Professional Documents
Culture Documents
Medicina - obiective
diagnosticul tratamentul prevenirea bolilor umane =>
MICROBIOLOGIA
studiul microorganismelor Microorganisme
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
1.ubiquitare 2.ageni etiologici
bolile infecioase: nu se transmit de la o persoan la alta (ex. panaritiu, furuncul). bolile infecto - contagioase: se transmit de la o persoan la alta.
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
5.celule ancestrale
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
6.arm biologic
To help protect your privacy, PowerPoint has blocked automatic download of this picture.
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
HIV: 1981-1982
Microorganisme=Microbi = Germeni
BACTERII VIRUSURI FUNGI PARAZITI TOTAL DIFERITI INTRE EI !! STRUCTURA DIAGNOSTIC TRATAMENT
Incadrare
Regn protista: alge, protozoare Regn Myceta: fungi Regn Prokariota (Monera): bacterii
Bacteriile = prokariote
Virusurile
NU sunt celule sunt structuri acelulare
nucleu adevrat:
nucleoli, membrana nuclear.
plasmide bacteriofagi
ORGANIZAREA CITOPLASMEI
compartimentat. organite =>
ribozomi 80 S,
su 60 S Su 40 S
50 S (Large) 30 S (Small).
MEMBRANA CITOPLASMATIC
complexa
Mycoplasma
NVELIURILE CELULARE
lipsesc nveliurile celulare Exist la
perete celular,
responsabil de meninerea formei
MULTIPLICARE
sexualitate. primete o dubl informaie genetic de la parentali care se reasociaz n meioz.
MORFOLOGIE BACTERIAN
Microscopia optic
COCI
Dispoziia rezult n urma diviziunii diplo: diplococi
Pneumococi:
coci Gram pozitivi, ovoizi cu aspect de flacre de lumnare (diviziune pe vertical),
Neisserii:
coci Gram negativi cu aspect reniform, concav convex (diviziune pe orizontal),
tetrade: Micrococi: 4 coci reunii octade: Sarcina: 8 coci. lanuri: Streptococi. grmezi: Stafilococi
BACILI
Capete bacililor pot fi: rotunjite la Enterobacterii b.coli i ali bacili Gram negativi ascuite la Fusobacterium bacili Gram negativi drepte bacilii din genul Bacillus (bacili Gram pozitivi) Grosimea cilindrului poate fi diferit: deformai prin endospori, incluzii Endosporii nu se coloreaz n coloraia Gram = zone necolorate, albe, sferice, endospori cu diam. < dect diam. f. vegetative, Bacillus (bacili Gram pozitivi) endospori cu diam. > dect diam.f.vegetative, Clostridium, Gram pozitivi. terminal, Clostridium tetani subterminal-rachet de tenis: Clostridium botulinicum central-brcu sau de fus: Clostridium septicum, sporogenes
BACILI
Dispoziia n frotiu: bacili izolai:
diplobacili:
Enterobacterii: bacil colii (bacili Gram negativi) Bacilul crbunos n frotiurile efectuate din produs patologic Bacillus (bacili Gram pozitivi): Bacil subtilis, bacil cereus, bacil crbunos (n frotiurile din cultur pur). Mycobacterium tuberculosis aspect de majuscule (X, Y, W) Corynebacterium diphteriae aspect de litere chinezeti (bacili ncurbai, deformai la capete Gram pozitivi). Bacili pseudodifterici (bacili Gram pozitivi)
streptobacili:
COCOBACILI
FORME SPIRALATE
BACILI NCURBAI: numr mic de ture de spir Vibrion holeric
bacil ncurbat mobil, aspect de virgul, Gram negativ
Campylobacter
2 bacili ncurbai unii la capete, aspect de liter S
Helicobacter
mai muli bacili ncurbai unii la capete (2-5) produc gastrite, ulcer duodenal
FORME SPIRALATE
Spirochete: bacterii spiralate lungi 5 - 10, Subiri 0,2 - 0,3 , mobile prin aparat locomotor;
Forma: meninut datorita peretelui celular. Bacterii fr perete celular : Mycoplasma culturi vechi 48-72 ore = pleomorfismul bacterian Bacterii necolorabile prin coloratia Gram =>
Bacterii spiralate
genul Mycobacteria
Treponema pallidum, Leptospira, Borrellia Necesita coloraii speciale: Fontana, Burri, Giemsa coloraia Ziehl Neelsen Rickettsia, Chlamydia coloraia Giemsa, Machiavello, Giemenez
Bacterii intracelulare:
Fontana
Giemsa,
Chlamydii, Rickettii
Gimenez
Macchiavello
Taxonomie
IDENTIFICAREA
Deosebeste
Microorganismele bune Rele = patogene
Proprietati specifice
Morfologice De cultura
izolare si identificare
agent cauzator = etiologic al unei imbolnaviri
CLASIFICAREA BACTERIILOR
Adansoniana numerica
Prezenta/absenta: pigmenti, enzime Complicata statistica
Filogenetica 1980
Tehnici moleculare si genetice
hybridizarea acizilor nucleici Analiza secventelor ARN-ului ribozomal (rRNA)
inrudirea evolutiva
Escherichia, K lebsiella P roteus, P rovidencia Salm onella, Shigella Yersinia, Vibrio Haem ophilus, Pasteurella
Fusobacterium
Grup 17:
Grup 18: bacili formatori de endospori: Grup 19: bacili nesporulati Grup 20: bacili neregulati, nesporulati : Grup 21: Mycobacteria: Mycobacterium Grup 22-29: Actinomycete:
Nocardia, Streptomyces, Rhodococcus Actinomyces Corynebacterium Listeria ClasaThallobacteria Bacillus Clostridium
Group 30:
M ycoplasm a, Ureaplasm a
IV. Mendosicutes:
Archaebacteria
GRUPE DE HAZARD
pot cauza boli umane prezint risc pentru personalul de laborator nu par a se rspndi n colectivitate exist msuri de profilaxie, tratament
Eschericia coli, Stafilococ aureus, Streptococ, Treponema pallidum, Klebsiella, Mycobacterii netuberculoase, Proteus, Vibrio holeric, Shigella.
Bacterii: Bacillus cereus, Bordetella pertussis, Campylobacter, Clostridium botulinicum i alte clostridii, Bacil difteric, Enterobacter,
Virusuri: Adenovirus, Coronavirus, Herpesvirus, virusuri Coxackie, Echo, virusul hepatitei A, virusuri poliomielitice, Rhinovirus, Rotavirus, virusul rubeolei, virus gripal, Paramyxovirus
Bacterii: Bacil crbunos, Brucella, Chlamydia psittaci, bacilul TBC, bacilul leprei, Rickettsii, Virusuri: CMV, Bunyavirusuri, Hepatita B,D, Enterovirus, HIV, Virusul rabic
Virusuri: Arenavirusuri (virusurile Lassa, Junin, Machupo), Bunyavirusuri (v. febrei de Crimeea Congo), Filoviridae (virusurile Ebola, Marburg); Poxviridae (virusul variolei)
Produsele patologice
nu se cunoate coninutul microbian trebuie prelucrate cu respectarea normelor de protecie.
Morfologie bacteriana
Dr. Carmen Costache
STRUCTURA
1.Structuri obligatorii: Nucleoid, Citoplasma, Membran citoplasmatic, Perete celular 2.Structuri facultative * neeseniale pentru multiplicare * confer proprieti de patogenitatea Capsul, Glicocalix; Pili comuni, pili de sex, Flageli (Cili), Spori
NUCLEOID
nu are
nucleoli, membrana nuclear.
Se evideniaz:
prin coloraii speciale:
coloraia Feulgen, acridin orange;
NUCLEOID
Informaia genetic - haploid (gene pentru un caracter ntr-un singur exemplar). contact direct ntre ADN i ARN, important pentru transcrierea i traducerea inf.genetice
sediul de aciune al unor AB: Quinolone Nitrofurani, imidazoli Rifamicine
NUCLEOID
Plasmidele
molecule de ADN circulare. se pot transmite de la o bacterie la alta = conjugarea bacterian Codifica nr variabil de gene
virulenta.
