PERCOBAAN I

EKSTRAKSI DAN UJI AKTIFITAS ENZIM AMILASE DARI KECAMBAH BIJI JAGUNG
I. Maksud percobaan - Mempelajari cara ekstraksi enzim amilase dari kecambah biji jagung - Mempelajari cara uji aktifitas ekstrak enzim amilase. - Mempelajari faktor – faktor yang berpengaruh terhadap aktifitas ekstrak enzim amilase. II. Prinsip percobaan Enzim merupakan biokatalis yang berfungsi mengkatalisis reaksi – reaksi yang berlangsung dalam mahkluk hidup. Fungsi ini dipengaruhi oleh faktor lingkungan yaitu suhu, keasaman (pH), konsentrasi substrat, konsentrasi enzim dan aktivator. Pada kondisi optimum, laju reaksi enzimatik akan optimum, sehingga dikenal adanya suhu dan pH optimum bagi enzim. Laju reaksi enzimatik akan bertambah dengan bertambahnya konsentrasi enzim, akan tetapi laju reaksi dapat mencapai konstan bila jumlah substrat bertambah terus sampai melewati batas kemampuan enzim. Biji yang sedang berkecambah menggunaakn energi yang diperoleh dari simpanan karbohidrat (pati), lemak dan protein. Karbohidrat pada proses perkecambahan dipecah menjadi gula sederhana yang dilanjutkan menjadi energi, karbon dioksida dan sejumlah air. Pemecahan pati menjadi gula sederhana memerlukan enzim pemecah karbohidrat, yaitu enzim amylase. Enzim ini disintesis selama proses perkecambahan. Oleh karena itu, pada biji brkecambah terdapat enzim amylase dengan konsentrasi yang relatif tinggi. Enzim adalah protein yang bersifat larut dalam air. Atas dasar kelarutan itu, enzim dalam biji berkecambah dapat diekstrak menggunakan pelarut air. Seperti halnya enzim – enzim lain, aktifitas enzim amylase dipengaruhi oleh suhu, pH, konsentrasi substrat dan konsentrasi enzim. III. Peralatan yang dipakai 1. Gelas kimia 2. Blender 3. Tabung reaksi 4. Rak tabung reaksi 5. Pipet tetes 6. Gelas ukur

7. Penangas air 8. Stopwatch 9. Thermometer 10. Pipet ukur 10 ml 11. Corong

IV. Bahan yang digunakan 1. Biji jagung 2. Larutan pati 1 % 3. Larutan iodium 10 % 4. Buffer fosfat pH 4,5,6,7,8 dan 10

5. Air murni(aquades) 6. Kapas 7. Kain saring

V. Cara kerja 5.1 Ekstraksi enzim amylase 1. Menyiapkan biji jagung sebanyak 100 gram, kemudian rendam dalam air selama 24 jam 2. Meniriskan biji jagung yang telah direndam, kemudian memasukkannya ke dalam gelas kimia yang telah diisi dengan kapas basah. 3. Menutup gelas kimia dengan plastik selama 48 jam. 4. Memasukkan biji jagung yang telah berkecambah kedalam blender, kemudian menambahkan air sebanyak 200 ml dan memblendernya. 5. Menyaring kecambah yang telah dihancurkan dengan kertas saring (kain kasa) atau gelas wool. 6. Mensentrifuse filtrat yang dihasilkan, kemudian mendekantasi supernatan dan merupakan ekstrak enzim amilase yang akan diuji aktifitasnya. 5.2 Uji aktifitas ekstrak enzim amylase 5.2.1. Pengaruh keasaman terhadap aktivitas  Menyiapkan 6 buah tabung reaksi kemudian isi sesuai dengan tabel berikut : No. Pati 1 I2 10 % Buffer fosfat (ml) pH Tabung % (ml) (ml) 4 5 6 7 8 10 1 1 0,05 1,5 2 1 0,05 1,5 3 1 0,05 1,5 4 1 0,05 1,5 5 1 0,05 1,5 6 1 0,05 1,5

 Menambahkan 2 ml ekstrak enzim amylase ke dalam masing – masing tabung, mengocok campuran kemudian menyimpannya pada suhu uang. c. Mengamati perubahan warna larutan setiap 5 menit selama 1 jam.

d. Memuat kurva antar superwaktu dalam menit terhadap pH larutan, menentukan pH optimum enzim 5.2.2. Pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas a. menyiapkan 6 buah tabung reaksi kemudian isi sesuai dengan tabel berikut : No. Pati 1 I2 10 % Air murni Buffer fosfat pH Tabung % (ml) (ml) optimum 1 2 0,05 5 1,5 2 3 0,05 4 1,5 3 4 0,05 3 1,5 4 5 0,05 2 1,5 5 6 0,05 1 1,5 6 7 0,05 0 1,5 b. Menambahkan 2 ml ekstrak enzim amylase ke dalam masing – masing tabung, mengocok campuran kemudian menyimpannya pada suhu uang. c. Mengamati perubahan warna larutan setiap 5 menit selama 1 jam. d. Memuat kurva antar superwaktu dalam menit terhadap volume pati. e. Membuat kesimpulan dari hasil percobaan anda. 5.2.3. Penaruh konsentrasi enzim No. Tabung Pati 1 % (ml) I2 10 % Air (ml) murni(ml) Buffer fosfat pH optimum

1 2 0,05 5 1,5 2 3 0,05 4 1,5 3 4 0,05 3 1,5 4 5 0,05 2 1,5 5 6 0,05 1 1,5 6 7 0,05 0 1,5 b. Menambahkan 1 ml pati 1% ke dalam masing – masing tabung, mengocok campuran kemudian menyimpannya pada suhu uang. c. Mengamati perubahan warna larutan setiap 5 menit selama 1 jam. d. Memuat kurva antar superwaktu dalam menit terhadap volume ekstrak enzim. e. Membuat kesimpulan dari hasil percobaan anda.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful