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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA CARRERA DE QUMICA FARMACUTICO BIOLGICA

AUTORES:

QFB Guadalupe Alejandra Aceves Rosas M. en C. Jos Luis Balderas Lpez QFB ngeles Garca Fernndez M. C. Amada Lpez Garca M. en C. Evangelina Lpez Nieto QFI Estela Valencia Plata

Mxico, D.F., febrero de 2006

Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

Tabla de contenido
Tabla de contenido I. Presentacin II. Forma de trabajo en el laboratorio a) Formacin de los equipos de trabajo b) Material necesario para el trabajo en laboratorio c) Normas de trabajo del Laboratorio de Farmacologa d) Mecanismos de evaluacin e) Programacin de las prcticas III. Guas de trabajo a) Gua para la elaboracin de fichas resumen de artculo b) Gua para la elaboracin de trabajos de investigacin / cuestionarios de investigacin bibliogrfica c) Gua para la elaboracin de informes d) Gua para la presentacin del seminario IV. Prcticas de Laboratorio Tema 1. Posologa Prctica 1. Posologa. Tema 2. Manejo de animales Prctica 2. Manejo de la rata y el ratn en el laboratorio de farmacologa Tema 3. Farmacocintica: absorcin Prctica 3. Determinacin del perfil farmacocintico de la sulfacetamida sdica en conejo Tema 4. Farmacocintica: distribucin Prctica 4. Distribucin de la sulfacetamida sdica en rata Tema 5. Farmacocintica: eliminacin Prctica 5. Determinacin de la ruta de eliminacin principal de la sulfacetamida sdica Tema 6. Relacin dosis respuesta cuantal Prctica 6. Determinacin de dosis letal media (DL50), dosis efectiva media (DE50), ndice teraputico (IT) y margen estndar de seguridad (MS) del 50 41 34 20 17 9 9 15 1 3 4 4 4 5 6 6 8 8

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pentobarbital sdico Prctica 7. Bioensayo de toxicidad en Artemia salina L. Tema 7. Relacin dosis respuesta gradual Prctica 8. Accin de la acetilcolina sobre el msculo recto anterior de rana Tema 8. Interaccin de frmacos Practica 9. Efecto de la succinilcolina en la accin de la acetilcolina en msculo recto anterior de rana V. Bibliografa recomendada VI. Anexos Anexo 1. Respuestas a los problemas de la prctica de posologa. Anexo 2. Manejo de residuos peligrosos biolgico-infecciosos. Anexo 3. Formularios. Formulario 1. Parmetros farmacocinticos Formulario 2. Clculo de Kp rgano/sangre Formulario 3. Mtodo Sigma minus Formulario 4. Anlisis probit Formulario 5. ndice Teraputico y Margen Estndar de Seguridad Formulario 6. Ecuacin de Hill

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

I. Presentacin
El trabajo experimental, siempre y cuando se cuente con el lugar y material necesario, es un complemento indispensable par ayudar a los estudiantes a la comprensin de la Farmacologa. Confirmar a travs del experimento los eventos comentados o discutidos en el aula, los libros, las revistas, etc. Por lo tanto, hay que conceder la mxima importancia al laboratorio, espacio donde conviven maestros y alumnos, aprendiendo, por qu no, unos de otros. As, el estudio por parte del alumno no quedar reducido a memorizar cantidad de nombres, frmulas, dosis, grficas, etc. Cosas que pueden olvidarse rpidamente. Es conveniente que antes de abordar una prctica se documenten sobre el tema, y consultar con sus maestros los problemas que se vayan presentando.

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II. Forma de trabajo en el laboratorio


a) Formacin de los equipos de trabajo Al inicio de cada semestre escolar, los alumnos se distribuirn en equipos de trabajo los cuales formarn de acuerdo a los siguientes criterios: Se formarn equipos de trabajo de acuerdo al nmero de alumnos. Los equipos se formarn con alumnos inscritos. Los alumnos que se den de alta posteriormente, sern asignados a un equipo determinado por los profesores del mdulo Los equipos debern ser integrados por alumnos de ambos gneros, no se aceptarn equipos con integrantes de un mismo gnero. Una vez formados los equipos no se aceptarn cambios de integrantes. Cualquier imprevisto ser resuelto por los profesores del mdulo.

b) Material necesario para el trabajo en laboratorio La lista de materiales para un buen desarrollo de las prcticas de laboratorio se enlista a continuacin. Cabe sealar que este material es obligatorio y debe tenerse siempre disponible en cada prctica.

Material individual Bata de laboratorio Marcador de tinta indeleble Cinta adhesiva Pipeta Pasteur de 1 mL con bulbo de plstico Libreta de laboratorio Este manual de prcticas

Material por equipo Perilla de succin o propipeta 8 Jeringas desechables de 1 mL

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3 Jeringas desechables de 3 mL 2 Jeringas desechables de 20 mL Franela Papel higinico 2 Rastrillos para rasurar sin lubricante 10 Tubos de ensaye de 13x100 mm Escobilln para tubos de ensaye

c) Normas de trabajo del Laboratorio de Farmacologa 1. Para el trabajo experimental dentro del laboratorio es obligatorio el uso de bata, la cual deber estar correctamente abotonada. No se permitir el trabajo e inclusive la permanencia de los alumnos en el laboratorio sin bata, durante las sesiones experimentales. 2. La tolerancia para el ingreso a la clase de laboratorio ser de 10 minutos, despus de este tiempo el alumno podr ingresar a la clase, sin embargo, tendr inasistencia. 3. Est estrictamente prohibido fumar e ingerir alimentos dentro del laboratorio, tanto en las sesiones tericas como en las prcticas. 4. Cada equipo de trabajo es responsable de su material, la limpieza del mismo y de la mesa. 5. Quedan estrictamente prohibidas las visitas dentro del laboratorio. 6. Al inicio del semestre se programarn las sesiones prcticas, tericas, seminarios y examen, de acuerdo con el calendario escolar en vigencia. 7. Al inicio del semestre se programarn los equipos que se encargarn de los cadveres y restos de los animales utilizados. 8. Los alumnos no podrn retrasar las sesiones programadas. No obstante, en caso de suspensin de alguna de las sesiones por una causa de fuerza mayor, sta ser reprogramada por los profesores del mdulo. 9. Ningn alumno podr retirarse si la sesin prctica o terica no ha concluido. El traslape de asignaturas es exclusivamente responsabilidad del alumno. 10. Cualquier imprevisto ser resuelto por los profesores del mdulo.

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d) Mecanismos de evaluacin La evaluacin del mdulo se realizar tomando en cuenta los siguientes criterios: Trabajo de laboratorio Trabajo de investigacin (cuestionario) Examen previo a la prctica Lectura de artculo (ficha de resumen) Informe de la prctica Seminario

Bajo las siguientes condiciones: La asistencia es obligatoria, para tener derecho a la calificacin el alumno deber tener como mnimo un 80% de la misma. El alumno que no entregue su Trabajo de investigacin/Cuestionario no tendr derecho a realizar la prctica. El alumno que no asista a la prctica, no tendr derecho a entregar el informe de la misma. Para obtener una buena calificacin dentro del Trabajo de laboratorio (cuestionario), el alumno deber mostrar inters, cooperacin y conocimientos durante el desarrollo de la prctica. Este punto ser evaluado constantemente por los profesores del mdulo. Para obtener calificacin aprobatoria, el alumno deber tener todos los criterios de evaluacin con calificacin aprobatoria.

e) Programacin de las prcticas El formato para la programacin de las prcticas se encuentra en la siguiente hoja. Los profesores al inicio del semestre indicarn las fechas correspondientes.

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Actividad / Prctica Organizacin Prctica 1. Posologa Prctica 2. Manejo de animales Prctica 3. Absorcin Prctica 4. Distribucin Prctica 5. Eliminacin Seminario 1. Practica 6. Curva Dosis Respuesta Cuantal Practica 7. Bioensayo de toxicidad Prctica 8. Curva Dosis Respuesta Gradual Prctica 9. Interaccin de frmacos Seminario 2.

Fecha(s) de realizacin

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III. Guas de trabajo


a) Gua para la elaboracin de fichas resumen de artculo 1. La ficha deber escribirse en una ficha tamao media carta o en una hoja tamao carta, a mquina de escribir o computadora. No se recibirn manuscritos. 2. Los artculos podrn ser asignados por el asesor o seleccionados por del alumno. 3. Si el alumno elige sus artculos, stos podrn estar escritos en espaol u otros idiomas, ser de carcter experimental y la fecha de publicacin deber estar dentro de los ltimos 5 aos. 4. En el contenido de la ficha deber especificarse claramente el objetivo del artculo, el procedimiento seguido, los resultados obtenidos y las conclusiones a las que se llegaron. Adems de una breve introduccin. 5. En las fichas en las cuales slo se tradujo el Abstract, tendrn calificacin igual a cero, sin excepciones. 6. Los datos adicionales que contendr la ficha son: referencia y datos del alumno como se especifica en el siguiente ejemplo:

Tema: Relacin Dosis-Respuesta cuantal. Toussaint M, Shedd T y Leather G. 1995. A comparison of standard acute toxicity test with rapid-screening toxicity test. Enviromental Toxicology and Chemistry, 14(5):907-915.

Alumna: Isabel Rivera F. Equipo: 3, Grupo: 1601

Las pruebas de toxicidad en animales son muy importantes debido a...

Las fichas se entregarn nicamente el da de inicio de la prctica correspondiente, sin prrroga.

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b) Gua para la elaboracin de Trabajos de Investigacin/Cuestionarios de investigacin bibliogrfica 1. Debern entregarse a mquina de escribir, a computadora o en la libreta destinada al laboratorio de farmacologa. Por ningn motivo los trabajos debern contener recortes o texto digitalizado. 2. La extensin mnima es de tres cuartillas y la mxima de cinco. Por lo que la informacin deber ser resumida. Por cada cuartilla de menos o de ms repercutir en la calificacin. 3. Cumplir con un mnimo de cinco referencias, tres de las cuales debern ser obligatoriamente de la lista anexa. Las referencias debern escribirse en sistema Vancouver. 4. El formato de entrega es libre. 5. Criterios de evaluacin: cumplimiento de los puntos del cuestionario, calidad del resumen, ortografa y limpieza. 6. Los trabajos de investigacin (cuestionarios) se entregarn nicamente el da sealado en el calendario de prcticas, sin prrroga. 7. Los trabajos de los alumnos que sean ms del 50% igual tendrn una calificacin igual a cero, sin excepciones.

c) Gua para la elaboracin de informes

1. Encabezado: El informe no deber contener portada ni adornos en las hojas. Se comenzar en una hoja blanca colocando en rengln separado la siguiente informacin: Titulo del informe, el cual tendr que ser diferente al de la prctica, y no debe tener ms de 25 palabras. Autor o autores, es decir, los nombres de los integrantes del equipo y subrayado el nombre del integrante que entrega el informe. Lugar y direccin donde se realiz el trabajo experimental, es decir, el nombre del laboratorio, de la facultad y su direccin. Ejemplo de la prctica de farmacocintica del equipo 4 que contiene 3 integrantes y es entregado individualmente por uno de ellos:

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Perfil farmacocintico de la sulfacetamida sdica en conejo. Prez O Juan, Ramrez M Elisa y Hernndez J Francisco Laboratorio de Farmacologa L-202, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao 66, Col. Ejrcito de Oriente, 09230, Mxico D.F.

2. Resumen: El resumen deber tener una extensin no mayor a media cuartilla, y en el se explicar brevemente, el objetivo perseguido, el procedimiento y resultados obtenidos, as como la conclusin principal de la prctica. Ejemplo:

Para realizar la determinacin de la DE50 del pentobarbital sdico se utilizaron 6 grupos de ratones a los cuales se les administraron dosis crecientes del frmaco por va intraperitoneal y se midi su perfil neurofarmacolgico durante 30 minutos, registrando los cambios que indicaran que haba pasado al efecto de sedacin. Los datos fueron analizados por el anlisis probit y se obtuvo una DE50 de 25.67 g/kg con un LIC de 18.34 g/kg y un LSC de 32.56 g/kg que demuestran la efectividad del pentobarbital como sedante a concentraciones bajas

3. Abstract: El abstract no necesariamente debe ser la traduccin del resumen. Debe ser redactado de tal forma que exprese la misma idea que el resumen aunque no proporcione la misma informacin. Ejemplo de abstract para el resumen anterior:

ED50 of sodium pentobarbital was calculated. Six mice groups were administrated intraperitoneally with sodium sulfacetamide in increasing doses. Neuropharmacological profile was observed for 30 minutes in order to detect sedation effect. Probit analysis was performed in order to calculate ED50 and confidence interval. The results were ED50=25.67 g/kg, UCL=18.34 g/kg and LCL de 32.56 g/kg, proved it efficacy in lower doses.

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El abstract no tiene calificacin, pero es obligatorio que este presente en el informe.

4. Introduccin: La introduccin no debe confundirse con el Marco Terico donde se exponen los fundamentos y conceptos de la prctica. En la introduccin debe redactarse como la presentacin del trabajo, es decir, de manera breve interesar al lector y explicar que beneficios o conocimientos adquirir al leer el informe o los temas relacionados.

5. Marco Terico: En el Marco Terico se exponen los conceptos y fundamentos de la prctica, encontrados ya sea, en libros o revistas. Su entrega es opcional y no tiene calificacin.

6. Objetivo: El objetivo deber responder a tres preguntas fundamentales: Qu se va a hacer? Cmo se va a hacer? Para que se va a hacer? Su redaccin deber ser breve, no mayor a 3 5 renglones. El siguiente ejemplo es de una prctica hipottica de determinacin de la potencia relativa.

Se determinar la potencia relativa de la metacolina por medio de la contraccin de msculo liso del ileon de cobayo utilizando la acetilcolina como estndar, para conocer su posible aplicacin en teraputica en enfermedades gastrointestinales

7. Hiptesis La hiptesis es una afirmacin que se sujetar a comprobacin mediante el protocolo experimental que se desarrollar. No es necesario que esta afirmacin sea cierta, sino que es lo que queremos comprobar o refutar. La hiptesis siempre deber estar relacionada con el objetivo.

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Su redaccin por ningn motivo ser en forma condicional, ni mencionar que si trabajo bien el experimento saldr bien, como:

Si se realiza adecuadamente el experimento, podemos obtener los resultados esperados Un ejemplo de hiptesis de acuerdo con el objetivo anterior sera:

La potencia relativa de la metacolina es mayor a 1 lo que indica que contrae con mayor eficacia al msculo liso del leon y por mayor tiempo que la acetilcolina

8. Metodologa: La metodologa se divide principalmente en Materiales y Procedimiento. a) Materiales. Se refiere a material biolgico utilizado, sustancias y reactivos, equipo e instrumentos. Con respecto al material biolgico debe especificarse el gnero y cepa del animal utilizado, de los reactivos la concentracin, y de los equipos e instrumentos el modelo o marca. b) Procedimiento: Se describe el procedimiento realizado durante la prctica incluyendo todas las modificaciones. Debe redactarse en pretrito y en prosa, sin enumerar. Pueden utilizarse diagramas de flujo o de bloques para describir mejor el procedimiento y por ningn motivo ste ltimo sustituir a la redaccin.

9. Resultados: Los resultados debern expresarse en grficas, esquemas o cuadros. Las grficas debern contener los valores, unidades y nombres de los ejes, as como un ttulo y pie de grfica como en el ejemplo:

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Perfil farmacocintico del sulfametoxazol en rata


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Log concentracin (mg/mL)

0 0 100 200 300 400 500 600 700 800

tiempo (min)

Grafica 1. Perfil farmacocintico del sulfametoxazol en rata, administrado por va intraperitoneal.

Los esquemas y cuadros debern contener un ttulo y un pie de esquema o figura. Los valores informados debern tener sus unidades respectivas. No es necesario que se coloquen los clculos realizados.

10. Discusin de Resultados: En la discusin de resultados, no deben describirse los resultados como por ejemplo: La grfica muestra un aumento en el tiempo 5 y una disminucin al tiempo 30. Los resultados muestran que el Kp del msculo es el mayor. Los datos muestran una gran variacin. Las muestras presentaron diferentes colores al igual que el blanco. Etc.

Para realizar una buena discusin debern investigar y analizar, por ejemplo: Por qu hay un aumento en el tiempo 5 y una disminucin al tiempo 30? Qu significa que el Kp del msculo sea el mayor? Por qu hay una gran variacin en los datos? Por qu las muestras no tienen el color debido? Etc.

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Cada anlisis deber estar bien fundamentado, referenciado en estilo Vancouver, y se deber omitir aquellas en las cuales: Los reactivos no servan Los equipos no estaban calibrados o no sirven. No trabaje bien. El clima influy en la determinacin.

La discusin es la parte principal del informe por lo que influye mucho su calidad en la calificacin.

11. Conclusiones: Las conclusiones debern ser breves y deben redactarse con respecto a los objetivos. No son validas las conclusiones como: Se cumpli con el objetivo y la hiptesis fue cierta Un ejemplo de conclusiones con respecto al objetivo anterior sera: La potencia relativa, con respecto a la acetilcolina, de la metacolina fue de 1.27 al realizar el experimento en leon de cobayo. Esta valor indica que es ms potente que la acetilcolina que junto con su caracterstica de hidrolizarse lentamente, lo hace adecuado para patologas asociadas a una falta de estimulo por acetilcolina en msculo liso

12. Sugerencias: Las sugerencias son todas aquellas observaciones que nos ayudarn a que. El experimento cumpla con sus objetivos, es decir, se obtenga los resultados esperados. El alumno adquiera mayores conocimientos y prctica, as como criterios para la toma de decisiones. Se minimicen los problemas que aparecen durante el desarrollo. Esta parte del informe no tiene calificacin y puede omitirse cuando no haya observaciones.

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13. Referencias: Las referencias debern escribirse en estilo Vancouver. Debern escribirse por orden de aparicin sin omitir los datos de la referencia y las pginas consultadas. El mnimo de referencias para el informe es 5 (cinco). Para mayor informacin del estilo Vancouver debern consultar el siguiente sitio de Internet: http://www.icmje.org/

d) Gua para la presentacin del seminario El seminario deber contener los siguientes puntos: Resumen Introduccin Marco terico Objetivos e hiptesis Desarrollo experimental Discusin de resultados Conclusiones Sugerencias

Todos los puntos, con excepcin de la discusin de resultados debern tratarse brevemente. Se debern utilizar acetatos, diapositivas o proyector (can). El material deber ser totalmente legible a una distancia mnima de 5 m. El tema de exposicin deber ser dominado por todos los integrantes del equipo, sean o no expositores. No se permitir que el expositor slo lea su informacin: deber de explicarla y darla a entender. Adems, siempre deber estar frente al grupo y hablar apropiadamente. Al final de cada exposicin habr una sesin de preguntas, donde, tanto alumnos como profesores harn las mismas. Todos los equipos receptores estn obligados a expresar sus dudas y/o sugerencias al final de la exposicin.

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No se permitir que los alumnos realicen otras actividades en el momento de la exposicin. Adems no se permitir que se sienten en las ltimas filas si las primeras estn desocupadas.

La evaluacin correr a cargo de todos los profesores. Cada uno dar una calificacin a cada uno de los integrantes de los equipos, las cuales se promediarn para dar la calificacin de la exposicin.

Por ningn motivo habr prrrogas o segundas oportunidades, sin excepcin.

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IV. Prcticas de Laboratorio


Tema 1. Posologa
PRCTICA 1. POSOLOGA.

OBJETIVO Conocer las principales vas de administracin de frmacos ms comnmente utilizadas en animales, as como los procedimientos para los clculos de dosificacin empleados para una adecuada administracin de frmacos y medicamentos en animales de experimentacin.

INTRODUCCIN Existe una relacin entre los efectos farmacolgicos, ya sean teraputicos o txicos, y la cantidad administrada del frmaco, por eso es tan importante calcular las dosis ajustndose a las necesidades de cada individuo teniendo en cuenta los factores que pueden modificar las respuestas como: El peso corporal, Edad, Raza, Gnero, Constitucin gentica, etc.

Tambin deben considerarse otros factores como los Inherentes al frmaco Inherentes a la va de administracin

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En esta sesin se resolvern algunos problemas relacionados con las dosis a administrar en funcin de diversos factores como el peso corporal, concentracin y especie animal, clculos muy usuales en el laboratorio de farmacologa.

CUESTIONARIO 1. Describe brevemente los siguientes conceptos: frmaco, droga, medicamento y xenobitico. 2. Indica la diferencia entre los estudios in vivo, in vitro, e in situ. 3. Indica las ventajas y desventajas de las principales vas de administracin de frmacos en animales. 4. Describe los factores inherentes al frmaco que influyen en la dosificacin 5. Describe los factores inherentes al individuo que influyen en la dosificacin. 6. Indica los principales vehculos utilizados para la administracin de frmacos en animales.

PROBLEMARIO 1. Al realizar la lectura de una muestra en el espectrofotmetro, la lectura de la misma est fuera del margen de la curva estndar, por lo que se tiene que hacer diluciones. Indique como preparara las diluciones 1:2, 1:5, y 1:10 de la muestra considerando que el volumen mnimo que lee el espectrofotmetro es de 5 mL. 2. Para preparar una disolucin de sulfacetamida, se disolvieron 2.38 g de sulfacetamida sdica en 100 mL de agua. Cul es la concentracin en %p/v de sulfacetamida libre? 3. Calcule las diluciones necesarias para obtener 100 mL de una disolucin de acetilcolina con una concentracin de 16 g/mL a partir de 200 mg de acetilcolina en polvo, utilizando agua destilada como disolvente. 4. Tiene 3 ratones de 24.3 g, 19.8 g y 21.7 g de peso, y desea administrarles xilacina para anestesiarlos. El efecto anestsico de la xilacina en ratones es a 0.2 mg/Kg de peso. Indique el volumen y las dosis que se administrarn a cada ratn si se tiene una disolucin stock de 20 g/mL y una jeringa de 1 ml con divisiones de 0.02 mL.

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5. Calcule la dosis y el volumen que debe administrarse de meperidina como preanestsico a un paciente de 72 Kg de peso, tomando en cuenta que: a) La dosis usual es de 1 mg/Kg de peso b) La presentacin farmacutica disponible es en ampolletas de 2 mL de una disolucin al 2.5% para administracin intramuscular. 6. Para realizar un perfil farmacocintico en conejo, se le administr 3.1 mL de una disolucin de cido acetilsaliclico con una concentracin de 2%. Cul fue la dosis administrada? 7. Calcule la dosis y el volumen necesario de pentobarbital sdico para un ratn de 28 g. La dosis anestsica es de 50 mg/Kg y la presentacin farmacutica es de 63 mg/mL. a. Es posible medir el volumen calculado o es necesario hacer alguna dilucin? b. Si hace la dilucin, tome en cuenta que el mximo volumen a administrar es de 10 mL/Kg. 8. Tiene tres disoluciones de paracetamol cuyas concentraciones son: a. 150 g/mL b. 0.0001 M c. 0.03% Sin embargo, para realizar un experimento necesita que todas las disoluciones estn en las mismas unidades de concentracin. Cul es la concentracin en mg/mL de cada disolucin? 9. Indique el procedimiento para preparar 100 mL de una disolucin de acetilcolina a una concentracin de 200 g/mL a partir de: a. Cloruro de acetilcolina al 98% de pureza b. Una disolucin de acetilcolina a 300 g/mL y agua c. Dos disoluciones de acetilcolina a 250 g/mL y 50 g/mL 10. Se tienen dos conejos de 5.4 y 5.7 Kg de peso. A dichos conejos se les debe administrar las mismas dosis de sulfadiazina que es de 400 mg. Si se tiene una disolucin de sulfadiazina de 0.125 g/mL, qu volumen se debe administrar a cada conejo?

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Tema 2. Manejo de animales


PRCTICA 2. MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO.
OBJETIVO Conocer y aplicar las normas ticas para el manejo adecuado de los animales de laboratorio; as como, los mtodos de sujecin, inmovilizacin y transporte de la rata y ratn, que han dado mejores resultados en el laboratorio.

INTRODUCCIN La investigacin cientfica requiere el uso de animales para experimentacin. Asimismo el uso de sistemas experimentales in vivo en investigacin permite tener un modelo integrador de procesos fisiolgicos y funcionales, que lleva una aplicacin ms segura en tratamientos mdicos para el ser humano. Es evidente que slo se justifica el uso de animales para experimentacin, en investigaciones cientficas perfectamente encaminadas a ampliar el saber en beneficio de la sociedad. Por ello es imprescindible que, por un lado, se optimice el uso de animales mediante un manejo correcto de los mismos y, por otro lado, que los animales utilizados sean los adecuados y que sean confiables en las pruebas a las que son sometidos por los investigadores. Saber manejar a los animales es un aspecto que debe conocer perfectamente el estudiante de ciencias de la salud, ya que durante sus estudios y posteriormente en la prctica profesional, requiere de mtodos seguros, tiles, prcticos y rpidos para la sujecin e inmovilizacin de las diferentes especies animales. Quien de una manera u otra maneja animales, ante todo ha de perder el temor que por ellos sienta, pero no debe volverse confiado y comprometer su seguridad.

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Tampoco debemos olvidar, hechos como el celo que muestran algunos machos hacia su derecho de posesin (territorio, hembras), el de las madres por sus cras y viceversa. Se deben tomar en cuenta muchos factores como son : los hbitos naturales de la especie, sus reacciones ante determinados actos, la raza y la individualidad, estudiando dentro de ellas la edad, el sexo, el estado de salud o enfermedad y el momento fisiolgico (estro, gravidez, estado postoperatorio). En la actualidad los tranquilizantes y anestsicos, facilitan el manejo de animales, suministrados por va parenteral o inhalados. Por ltimo, y esto es muy importante, es necesario que la persona que desarrolla esta actividad, tenga control completo de s mismo como del animal. La tensin o el nerviosismo pueden influir y causar dificultades. Recordemos, tambin, que una nueva tendencia de la gentica es la de crear animales de fcil manejo y en la actualidad ya se producen nuevas lneas de animales dciles y apacibles, por lo tanto, fciles de manejar. En la presente prctica se han recopilado los mtodos ms sencillos para tales fines y se hace mencin del material necesario y fcil adquisicin. Se mencionan algunos procedimientos clnicos para la administracin de sustancias, donde el manejo se ve facilitado por el empleo de aparatos y dispositivos, as como de tranquilizantes, sedantes y anestsicos. En los cursos de laboratorio de Farmacologa, se llevan a cabo tres tipos de experimentos con los animales: in vivo, in vitro e in situ. Cuando se utiliza al animal ntegro y vivo; cuando se utiliza una muestra de rgano o tejido en condiciones ambientales adecuadas, y; cuando se utiliza algn rgano o tejido en el sitio original, respectivamente. Los animales de uso comn en los experimentos farmacolgicos son el conejo, la rata, el ratn y la rana de laboratorio. Esto es, por su costo, tamao, reproduccin y fcil manejo. Para otras investigaciones bsicas del rea biomdica tambin se utilizan especies como el perro, el gato, primates, etc.

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Por lo anterior, es importante tener conocimiento de las tcnicas de manejo de los animales y todos los procedimientos durante las prcticas del laboratorio de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos que han tenido xito durante los ltimos semestres.

METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Una rata hembra Wistar Un ratn hembra CD-1

Cristalera y equipo Jeringas de 1, 5 y 10 mL Vaso de precipitados Tabla y estuche de diseccin Franela Hilo de camo

Reactivos Azul de metileno al 5%

DESARROLLO EXPERIMENTAL

I. Tcnicas de marcaje para identificacin individual de los animales. Frecuentemente se utilizan ms de un animal en las diferentes investigaciones, por lo que resulta necesario identificar de manera individual a los animales de un grupo. Las tcnicas ms utilizadas son las siguientes: Marcado con cido pcrico al 10%, aplicado en la parte dorsal de los animales con un pincel, esta sigue una clave.
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Marcado de las orejas. Consiste en hacer perforaciones o muescas con unas pinzas especiales, tanto para la rata como el ratn. Esta tcnica se recomienda cuando los experimentos son de larga duracin y se utilizan grandes cantidades de animales. La clave que se sigue en el laboratorio de Farmacologa se muestra en la figura 1.

Marcado con plumn marcador. El marcado se realiza en la cola del animal, siguiendo la clave de la figura 2. Esta tcnica se recomienda cuando se utilizan pocos animales y en experimentos muy cortos en duracin.

II. Tcnicas de sujecin Sujetar: es impedir la accin o movimiento, sea por medio de la accin fsica o moral o por la interposicin de un obstculo. Someter al dominio de alguno. Inmovilizar: Dejar sin movimiento. Se debe elegir entre una sujecin general, la sujecin de un rea particular o algo que evite el movimiento para distraer la atencin del animal. Cada especie fue dotada por la naturaleza de medios de defensa especiales (dientes, uas, etc.); en la prctica deben conocerse estas armas para cuidarse de ellas. Todo mtodo de sujecin e inmovilizacin debe permitir la libre respiracin, por lo que se evitar entre otras cosas, la obstruccin de la nariz, opresin del cuello u otra regin evitando la circulacin normal de aire o sangre. Muchos animales resultan heridos por el abuso de las tcnicas de sujecin o por aplicacin de las mismas indebidamente.

Conejo En el manejo de esta especie frecuentemente se incurre en prcticas no adecuadas que ocasionan trastornos a los animales y en consecuencia a la exploracin.

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La mayora de las personas tienden a levantar a los conejos por las orejas (Figura 3) por ser una de las partes ms sobresalientes en estos animales; esto nunca debe hacerse, pues no slo se maltratan sino pueden lesionarse las orejas y el odo. Hay dos formas correctas de manejar a los conejos: Con la mano izquierda se suspenden de la piel floja del dorso, arriba de las espaldillas y con la mano derecha se les sujetan las patas (Figura 4). Tambin se pueden manejar (sobre todo cuando se sacan de sus jaulas) en la siguiente forma: con la mano derecha se sujeta de la piel floja de la regin dorsal comprendida entre los miembros anteriores y el cuello, despus con el brazo y la mano izquierda se inmoviliza el animal (Figura 5).

Rata Junto con el ratn, estos animales ofrecen mayor dificultad en su manejo porque al sentirse capturados con frecuencia muerden. Para capturar a la rata dentro de la jaula, la manera ms prctica es tomarla con una mano de la cola y con la otra sujetar la piel del cuello, con esto no puede atacar y queda inmovilizada (Figura 6). Tambin puede sujetarse con una sola mano, rodeando el cuello con el pulgar y el ndice, cuidando de no ejercer mucha presin y provocar asfixia. Abrazar con la palma de la mano, levantar y voltear la parte ventral hacia el manejador (Figura 7). Esta tcnica de sujecin nos servir para la administracin intraperitoneal e intramuscular. Se requiere mucha prctica para perfeccionar la tcnica.

Ratn Los ratones facilitan an ms su manejo, bastando con tomarlos de la cola con los dedos medio e ndice (como se toma un cigarro) y rodearlo con el resto de la mano (Figura 8).

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Para inyecciones o inoculaciones deber tomarse de la piel del dorso con el pulgar y el ndice, sostenindolo de la cola con el meique y el anular apoyados en la palma de la mano (Figura 9).

Rana Para el manejo de la rana es necesario humedecer las manos antes de tomarla. Luego, se debe tomar firmemente entre la mano dejando expuesta la cabeza, con el fin de desmedular y descerebrar a la rana. Doblar ligeramente la cabeza del animal, se introduce un estilete en el orificio que se encuentra en la lnea media de la cabeza a nivel de las membranas timpnicas. Con un movimiento circular hacia la derecha se destruye el cerebro (Figura 10). Luego se cambia la direccin del estilete a la izquierda, se introduce hasta en el canal medular, se rota hasta observar la relajacin de las extremidades inferiores o traseras (Figura 11).

III. Tcnicas para la administracin de frmacos o medicamentos

Intravenosa Durante la prctica de Farmacocintica, se requiere administrar algunas sustancias como tomar muestras de sangre en un conejo. Este procedimiento se lleva acabo en las venas marginales que se encuentran en la oreja del conejo (Figura 12). Es muy importante seguir las indicaciones del maestro de mesa.

Intramuscular La administracin intramuscular se aplica en la parte muscular de las patas traseras, en la regin gltea, ya sea del conejo, la rata o el ratn (Figura 13).

Intraperitoneal Despus de haber sujetado a la rata y el ratn, por la tcnica anteriormente descrita, se divide, de manera imaginaria, la regin ventral en cuatro cuadrantes. Se puede elegir cualquiera de los

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cuadrantes, se coloca la jeringa en un ngulo de 45, para luego administrar el frmaco (Figura 14). Antes de inyectar se debe verificar que se encuentra en el peritoneo, al jalar el embolo de la jeringa debe entrar aire, si esto no ocurre debemos tratar nuevamente.

Subcutnea Generalmente se lleva a cabo en el conejo, se toma la piel floja de la espalda, se introduce la jeringa y se administra nuestra sustancia problema (Figura 15).

Intracardiaca En la prctica de Farmacocintica (Volumen de distribucin), se debe obtener una muestra de sangre por puncin intracardiaca. Con la ayuda del medio se percibe el pulso cardiaco a un centmetro, aproximadamente, de la ltima costilla de la rata. Se introduce una jeringa de insulina a 90, y se toma la muestra de sangre.

Oral Por otro lado, para la administracin oral es necesario sujetar, con la ayuda de dos pedazos de hilo los dientes incisivos y caninos, para mantener el hocico del animal abierto. Luego, se introduce una cnula, que esta conectada a una jeringa, por la que se introduce la sustancia prueba (Figura 16). La anestesia poco profunda que se logra colocando a los animales dentro de un frasco donde previamente se coloca un algodn impregnado en cloroformo, facilita mucho cualquier maniobra dolorosa como las inoculaciones por va oral o la obtencin de sangre por puncin intracardiaca. Todas las tcnicas descritas, necesitan para su aplicacin, suficiente prctica por parte del alumno, la cual se podr adquirir en esta sesin.

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IV. Tcnicas de eutanasia Eutanasia se define como la opcin de favorecer la muerte deliberadamente de algn individuo con una enfermedad incurable o una lesin irreparable. Puede ser de manera activa, con la administracin de una sustancia letal, o pasiva, dejando que el individuo muera sin ningn tratamiento. Es importante saber que despus de haber utilizado los animales, en experimentos in vivo, se deben sacrificar adecuadamente. Los mtodos comnmente aplicados son la sobredosis de algn anestsico por va intravenosa o intraperitoneal, inhalacin de ter, cloroformo, bixido de carbono, nitrgeno, etc. Cundo se deben eliminar a los animales? Despus de utilizarlos ms de una ocasin, por enfermedad o defectos genticos.

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TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS De acuerdo con los resultados discuta sobre: Las tcnicas de manipulacin de animales. Las diferentes vas de administracin Las tcnicas de eutanasia.

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CUESTIONARIO 1. Cules son las principales formas de sacrificar a los animales y cundo se llevan a cabo? 2. Qu tipo de investigaciones se realizan con las diferentes especies animales utilizadas en el laboratorio? 3. Cules son las caractersticas ideales que debe tener un animal para ser incluido en un protocolo de investigacin? 4. Qu significa eutanasia? 5. A qu se le denomina xenobitico? 6. A qu se refiere cuando hablamos de experimentos in vivo, in vitro e in situ? 7. Qu caractersticas individuales debemos conocer de las diferentes especies animales?

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Tema 3. Farmacocintica: Absorcin


PRCTICA 3. DETERMINACIN DEL PERFIL FARMACOCINTICO DE LA SULFACETAMIDA SDICA EN CONEJO.

OBJETIVO Realizar el estudio farmacocintico de la sulfacetamida sdica en conejo ensayando diferentes vas de administracin, para determinar cul de ellas es mejor.

INTRODUCCIN Cuando se administra un frmaco a un organismo varios procesos como la absorcin, distribucin, biotransformacin y eliminacin influirn en la biodisponibilidad del frmaco. Estos procesos tienen lugar durante un perodo determinado y por esto pueden medirse y expresarse como velocidades. La ciencia que mide las velocidades de absorcin, distribucin y eliminacin de un frmaco se llama Farmacocintica. La administracin de un frmaco tiene por objeto la obtencin de un efecto que est estrechamente relacionado con la concentracin plasmtica por lo tanto es posible predecir que los cambios en la concentracin plasmtica producirn cambios en el efecto del frmaco. El conocimiento de los parmetros cinticos que gobiernan las concentraciones plasmticas es de gran ayuda para elegir la dosis, el intervalo y la va de administracin apropiada para obtener el efecto deseado. Para la determinacin de los parmetros farmacocinticos existen modelos matemticos los cuales consideran al organismo como compartimientos y as tenemos el modelo abierto de un compartimiento (MAUC) y el modelo abierto de dos compartimientos bicompartimental (MABC). Para el modelo abierto de un compartimiento se hacen las siguientes consideraciones:

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a) El frmaco se absorbe siguiendo una cintica de primer orden. b) La distribucin del frmaco es instantnea en un compartimiento central que es la sangre. c) La concentracin plasmtica es representativa de los tejidos por establecerse un equilibrio. d) La eliminacin del frmaco ocurre a partir del compartimiento central con una cintica de primer orden. Para el modelo abierto de dos compartimientos: a) El frmaco se absorbe con una cintica de primer orden. b) El frmaco se distribuye del compartimiento central a un segundo compartimiento llamado perifrico. c) La eliminacin del frmaco es a travs del compartimiento central con una cintica de primer orden.

METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Un conejo de 2.0 a 2.5 Kg con 12 horas de ayuno

Cristalera y equipo 10 tubos de ensaye de 13x100 mm 10 tubos de ensaye de 15x150 mm 1 gradilla 2 jeringas de 1 mL 2 jeringas de 3 mL 1 rastrillo 1 balanza de dos platillos 1 balanza con canastilla 1 centrfuga 1 colormetro 1 cepo para conejo Papel Parafilm
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Algodn

Reactivos. Sulfacetamida sdica (disolucin al 10%) Heparina (disolucin 5000 UI/mL.) N-naftiletilendiamina al 0.05% cido tricloroactico al 25% Nitrito de sodio al 0.5% Sulfamato de amonio al 0.5% Xilol

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Preparacin de la curva patrn de sulfacetamida sdica. Pesar 0.2 g. de sulfacetamida sdica, disolver con agua destilada en un matraz volumtrico de 100 mL y aforar. De esta disolucin pasar a matraces volumtricos de 100 mL 0.1, 0.2. 0.4, 0.8, 1.0, y 2.0 mL y llevar al aforo con agua destilada siendo la concentracin final de 2.0, 4.0, 8.0, 16.0, 20.0 y 40.0 g/mL. Mida 2.0 mL de cada una de las disoluciones y siga la tcnica de Bratton-Marshall para determinar las absorbancias. Con las absorbancias construya una grfica colocando las concentraciones en las abscisas y las absorbancias en el eje de las ordenadas.

Preparacin del material biolgico. Pese al conejo y proceda a rasurar ambas orejas. No utilizar rastrillo con lubricante o jabn.

Heparinizacin. Administre una dosis de 1500 U/Kg de heparina por va intravenosa. Deje transcurrir 5 minutos y tome una muestra de 0.2 mL de sangre (muestra blanco t=0).
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Administracin del frmaco. Calcule la dosis y el volumen a administrar de la sulfacetamida sdica de acuerdo al peso del conejo (dosis: 75 mg/Kg). Para la va intravenosa utilice la vena marginal de la oreja (sitio diferente a la administracin de la heparina). Tome el tiempo. Para la va intramuscular utilice el muslo de la pata trasera.

Toma de muestras. Se tomarn 0.2 mL de sangre de la vena marginal de la oreja donde se administr la heparina a los siguientes tiempos: 5, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos. Procese las muestras siguiendo la tcnica de Bratton-Marshall.

Determinacin colorimtrica de sulfonamidas en sangre total (BrattonMarshall.) Medir 0.2 mL de sangre y aadir 1.8 mL de agua destilada, deje reposar 5 minutos, agregar 0.6 ML. de cido tricloroactico al 25 % agitar y reposar 5 minutos. Centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos. Observe que el sobrenadante est transparente, si presenta turbidez centrifugue 5 minutos ms. Medir 2 mL de sobrenadante y adicione dos gotas de nitrito de sodio al 0.5% mezclar y dejar en reposo 2 minutos. Aadir 1.0 mL de sulfamato de amonio al 0.5%, agitar y reposar 2 minutos. Para el desarrollo de color al momento que vaya a leer en el colormetro adicionar 2 mL de N-naftiletilendiamina al 0.05% y mezclar. Se obtiene una coloracin rosa. Leer a 540 nm la absorbancia. Interpole las absorbancias en la curva patrn para determinar la concentracin de la sulfacetamida en cada una de las muestras y recopile los resultados de todos los equipos de trabajo llenando cada uno de los cuadros de resultados.

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TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados construya las graficas de concentracin contra tiempo y aplique las ecuaciones de acuerdo al modelo matemtico (ver formulario anexo) y calcule para cada va de administracin: rea bajo la curva (ABC) Concentracin mxima (Cmax) Tiempo de concentracin mxima (tmax) Constante de absorcin (Ka) Constante de eliminacin (Ke) Volumen aparente de distribucin (Vd) Tiempo de vida media biolgica (t1/2) Biodisponibilidad absoluta (Fabs) Biodisponibilidad relativa (Frel)

Con los parmetros anteriores analice y determine: La va de administracin que presenta el mayor tiempo de actividad. El rgimen de dosificacin por cada va de administracin. La mejor va extravascular de administracin.

CUESTIONARIO 1. Describe brevemente los conceptos de farmacocintica y farmacodinamia. 2. Describe las fases que comprende el proceso LADBE. 3. Indica el concepto de Compartimento y su utilidad en la descripcin de los parmetros farmacocinticos. 4. Indica y localiza los principales parmetros farmacocinticos en una curva Cp = (t). 5. Describe brevemente los conceptos de Concentracin Mnima Efectiva (CME) y Concentracin Mxima Tolerada (CMT). 6. Indica las propiedades fsicas, qumicas, farmacolgicas y toxicolgicas de la sulfacetamida sdica. 7. Indica el valor de Concentracin mnima efectiva de la sulfacetamida sdica.
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8. Indica el procedimiento para elaborar un Rgimen de dosificacin. 9. Describe el fundamento qumico de la determinacin colorimtrica de sulfonamidas. 10. Indica el procedimiento para el clculo de la Biodisponibilidad relativa y Biodisponibilidad absoluta y utilidad de dichos parmetros.

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Tema 4. Farmacocintica: Distribucin


PRCTICA 4. DISTRIBUCIN DE LA SULFACETAMIDA SDICA EN RATA.

OBJETIVO Calcular experimentalmente la concentracin de sulfacetamida sdica en diferentes rganos y lquidos corporales de la rata, despus de haberla administrado por va intraperitoneal para determinar el perfil de distribucin.

INTRODUCCIN La Farmacologa puede ser definida como la ciencia de los frmacos. Incluye el estudio de sus fuentes (materia mdica); sus acciones en los organismos animales vivos (Farmacodinamia), la manera en la cual son absorbidos, trasportados a travs del cuerpo, y excretados (Farmacocintica); su uso en medicina (Teraputica); y sus efectos adversos (Toxicologa). Uno de los objetivos de la farmacocintica es describir en trminos relativamente simples el fenmeno complejo que involucra la disposicin del frmaco y la respuesta. Lo ltimo incluye la cintica de la absorcin de la droga, distribucin y eliminacin, as como la cintica de la respuesta farmacolgica. Estn implicados varios procesos fsico-qumicos, bioqumicos y fisiolgicos en la disposicin del frmaco y pueden ser descritos por algunas relaciones matemticas. La aplicacin de los principios bsicos de la farmacocintica en la teraputica es estudiada por la Farmacocintica Clnica. Las tres etapas que se muestran en la Figura 16, biodisponibilidad, distribucin y depuracin son las principales variables farmacocinticas. Varios procesos fisiolgicos (maduracin de la funcin de rganos en infantes) y patolgicos (dao cardaco y renal) sugieren el ajuste de dosis en pacientes de manera individual. Basado en la modificacin de parmetros farmacocinticos especficos. Las dos variables bsicas en la farmacocintica son

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la depuracin, parmetro para medir la forma de eliminar la droga del organismo; y el volumen de distribucin, parmetro para calcular el frmaco disponible en el organismo. El proceso de extrapolacin requiere del avance de muchas disciplinas diferentes que podran incluir la ingeniera, fsica, biologa, qumica, patologa, farmacologa, fisiologa, salud pblica, inmunologa, epidemiologa, bioestadstica y salud ocupacional.

Dosis del frmaco

biodisponibilidad
Frmaco en tejidos (distribucin) Concentracin del frmaco en circulacin sistmica Frmaco biotrransformado o excretado

farmacocintica

distribucin

depuracin
Concentracin del frmaco en el sitio de accin

Efecto farmacolgico

Respuesta clnica

farmacodinamia

Toxicidad

Eficacia

Utilidad

Figura 16. Representacin esquemtica del proceso farmacocintico y farmacodinmico que vincula la administracin del frmaco y sus efectos.

Distribucin. Una vez absorbido, el frmaco puede ser distribuido a travs de varios compartimientos en el cuerpo. La distribucin de un frmaco depende de sus caractersticas fsico-qumicas y de las propiedades de los compartimentos corporales. Adems de su afinidad por los tejidos, su hidrosolubilidad, liposolubilidad, unin a sustancias extracelulares y captacin intracelular.

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La albmina srica posee muchos sitios de unin no-especficos para los xenobiticos, y por lo tanto llega ser un sistema de transporte para muchas sustancias. La albmina es la principal protena del plasma (50% del total). La mayor parte de los procedimientos rutinarios para la determinacin de las concentraciones del frmaco comienzan con la desproteinizacin. Invariablemente este paso es una precipitacin (ejemplo, con el cido tricloroactico), seguido por la separacin de las protenas por filtracin o centrifugacin. En tales procedimientos de datos analticos representarn las concentraciones totales de frmaco debido a que el frmaco unido a la protena se libera a la solucin sobrenadante o filtrado. El balance entre los estados disociados (polar) y no disociados (no polar) afecta la distribucin de un qumico, porque el pH cambia del fluido extracelular (pH 7) al del plasma (pH 7.4). El coeficiente de particin de una sustancia tambin influye en su distribucin, determinando, por ejemplo, el grado de secuestro en la grasa. Las sustancias altamente liposolubles sern secuestradas en el tejido adiposo por largo tiempo. La cantidad vara de acuerdo a la edad y a la localizacin. La velocidad de entrada de un frmaco a los diferentes tejidos del cuerpo depende obviamente de las velocidades relativas del flujo sanguneo a travs de los lechos capilares respectivos y de la permeabilidad de los capilares a las molculas del frmaco en particular. El equilibrio de distribucin del frmaco en la sangre y los tejidos depende del riego sanguneo que llega al rgano. Este equilibrio se ve influido por el Volumen aparente de distribucin de cada frmaco, que se considera como el volumen lquido en cual parece distribuirse un frmaco (Vd). El rango de distribucin de una sustancia esta en funcin del flujo sanguneo a travs de los tejidos (irrigacin de tejidos). Primero se acumular en los rganos ms irrigados, y al ltimo, en los menos irrigados. Entonces se establece un equilibrio, luego se distribuir en base a su solubilidad. En seguida de la administracin intravenosa de una sustancia con un alto coeficiente de particin, el equilibrio se alcanza instantneamente en el rin y el hgado por su alta vascularidad, casi inmediatamente en el cerebro, a los 30 minutos en el msculo, y a las 3 horas en el tejido graso.

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Los frmacos actan sobre la superficie de la membrana externa, para luego pasar a travs de ella. Se debe tomar en cuenta las propiedades bioelctricas, las funciones bioqumicas, los receptores superficiales y el mecanismo para el paso de los frmacos al interior de las clulas. Para las clulas secretoras y las neuronas es importante no olvidar la salida de sustancias. El frmaco puede entrar a los tejidos del sistema nervioso central por dos vas distintas: la circulacin capilar y el lquido cefalorraqudeo (LCR). Las membranas que rodean al cerebro y las separan de los vasos sanguneos constituyen la barrera hematoenceflica, solo dejar pasar agentes liposolubles, tales como los anestsicos. El intercambio de alimentos, oxgeno y bixido de carbono, as como de los frmacos, debe ocurrir principalmente a travs de la placenta, de la sangre arterial materna por medio de los espacios intervellosos a los capilares fetales en las vellosidades y por ltimo a la sangre venosa principal. Volumen de distribucin. El volumen de distribucin puede modificarse en funcin de factores inherentes al individuo y al frmaco. Factores del individuo como sexo, edad, enfermedad, grasa corporal, influyen en el volumen de los diversos compartimentos. Factores inherentes al frmaco como el pK, pH, grado de unin a protenas del plasma, coeficiente de reparto lpido/agua y grado de unin de la molcula, activan a otros tejidos del organismo. Volumen aparente de distribucin. El volumen aparente de distribucin (Vd) de un frmaco es el volumen lquido en que aparentemente se disuelve. La determinacin del Vd es un principio simple. Una cantidad conocida de frmacos se inyecta por va intravascular y despus de suficiente tiempo para su distribucin se toma una muestra de sangre en la que se determina la concentracin de frmaco en el agua plasmtica. El volumen de distribucin (Vd) relaciona la cantidad de frmaco administrado y la cantidad de droga (C) en sangre o plasma:

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cantidad total del frmaco administrado (mg)

Vd =
concentracin de frmaco en el plasma (mg/L)

Una gran cantidad de sustancias se distribuye aproximadamente en el volumen de lquido extravascular. Un problema prctico al calcular el Vd es el hecho de que a menudo los frmacos no tiene un compartimiento ideal. Se biotransforman, se excretan o se secuestran, de tal manera que nunca se obtiene la meseta real de distribucin. Primero, la concentracin plasmtica disminuye rpidamente, despus con ms lentitud, para que despus contine disminuyendo. Lo que se necesita hacer es tratar de determinar cul sera la concentracin plasmtica si no estuviera presente el proceso responsable de la disminucin continua. Esta determinacin se obtiene por extrapolacin de la que finalmente sera la velocidad de declinacin, retrocediendo hasta el momento de la inyeccin. Naturalmente, esto se tiene que hacer en una grfica semilogartmica, suponiendo que las diferentes fases de desaparicin del frmaco del plasma son de primer orden. Las molculas del frmaco son distribuidas a travs del cuerpo por la circulacin sangunea. El volumen de sangre total (cerca de 6 litros) es bombeado a travs del corazn cada minuto; despus de unos minutos la droga entra al sistema circulatorio y es diluido en el total de la sangre. El frmaco se restringe al espacio vascular y puede penetrar libremente a los eritrocitos que tiene un volumen de distribucin de 6 litros. Si el frmaco no logra atravesar los vasos sanguneos el volumen se disminuye a 3 litros (volumen plasmtico). El volumen total de los compartimentos lquidos de un individuo de 70 Kg, es de aproximadamente 40 L, y constituye el 60% del peso del sujeto. El volumen relativo de cada compartimento es como sigue: Lquido plasmtico Lquido intersticial Lquido intracelular 5 litros 12 litros 23 litros

En la presente sesin se determinar la distribucin de sulfacetamida sdica en sangre, orina, hgado, rin, corazn, pulmn, bazo, cerebro, intestino y msculo; midiendo su concentracin despus de su administracin por va intraperitoneal, a los 5, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos.

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METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: 6 ratas hembra Wistar

Cristalera y equipo: Espectrofotmetro Centrfuga Balanza Bscula 1 jeringa de 3 mL 1 jeringa de 1 mL 10 tubos de ensaye chicos 10 tubos de ensaye grandes 10 pipetas volumtricas de 1mL 3 pipetas volumtricas de 5 mL 2 vasos de precipitados de 20 mL Morteros (los disponibles) Algodn

Reactivos: Hidrxido de sodio al 0.1 N cido tricloroactico al 25% Nitrito de sodio al 0.5 % Sulfamato de amonio al 0.5 % N-naftiletilendiamina al 0.05% Sulfacetamida sdica al 10% ter etlico

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DESARROLLO EXPERIMENTAL 1. Cada equipo pesar a su rata para administrar sulfacetamida sdica, a una dosis de 0.1 g/Kg de peso. Se recomienda que inicien los equipos a los cuales les toc los ltimos tiempos. 2. Colocar a la rata en una jaula metablica para colectar una muestra de orina. S la rata no orin antes del siguiente paso, se debe estimular al animal a que lo haga. 3. Anestesiar a la rata con ter y extraer una muestra de sangre por puncin cardiaca. 4. Cada equipo sacrificar su rata a los tiempos de: 5, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos respectivamente. 5. Una vez sacrificada la rata, abrir la cavidad abdominal para obtener muestras de 0.5 g de los siguientes rganos: hgado, rin, bazo y duodeno; de la cavidad torcica, corazn y pulmn; de la pierna, msculo esqueltico; y de la cavidad craneana, cerebro. 6. Las muestras se pesan sobre un portaobjetos y posteriormente son trituradas en un mortero. 7. Inmediatamente se colocan en tubos de ensaye en un volumen de 5 mL de hidrxido de sodio. 8. Dejar reposar, para despus centrifugar. 9. Tomar 2 mL del sobrenadante. 10. Seguir la tcnica modificada de Bratton-Marshall descrita en la prctica anterior, para llevar a cabo la reaccin colorimtrica. 11. Leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 540 nm. 12. Interpolar el valor de la lectura en una curva patrn. 13. Calcular la concentracin de la sulfacetamida sdica considerando las diluciones realizadas.

TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados obtenidos: Calcula las concentraciones a cada tiempo de sulfacetamida sdica por cada rgano o tejido. Realiza una grfica concentracin-tiempo por cada rgano o tejido. Calcula el ABC y el Kp para cada rgano o tejido.

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Con las grficas realizadas y los valores calculados, analice y determine: Los rganos en los cuales se presenta actividad de la sulfacetamida sdica. El o los rganos blanco de la sulfacetamida sdica. Compare con la informacin de la literatura sobre las sulfonamidas.

CUESTIONARIO 1. Defina brevemente Distribucin de frmacos. 2. Describa brevemente los mecanismos de transporte que se llevan a cabo en las membranas celulares. 3. Describa brevemente las propiedades y constitucin de las principales barreras del organismo (hematoenceflica y placentaria). 4. Indique las propiedades fisicoqumicas los frmacos que influyen para atravesar cada una de las barreras. 5. Indique las protenas principales que se unen a los frmacos y la influencia de la estructura de stos ltimos en la unin. 6. Describa brevemente la relacin entre la estructura qumica de un frmaco y su distribucin en el organismo. 7. Defina brevemente el concepto de volumen aparente de distribucin. 8. Describa los factores que afectan el valor de volumen aparente de distribucin. 9. Describa el perfil de distribucin en el organismo de las sulfonamidas. 10. Indique el procedimiento para el clculo de Kp (constante de reparto) para cada rgano y significado del mismo.

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Tema 5. Farmacocintica: Eliminacin


PRCTICA 5. DETERMINACIN DE LA RUTA DE ELIMINACIN PRINCIPAL DE LA SULFACETAMIDA SDICA.

OBJETIVO. Determinar la ruta principal de eliminacin de la sulfacetamida sdica en rata por medio de la medicin de las concentraciones en orina, para determinar la influencia de esta en los efectos teraputicos y txicos.

INTRODUCCIN El ltimo paso para la determinacin de las propiedades farmacocinticas de los frmacos corresponde a la determinacin de las rutas de eliminacin y sus posibles consecuencias tanto en los efectos teraputicos como en los txicos. Existen dos mecanismos de eliminacin: Excrecin Biotransformacin

Todas las rutas de eliminacin siguen forzosamente alguno de estos dos mecanismos o incluso combinacin de stas.

METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Una rata hembra Wistar

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Cristalera y equipo 1 jaula metablica 1 caja Petri 10 Tubos de ensayo de 10x100 mm 10 Tubos de ensayo de 13x150 Espectrofotmetro Gradilla Pipetas de 1, 5 10 mL Centrifuga Balanza de dos platos

Reactivos Sulfacetamida sdica al 10% Furosemida inyectable N-naftiletilendiamina al 0.05% cido tricloroactico al 25% Nitrito de sodio al 0.5% Sulfamato de amonio al 0.5%

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Preparacin del material biolgico. 1. Hidratar a la rata con 2 mL de agua por va oral. 2. Se toma la muestra de orina a t = 0, colocando a la rata en la jaula metablica (si despus de 10 min no orina, se omite la muestra). 3. Administrar 0.1 g/Kg de sulfacetamida sdica por va intraperitoneal conjuntamente con 0.5 mL de furosemida. 4. Se coloca nuevamente la rata en la jaula metablica y se toma la orina en intervalos de tiempo de: 0-10 min 10-20 min
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20-30 min 30-60 min 60-90 min 90-120 min 5. Se debe medir el volumen total de orina en cada intervalo y tomar una muestra de 0.2 mL para la determinacin colorimtrica. 6. Se determinan las concentraciones de la muestra por medio de la determinacin colorimtrica de Bratton-Marshall descrita en las prcticas anteriores.

TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados construya las graficas de cantidad acumulada contra tiempo promedio y aplique el mtodo Sigma minus para determinar los siguientes parmetros: Constante de eliminacin total (Ke) Constante de eliminacin renal (Kr) Constante de eliminacin no renal (Knr) Depuracin total (ClT) Depuracin renal (ClR) Depuracin heptica (ClH)

Con los parmetros anteriores analice y determine: La va principal de eliminacin de la sulfacetamida sdica. Los metabolitos principales de la sulfacetamida sdica y su relacin con los resultados obtenidos. Los resultados obtenidos en comparacin con los informados para otras sulfonamidas. Los resultados obtenidos en las tres ltimas prcticas y su relacin con las presentaciones comerciales existentes de la sulfacetamida sdica.

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CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Indique la diferencia entre Eliminacin, Excrecin y Biotransformacin. Describa las principales vas de excrecin del organismo. Describa el concepto de Xenobitico. Describa brevemente la diferencia entre metabolismo y biotransformacin. Describa brevemente el concepto de Depuracin. Indique el procedimiento para calcular ClR, ClH, ClT, ke renal, ke heptica y ke total. Describa el significado biolgico de cada uno de los parmetros anteriores. Describa las fases de la biotransformacin de xenobiticos y en qu consisten cada una de ellas. Indique las principales rutas de eliminacin de las sulfonamidas. 10. Indique los metabolitos principales de la biotransformacin de las sulfonamidas.

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Tema 6. Relacin Dosis Respuesta Cuantal


PRCTICA 6. DETERMINACIN DE DOSIS LETAL MEDIA (DL50), DOSIS EFECTIVA MEDIA (DE50), NDICE TERAPUTICO (IT) Y MARGEN ESTNDAR DE SEGURIDAD (MS) DEL PENTOBARBITAL SDICO.

OBJETIVO Determinar experimentalmente los estados clnicos de: sedacin, hipnosis y muerte en el ratn, del pentobarbital sdico para la determinacin de sus DE50, DL50, IT y MS.

INTRODUCCIN A la farmacologa le interesan los efectos de los frmacos sobre los sistemas vivos o sobre los componentes ntimamente relacionados, como clulas, membranas o enzimas. En consecuencia, pueden estudiarse muchos niveles de organizacin o complejidad de los sistemas, que abarcan desde la interaccin molecular de los frmacos hasta su efecto sobre las poblaciones. Como en todas las disciplinas cientficas, la farmacologa tiene su vocabulario y lenguaje propios. Estos trminos comprenden entre otros; farmacodinamia, farmacocintica, farmacoterapia, farmacoepidemiologa, farmacoeconoma, toxicologa, relacin riesgo-beneficio, etc.

La farmacodinamia describe la accin que realiza un frmaco. La farmacocintica describe el estudio de cmo el organismo absorbe, distribuye, biotransforma y excreta los frmacos.

En los estudios farmacodinmicos, que vienen a ser el estudio detallado de cmo actan los frmacos, suelen emplearse mtodos cuantitativos y anlisis matemticos para comparar los efectos de los frmacos y para asegurar una descripcin exacta y completa de ellos. Esta clase de estudios incluyen la medida de los efectos del frmaco a diferentes concentraciones del

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mismo y esta informacin suele presentarse en forma de grfico como Curva DosisRespuesta. Las curvas de dosis-respuesta pueden ser representadas y analizadas de diferentes formas para que los frmacos y sus efectos puedan analizarse y compararse. Existen dos tipos de curva de dosis-respuesta: a) Curva Dosis-Respuesta Gradual. b) Curva Dosis-Respuesta Cuantal.

METODOLOGA Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: 48 ratones hembra CD-1

Cristalera y equipo: Balanza granataria para animales 8 jeringas de 1 mL Marcador de tinta indeleble Solucin salina fisiolgica

Reactivos: Disoluciones de pentobarbital sdico a 1, 2, 4, 8, 16 y 32 mg/mL.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Cada equipo de alumnos, recibir 8 ratones, los cuales se pesarn y se marcarn de acuerdo a la tcnica de marcado conveniente para este experimento. Los datos del peso de cada ratn debern ser registrados para as poder calcular la dosis para cada uno de ellos. 2. Se asignarn las dosis correspondientes de pentobarbital (10, 20, 40, 80, 160 y 320 mg/Kg), por nmeros aleatorios a cada equipo de alumnos.

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3. Se proporcionar a cada equipo una solucin de pentobarbital de acuerdo a la dosis que le haya sido asignada. 4. Se utilizar un ratn como control, y solo se le administrar 0.1 ml de solucin salina fisiolgica. 5. De acuerdo a la dosis asignada a cada equipo de trabajo y al peso de cada ratn se procede a calcular la cantidad de frmaco que deber ser administrada a cada uno de ellos, recuerde siempre anotar todos los datos. 6. Con una jeringa de insulina se administra el frmaco por va intraperitoneal. 8. Una vez administrado el frmaco, se observa el comportamiento de cada uno de los ratones, durante 30 minutos a partir del momento de la aplicacin del pentobarbital. 9. Debe registrar el efecto farmacolgico presentado en cada uno de los animales de experimentacin (sedacin, hipnosis o muerte). 10. Una vez concluidas sus observaciones, proceder a sacrificar los ratones de acuerdo a las normas ticas del manejo de animales.

TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados obtenidos: Construya una curva dosis-respuesta cuantal para el pentobarbital sdico. Calcule la DE50 para los efectos de sedacin e hipnosis del pentobarbital sdico por medio de a) Por interpolacin en la curva dosis-respuesta b) Por unidades Probit Calcule la DL50 para el efecto muerte del pentobarbital sdico por los dos mtodos anteriores. Calcule el ndice Teraputico y el Margen Estndar de Seguridad para cada uno de los efectos medidos. Con la grfica realizada y los valores calculados, analice: La seguridad, efectividad y selectividad de los efectos del pentobarbital sdico. La importancia de las curvas dosis-respuesta cuantales.

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CUESTIONARIO 1. Describa el concepto de Farmacometra. 2. Explique la diferencia entre una Respuesta Gradual y una Respuesta Cuantal. 3. Describa las caractersticas que componen a una curva Dosis-Respuesta. 4. Indique el procedimiento grfico que se utiliza para calcular DL50 y DE50. 5. Indique el procedimiento utilizando unidades Probit que se utiliza para calcular DL50 y DE50. 6. Indique los principales organismos utilizados para el clculo de DL50, DE50, DT50. 7. Describa la utilidad de los estudios dosis-respuesta cuantal en diversas reas o campos. 8. Indique las propiedades farmacolgicas y toxicolgicas del pentobarbital. 9. Indique los mecanismos de accin del pentobarbital. 10. Describa el procedimiento para calcular el ndice Teraputico y el Margen Estndar de Seguridad e indique la utilidad de cada parmetro.

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PRCTICA 7. BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN Artemia salina L.

OBJETIVO Determinar la CE50 y la potencia relativa del cloruro de mercurio (II) y del sulfato de plata por medio del bioensayo en Artemia salina L. para determinar el grado de toxicidad de los mismos en el sistema de prueba.

INTRODUCCIN Un bioensayo de toxicidad es una herramienta fundamental en ecotoxicologa, un campo de la farmacologa, que combina las tcnicas ecolgicas y la qumica para determinar los efectos de que una sustancia puede tener en un organismo. Los bioensayos de toxicidad involucra la exposicin de organismos a una serie de diferentes concentraciones de la sustancia y determinando la respuesta del organismo. La respuesta del organismo usualmente depende de la especie y el tipo de prueba, y puede incluir una reduccin del crecimiento o supervivencia. Las especies o estados de vida que son especialmente sensitivos a las sustancias son ideales para las pruebas de toxicidad. Por ejemplo, los estados de desarrollo temprano de organismos marinos son ms sensitivos que sus equivalentes adultos. Porque el estrs del medio ambiente que afecta el desarrollo larvario puede tener serias consecuencias potenciales para la poblacin del ecosistema, esos estados de vida tempranos son muy tiles para identificar el efecto daino del medio ambiente. Tambin ayuda si el organismo de prueba tiene una amplia distribucin geogrfica, es una parte importante del ecosistema, es econmico, o fcilmente cultivable, y puede ser colectado a lo largo del ao o puede ser mantenido bajo condiciones de laboratorio. Opciones de pruebas de toxicidad. Los bioensayos de toxicidad aguda son pruebas rpidas diseadas para medir los efectos de sustancias en especies durante un corto tiempo. Los bioensayos, los cuales tpicamente tardan de 48 a 96 horas, usualmente miden los efectos de sustancias en la supervivencia de la especie. Los resultados de esas pruebas son reportadas como CE50, la cual es la concentracin
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efectiva de una muestra de prueba que causa un efecto especfico (aqu un 50% de la reduccin de la supervivencia). Sin embargo, los ensayos de toxicidad crnica son usados para sustancias de bajo nivel en situaciones de alto riesgo. Estas son pruebas de largo tiempo relativo a la vida de la especie utilizada y son diseados para medir el desarrollo larvario o crecimiento y el xito o falla de la reproduccin. En esta prctica se realizar un bioensayo de toxicidad aguda utilizando el crustceo Artemia salina, el cual es muy utilizado para pruebas ecotoxicolgicas, o como pruebas de screening para la bsqueda de sustancias citotxicas.

METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Huevecillos liofilizados de Artemia salina L.

Cristalera y equipo: Pecera de vidrio capacidad 2 L Tubos de ensaye Pipetas de vidrio Jeringas de 1 mL Foco sumergible de 5 W Termmetro para pecera Pecera de 500 mL Matraz Erlenmeyer de 1 L Vasos de precipitados de 100, 500 mL 5 Pipetas Pasteur con bulbo Balanza Gradillas Aereador con manguera y filtro

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Reactivos: Disolucin de cloruro de mercurio (II) al 1 % Disolucin de sulfato de plata al 1%. Agua de mar artificial Anticloro (tiosulfato de sodio al 1 %)

PROCEDIMIENTO

a) Incubacin de los huevecillos 1. Se arma el dispositivo de incubacin como se muestra en la figura 17.

Figura 17. Pecera con dispositivos de incubacin (1), aeracin (2) e iluminacin (3).

2.

Se preparan 400 mL de agua de mar artificial, pesando 12.2 g de sal marina y disolver en un volumen final de 400 mL. Adicionar una gota de anticloro y dejar reposar durante 5 minutos.

3. 4.

De la solucin anterior se colocan 300 ml en la pecera de incubacin. Colocar una cantidad de agua corriente en la pecera mayor, aproximadamente a una temperatura de 26-28OC y dejar que alcance el equilibrio con el agua de la pecera de incubacin.

5.

Conectar los dispositivos de aeracin y luz.

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6.

Adicionar los huevecillos en la pecera de incubacin con una esptula limpia y seca (aproximadamente 10 g de huevecillos), colocar en la zona obscura de la pecera de 500 mL. Dejar incubar durante 24 h.

b) Preparacin de las muestras 1. Las muestras se prepararn de acuerdo con la siguiente tabla: Volumen de disolucin de HgCl2 Ag2SO4 (mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 Volumen de agua de mar artificial (mL) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 Concentracin (mg/mL)

Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

c) Realizacin del bioensayo 1. 2. 3. 4. Se colocar el volumen de disolucin de prueba en cada tubo de ensaye previamente marcado. Se colocarn 10 nauplios de Artemia salina L. por cada uno de los tubos de ensaye, evitando agregar demasiada agua de mar artificial. Se colocar el volumen de agua de mar artificial necesario para completar a un volumen total de 2 mL. Se observar el movimiento de los organismos por un periodo de 120 minutos.

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5.

Al trmino del periodo de observacin se contarn los nauplios de Artemia salina L. que sobrevivieron de la siguiente manera: a) b) Los nauplios que presentan movimiento, aunque sea este mnimo, se consideran vivos. Los nauplios que permanecen inmviles, se consideran muertos.

TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados obtenidos: Realizar la curva dosis-respuesta cuantal para las sustancias probadas, utilizando los datos de todos los equipos del grupo. Calcular la CL50 de cada una de las sustancias probadas por medio del anlisis Probit. Calcular la potencia relativa de cada una de las sustancias probadas tomando al cloruro de mercurio (II) como referencia. Con la grfica realizada y los valores calculados, analice: Los datos encontrados con respecto a los datos informados en la literatura. Las ventajas y desventajas de los bioensayos con respecto a los ensayos con organismos superiores.

CUESTIONARIO 1. Indique las diferencias principales entre DL50 y CL50. 2. Indique los organismos utilizados para las pruebas de toxicidad. 3. Describa las caractersticas del crustceo Artemia salina. 4. Indique los campos de aplicacin de las pruebas de toxicidad. 5. Indique las ventajas de utilizar organismos inferiores en las pruebas farmacolgicas. 6. Defina el concepto de pruebas de screening farmacolgico. 7. Indique los organismos utilizados para las pruebas de screening farmacolgico.

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Tema 7. Relacin Dosis Respuesta Gradual


PRCTICA 8. ACCIN DE LA ACETILCOLINA SOBRE EL MSCULO RECTO ANTERIOR DE RANA.

OBJETIVO Comprender la relacin dosis - efecto que existe en la respuesta de tipo gradual de la acetilcolina en el msculo recto anterior de rana para la determinacin del efecto, de la CE50 y la potencia relativa.

INTRODUCCIN Aqullas respuestas de un organismo que dentro de ciertos lmites, aumentan en magnitud a medida que se incrementa la dosis del medicamento se denomina de tipo gradual. Cuando tales respuestas se analizan en un tipo de coordenadas cartesianas, en el cual las ordenadas representan la magnitud de las respuestas y las abscisas las dosis o los logaritmo de las dosis, se obtiene un trazo hiperblico o una curva sigmoidea, que para fines prcticos puede considerarse como una lnea recta. Para que los frmacos acten se requiere de sus mecanismos de accin: los efectos de los frmacos se ven influenciados por la interaccin que presentan con las macromolculas del organismo, ya que el interactuar modifica la funcin del componente y con ello se dan los cambios bioqumicos y fisiolgicos que determinan la respuesta al frmaco. Entre una de las consecuencias ms importantes, consiste en que el medicamento es capaz de modificar la velocidad con que ocurre cualquier funcin corporal, y no genera efectos sino modula funciones. Principales mecanismos de accin de un frmaco: una vez que el frmaco agonista se une a su receptor, algn mecanismo efector se activa para muchos medicamentos, ste efecto se

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localiza dentro de la clula o modifica algn efecto intracelular. Se han definido cuatro mecanismos de accin: 1. Frmacos liposolubles (hormonas esteroides) pueden cruzar las membranas y mezclarse con un receptor intracelular 2. Los frmacos que regulan los conductos inicos (acetilcolina en el receptor nicotnico) pueden accionarse en forma directa la apertura de un conducto inico. 3. Los frmacos que actan enzimticamente (insulina) pueden accionarse en la porcin extracelular de enzimas que se expanden a travs de la membrana y modificar su actividad intracelular. 4. Frmacos que pueden unirse a receptores que se enlazan por medio de protenas acopladoras a efectores intracelulares. Existen varios tipos de receptores de frmacos: Tipo 1: se encuentran en la superficie externa de la membrana plasmtica de las clulas diana e interactan con frmacos que imitan o bloquean las acciones de mediadores autnomos como las catecolaminas, algunas hormonas peptdicas y ciertos factores liberadores. Tipo 2.- Estn situados en el protoplasma de las clulas diana y se combinan con frmacos que imitan o bloquean las acciones de hormonas esteroideas. La combinacin frmaco receptor puede ser modificada y traslocada al ncleo, donde quiz regule la concentracin de un cido ribonuclico (RNA) mensajero especfico y la sntesis de protenas Tipo 3.- Se encuentra en el ncleo celular. La hormona tiroidea representa el mejor ejemplo. Para que un frmaco llegue al sitio de accin, es necesario que atraviese por varias

membranas celulares del organismo, en donde la absorcin, transporte capilar, penetracin en dicha clula y excrecin son los movimientos bsicos de los frmacos a travs de las membranas. Debido a su naturaleza lipdica, la membrana celular es muy permeable a las sustancias liposolubles, por lo que se cree, que la membrana lipdica tiene poros que permiten el pasaje de las molculas insolubles en lpidos. Adems del movimiento pasivo a travs de las membranas,

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tambin hay procesos ms complejos para el pasaje de glucosa, aminocidos, inorgnicos y algunos frmacos; entre stos mecanismos se encuentran: 1.-Transporte pasivo: a.-Difusin simple b.-Filtracin.

algunos

iones

2.-Transporte especializado: a.-Transporte activo b.-Difusin facilitada c.-Pinocitosis. Los medicamentos actan por medio de receptores, en muchos de los casos, pero no siempre. Receptor es un sitio especfico de una macromolcula en una membrana celular, a las cuales necesita unirse o debe interactuar un neurotransmisor o frmaco par producir su respuesta biolgica caracterstica. Receptor metabotrpico: no acta sobre conducto inicos, sino sobre enzimas intracelulares, son activados de manera selectiva por trans-1amino-ciclopentil-1,3-dicarboxilato (ACPD): estn acoplados a protenas G y se acoplan positivamente a fosfolipasa C (la estimulan) o negativamente a adenilciclasa. Los medicamentos para unirse a su receptor necesitan tener afinidad y eficacia, la afinidad es la capacidad de un frmaco de unirse a su receptor y formar con el un complejo estable, depende de la estructura qumica del frmaco y del receptor, por lo menos del grupo de anclaje del agonista o antagonista y la eficacia: es la capacidad de estmulo para un grado determinado de ocupacin del receptor. Otras caractersticas del frmaco segn su estructura qumica es que sea: agonista, agonista parcial, agonista completo, agonista inverso, antagonista, antagonista competitivo, no competitivo. Agonista: frmacos que interactan con el receptor y desencadenan una respuesta. Agonista parcial: tiene afinidad, pero menor eficacia que el agonista. Agonista completo: los compuestos que interactan con los receptores previniendo la accin de los agonistas. Agonista inverso: no se puede hablar de un antagonismo clsico por la falta de un receptor, como el caso de las benzodiacepinas donde no se demuestra un agonista endgeno, un agonista de receptor a benzodiacepinas que antagoniza un efecto. Antagonista: frmaco que tiene afinidad y carece de eficacia. Antagonista competitivo: se produce cuando es posible revertir el efecto de un frmaco antagonista por un incremento en la dosis del agonista, que compite por el mismo receptor. Antagonista no competitivo: un antagonista se une fuertemente,

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casi de forma irreversible con uniones qumicas de alta energa, a un receptor, tal unin no se revierte aumentando la dosis. En la prctica utilizaremos el frmaco acetilcolina (ACh) que es un agonista y a la vez un neurotransmisor que es una sustancia qumica que se libera en las terminaciones nerviosas para producir excitacin o inhibicin de una neurona o una clula muscular adyacente, en la regin de la sinpsis y puede activar o inhibir a la clula post sinptica al unirse a una molcula de receptor especializado. La acetilcolina tiene receptores muscarnicos y nicotnicos, los muscarnicos se encuentran en los msculos lisos, en el msculo cardaco, en glndulas excrinas y en el SNC. Los nicotnicos se localizan en los ganglios del SNA y en las sinpsis neuromuscular esqueltica y en los ganglios nerviosos vegetativos. Almacenamiento de ACh. La ACh que es sintetizada en el citoplasma neuronal, es captada y almacenada en las vesculas que se hallan concentradas en las terminaciones nerviosas, la liberacin de ACh se desencadena `por la despolarizacin de las terminaciones nerviosas, permitiendo el ingreso de calcio para producir el proceso de liberacin de ACh. Terminacin de la accin de la ACh: la ACh se hidroliza para formar acetato y colina, por medio de catlisis con la enzima acetilcolinesterasa, donde la colina puede ser transportada de regreso a la terminacin nerviosa. En un msculo esqueltico aislado se puede inducir contraccin estimulando su nervio motor o adicionando acetilcolina a la solucin Ringer en que est sumergido. El efecto de la acetilcolina liberada por la accin de la estimulacin del nervio (o adicionada), es reversible, porque tambin la unin con su receptor es reversible, basta renovar la solucin en que se sumerge el msculo para que desaparezca el efecto, debido a que la acetilcolina libre, tanto la que an no logra fijarse al receptor como la que proviene de disociacin del complejo droga receptor, queda expuesta a una enzima que la hidrolizara rpidamente en cido actico y colina, productos que carecen de actividad biolgica. Otras substancias pueden inducir la contraccin del msculo esqueltico, pero las que tienen estructura parecida a la acetilcolina son las ms activas para estimular la contraccin muscular o para inhibirla, esto depende tambin substancias sean agonistas, antagonistas etc. de que las

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METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Una rana Moctezuma

Cristalera y equipo: 1 tabla y estuche de diseccin 2 varillas de vidrio con punta fina Hilo de seda 1 cmara para rgano aislado 1 pinzas de tres dedos con nuez 5 vasos de precipitados de 30 mL 1 vaso de precipitados de 200 mL 3 pipetas de 1 mL, 5 mL, 10 mL 1 Caja Petri Fisigrafo Migrafo F60 Soporte con tensmetro Papel para fisigrafo Tachuelas

Reactivos Disolucin de cloruro de acetilcolina (100 g/mL) Disolucin Ringer rana

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Preparacin de msculo de rana 1. Descerebrar y desmedular a la rana de acuerdo a lo mostrado en la prctica Manejo de animales.

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2. Disecar y amarrar con hilo seda los msculos rectos anteriores desde la regin torcica a la plvica 3. Irrigar con solucin Ringer rana constantemente los msculos rectos anteriores, para que no se deshidraten. 4. Colocar en la caja Petri con solucin Ringer rana los msculos disecados. 5. Colocar inmediatamente, el msculo en la cmara para rgano aislado. 6. Amarrar la porcin plvica haca el migrafo y la torcica en la parte baja de la cmara para rgano aislado 7. Llenar la cmara para rgano aislado con solucin Ringer rana hasta cubrir el msculo y ajustar el Fisigrafo.

Realizacin del ensayo 1. Ajustar el fisigrafo antes de colocar la preparacin. 2. Una vez colocada la preparacin se ajustar la tensin del msculo. 3. Se deja reposar la preparacin bajo disolucin Ringer durante un minuto y se registrar en el fisigrafo dicho reposo. Este registro ser la Lnea Basal. 4. Realice el experimento desalojando primeramente la disolucin Ringer y posteriormente colocando la primera disolucin en la cmara de rgano aislado, cuidando que dicha disolucin cubra totalmente al msculo. 5. El efecto se observar durante un minuto, o cuando se obtenga un desplazamiento constante o cuando empiece a disminuir el efecto. 6. Despus de observar el efecto se desalojar la disolucin Ringer, y se lavar la preparacin con disolucin Ringer, hasta que la plumilla del fisigrafo retorne a la lnea basal. 7. Se repiten los pasos 3, 4, 5 y 6 para las dems disoluciones de acetilcolina.

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Las disoluciones se prepararan de la siguiente manera: Volumen de la disolucin de acetilcolina (mL) 0.4 0.8 1.6 3.2 6.4 Volumen de la disolucin Ringer (mL) 19.6 19.2 18.4 16.8 13.6

Muestra 1 2 3 4 5

Volumen final de la muestra (mL) 20 20 20 20 20

Concentracin de acetilcolina (g/mL)

TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados obtenidos: Construya una curva dosis-respuesta para la de acetilcolina de cada equipo del grupo. Ajuste cada grfica por medio de la Ecuacin de Hill. Calcule la DE50 para cada disolucin de acetilcolina. Calcule la potencia relativa para cada disolucin de acetilcolina, tomando una de ellas como estndar. Con las grficas realizadas y los valores calculados, analice y determine: El tipo de ligado al que corresponde la acetilcolina. La importancia de las curvas dosis-respuesta graduales.

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CUESTIONARIO 1. Describa los conceptos de Neurotransmisor, Hormona, Ligando y Receptor. 2. Indique los principales tipos de ligandos y describa las diferencias entre ellos. 3. Describa brevemente las principales caractersticas de los ligandos. 4. Elabore una curva dosis-respuesta en la que se ilustre la forma de las curvas de los tipos de ligandos. 5. Describa los principales tipos de receptores que se conocen actualmente. 6. Describa brevemente el mecanismo de transduccin de seales de la acetilcolina. 7. Indique los tipos y subtipos de receptores de la acetilcolina, as como la funcin en el organismo de cada uno de ellos. 8. Indique los usos teraputicos de lo principales agonistas de la acetilcolina. 9. Indique el procedimiento para ajustar una curva dosis-respuesta por medio de la Ecuacin de Hill. 10. Indique el procedimiento para el clculo de la potencia relativa.

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Tema 8. Interaccin de frmacos


PRACTICA 9. EFECTO DE LA SUCCINILCOLINA EN LA ACCIN DE LA ACETILCOLINA EN MSCULO RECTO ANTERIOR DE RANA.

OBJETIVO. Observar los efectos provocados por la interaccin farmacolgica de dos frmacos (acetilcolina y succinilcolina), en el msculo recto anterior de la rana, para determinar el tipo de interaccin que ocurre con esta asociacin.

INTRODUCCIN Es la relacin que tienen dos o ms medicamentos al administrarse para tratar enfermedades coexistentes, provocando la probabilidad de que algunas veces uno de los medicamentos altere la intensidad del efecto farmacolgico del otro medicamento que se administra en forma concurrente: Esto puede causar el aumento o la disminucin de los efectos de uno o de ambos medicamentos, la aparicin de un nuevo efecto que no presente ninguno de los medicamentos administrados. Las interacciones pueden deberse a alteraciones en la fase farmacutica, farmacocintica y farmacodinmica.

Interacciones Farmacuticas: Disposicin: que tenga buena calidad, para que est disponible y no se tarde mas en absorber y pueda interactuar con otros medicamentos. Disolucin: en general, agentes en solucin se absorben ms de prisa que en suspensin, el tiempo de disolucin afecta la velocidad de absorcin, el inicio de la accin de agentes poco solubles se retrasa debido a que tarda en disolverse.

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Interacciones Farmacocinticas: Absorcin: la absorcin de sitios subcutneos puede hacerse lenta por la administracin simultnea de vasoconstrictores, por ejemplo: anestsicos locales y adrenalina Distribucin: puede ser alterada por medicamentos que compiten por los sitios de fijacin: por ejemplo la quinidina puede desplazar a la digoxina; o alterar el compartimento fsico en el cual otro medicamento se distribuye: por ejemplo, los diurticos pueden reducir el agua corporal total en la que se distribuyen los aminoglucsidos Biotransformacin: puede ser acelerado por agentes: por ejemplo, barbitricos que son inductores de las enzimas hepticas, o pueden ser inhibido por agentes como cimetidina, inhibidora de la MAO. Eliminacin: la excrecin de medicamentos por el rin puede cambiar por la presencia de medicamentos que reducen el flujo sanguneo renal, por ejemplo, agentes -bloqueadores, o que inhiben mecanismos especficos de transporte renal, por ejemplo la accin de la aspirina sobre la secrecin del cido rico.

Interacciones Farmacodinmicas: Antagonismo: es un medicamento que se une a los receptores pero no los activa. Los efectos de los antagonistas son el resultado de impedir la accin de los agonistas y stos pueden ser competitivos y no competitivos Sinergismo: es cuando el efecto conjunto de dos medicamentos es superior a la suma algebraica de los efectos individuales. Adicin: el efecto aditivo se refiere a la misma adicin, pero cuando ambos tienen el mismo mecanismo de accin. Sumacin: es cuando ambos medicamentos evocan la misma respuesta aparente sea cual fuere el mecanismo de accin y su efecto combinado es la suma algebraica de los efectos individuales

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Siempre hay que tener presentes stas interacciones ya que nos pueden dar efectos que a veces son convenientes, pero a veces son contraproducentes.

METODOLOGA

Material por equipo de trabajo:

Material biolgico: Una rana Moctezuma

Cristalera y equipo 1 tabla y estuche de diseccin 2 varillas de vidrio con punta fina Hilo de seda 1 cmara para rgano aislado 1 pinzas de tres dedos con nuez 5 vasos de precipitados de 30 mL 1 vaso de precipitados de 200 mL 2 pipetas de 1 mL, 5 mL, 10 mL 1 Caja Petri Fisigrafo Migrafo F60 Soporte con tensmetro Papel para fisigrafo

Reactivos Disolucin de cloruro de succinilcolina (10 g/ mL) Disolucin de cloruro de acetilcolina (100 g/mL) Disolucin Ringer rana

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DESARROLLO EXPERIMENTAL

Preparacin de msculo de rana 1. Descerebrar y desmedular a la rana de acuerdo a lo mostrado en la prctica Manejo de animales. 2. Disecar y amarrar con hilo seda los msculos rectos anteriores desde la regin torcica a la plvica 3. Irrigar con solucin Ringer rana constantemente los msculos rectos anteriores, para que no se deshidraten. 4. Colocar en la caja Petri con solucin Ringer rana los msculos disecados 5. Colocar inmediatamente, el msculo en la cmara para rgano aislado. 6. Amarrar la porcin plvica haca el migrafo y la torcica en la parte baja de la cmara para rgano aislado 7. Llenar la cmara para rgano aislado con solucin Ringer rana hasta cubrir el msculo y ajustar el Fisigrafo.

Realizacin del ensayo 1. Ajustar el fisigrafo antes de colocar la preparacin. 2. Una vez colocada la preparacin se ajustar la tensin del msculo. 3. Realice el experimento utilizando la disolucin de acetilcolina, tal y como se realiz en la prctica anterior. 4. Al finalizar la ltima dosis, deje reposar el msculo durante 10 minutos en disolucin Ringer fresca. 5. Despus del reposo, se realizar el experimento con las disoluciones de acetilcolinasuccinilcolina. Es muy importante que se realice en el mismo msculo que el experimento anterior. 6. El efecto se observar durante un minuto, o cuando se obtenga un desplazamiento constante. 7. Despus de cada disolucin, se lavar la preparacin las veces que sea necesario, hasta que la plumilla del fisigrafo llegue a la lnea basal.

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Las disoluciones se prepararn de la siguiente manera:

Experimento 1. Muestra 1 2 3 4 5 Volumen de la disolucin de acetilcolina (mL) 0.4 0.8 1.6 3.2 6.4 Volumen de la disolucin Ringer (mL) 19.6 19.2 18.4 16.8 13.6 Volumen final de la muestra (mL) 20 20 20 20 20 Concentracin de acetilcolina (g/mL)

Experimento 2. Muestra 1 2 3 4 5 Experimento 3. Muestra 1 2 3 4 5 Volumen de la disolucin de acetilcolina (mL) 0.4 0.8 1.6 3.2 6.4 Volumen de la disolucin de succinilcolina (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 Volumen de la disolucin Ringer (mL) 19.5 19.1 18.3 16.7 13.5 Volumen final de la muestra (mL) 20 20 20 20 20 Volumen de la disolucin de succinilcolina (mL) 0.4 0.8 1.6 3.2 6.4 Volumen de la disolucin Ringer (mL) 19.6 19.2 18.4 16.8 13.6 Volumen final de la muestra (mL) 20 20 20 20 20 Concentracin de succinilcolina (g/mL)

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TRATAMIENTO DE LOS RESULTADOS Con los resultados obtenidos: Construya una curva dosis-respuesta para la acetilcolina y para acetilcolinasuccinilcolina. Calcule la DE50 para cada frmaco y la combinacin de los mismos.

Con la grfica realizada y el valor calculado, analice y determine: El tipo de interaccin que ocurre en la combinacin acetilcolina-succinilcolina. El tipo de ligado al que corresponde la succinilcolina. La potencia relativa de la combinacin de acetilcolina-succinilcolina con respecto a la acetilcolina.

CUESTIONARIO 1. Describa los principales tipos de Antagonismo que se conocen actualmente. 2. Indique la diferencia entre Antagonismo y Antagonista. 3. Indique la diferencia entre una Interaccin Farmacolgica y una Interaccin

Farmacocintica. 4. Describa lo principales mecanismos de Interacciones Farmacolgicas por interaccin con receptores. 5. Describa lo principales mecanismos de Interacciones Farmacocinticas. 6. Indique los diferentes tipos de antagonistas y las diferencias entre cada uno de ellos. 7. Describa en que consiste el Modelo del Complejo Ternario para los receptores Metabotrpicos. 8. Describa el procedimiento experimental para diferenciar los diferentes tipos de agonistas y antagonistas. 9. Describa los mecanismos de accin propuestos para antagonistas no competitivos. 10. Indique los principales agonistas y antagonistas nicotnicos, as como sus propiedades y usos.

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Manual de Laboratorio

V. Bibliografa recomendada
1. Altamirano A.1994. Manual para el manejo de animales de laboratorio. FES Zaragoza, UNAM, Mxico. 2. Arrelln Rosas G. 1996. Efectos de los factores microambientales sobre la respuesta del animal a la manipulacin experimental. Animales de Experimentacin. 1:9-30. 3. Avendao M. 1993. Introduccin a la qumica farmacutica. Interamericana-McGraw Hill. Espaa. 4. Brody T, Larner J, Minneman K y Neu H. 1994. Human pharmacology. Molecular to clinical. 2nd edition. Mosby, EUA. 5. Burgos M y Martnez J. La rata de laboratorio. Manual. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM, Mxico. 6. Clark B y Smith D. 1989. Introduccin a la farmacocintica. Acribia, Espaa. 7. Craig Ch, Stitzel R C, Stitzel R E (editores). 2003. Modern Pharmacology With Clinical Applications, Sixth Edition. Lippincott Williams & Wilkins, EUA. 8. Curry S. 1977. Drug disposition and pharmacokinetics with a consideration of pharmacological and clinical relationships. 2nd edition. Blackwell Scientific Pub., Oxford 9. Finney D. 1978. Statistical method in biological assay. 3rd edition. Mc Millan Pub. Co., EUA. 10. Flores J. 1998. Farmacologa Humana 3 edicin. Masson Editores, Espaa. 11. Grahame-Smith. 1977. Drug interactions. University Park Press, GB. 12. Hansch C, Sammers P y Taylor J. (editores). 1990. Comprehensive Medicinal Chemistry. The rational design, mechanistic study and therapeutic application of chemical compounds. Vol. 1 to 6. Pergamon Press, GB. 13. Hardman J, Limbird L, y Goodman A. 2001. Goodman & Gilmans The pharmacological basis of therapeutics. 10th edition. McGraw Hill, EUA. 14. Hladky S. 1990. Pharmacokinetics. Manchester University Press, GB. 15. Infante S y Caldern L. 1994. Manual de anlisis probit. Colegio de postgraduados, Mxico 16. Kalant H y Roschlau W. 1989. Principles of medical pharmacology. 5th edition. B C Decker, Philadelphia, EUA. 17. Katzung B. 2000. Basic & Clinical Pharmacology, 8th edition. McGraw-Hill/Appleton & Lange, EUA.

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

18. Korolkovas A. 1988. Essentials of medicinal chemistry. 2nd edition. John Wiley and Sons, EUA. 19. Levine R. 2000. Pharmacology, Drug actions and reactions. 6th edition. The Parthenon Publishing Group, GB. 20. Madroero R. 1980. Qumica mdica. Mtodos fundamentales en la bsqueda de nuevos frmacos. Alhambra, Espaa. 21. McLaughlin J. 1991. Crow gall tumors on potato disc and Brine Shrimp lethality; Two simple bioassay for higher plant screening and fractionation. Methods in Plant Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA, 1-30. 22. Munson P (Editor). 1994. Principles of pharmacology. Basic concepts and clinical applications. Chapman and Hall, NY, EUA. 23. Mycek M, Harvey R y Champe P. 2000. Pharmacology. 2nd edition. Lippincott Wlliams & Wilkins, Philadelphia, EUA. 24. Oteiza Fernndez J. 1979. Manejo de animales. UNAM, Mxico. 25. Rang H, Dale M y Ritter J. 2000. Farmacologa. 4 edicin. Harcourt, Espaa. 26. Shargel L y Yu A. 1999. Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics. 4th edition. Appleton and Lange, EUA. 27. Short D y Woodnott D (editores). 1963. The A.T.A. manual of laboratory animal practice and techniques. Charles C. Thomas-Publisher, EUA. 28. Smith A, Van de Waterbeemd H, D. K. Walker D, Mannhold R, Kubinyi H y Timmerman H, 2001. Pharmacokinetics and Metabolism in Drug Design. Wiley-VCH Verlag GmbH, EUA. 29. Smith C y Reynard A. 1993. Farmacologa. Edit. Mdica Panamericana, Argentina. 30. Smith D, Van de Waterbeemd H, Walker D, Mannhold R, Kubinyi H y Timmerman H. 2001. Pharmacokinetics and Metabolism in Drug Design. Wiley-VCH Verlag GmbH, USA. 31. Smith G. 1977. Drug Interactions. University Park Press, GB. 32. Taylor M y Reide P. 1998. Lo esencial en farmacologa. Harcourt, Espaa. 33. Velasco A, Lorenzo P, Serrano J y Andrs-Trelles F. 1993. Velzquez Farmacologa. 16 edicin. Interamericana-McGraw Hill, Espaa. 34. Vogel G y Vogel W (editores). 1997. Drug discovery and evaluation. Pharmacological assays. Springer, Alemania. 35. Wepierre J. 1988. Manual de farmacologa general y molecular. Masson Editores, Espaa. 36. Wolff M. (editor) 1995. Burgers medicinal chemistry and drug discovery. Volmenes 1 a 3. John Wiley and Sons Inc., EUA.

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Manual de Laboratorio

VI. Anexos
Anexo 1. Respuestas a los problemas de la prctica de posologa.
Problema 1. Dilucin 1:2 = 2.5 mL de la muestra y 2.5 mL de agua. Dilucin 1:5 = 1 mL de la muestra y 4 mL de agua. Dilucin 1:10 = 0.5 mL de la muestra y 9.5 mL de agua.

Problema 2. Concentracin de sulfacetamida = 2%

Problema 3. Se disuelven los 200 mg de acetilcolina en 100 mL de agua, esta disolucin de diluye 1:10 tomando 1 ml de la disolucin y 9 mL de agua, posteriormente se toman 8 mL de esta ltima disolucin y se aforan a 100 mL.

Problema 4. Ratn de 24.3 g = dosis, 4.86 g y volumen, 0.24 mL Ratn de 19.8 g = dosis, 3.96 g y volumen, 0.20 mL Ratn de 21.7 g = dosis, 4.34 g y volumen, 0.22 mL

Problema 5. Dosis a administrar = 72 mg Volumen a administrar = 2.88 mL

Problema 6. Dosis = 62 mg

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

Problema 7. No es posible medir el volumen, es necesaria una dilucin 1:10 Dosis a administrar = 1.4 mg Volumen a administrar = 0.22 mL

Problema 8. Concentraciones: a. 150 g/mL = 0.15 mg/mL b. 0.0001 M = 15.1 mg/mL c. 0.03% = 0.3 mg/mL

Problema 9. a. Se pesan 20 mg de cloruro de acetilcolina al 98% y se afora a un volumen de 100 mL con agua. b. Se toman 66.67 mL de la disolucin y se afora a un volumen de 100 mL con agua. c. Se toman 60 mL de la disolucin de 250 g/mL y 40 mL de la disolucin de 50 g/mL.

Problema 10. Conejo de 5.4 Kg = 3.2 mL Conejo de 5.7 Kg = 3.2 mL

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Manual de Laboratorio

Anexo 2. Manejo de residuos peligrosos biolgico-infecciosos.

CLASIFICACIN DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS


De acuerdo con la NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y especificaciones de manejo, se consideran residuos peligrosos biolgico-infecciosos los siguientes:

La sangre: La sangre y los componentes de sta, slo en su forma lquida, as como los derivados no comerciales, incluyendo las clulas progenitoras, hematopoyticas y las fracciones celulares o acelulares de la sangre resultante (hemoderivados).

Los cultivos y cepas de agentes biolgico-infecciosos: Los cultivos generados en los procedimientos de diagnstico e investigacin, as como los generados en la produccin y control de agentes biolgico-infecciosos. Utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.

Los patolgicos: Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las necropsias, la ciruga o algn otro tipo de intervencin quirrgica, que no se encuentren en formol. Las muestras biolgicas para anlisis qumico, microbiolgico, citolgico e histolgico, excluyendo orina y excremento. Los cadveres y partes de animales que fueron inoculados con agentes enteropatgenos en centros de investigacin y bioterios.

Los residuos no anatmicos Los recipientes desechables que contengan sangre lquida.

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

Los materiales de curacin, empapados, saturados, o goteando sangre o cualquiera de los siguientes fluidos corporales: lquido sinovial, lquido pericrdico, lquido pleural, lquido Cfalo-Raqudeo o lquido peritoneal.

Los materiales desechables que contengan esputo, secreciones pulmonares y cualquier material usado para contener stos, de pacientes con sospecha o diagnstico de tuberculosis o de otra enfermedad infecciosa segn sea determinado por la SSA mediante memorndum interno o el Boletn Epidemiolgico.

Los materiales desechables que estn empapados, saturados o goteando sangre, o secreciones de pacientes con sospecha o diagnstico de fiebres hemorrgicas, as como otras enfermedades infecciosas emergentes segn sea determinado por la SSA mediante memorndum interno o el Boletn Epidemiolgico.

Materiales absorbentes utilizados en las jaulas de animales que hayan sido expuestos a agentes enteropatgenos.

Los objetos punzocortantes: Los que han estado en contacto con humanos o animales o sus muestras biolgicas durante el diagnstico y tratamiento, nicamente: tubos capilares, navajas, lancetas, agujas de jeringas desechables, agujas hipodrmicas, de sutura, de acupuntura y para tatuaje, bisturs y estiletes de catter, excepto todo material de vidrio roto utilizado en el laboratorio, el cual deber desinfectar o esterilizar antes de ser dispuesto como residuo municipal.

SEPARACIN Y ENVASADO DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICOINFECCIOSOS


Los residuos peligrosos biolgico-infecciosos se separarn y envasarn para su almacenaje temporal de la siguiente forma:

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Manual de Laboratorio

TIPO DE RESIDUOS Sangre Cultivos y cepas de agentes infecciosos Patolgicos Residuos no anatmicos Objetos punzocortantes

ESTADO FSICO Lquidos Slidos Slidos Lquidos Slidos Lquidos Slidos

ENVASADO Recipientes hermticos Bolsas de polietileno Bolsas de polietileno Recipientes hermticos Bolsas de polietileno Recipientes hermticos Recipientes rgidos polipropileno

COLOR Rojo Rojo Amarillo Amarillo Rojo Rojo Rojo

Las bolsas se llenarn al 80 por ciento (80%) de su capacidad, cerrndose antes de ser transportadas al sitio de almacenamiento temporal y no podrn ser abiertas o vaciadas. Adems, las bolsas debern estar marcadas con el smbolo universal de riesgo biolgico y la leyenda Residuos Peligrosos Biolgico-Infecciosos.

SMBOLO UNIVERSAL DE RIESGO BIOLGICO:

RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO INFECCIOSOS

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

Anexo 3. Formularios.
FORMULARIO 1. PARMETROS FARMACOCINTICOS

Modelo de Un Compartimento (Administracin Intravascular)

Ecuacin general:

Cp = Cp 0 * e ke *t

Vd =

D Cl = 0 Cp Ke

Vd rea =
Cl =

D ke * ABC

D ABC

ABC 0 =
t

Cp 0 Ke
k

ABC 0 = (t n +1 t n )(
n =1

Cn +1 + Cn ) 2

t 12 =

ln 2 ke

Modelo de Un Compartimento (Administracin Extravascular)

Ecuacin general:

Cp = Cp 0 * (e ke *t e k a *t )

Vd =

Cl ke F *D k e * ABC

Vd rea = Cl =

F *D ABC
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Manual de Laboratorio

ABC 0 = Fabsoluta =
Frelativa =

Cp 0 Cp 0 ke ka ABC EV * DIV ABC IV * DEV


ABC problema * Destndar ABCestndar * D problema

Modelo de Dos Compartimentos (Administracin Intravascular)

Ecuacin general:

Cp = A * e *t B * e *t

Cp 0 = A + B t 12 = Vc = Vd = ln 2

D Cp 0 D

D * ABC A * * ( ) ( A * + * B) 2

Vd rea =

Vd rea = Vd ss + D * Vd ss = Vc Vd =

(k12 + k 21 ) k 21

ke *Vd

Cl

D * ( B * + A * )

Cl = *Vd = Vc * ke = ABC = A

D ABC

+ = k12 + k 21 + ke * = k 21 * ke
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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

k10 = ke =

*
k 21

k12 = + k 21 k10 k 21 = ( A * ) + ( B * ) Cp 0

Modelo de Dos Compartimentos (Administracin Extravascular)

Ecuacin general:

Cp = A * e *t + B * e *t C * e k a *t

Vd rea =

F *D * ABC ( A * ) * ( ) ( A * + * B) 2

Vd rea = Vd ss + D * F * Vd ss = Vc * Vd = Cl = k12 + k 21 k 21 = Cl

ke *Vc

F *D = *Vd ABC A

ABC =

Cp 0 ka

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Manual de Laboratorio

FORMULARIO 2. CLCULO DE Kp rgano/sangre

Clculo de la constante de reparto rgano/sangre (Kp):

Kp rgano =

ABC ABC

t 0rgano t 0 sangre

ABC 0 = (t n +1 t n )(
t n =1

Cn +1 + Cn ) 2

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

FORMULARIO 3. MTODO Sigma minus

Ecuacin general:

ln(Du Du ) = k t + ln(Du )

t1 =
2

ln 2 k
0

[ABC ]0 = Cp

Ke

Clculo de constantes de eliminacin:

k = k nr + ke ke = Du k D0

k m k nr

Clculo de depuraciones:

ClT = Cl R =

D0 [ABC ] 0 Du [ABC ] 0

Cl NR = ClT Cl R Cl H Cl NR

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Manual de Laboratorio

FORMULARIO 4. ANLISIS PROBIT

Ecuacin general:

UP = * logC +

Clculo de DE50 DL50:

50 =

DL 50 = 10 50

Clculo de una DE DL especfica:

n =

UP

DL n = 10 n

Tabla de transformacin de Probabilidad a Unidades Probit


Probabilidad 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 0.00 --3.72 4.16 4.48 4.75 5.00 5.25 5.52 5.84 6.28 0.01 2.67 3.77 4.19 4.50 4.77 5.03 5.28 5.55 5.88 6.34 0.001 6.90 7.07 7.37 0.02 2.95 3.82 4.23 4.53 4.80 5.05 5.31 5.58 5.92 6.41 0.002 6.91 7.10 7.41 0.03 3.12 3.87 4.26 4.56 4.82 5.08 5.33 5.61 5.95 6.48 0.003 6.93 7.12 7.46 0.04 3.25 3.92 4.29 4.59 4.85 5.10 5.36 5.64 5.99 6.55 0.004 6.94 7.14 7.51 0.05 3.36 3.96 4.33 4.61 4.87 5.13 5.39 5.67 6.04 6.64 0.005 6.96 7.17 7.58 0.06 3.45 4.01 4.36 4.64 4.90 5.15 5.41 5.71 6.08 6.75 0.006 6.98 7.20 7.65 0.07 3.52 4.05 4.39 4.67 4.92 5.18 5.44 5.74 6.13 6.88 0.007 7.00 7.23 7.75 0.08 3.59 4.08 4.42 4.69 4.95 5.20 5.47 5.77 6.18 7.05 0.008 7.01 7.26 7.88 0.09 3.66 4.12 4.45 4.72 4.97 5.23 5.50 5.81 6.23 7.33 0.009 7.03 7.29 8.09

Probabilidad 0.000 6.88 0.97 7.05 0.98 7.33 0.99

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Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

FORMULARIO 5. NDICE TERAPUTICO Y MARGEN ESTNDAR DE SEGURIDAD

Clculo del ndice Teraputico (IT):

IT =

DL 50 DE 50

Clculo del Margen Estndar de Seguridad (MS):

MS =

DL1 DE 99 *100 DE 99

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Manual de Laboratorio

FORMULARIO 6. ECUACIN DE HILL


E log E E max = h * logC h * logCE 50

Ecuacin general:

E Y = log E E max

E calculado =

E max 10 Y + 1
b

CE 50 = 10

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