tugas-epid-1

Penyakit Parkinson (PD) adalah gangguan neurodegenerative yang disebabkan terutama oleh hilangnya progresif neuron dopamin di substantia nigra

pars compacta. Pemicu timbulnya penyakit ini termasuk stres oksidatif dan disfungsi mitokondria. Gen PARK7, DJ-1, telah dilaporkan responsif terhadap stres oksidatif dan penting bagi pemeliharaan mitokondria . DJ-1 pada awalnya diidentifikasi dan digambarkan sebagai onkogen dan protein asam amino 189 sangat kuat di antara seluruh spesies. Protein DJ-1 berlimpah menyatakan seluruh tubuh dan di otak manusia normal itu adalah cukup dinyatakan dalam neuron dan dalam astrosit seluruh SSP . Modifikasi oksidatif DJ-1 telah dilaporkan pada jaringan otak dari pasien dengan PD sporadis dan penyakit Alzheimer dibandingkan dengan kontrol. DJ-1 melindungi neuron terhadap stres oksidatif dengan bertindak sebagai redoks yang tidak dapat berdiri sendiri. DJ-1 dapat mengikat RNA secara oksidatif dan DJ-1/RNA kompleks berdisosiasi setelah stres oksidatif Pada tahun 2001 lokus kromosom 1p36 PARK7 terkait dengan suatu keluarga dengan autosomal resesif di awal onset parkinson di Belanda. Pada lokus yang sama di tahun berikutnya dikaitkan dengan keluarga dengan AREP di Italia. Dua mutasi pada DJ-1 itu kemudian dilaporkan ke cosegregate dengan penyakit, delesi 14kb dalam keluarga PD Belanda dan Leu166Pro substitusi dalam keluarga PD Italia, dan keduanya menyebabkan hilangnya fungsi gen. DJ-1 mutasi yang resesif diwariskan dan mengakibatkan PD dengan onset awal, mutasi keseluruhan diidentifikasi sampai saat ini jarang terjadi, menyebabkan ~ 1% dari kasus PD di seluruh dunia dan tidak ada mutasi dilaporkan dalam kasus PD Swedia [15]. Pada Kaukasia, mayorita populasi PD dengan DJ-1 mutasi mengarah ke perubahan dalam urutan asam amino telah ditemukan di ekson 2, 5 dan 7. Oleh karena itu ekson ini diurutkan dalam Swedia Parkinson kohort untuk mencari variabel yang diketahui dan baru. BAHAN DAN METODE Subjek Ekson 2, 5 dan 7 dan ekson / intron border DJ-1 disekuensing dalam bahan PD Swedia yang terdiri dari 144 individu (usia rata-rata 64,3 tahun, laki-laki 56,9%). 77 dari PD pasien memiliki onset penyakit dini (≤50 tahun) dan 67 dari pasien melaporkan memiliki sejarah keluarga yang positif dari PD dalam satu atau lebih saudara-saudara tingkat pertama, kedua, atau ketiga (15 dari pasien ini memiliki onset awal juga). 66 dari kasus onset awal telah diselidiki untuk kemungkinan perubahan

Fullerton.3% laki-laki). primer 5'-AAGCGTTAA terbalik ATGTGAGCAGTG-3 '. DNA diekstraksi dari darah sesuai dengan protokol standar. PCR produk tersebut 337 bp (ekson 2). berikut ini penyedia instruksi. Jerman). 56 ° C selama 40 s dan 72 ° C selama 1 menit diikuti oleh 7 perpanjangan terminal menit pada 72 ° C. Beckman Coulter Inc. Bahan ini diperoleh setelah diberitahu lisan dan persetujuan tertulis dan persetujuan dari etika lokal komite di Karolinska Institutet dan University of Gothenburg. 258 bp (ekson 5) dan 378 bp (Ekson 7) dari gen DJ-1. Pasien-pasien ini disaring untuk mutasi titik Parkin dan Parkin. Sequencing Sampel dari pasien PD dianalisis dengan otomatis kapiler sekuensing. Positif kontrol untuk Ala167Ala mutasi yang digunakan dalam uji pyrosequencing . ekson 5 primer maju 5'AAATAGGTCAGAGAGCTTGTGG-3 '. 40 siklus dijalankan pada 95 ° C selama 45 s. AS). Subyek kontrol terdiri dari 213 neurologis peserta sehat dari daerah Stockholm (usia rata-rata 75. Semua subjek PD bertemu dengan Inggris Raya Parkinson Penyakit Masyarakat Kriteria Bank Otak untuk PD kecuali bahwa lebih dari satu relatif terpengaruh diizinkan [18]. primer 5'-maju AGACGGCCTGATTCTTACAAGC-3 '. CA. -synuclein. uch-L1 dan PINK1 ekson menyalin nomor penyimpangan juga.dalam jumlah salinan dalam ekson 1. sebaliknya primer 5'-GGACAGCGACTTCTGAACAC-3 '. 5 dan 7 dari DJ-1 meskipun tidak penyimpangan yang terdeteksi [17]. sebaliknya primer 5'TCAAACCATCGAATGAAAGG-3 'dan ekson 7 maju primer 5'-ACAGTGTTGGGTTTATATGCTG-3 '. Tidak diketahui PD menyebabkan mutasi Parkin atau kelainan menyalin nomor itu ditemukan. 3. Pyrosequencing Untuk kontrol layar khusus neurologis yang sehat untuk yang Ala167Ala mutasi pada ekson 7 kita digunakan pyrosequencing [19] dan urutan primer berikut. Pemurnian diperkuat fragmen dilakukan dengan menggunakan QIAquick ® Pemurnian PCR kit (Qiagen. Primer reverse terbiotinilasi pada akhir 5'-. Hilden. Polymerase chain reaction (PCR) dilakukan dengan menggunakan DNA polimerase Taq dan mengikuti primer urutan: ekson 2 maju primer 5'-TCTCAGGG TTGCAATGAAAG-3 '. 41.8 tahun. DNA diisolasi fragmen yang diurutkan menggunakan kit DTC diikuti oleh otomatis elektroforesis gel kapiler (CEQ 2000 sistem. primer 5'-terbalik GGCCTGTTTCTCTAAGTGATCG-3 'dan sequencing primer 5'-CTTCGAGTTTGCGC-3 '.

Swedia). mencuci dan template beruntai tunggal adalah anil untuk sekuensing primer mundur pada 80 ° C selama 2 menit diikuti dengan pendinginan sampai suhu kamar. Semua solusi digunakan dalam persiapan sampel disiapkan sesuai dengan produsen instruksi (Biotage AB. Biotage AB. DNA amobil Template kemudian ditangkap probe ke saringan (PyroMark Vacuum Prep Tool. Volume 5 Anvret et al. Swedia). PCR dilakukan dengan DNA polimerase Taq untuk memperkuat fragmen 175 bp. rs71653621) Ala167Ala menggunakan sebaliknya sekuensing primer (T> C). Parsial DJ-1 urutan mRNA dari 141 nukleotida termasuk urutan mengapit (70 nukleotida) di kedua sisi mutasi dianalisis dan dibandingkan dengan urutan wild type. sekunder Struktur diperkirakan menggunakan online yang tersedia untuk umum mfold lunak versi 3. Uppsala. denaturasi etanol larutan buffer. Uppsala. Uppsala. Ala167Ala pembawa dan b) (Het) heterozigot T / C. setelah PCR terbiotinilasi produk diamobilisasi pada dilapisi streptavidin manik-manik dengan pencampuran at 2500 rpm selama 10 menit pada suhu kamar sesuai dengan instruksi pabrik. Prediksi Struktur Sekunder mRNA Untuk mengevaluasi efek yang mungkin dari diidentifikasi Ala167Ala mutasi pada tingkat DJ-1 mRNA.501A> G. Tidak Ala167Ala operator diidentifikasi di antara 213 neurologis yang sehat Swedia kontrol. Para Filter probe merona dengan 70%. 45 siklus yang berjalan pada 95 ° C selama 20 s. 2011. 10 The Journal Neurology Terbuka.3%) di urutan A G> diganti dibandingkan dengan urutan liar jenis (Tabel 2). HASIL Dalam kasus 144 PD kita mengidentifikasi mutasi sinonim. Ala167Ala pembawa.501A> G. Hasil dari sekuensing kapiler otomatis ekson 7 di DJ-1 termasuk mutasi (c. Untuk menguji apakah Ala167Ala sinonim substitusi memiliki efek yang mungkin pada struktur sekunder mRNA DJ-1 kita melakukan analisis struktur dalam silico. dalam ekson 7 dari DJ-1 pada dua pasien PD (Gambar 1 dan Tabel 1). Ala167Ala (c. Sampel dianalisis pada pyrosequencer otomatis menggunakan Sistem 96 PSQ bersama-sama dengan Software SNP tunggal dan SNP Pereaksi Kit (Biotage AB. .21]. ergy (1.untuk menjamin akurasi metode serta kontrol air. (1). a) jenis liar homozigot (WT) T / T. 57 ° C selama 20 dan 72 ° C selama 30 detik diikuti oleh 7 terminal min elongasi pada 72 ° C. Hasil kami menunjukkan penurunan kecil di lipat mRNA enGambar.2 [20. rs71653621). Swedia).

Mekanisme yang mutasi sinonim Ala167Ala mungkin memiliki konsekuensi pada tingkat protein dan menyebabkan rentan terhadap penyakit tidak baik dipahami. DJ-1 protein telah disarankan untuk bertindak dalam beberapa jalur dan hipotesis bahwa hilangnya pelindung fungsi DJ-1 di neuron dopaminergik dapat menyebabkan neurodegeneration [24]. lipat. Beberapa kemungkinan telah diusulkan untuk mutasi sinonim. yang ini sesuai dengan laporan bahwa DJ-1 telah terlibat pada penyakit Alzheimer [8]. Mengamati DJ-1 frekuensi mutasi (1. tidak ada kesimpulan yang kuat dapat ditarik dari kondisi buatan digunakan untuk pemodelan struktur sekunder in silico.96% dan variasi jumlah salinan dalam DJ-1 telah sejauh ini hanya dilaporkan pada populasi Kaukasia PD (0. Mutasi Ala167Ala sebelumnya diidentifikasi pada pasien PD (pembawa homozigot) dari Britania Raya dan pasien dari Amerika Utara material dengan Kaukasus / asal Hispanik (pembawa heterozigot) [22. Salah satu pembawa Ala167Ala Swedia didiagnosis dengan penyakit Alzheimer juga (Tabel 1).23]. kami telah mencari mutasi di ekson 2. Namun. 5 dan 7 dan di ekson / intron perbatasan DJ1. karena variasi telah dilaporkan di wilayah ini [22]. termasuk perubahan dari mRNA stabilitas. namun tidak ada pembawa Ala167Ala yang diidentifikasi di antara 213 kontrol neurologis yang sehat.4%) adalah sesuai dengan temuan di PD populasi Kaukasia lainnya.54%) [16]. Kami mendeteksi mutasi heterozigot Ala167Ala dalam dua keluar dari 144 pasien PD Swedia. Kaukasia: 0. Asia: 3. omset dan / atau fungsi [25]. menunjukkan kemungkinan efek Ala167Ala pada DJ-1 fungsi gen [26]. aktivitas transkripsi.3%) membandingkan Ala167Ala bermutasi urutan dengan urutan tipe liar.74% dan Ashkenazi Yahudi: 1. KESIMPULAN . struktur sekunder. Kami menemukan penurunan kecil di mRNA lipat energi (1.91%. Dalam studi ini.PEMBAHASAN Jumlah DJ-1 mutasi digambarkan hari ini adalah rendah dan mereka account hanya beberapa kasus beberapa PD di populasi yang berbeda [16]. Frekuensi DJ-1 mutasi telah dilaporkan bervariasi di antara populasi PD dengan asal etnis yang berbeda. Arab: 0. tingkat.03%. Ini adalah laporan pertama pada DJ-1 mutasi yang diidentifikasi dalam Swedia PD materi. tetapi tidak ada varian genetik lain dalam salah satu dari tiga ekson diselidiki. Kami menemukan mutasi Ala167Ala dalam dua PD pasien dalam kohort Swedia kami. atau perubahan dalam sintesis protein.

Ini adalah laporan pertama pada mutasi DJ-1 diidentifikasi dalam Swedia pasien PD. Berdasarkan hasil pemeriksaan di kami Swedia kohort serta hasil dari penelitian lain. . tampak jelas bahwa mutasi pada DJ-1 adalah penyebab langka kekeluargaan dan awal-awal PD di seluruh dunia.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful