CITOESQUELETO

ESTRUCTURA

MORFOLOGÍA

SOSTEN

ORGANELAS

MOVIMIENTO

LOCALIZADOS (CITOCINESIS, CONTRACTILES) DESPLAZAMIENTO
1

ESTRUCTURA Y MORFOLOGIA CELULAR

Estructura:
• Estables • Dinámicas • Organización y ubicación de organelas

Morfología:
• • • • • • • • • Esférica Cúbica Bicóncava Ahusada Estrellada Con microvellosidades Con axón Con flagelo Con cilias

2

MOVIMIENTOS CELULARES

Desplazamiento:
• Diapédesis • Migración • Contracción muscular

Modificaciones morfológicas:
• Extensión de axones • Proyecciones citoplasmáticas • Constricción citoplasmática (citocinesis)

Movimientos internos:
• Transporte de vesículas con membranas • Separación de cromosomas (segregación) • Corrientes citosólicas

3

CITOESQUELETO
Red de filamentos de proteínas que se extiende por todo el citoplasma

Citosol: alta [proteínas] muy organizadas

Tritón X-100
MET: orgánulos y citoesqueleto

4

CITOESQUELETO

MICROFILAMENTOS: actina FILAMENTOS INTERMEDIOS: aspecto de cuerdas MICROTUBULOS: polímeros de tubulina

5

MICROFILAMENTOS: filamentos de actina, 6-8 nm (delgados y flexibles). REDES Y HACES Estructuras: Estables: Microvellosidades haces contráctiles (sarcómera) Transitorias: protrusiones anillo contráctil Funciones: anclaje soporte motilidad: migración, fagocitosis, contracción muscular división celular (citocinesis).

6

Nucleación espontánea (polimerización)
Actina G (monómero globular) equilibrio
166º

Actina F (polímero filamentoso)

Si a filamentos de actina se le unen las cabezas de filamentos S1 ó HMM de miosina, se unen con una orientación definida en punta de flecha hacia el extremo (-) o barbado hacia el (+).

[Mg++, K+, Na+]

7

ACTINA: proteína abundante (5-10%) en células de mamíferos. En musculares y neuronas hasta 20%. En humano, seis isoformas, codificadas por genes diferentes, que se pueden diferenciar por inmunohistoquímica en diferentes tipos celulares. Proteína conservada evolutivamente. 4 -actina: en células musculares, se asocia con estructuras contráctiles -actina: en filamentos de fibras de estrés -actina: en borde de proyecciones de células en movimiento

8

Regulación de la polimerización de la actina • • ATP Cc

Proteínas de unión a la actina (PBA)

9

Intercambio rotatorio: necesita ATP

Adición reversible de monómeros: aunque ATP no es necesario para polimerización, la velocidad depende de unión del monómero a un nucleótido trifosfato (ATP) que aumenta su afinidad. La hidrólisis a ADP genera un cambio conformacional que facilita la despolimerización de la actina F. Existe una concentración de monómeros crítica para este intercambio.
10

ACTINA

ATP

La concentración de actina G determina la formación del filamento

Concentración crítica
A partir de Cc, se inicia la formación de filamentos. A esta Cc los monómeros y filamentos están en equilibrio.
11

Regulación del ensamblaje y desensamblaje por proteínas de unión a la actina: Formina: inicio, nucleación y elongación en el sentido de polimeración rápida

1

1

1

12

Regulación del ensamblaje y desensamblaje por proteínas de unión a la actina: Formina: inicio, nucleación y elongación en el sentido de polimeración rápida Cofilina: a monómeros actina-ADP (extremo -). Incrementa velocidad de disociación. Permanece unida evitando reensamblaje. Profilina: favorece intercambio de ADP por ATP. Favorece incorporación de Actina-ATP en extremo +. Arp2/3: sitios de nucleación. Inicio de ensamblaje de nuevos filamentos. Ramificaciones. Estas proteinas son reguladas por vías de señalización celular, por lo que el ensamblaje y desensamblaje de microfilamentos de actina responde a estímulos externos.

