno facultativo
intracelular que puede crecer en los macrófagos, las células epiteliales y los fibroblastos en cultivo. Los estudios con modelos animales han puesto de manifiesto que esta infección se inicia en los enterocitos o en las células M de las placas de Peyer.

Patogenia e inmunidad
Su entrada en las células no fagocíticas está mediada por seis o más proteínas ricas en leucina, las internalinas (p. ej., InlA, InlB, InlC), que interaccionan con los receptores glucoproteicos de la superficie de las células del organismo anfitrión.
Después de penetrar en las células, el pH ácido del fagolisosoma que rodea a las bacterias activa una toxina bacteriana (Iisteriolisina O) y dos enzimas diferentes de fosfolipasa C, lo que conlleva la liberación de las bacterias en el citosol de la célula.

Patogenia e inmunidad

Las bacterias se replican y posteriormente se mueven a través de la célula hasta la membrana celular. Este movimiento está mediado por una proteína bacteriana, ActA, la cual se localiza en la superficie celular en un extremo de la bacteria y coordina el ensamblaje de la actina. Por tanto, la bacteria es empujada hacia la membrana celular, donde se forma una protrusión (filópodo) que obliga a la bacteria a pasar a la célula adyacente.

Patogenia e inmunidad
Una vez que la bacteria es ingerida por la célula adyacente, se repite el proceso de lisis fagolisosómica, replicación bacteriana y movimiento direccional. La entrada en los macrófagos después de haber atravesado las células que recubren el intestino conduce a las bacterias hasta el hígado y el bazo, lo que produce la diseminación de la enfermedad.

Patogenia e inmunidad
La inmunidad humoral es relativamente poco importante en el desarrollo de las infecciones por L. monocytogenes. Estas bacterias se pueden replicar en los macrófagos y moverse en el interior de las células, evitando así la eliminación mediada por anticuerpos. Por este motivo, los pacientes con deficiencias de la inmunidad celular, pero no de la humoral, son especialmente susceptibles a las infecciones graves.

Invasión

FACTORES DE VIRULENCIA
Hemolisinas
Fosfolipasas

ActA
Internalinas Otros factores de virulencia: p60, factores antioxidantes, consumo de iones metales, mediadores de respuesta al stress.

Importancia Clínica
• En adultos no embarazados, L. monocytogenes produce principalmente meningitis, encefalitis y septicemia. • Individuos ancianos o personas con respuesta inmune celular disminuida son especialmente susceptibles. • L. monocytogenes posee un elevado tropismo por el sistema nervioso central, lo que produce enfermedades severas con una elevada tasa de mortalidad (20-50%) o secuelas neurológicas entre los sobrevivientes.

Importancia Clínica

• En mujeres embarazadas produce una enfermedad bacteriémica tipo influenza que, si no es tratada, puede conducir a placentitis y amnionitis e infección del feto, lo que resulta en abortos y nacimientos prematuros, ya que el microorganismo es capaz de atravesar la placenta.

Importancia Clínica
• DIAGNÓSTICO PRECOZ  Detección de L. monocytogenes en sangre de la madre y en diferentes muestras del recién nacido (LCR, sangre, líquido amniótico, secreciones respiratorias, placenta, heridas cutáneas, aspirado gástrico o meconio). La observación microscópica de bacilos Gram positivo en estas muestras es de invaluable ayuda en el diagnóstico temprano de esta patología.

Importancia Clínica

• Raramente ocurren Infecciones localizadas después de un episodio de bacteriemia, sin embargo, se ha descrito listeriosis primaria cutánea con o sin bacteriemia en veterinarios y trabajadores del campo, quienes adquieren la enfermedad a través del contacto con tejidos animales infectados.

Importancia Clínica
• Infecciones como endocarditis, artritis, abscesos intrabdominales, endoftalmitis e infecciones pleuropulmonares se han descrito infrecuentemente.

Se aísla de la tierra, el agua, la vegetación y de varios animales, incluyendo al ser humano (portadores gastrointestinales de bajo grado).

Epidemiología
La enfermedad se asocia con el consumo de alimentos contaminados (p. ej., queso no curado, leche, pavo, vegetales crudos [especialmente repollo]) o con la diseminación transplacentaria de la madre al neonato; los casos esporádicos y epidémicos ocurren durante todo el año pero tienen un máximo en los meses más cálidos.

Los jóvenes, los ancianos y las mujeres gestantes, así como los pacientes con defectos de la inmunidad celular, tienen riesgo de padecer esta enfermedad.

Diagnóstico e Identificación
• Seguridad en el laboratorio. • Muestras – Clínicas – Alimentos

• Aislamiento
– Cultivo – Detección rápida

Diagnóstico e Identificación
• Identificación
– Género: – Bacilos Gram positivo – Motilidad en vueltas de payaso en gota pendiente – Catalasa positiva – Esculina positiva – Crecimiento a 4 ºC y 37 ºC – Especie – Hemólisis – CAMP (S. aureus y R. equis) – Hipurato – Acido a partir de:
– – – – – – – Manitol D-metil-manosido L-rhamnosa Almidón D-xilosa Ribosa N-acetil-β-D-manosamina

Pruebas de Susceptibilidad
• Los patrones de susceptibilidad y resistencia de L. monocytogenes han permanecido relativamente estables por mucho tiempo.
• In vitro es susceptible a AM, GM, E, Te, Ra y C, pero presenta susceptibilidad moderada a quinolonas. • Penicilina o ampicilina con o sin un aminoglicósido son el tratamiento recomendado.

• Plásmidos de resistencia a TE, C y macrólidos en infecciones graves por L. monocytogenes.
• Las cefalosporinas son inactivas in vitro, sin embargo in vivo al parecer poseen cierto efecto, por lo que no se recomiendan para el tratamiento de listeriosis.

Familia Bacillaceae

Género Bacillus
• 247 especies • 05 subespecies

B. anthracis B. cereus

Bacillus
• Son bacilos Gram positivo aeróbicos, formadores de esporas de resistencia, a excepción de B. infernus que es anaeróbico estricto. • Son catalasa y motilidad positiva.

• La mayoría de las especies son mesófilos, pero existen especies termófilas y psicrófilas.
• La mayoría de los miembros son aeróbicos formadores de esporas ampliamente distribuidos en la naturaleza, pero algunas especies son oportunistas y patógenos obligados de mamíferos e insectos. • El principal habitad es el suelo, todo tipo de suelos, ácidos, alcalinos, frios, calientes, fértiles, desérticos, así como las columnas de agua y depósitos de los fondos de cuerpos de agua fresca y aguas marinas.

Bacillus
• Sus esporas fácilmente sobreviven en el suelo, polvo y aerosoles de una gran cantidad de ambientes naturales y hábitat. • Alimentos secos como especies, leche en polvo y otros productos están frecuentemente contaminados con una alta carga de esporas.

• B. anthracis es un patógeno obligado de animales y el hombre, ya que su multiplicación en el ambiente es muy rara.
• B. cereus es un patógeno oportunista que produce principalmente intoxicaciones alimentarias.

Importancia Clínica
• La mayoría de los miembros del género poseen poco o ningún poder patógeno y no están asociados a infecciones en el humano y otros mamíferos. Las excepciones son B. anthracis, B. cereus y B. liqueniformis. La alta resistencia de las esporas a la desecación, radiación, desinfección y al calor permiten que estos se comporten como contaminantes de quirófanos, instrumentos quirúrgicos, productos farmacéuticos y alimentos. Muchas especies son de utilidad biotecnológica:
• • • • •
• • • •

• •

B. licheniformis y B. subtilis (bacitracina) P. polymyxa (polimixina) B. megaterium (vitamina B12 y B2) B. subtilis (biotina y riboflavina) B. cereus, B. circulans, B. megaterium, B. pumilis, B. subtilis, G. stearothermophilus (ensayoe de antibióticos) B. cereus (validación de desinfectantes) B. subtilis (monitoreo de fumigaciones) G. stearothermophilus (esterilización por calor) B. pumilis (esterilización por radiación).

Bacillus cereus
• Bacillus cereus es el segundo en importancia dentro del género como patógeno humano. • Produce principalmente infecciones oportunistas. intoxicaciones alimentarias e

• Produce dos tipos de intoxicación alimentaria:
• Tipo diarreica: caracterizada por dolor abdominal, con diarrea de 8 a 16 horas después de la ingestión del alimento contaminado, esta asociada a una amplia diversidad de alimentos como carnes, vegetales, pastas, tortas, salsas y leche. • Tipo emética: caracterizada por nauseas y vómito de 1 a 5 horas después de la ingesta del alimento contaminado, está asociada principalmente a la ingesta de arroz chino, ocasionalmente se asocia a cremas pasteurizadas, pudines de leche, pastas y formulas lácteas reconstituidas.

Bacillus cereus
• Ambos síndromes se deben a la capacidad de las esporas de B. cereus de sobrevivir a los procedimientos de cocción utilizados en la preparación del alimento y a malas condiciones de almacenamiento de los alimentos después de preparados, lo que permite la germinación de las esporas.

Patogenia Bacillus cereus
Enterotoxina termoestable resistente a proteólisis
Forma emética

Gastroenteritis

Enterotoxina termolábil similar a las producidas por E. coli y V. cholerae

Forma diarreica

Infecciones oculares
1) Toxina necrótica (enterotoxina termolábil) 2) Cereolisina (hemolisina) 3) Fosfolipasa C (lecitinasa)

Bacillus anthracis
• El ántrax es la condición clínica causada por las especies de Bacillus más conocida y estudiada.
• Manifestaciones clínicas
– Ántrax cutáneo – Ántrax respiratorio – Ántrax gastrointestinal

Bacillus anthracis
Patogenicidad
• Plásmidos de Virulencia
– pX01
• Gen cya (factor de edema) • Gen lef (factor letal) • Gen pag (antígeno protector)

– pX02
• Genes necesarios para la síntesis de la cápsula de ácido poli-Dglutámico

• Toxina del Ántrax
– Toxina letal (LeTx) – Toxina de edema (EdTx)

TOXINA DE EDEMA

CÁPSULA

TOXINA LETAL

La cápsula inhibe la fagocitosis de las células en fase de replicación. La actividad adenil ciclasa de la toxina de edema origina la acumulación de líquidos característica del carbunco.

La actividad de la metaloproteasa de zinc de la toxina letal estimula la liberación de factor de necrosis tumoral e interleucina, así como otras citocinas proinflamatorias, por parte de los macrófagos. Esta toxina interviene, igualmente, en la lisis de macrófagos en ciertos cultivos celulares. PA (Antígeno protector) es la proteína dotada de una mayor inmunogenicidad (de donde proviene su nombre) de las principales proteínas de B. anthracis. Tanto Factor letal como Factor Edema inhiben el sistema inmunitario del organismo anfitrión.

Aislamiento e identificación
• Muestras clínicas. • Coloración de Gram • Aislamiento

– Crecen y esporulan a 37 ºC en los medios de rutina utilizados en un laboratorio clínico.
– Consideraciones de bioseguridad. – Muestras con flora mixta.

Asilamiento e identificación
• Identificación
– Antes de comenzar a identificar a nivel de especie es importante establecer que es un microorganismo aeróbico formador de endosporas. – Diámetro del bacilo (µm) – Cadenas de células – Motilidad – Esporangio
– – – – – – – – –
• Forma, posicion, etc.

Crecimiento en anaerobiosis. Crecimiento a 50 y 65 ºC. Reacción en amarillo de huevo agar Hidrólisis de la caseína, almidón y gelatina. Arginina dehidrolasa Producción de indol Reducción de nitratos Gas de carbohidratos Acido a partir de:
– – – – – – – D-arabinosa Glicerol Glicógeno Inulina Manitol Salicin D-trealosa

Aislamiento e identificación

Aislamiento e identificación

Aislamiento e identificación

Aislamiento e identificación

Pruebas de Susceptibilidad
• Bacillus antharcis es invariablemente susceptible a la penicilina, solo cinco trabajos han reportado la aparición de resistencia a penicilina. • Es susceptible a GM, E y V. • Es generalmente susceptible a estreptomicina pero resistente a cefalosporinas. • El tratamiento de elección es una fluoroquinolona combinado con otro antibiótico al que el microorganismo sea sensible. • B. cereus y B. thuringiensis producen betalactamasa por lo tanto son resistentes a penicilina, ampicilina y cefalosporinas, también son resistentes a TMP, pero casi siempre sensibles a CC, E, C, Va, Te, Sulfas y aminoglicósidos.

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