Twinfilina

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14

Drogas o fármacos que afectan la despolimerización: faloidinas (veneno fúngico): se unen a lo largo de los microfilamentos y evita despolimerización. Se emplea como marcador fluorescente la polimerización: citocalasina (alcaloide fúngico): se une al extremo (+), bloquea agregado pero no despolimerización e interfiere en locomoción, contracción muscular, citocinesis o endocitosis.
Faloidina

Citocalasina

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ORGANIZACIÓN DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA HACES: filamentos paralelos REDES: filamentos que se entrecruzan Todas las proteínas de unión a la actina tienen por lo menos dos dominios de unión a la actina (ABD), lo que les permite fijar y entrecruzar dos filamentos diferentes Las secuencias espaciadoras entre los dominios de unión a la actina, varían en longitud y flexibilidad, son responsables de las distintas propiedades de entrecruzamiento

ENTRAMADOS: sol-gel citoplasma: coloide líquido viscoso (sol) redes tridimensionales densas propiedades de un sólido (gel)

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Transiciones sol- gel en corteza citoplasmática rápida reorganización de filamentos de actina despolimerizan u orientan en filamentos paralelos
citoplasma: coloide líquido viscoso (sol) redes tridimensionales densas propiedades de un sólido (gel) Estos cambios pueden ser activados por moléculas que se unen a receptores de la MP u otros estímulos como el frío (plaquetas sanguíneas congelarse forma estrellada las incapacita funcionalmente)

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Proteínas de unión formadoras de haces de actina Pequeñas, rígidas. Fuerzan a los filamentos a asociarse en paralelo

Haces paralelos estrechamente empaquetados (14 nm) Fimbrina: monómero, contiene dos dominios de unión a la actina (ABD) adyacentes. Villina: sólo en microvellosidades intestinales y de túbulos renales
Haces contráctiles: paralelos espaciados (40 nm), capaces de contraerse (anillo citocinesis) -actinina: dímero. Cada subunidad contiene un solo ABD y cuatro dominios espaciadores en hélice repetidos
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Proteínas de unión formadoras de redes Largas y flexibles. Filamina: dímero flexible en forma de V. Entrelaza filamentos en redes ortogonales. Cada subunidad posee un ABD N-terminal y un dominio de dimerización C-terminal separados por dominios espaciadores en lámina  repetidos. Forman mallas tridimensionales holgadas subyacentes a la MP.

Forman estructuras planas rodeadas de MP. Dan la forma celular. Ej: eritrocitos

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Proteínas de unión de los microfilamentos a proteínas integrales de la MP

Filamina conecta red tridimensional de filamentos de actina con proteínas del coágulo

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Espectrina se asocia con filamentos cortos de actina (red actina-espectrina) en eritrocitos. Anquirina: proteína nexo entre espectrina y proteína tansmembrana Banda 3 Proteína 4.1: proteína que se fija en uniones de espectrina con actina y al dominio citosólico de la proteína transmembrana Glicoforina

Espectrina: proteína de unión a actina. Tetrámero: 2 cadenas  y 2 . Cadena : un solo ABD en N-terminal, múltiples -hélices repetidas, igual que cadena , la que posee un dominio de fijación al Ca++ en su C-terminal

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Proteínas de unión de los microfilamentos a proteínas

integrales de la MP Contacto célula-célula: uniones adherentes
Cinturón de adhesión en células epiteliales: haz contráctil de filamentos de actina subyacente a la MP apical
Cadherinas: unión homodímera con célula adyacente. Transmembranosa Catenina: heterodimérica. -catenina se une a dominio citoplasmático de cadherina. -catenina a actina

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PROYECCIONES O PROTUBERANCIAS DE LA SUPERFICIE CELULAR Aumentan superficie celular. Cubiertas por MP. Visibles al MET y SEM.

• Microvellosidades: prolongaciones citoplasmáticas digitiformes • Abundantes en parte apical de epitelio intestinal (borde en cepillo). Aumentan superficie absorción • Estereocilios: microvellosidades auditivas especializadas en la detección de vibraciones sonoras • Funciones: movimiento celular, fagocitosis, absorción • Estabilidad: permanentes o transitorias • Estructura: haces o redes de filamentos de actina
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Extensiones permanentes: microvellosidades intestinales

• Haces de filamentos de actina centrales • Fimbrina y villina (especial en células intestinales y renales) • Unidos a MP por brazos laterales de : calmodulina (fijadora de calcio) y miosina I (implicada en movimiento de microvellocidad) • Anclados por su base (extremo -) a la red terminal (rica en espectrina) • Extremo + inmersos en cápsula de proteínas desconocidas

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REGIONES ESPECIALIZADAS TRANSITORIAS EN LA MP Contactos de los filamentos de actina con células adyacentes, MEC y otros sustratos (placas de cultivo)
Fibroblastos en cultivo: segregan proteínas de la MEC que se adhieren a la superficie plástica de la placa

• Adhesiones focales: sitios donde la célula se une a la superficie de la placa
• Fibras de estrés: filamentos de actina de gran tamaño anclados a la MP en las adhesiones focales
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Extensiones transitorias: en respuesta a estímulos ambientales. Formación y retracción
en base a ensamblaje y desensamblaje regulado de filamentos de actina Lamelipodios: extensiones laminares anchas. En borde apical de fibroblastos Red de filamentos de actina Pseudópodos: se extienden desde parte anterior de célula en movimiento. Red tridimensional de filamentos de actina. Fagocitosis, movimiento de amebas Filopodios o microespinas: proyecciones delgadas. Haces de actina

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PAPEL DEL LAS VIAS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES EN LA LOCOMOCION DE LA CELULA Y ORGANIZACION DEL CITOESQUELETO

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ORIENTACION DE LOS MICROFILAMENTOS DURANTE LA FORMACION DE PROYECCIONES INESTABLES

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ARRASTRE CELULAR sobre una superficie: forma básica de locomoción celular • • • • • • Movimiento de amebas Invasión de glóbulos blancos a los tejidos (infección) Migración de células involucradas en la cicatrización Metástasis: propagación de células cancerosas malignas Fagocitosis Extensión de neuronas durante desarrollo embrionario

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Arrastre celular: ciclo coordinado 1) Extensión de borde delantero (pseudópodos, lamelipodios, filopodios) polimerización y entrelazado de filamentos de actina 2) Sujeción de la zona anterior al sustrato 3) Disociación del sustrato y retracción del borde posterior hacia el cuerpo celular miosina II

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1. Por polimerización y entrelazado de filamentos de actina. Citocalasina: bloquea formación de protuberancias celulares. Arp 2/3: ramificaciones. Reciclaje (cofilina) de filamentos de actina conduce a la formación de lamelipodios y filopodios en borde delantero. Miosinas no convencionales: extensión de pseudópodos en Dictyosdtelium y filopodios en neuronas. 2. En células de movimientos lentos (fibroblastos): contactos focales. En las rápidas contactos difusos aún desconocidos 3. Poco comprendido. Se supone participación de miosina II que generaría fuerza contráctil en córtex para retracción

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Proteínas de unión de los microfilamentos

a proteínas integrales de la MP Anclaje de las fibras de estrés a la MP en las adhesiones focales

Integrinas: proteínas transmembranas heterodímeras que conectan MEC con proteínas de unión a la actina Talina (se une a integrina) y Vinculina (se une a actina)

• • •

-actinina que conecta integrina
con actina
Fibras de estrés: haces contráctiles (actina unida por actinina). Se unen al dominio citoplasmático de las integrinas mediante

FIBRONECTINA
Fibroblastos sobre placa de cultivo
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FILAMENTOS DE ACTINA ASOCIADOS A MIOSINA Involucrados en movimientos celulares: desplazamiento por arrastre, citocinesis, contracción muscular
Miosina: proteínas motoras mecanoquímicas, convierte energía química (ATP) en mecánica (fuerza y movimiento) Cadenas pesadas: cabeza globular (ATPasa),cuello y cola. Cadenas livianas (reguladoras) II y V: dímeros, secuencias α-hélice de colas forman bastón enrollado Se conocen 14 tipos de miosina (I a XIV). Con 1 ó 2 cabezas globulares. En general sus funciones no están bien determinadas.

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CONTRACCIÓN MUSCULAR EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO O ESTRIADO Músculo esquelético: voluntario. Haces de fibras musculares (fusión, multinucleadas) Miofibrillas: filamentos gruesos (miosina II) y delgados (actina)

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MODELO DE ACCION DE LA MIOSINA

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PAPEL DEL Calcio EN LA CONTRACCION MUSCULAR La recaptación de los Ca++ produce la relajación muscular

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ASOCIACIONES CONTRACTILES DE ACTINA- MIOSINA EN CELULAS NO-MUSCULARES Y EN MUSCULO LISO Regulada por la fosforilación de la cadena ligera reguladora de la miosina II Aumento Ca++ citosólico Unión de Ca++ a calmodulina Ca++-calmodulina activa a Kinasa de la cadena ligera reguladora de la miosina (MLCK) Este complejo fosforila a cadena ligera reguladora de miosina II y la activa

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Ensamblaje de miosina en filamentos Filamentos polares de miosina se unen a actina Deslizamiento de filamentos de actina en direcciones opuestas
En estas células tropomiosina compite con filamina por sitios activos

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Citocinesis: división de célula en dos al final mitosis. Anillo contráctil Deslizamiento de filamentos de actina sobre miosina II Grosor de anillo constante: desensamblaje de filamento de actina Al final disgregación total de anillo

Inicio mitosis: MPF fosforina sitio inhibidor de cadena ligera de miosina II e inhibe formación de anillo. Anafase: fosfatasas constitutivas desfosforilan cadena ligera de miosina II y se forma anillo contráctil. Telofase: una cinasa específica fosforila el sitio activador de la cadena ligera de la miosina y favorece cierre de anillo y su despolimerización. 39

MIOSINAS NO CONVENCIONALES No forman filamentos (como en músculo) No participan en la contracción Implicadas en: • Transporte de vesículas de membrana y orgánulos • Fagocitosis • Extensión de pseudópodos • En microvellosidades: movimiento de MP a lo largo de haces de actina (hacia extremo+)

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Miosina I: 1 cabeza globular (motor molecular), cola corta. No dimeriza Colas pueden unirse a otras estructuras El movimiento de miosina I a lo largo de un filamento de actina puede transportar lo que lleve unido

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FILAMENTOS INTERMEDIOS:
10 nm (entre actina 7 y microtúbulos 25) En células animales, no en plantas ni hongos. Funciones: mecánicas, soportan grandes tensiones sin romperse. Forman estructuras fuertes, estables (no se encuentran en equilibrio dinámico), insolubles, resistentes a los cambios de temperatura y dispuestas en densas redes tridimensionales.

No participan en movilidad celular
queratina y lamina

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Filamentos intermedios:

diversas proteínas que se expresan en distintos tipos celulares. Mas de 50 proteínas, asociadas en 6 grupos según su función y similitud en sus secuencias de aminoácidos

Grupo I y II: queratinas
Cada célula epitelial expresa al menos 1 queratina tipo I y una queratina tipo II, que copolimerizan para formar filamentos. Heterodímeros

• •

queratinas duras: pelos, uñas, cuernos y lana queratinas blandas: en citoplasma de células epiteliales (citoqueratinas)

Grupo III Vimentina: en leucocitos, fibroblastos,células endoteliales Desmina: une discos Z Periferina: neuronas periféricas

Grupo IV Neurofilamentos (NF). Determinan el diámetro de un axón, por ende la velocidad de conducción .
Heteropolímeros de NF-L, NF-M, NF-H

-internexina:

se expresa previamente a los neurofilamentos en axones motores. Sostén de largas prolongaciones (h.1 m)

Neurofilamentos: Grupo V Laminas A, B y C

Grupo VI Nestina: se expresa al inicio del desarrollo embrionario

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• Diagnóstico oncológico: el patrón de distribución de los filamentos intermedios de la célula originaria del tumor se conserva. En general en la composición molecular de los filamentos intermedios existen pares característicos de citoqueratinas para algunos tipos celulares . Esto suele ser de mucha utilidad en el momento de investigar el origen de un tumor maligno

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Queratina y vimentina alrededor envoltura nuclear: posicionar y anclar núcleo Inmunoperoxidasa Coloración de contraste: hematoxilina (núcleos)

Inmunohistoquímica UUT de oviducto de vicuña Anticitoqueratina (tejido epitelial)

Inmunohistoquímica Ampula de oviducto de vicuña Antivimentina (tejido conjuntivo)

Por su distribución específica en los tejidos, la caracterización del tipo de FI sirve para caracterizar el origen de un tumor y por ende su tratamiento. 45

Proteínas de filamentos intermedios: secuencias diversas , sin embargo poseen organización estructural común: Dominio -hélice central (310-350 aa) Dominio N-terminal globular Dominio C-terminal

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Ensamblaje de los filamentos intermedios Polipéptidos paralelos se enrollan por sus dominios centrales: dímeros Dímeros se asocian antiparalelos de forma escalonada: tetrámeros Tetrámeros se asocian cabeza-cola: protofilamento Protofilamentos se asocian (8) lateralmente: filamentos Son apolares

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Ensamblaje no requiere hidrólisis de ATP ó GTP

ENSAMBLAJE DE LAMINAS NUCLEARES Polares: extremos N y C terminales

48

49

Laminas nucleares: estructura de envoltura nuclear. Punto de anclaje de la cromatina. Forman malla ortogonal

• •

Laminas A, B (B1 y B2) y C. Laminas A y C originadas por mismo pre-RNAm por empalme alternativo Lamina B codificada por otro transcripto específico. Postranscripcional se le adosa un ácido graso (isoprenilo en el extremo C-terminal) que se incorpora a la membrana nuclear interna, con lo que sujeta la lamina nuclear

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Fosforilación Laminas Despolimerización Desintegración

Desfosforilación Laminas Repolimerización Envoltura nuclear (ciclo celular) Reconstitución

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Filamentos de queratina anclados a MP en áreas de contacto a través de (PAFI) proteínas adaptadoras Desmosomas: célula-célula (placa densa, desmoplaquina-cadherinas (desmogleína y desmocolina))

Placofilina Placoglobina

52

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Hemidesmosomas: célula-MEC (plectina-laminina)

BP160 BP230

alfa

beta

LAMININA
Lámina basal epitelios
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Fibronectina 55

Proteínas de unión de los microfilamentos a proteínas integrales de la MP

CONTACTOS CELULA - MEC
DISTROFINA: producto del gen responsable de dos distrofias musculares (Duchenne y Becker), congénitas asociadas al cromosoma X. Producen degeneración progresiva del músculo esquelético. Pacientes mueren jóvenes. Dímero con un solo ABD. Se une a la actina y a un complejo transmembrana que liga el citoesqueleto con la MEC. Esto es importante durante la contracción muscular.
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lmportancia de la queratina en la resistencia mecánica de los tejidos epiteliales de la epidermis
Enfermedades de la piel Estudios in vitro: células en cultivo no expresan filamentos intermedios. Se pensó que no los necesitan al no estar sometidas a tensiones mecánicas

• Estudios in vivo: Ratones transgénicos: con gen de queratina mutado. La descendencia con gen mutado alteró citoesqueleto de modo que la mínima tensión mecánica (frotar) produjo la lisis de las células epiteliales con la generación de ampollas

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Epidermolisis bulbosa (ampollar) simple (EBS): mismos síntomas. Se demostró que se debe a mutaciones del gen de queratina.

58

• Enfermedades del sistema nervioso • Esclerosis lateral amiotrófica (ELA): físico Stephen Howking Perdida progresiva de neuronas motoras: atrofia muscular, parálisis, muerte. Se sugiere la participación de los neurofilamentos en esta patología

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MICROTÚBULOS

• • • • • • • •

Movimientos de cilios y flagelos Transporte de vesículas de membranas Alineación y separación de cromosomas Migración de axones Organización de la célula Polaridad de la célula

Polimerización y despolimerización Efecto de proteínas motoras Ambos procesos Guiando cono de crecimiento COMT COMT

En estructuras estables: cilios, flagelos, axones En estructuras transitorias: huso mitótico

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Microtúbulo: polímero de dímeros de subunidades de - y  tubulina
Dímero: -tubulina (ATP) y -tubulina (ATP-GDP)(actividad de GTPasa) Codificadas por familia de genes relacionados -tubulina: específicamente en centrosoma

Dímero de tubulina


Protofilamento (polímero lineal)
Microtúbulo (hueco, 13 protofilamentos paralelos, pero de moléculas sesgadas)

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Extremo – (crecimiento lento) corresponde a -tubulina (GTP) Extremo + (crecimiento rápido) corresponde a -tubulina (GTP GDP) Definen dirección de movimiento desplazamiento de moléculas y Calentamiento en presencia de GTP orgánulos

Ciclos de ensamblaje-desensamblaje de microtúbulos Depende de temperatura y GTP A 4ºC se despolimerizan en dímeros de  -tubulina A 37ºC +GTP se polimerizan y forman microtúbulos

Intercambio rotatorio Moléculas unidas a GDP se liberan continuamente de extremo – Moléculas unidas a GTP se adicionan continuamente a extremo + Dímeros de tubulina se asocian longitudinalmente: protofilamentos Interacciones laterales entre protofilamentos: hoja o cilindro 62

ENSAMBLAJE Y DESARMADO DE LOS MICROTÚBULOS INESTABILIDAD DINÁMICA Microtúbulos individuales alternan ciclos de crecimiento y acortamiento Depende de concentración crítica de GTP-α-tubulina Altas concentraciones: se añaden mas rápido que hidrólisis de GTP Crecimiento de extremo + Bajas concentraciones: hidrólisis de GTP mas rápida que adición Desensamblaje, acortamiento de extremo Renovación continua y rápida de microtúbulos: importante en procesos como mitosis

Estructura plana

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Microtúbulos Estables: cilios, flagelos, axones Inestables: huso mitótico Capaces de generar fuerzas de propulsión sin doblarse Microtúbulo simple: 13 protofilamentos Microtúbulo doble: 13+10 protofilamentos (cilios y flagelos) Microtúbulo triple: 13+10+10 protofilamentos (cuerpos basales, centríolos)

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ESTABILIZACIÓN DE LOS MICROTUBULOS Y SU UNION CRUZADA A OTRAS PROTEINAS
Inestabilidad dinámica: modificada por otras proteínas. Su actividad es regulada por fosforilación, las formas fosforiladas son incapaces de unirse a los microtúbulos Proteínas asociadas a microtúbulos (MAPs) se fijan y aumentan su estabilidad Permiten: Localización definida de los microtúbulos -Determinación de forma -Determinación de polaridad MAPs: varían en función del tipo celular. Poseen un dominio de proyección que une MT entre sí, con MP, con FI. MAP-1, MAP-2 y Tau: en neuronas MAP-4: en todo tipo celular, excepto neuronas Tau: principal componente detectado en cerebros de pacientes con Alzheimer Proteínas desestabilizadoras de los microtúbulos Katanina (MAP) : rompe ligaduras internas entre las subunidades y microtúbulo se fragmenta Op 18: se une a dímeros evitando su polimerización 65

El espacio entre microtúbulos depende de la longitud de dominio de proyección de las proteínas asociadas

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Fármacos que afectan polimerización de microtúbulos
Colchicina (vegetal) y colcemida (sintética): se unen a tubulina o MT Altas concentraciones: despolimerizan microtúbulos Bajas conc.: altera equilibrio entre ensamblaje y desensamblaje. Bloqueo de mitosis en metafase Experimentales

Taxol: estabiliza microtúbulos Inhibe ensamblaje Bloquea división celular Anticancerígeno y experimental

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MICROTUBULOS, PROTEINAS MOTORAS Y MOVIMIENTOS CELULARES -Transporte intracelular y posicionamiento de vesículas y orgánulos con membrana -Segregación y distribución de cromosomas (mitosis) -Movimiento de cilias y flagelos Proteínas motoras: generan energía mecánica (fuerza y movimento) a partir de hidrólisis de ATP Prototipo de proteínas motoras de los microtúbulos Familias de CINESINAS (QUINESINAS) y DINEÍNAS, pertenecen a familias de proteínas motoras relacionadas a MT.

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Cinesina: dímero de 2 cadenas pesadas, cada una unida a una cadena ligera Cadena pesada: 1 cabeza globular (N-terminal), dominio motor que se une a microtúbulo y ATP (estructura similar a la de miosina) y cadena -hélice que se enrolla con la otra cadena Cadena ligera: unida a dominio C-terminal de cadena pesada. Esta región se une a otros componentes celulares para su transporte. Responsable del tipo de estructura que se transporta (de – a + ) Procesividad: propiedad de recorrer un largo tramo de un MT sin desprenderse Citosólicas y mitóticas Dineína: Multiméricas. 2-3 cadenas pesadas unidas a variables péptidos cortos y medianos. Molécula muy grande (h. 2.000 kDa) Cadena pesada: glogular, dominio motor Porción basal: unión a estructuras subcelulares. Transporte axónico retrógrado, de vesículas de Golgi (hacia -) Citosólicas y del axonema (cilios y flagelos)

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DINACTINA: complejo proteico que se une a la dineína (sin su presencia la dineína no puede transportar cargas por sí sola) La dinactina también se une a los microtúbulos Complejo dineína-dinactina y el complejo NuMa (proteína del aparato nuclear mitótico) median la asociación de los microtúbulos con los centrosomas durante mitosis

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Posicionamiento intracelular de: RE, aparato de Golgi, lisosomas y mitocondrias La ubicación de RE, lisosomas y mitocondrias requiere moléculas de la familia de las cinesinas. Dineina en colocación de aparato de Golgi cerca de centrosoma

Asociación de RE y microtúbulos Célula epitelial:
• C11.47

(A)

RE: colorante fluorescente específico

(B)

Antitubulina fluorescente

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Polaridad de MT

Transporte axónico: anterógrado y retrógrado

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COMT CENTROSOMA Y ORGANIZACIÓN DE MICROTÚBULOS INESTABLES Centrosoma: lugar inicio de ensamblaje de microtúbulos citosólicos (inestables)

Experimento: fibroblastos de ratón Antitubulina fluorescente Microtúbulos durante interfase (A) Incubación 1 h con colcemida (desensamblaje de microtúbulos) Retiro de fármaco Observo a los 30 minutos Microtúbulos creciendo desde centrosoma

A

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Centrosoma - par centríolos perpendiculares (no siempre) - material pericentriolar amorfo
Centríolos: estructuras cortas 9 tripletes microtúbulos (similar cuerpos basales) No parecen participar en organización microtúbulos Ausentes en células vegetales, muchos eucariotas unicelulares, óvulos ratón Material Pericentriolar: lugar inicio montaje microtúbulos (- ) Complejos de -tubulina (10-13 moléculas) y pericentrina Anillo diámetro similar a microtúbulos Sitio nucleación α-tubulina MT: empotrados en COMT pero sin entrar en contacto con centríolos
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Gama T

Replicación del centrosoma: inicio en G1. De cada centriólo brota un centríolo hijo. También se replican los otros componentes. En G2 se completa crecimiento de centríolos. Se separan al inicio de la mitosis.

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76

77

Reorganización de los microtúbulos durante la mitosis Importancia de la inestabilidad dinámica:

Microtúbulos de interfase
Se disgregan Unidades de tubulina Durante mitosis Reensamblan

Huso mitótico
Segregación cromosomas Inestabilidad dinámica de los microtúbulos: durante profase microtúbulos de interfase son reemplazados por microtúbulos del aparato mitótico
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Aparato mitótico: máquina de microtúbulos para separar los cromosomas Microtúbulos cinetocóricos Huso mitótico Aparato mitótico Microtúbulos polares (en metafase) Par de ásteres Microtúbulos astrales

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1) Microtúbulos cinetocóricos: se asocian a cinetocoro por su extremo + y así se estabilizan 2) Microtúbulos cromosómicos: unidos a telómeros de cromosomas

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3) Microtúbulos polares: emanan de centrosomas y se estabilizan al solaparse uno sobre otro en el centro de la célula

4) Microtúbulos astrales: extremos + libres, determinan lugar (plano de escisión) de citocinesis

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PROTEINAS MOTORAS DURANTE LA MITOSIS Cinesinas mitóticas (CENP-E, BimC, ncd (hacia +). Dineínas: NuMA (asociada a aparato nuclear mitótico) y dineína citosólica (hacia -)

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MICROTÚBULOS ESTABLES CILIOS Y FLAGELOS EN EUCARIOTAS Cilios y flagelos: prolongaciones de la MP. Estructura básica: axonema (microtúbulos y proteínas)

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MICROTÚBULOS ESTABLES DETERMINAN LA POLARIDAD CELULAR Neuronas Dos tipos de proyecciones: dendritas y axones En su estructura poseen: neurofilamentos y microtúbulos Axones: extremos (+) de todos los microtúbulos hacia la periferia. Proteínas tau Dendritas: microtúbulos se orientan en ambas direcciones (+ y -). Proteínas MAP-2 TODOS los microtúbulos nacen en el citoplasma y no en el centrosoma

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ESTRUCTURA DE UN AXONEMA

La marcha de los brazos de la Dineína axonémica que se extienden desde un doblete hacia el extremo (-) del doblete vecino, genera una fuerza de deslizamiento lineal del axonema, el que es restringido por proteínas de unión cruzad y se convierte en en curva

9 tripletes

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BIBLIOGRAFIA

LA CELULA COOPER’S (5Ta. EDICCIÓN – 2010)

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR – LODISH 5TA.ED-2005

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