Feuelgen pozitiv
CITOPLASMA BACTERIILOR
necompartimentat, fr organite:
2 zone distincte
Periferica, amorfa Interna (nucleoidul)
CITOPLASMA BACTERIILOR
1.Ribozomi: mii, 70 S
sediul sintezei proteice inta de aciune a unor antibiotice => inhiba selectiv sinteza proteica bacteriana dar nu si cea eukariota !
50 S
30 S
CITOPLASMA BACTERIILOR
2.Granule/Incluzii:
mas lichid de substane nutritive, delimitate de membran Colorate specific de anumiti coloranti
Ex. Volutina = corpuscul metacromatic (albastru de metilen=> rosu)
CITOPLASMA BACTERIILOR
6. Plasmide
MEMBRANA CITOPLASMATICA
strat subire (10 -20 nm) sub peretele celular => greu de evideniat. Structura membranei citoplasmatice modelul mozaicului Singer:
MEMBRANA CITOPLASMATICA
Prelungiri n citoplasm: 1. Mezozomi Rol:
diviziunea bacteriilor; replicare ADN-ului; formarea endosporilor
2. Funcie bioenergetic:
sediul transportului de electroni, a fosforilrii oxidative (Oxizomii).
hidrolizeaz polimeri organici: proteine, zaharuri, lipide n nutrieni, care pot ptrunde n bacterie.
8. Import de macromolecule
ex. fragment de ADN, de la bacterii donatoare = transformare
prezent la majoritatea bacteriilor, cu excepia genului Mycoplasma. PERETELE CELULAR LA BACTERII GRAM POZITIVE gros (15- 50 nm), dar simplu structurat: straturi suprapuse de peptidoglican (40) i acizi teichoici ataai 1.Acizi teichoici sunt heteropolimeri repetitivi, Rol - aderarea bacteriilor de celulele epiteliale ale mucoaselor - antigene de suprafa - captarea unor nutrieni: ex. Mg. 2.Polizaharide de perete 3.Proteine de perete
excepie Mycobacterium,
ex. streptococ hemolitic.
subire (10 -15 nm) dar complex structurat 1. Peptidoglicanul : 2. Stratul lipoproteic Formeaz un schelet 3. Membrana extern
mas fosfolipidic fluid, n care noat proteine.
Proteinele majore (70%) i minore (30%)
Proteine majore: Porine, Nonporine NBP (nutrient binding protein), PBP (penicillin binding protein), FeBP (siderofor)
5. Spatiul periplasmic
ntre membrana extern i membrana citoplasmatic. Deine oligozaharide i protein-enzime:
distrugerea bacteriilor btrne/moarte -autoliza scindeaz substanele nutritive cu G.M. mare, (polimeri organici) n monomeri: nutrieni care pot ptrunde n bacterie.
1. Menine forma 2. delimitarea bacteriilor n 2 grupe Gram. 3. responsabil de acido - alcoolorezisten, 4. creterea i diviziunea bacteriilor - primer pentru propria sintez 6. Intervine n nutriia bacterian 7. Intervine n metabolismul bacterian,
sit molecular transportor de ioni import i export de proteine
FORMATIUNI FACULTATIVE
CAPSULA strat amorf de nveli 3 structuri : Capsula microscopic :poate nconjura 1-2 bacterii.
Capsula se evideniaz
1. n frotiuri prin: coloraii negative,
nu coloreaz capsula, vizibil ca un halou alb n jurul bacteriilor:
coloraia Gram (prod. patologic), Burri (culturi pure)
coloraii pozitive: coloraia Muir 2. Prin reacii antigen - anticorp: reacia de precipitare i reacia de umflare a capsulei 3. Dup aspectul coloniilor pe medii de cultur: foarte mucoase
CAPSULA
Compoziie chimic
polizaharidic,
majoritatea bacteriilor capsulate (Pneumococ, Meningococ, Hemofili).
polipeptidic:
polimer al acidului D - Glutamic, la bacilul crbunos.
proteic
Yersinia pestis,
polimer de acid hialuronic la Streptococ - hemolitic. Rol 1. antigen bacterian. 2. factor de patogenitate bacterian:
se opune fagocitrii bacteriilor.
GLICOCALIXUL
strat de suprafa sintetizat de bacterii n mediul lor natural. structurat, fibre polizaharidice lungi (dextran sau levan) se poate evidenia doar n microscopie electronic Rol 1.adezina polizaharidic 2.factor de colonizare
Ex. Mutanul ( Streptococus mutans) - ader de smalul dentar cu formarea cariei dentare. Bacteriile produc metabolii acizi, care atac smalul dentar.
formaiuni filamentoase, tubulare scurte numr mare (aproximativ 100 - 200 pili). natur proteic (pilein ). determinism cromozomial
mai rar determinism plasmidic.
PILII
Rol 1. adezinele proteice ale bacteriilor:
aderarea nespecific pe suprafee inerte, aderarea specific pe mucoase, epitelii, endotelii, hematii, fagocite.
2. factor de patogenitate
Gonococii, E. coli- (ETEC),
3. antigene
posibilitatea modificarea structurii antigenice
PILII DE SEX
formaiuni tubulare lungi numr mic (1-4 ) prezeni la bacteriile G negative au determinism extracromozomial (plasmidic) Rol: conjugarea bacterian
FLAGELI (CILI)
organite de locomoie ale bacteriilor Structur proteic = flagelin Ultrasctructura la ME: Evidentierea cililor :
corpuscul bazal cilindru proteic (filament axial). n preparate microscopice:
chimiotaxie (deplasarea spre substane chimice); fototaxie (deplasare spre locurile cu lumin); etc
SPORII
forme de rezisten - condiii nefavorabile de temperatur, nutriie, pH, oxigen, form primitiv de difereniere celular la bacterii. Sporularea:
Germinare
Evidenierea sporilor
coloraii negative: Gram (formaiuni ovalare, necolorate, n interiorul bacteriilor). coloraii pozitive: verde malachit i safranin
Rol: 1. identificarea bacteriilor. 2.alegerea metodelor de sterilizare i dezinfecie capabile s distrug sporii
SPORI
II. Pentru alte boli infectioase, exist posibilitatea cultivrii i izolrii agentului etiologic, dar examenul microscopic ofer informaii preioase.
gonoree - Neisseria gonnorhoeae (gonococ)
imaginea microscopic: PMN, diplococi intra i extracelulari.
FORMATIUNI FACULTATIVE
CAPSULA strat amorf de nveli 3 structuri : Capsula microscopic : poate nconjura 1-2 bacterii.
Capsula se evideniaz
1. n frotiuri prin: coloraii negative,
nu coloreaz capsula, vizibil ca un halou alb n jurul bacteriilor:
coloraia Gram (prod. patologic), Burri (culturi pure)
coloraii pozitive: coloraia Muir 2. Prin reacii antigen - anticorp: reacia de precipitare i reacia de umflare a capsulei 3. Dup aspectul coloniilor pe medii de cultur: foarte mucoase
CAPSULA
Compoziie chimic
polizaharidic,
majoritatea bacteriilor capsulate (Pneumococ, Meningococ, Hemofili).
polipeptidic:
polimer al acidului D - Glutamic, la bacilul crbunos.
proteic
Yersinia pestis,
polimer de acid hialuronic la Streptococ - hemolitic. Rol 1. antigen bacterian. 2. factor de patogenitate bacterian:
se opune fagocitrii bacteriilor.
GLICOCALIXUL
strat de suprafa sintetizat de bacterii n mediul lor natural. structurat, fibre polizaharidice lungi (dextran sau levan) se poate evidenia doar n microscopie electronic Rol 1.adezina polizaharidic 2.factor de colonizare
Ex. Mutanul ( Streptococus mutans) - ader de smalul dentar cu formarea cariei dentare. Bacteriile produc metabolii acizi, care atac smalul dentar.
formaiuni filamentoase, tubulare scurte numr mare (aproximativ 100 - 200 pili). natur proteic (pilein ). determinism cromozomial
mai rar determinism plasmidic.
PILII
Rol 1. adezinele proteice ale bacteriilor:
aderarea nespecific pe suprafee inerte, aderarea specific pe mucoase, epitelii, endotelii, hematii, fagocite.
2. factor de patogenitate
Gonococii, E. coli- (ETEC),
3. antigene
posibilitatea modificarea structurii antigenice
PILII DE SEX
formaiuni tubulare lungi numr mic (1-4 ) prezeni la bacteriile G negative au determinism extracromozomial (plasmidic) Rol: conjugarea bacterian
FLAGELI (CILI)
organite de locomoie ale bacteriilor Structur proteic = flagelin Ultrasctructura la ME: Evidentierea cililor :
corpuscul bazal cilindru proteic (filament axial). n preparate microscopice:
chimiotaxie (deplasarea spre substane chimice); fototaxie (deplasare spre locurile cu lumin); etc
SPORII
forme de rezisten - condiii nefavorabile de temperatur, nutriie, pH, oxigen, form primitiv de difereniere celular la bacterii. Sporularea:
iniial endospori ulteior - spori liberi = exospori
Germinare
Revenire la forma vegetativ cnd ntlnesc condiii favorabile
SPORII
Evidenierea sporilor
coloraii negative: Gram (formaiuni ovalare, necolorate, n interiorul bacteriilor). coloraii pozitive: verde malachit i safranin Protoplastul sporal Peretele sporal Cortexul nveliurile sporale si exosporium
SPORII
Rol: 1. Forma de rezisten pentru bacterii 2. identificarea bacteriilor. 3. alegerea metodelor de sterilizare i dezinfecie capabile s distrug sporii
gonoree - Neisseria
gennorhoeae
(gonococ)
frotiu din produs patologic: bacili acido alcoolorezisteni, coloraia Ziehl - Neelsen
Frotiu din puroi, colorat Gram: coci Gram pozitivi, dispui n lanuri infecie streptococic
Metabolism bacterian
Dr. Carmen Costache
METABOLISM BACTERIAN
Planul cursului
Definiie,
Anabolism, Catabolism
CO2
Nutriia bacterian Bacteriile de importan medical Metabolismul energetic bacterian Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor
Metabolism bacterian
Definiie:
Suma tuturor proceselor chimice
1. Anabolism: Sinteza de compui compleci, cu consum energetic. 2. Catabolism: - descompunerea compuilor compleci - producere de energie
Efectul factorilor fizici asupra dezvoltrii bacteriene Efectul temperaturii dezvoltare bacterian
izvoarele cu ap fierbinte din Yellowstone National Park 120C. Soluii apose pn la -20C, Gheari din Antarctica, Congelatoare casnice: 0 C.
Clasificarea bacteriilor n funcie de temperatura de cretere Microorganisme: limite de T, definite prin 3 valori: T min, T o, T max
T min = < NU se dezvolt T o = cretere i multiplicare optim T max= > NU se pot dezvolta, mor
Clasificarea bacteriilor=f(T)
Criofile (fr importan medical) T : 0 20C To: 10-15C Mri, oceane, soluri reci, frigidere Termofile (fr importan medical) T: 45-90C T o: 60-70C Soluri calde, izvoare termale Mezofile - importan medical !!! T o aproape de 37C T: 20-45C
Inghearea =>
stoparea multiplicrii unor bacterii DAR multe din ele nu sunt omorte la temperaturile din congelatoarele casnice !
Saramura: folosit pentru conservarea alimentelor DAR Stafilococi- halotolerani=> contaminare => stricarea alimentelor Levurile i mucegaiurile tolereaz presiuni osmotice crescute => cresc pe carne, gemuri, etc.
Mecanism
Bacterii din aer Suprafee, inclusiv suprafaa apei Instrumentar medical (raze gamma)
Energia radiant => nucleoproteine =>dimeri de timin lezare celular => moarte Penetrare redus => aplicaie limitat n sterilizare
Revers: persistenta microorganismelor in picaturi mici de apa (aerosoli) => afectiuni cu poarta de intrare respiratorie !
Dezinfecia: efectul substanelor chimice folosite pe suprafee Antisepsia: efectul sustanelor chimice folosite pentru decontaminarea esuturilor.
Obligat aerobe = strict aerobe Obligat anaerobe = strict anaerobe Aerob facultativ anaerobe Microaerofile Anaerob-aerotolerante
Oxigenul molecur (O2) indispensabil pentru cretere Acceptorul final de electroni n lanul respirator: oxigenul Respiraie => energie
Ex. Mycobacterium tuberculosis; genul Bacillus
Cresc n prezena SAU absena O2 respiratie (aerob, anaerob) sau fermentaie => energie
Ex. Enterobacteriile
Anaerob-aerotolerante
pot crete n prezena O2 DAR Fermentaie => energie Ex. Streptococcus Toate organismele care cresc n prezena O2 au superoxid dismutaz.
superoxid dismutaz catalaz i/sau peroxidaz, => sunt supuse aciunii radicalilor liberi rezultai n prezena oxigenului, pe care nu au cum s i neutralizeze => efect letal asupra bacteriilor
Aciunea superoxid dismutazei, catalazei i peroxidazei neutralizeaz radicalii de oxigen care sunt generai inevitabil n prezena O2 n orice sistem viu.
Nutriia bacterian
Sursa de energie
Sursa de C:
Bacterii C autotrofe: CO2 fr importan medical.
Bacterii C heterotrofe
bacteriile fototrofe - lumina bacterii chimiotrofe reacii chimice de oxidoreducere bacterii chimiolitotrofe substane chimice anorganice
Saruri, microelemente
Apa
Nutriia bacterian
ex. vitamine propriu-zise: K, B (B1, B2, B6, B12)) extract de drojdie snge pentru bacterii pretenioase nutritiv (streptococi, gonococi, meningococi) Factor X, V pentru hemofili
Bacteriile paratrofe
1. Respiraia (metabolism energetic respirator) lan transportor de electroni; fosforilare oxidativ = aerob lan transportor de electroni, fosforilare anoxibiotic = anaerob 2. Fermentaia (metabolism energetic fermentativ)
Tipuri de fermentaie
Tipuri de fermentaie
Tipuri de fermentaie
Tipuri de fermentaie
parental => 2 celule fiice identice Creterea i diviziunea unei celule = ciclul celular Creterea i multiplicarea unei populaii bacteriene = curba de cretere.
cu parentalul identice ntre ele.
Perioadele (fazele) curbei de cretere: Faza de laten - lag Faza de multiplicare logaritmic - log Faza staionar Faza de declin
Faza staionar
Numr constant reprogramat activitatea metabolic sintetizeaz proteine de supravieuire sporularea devin mai rezistente la AB.
Faza de declin
Bacteriile mor cu o rat ridicat modificate morfologic: btrne (perete celular gros), forme aberante, globuloase starea fiziologic de rezisten la stres rezistente la aciunea factorilor fizici, chimici, la antibiotice.
Clasificarea
Utilizarea bacteriilor:
Identificarea bacteriilor
preparare vaccinuri, obinerea de antigene bacteriene, n industria alimentar (lactate, pine, alcool), n cercetarea fundamental mediu.
Multiplicarea bacteriilor pe mediul solid => o colonie. Colonie = populaie bacterian pur din punct de vedere genetic deoarece provine de la un singur parental.
GENETIC BACTERIAN I
Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian Variabilitatea Rolul materialulul genetic extracromozomial
Mutaia Transfer de material genetic
Planul cursului
INTRODUCERE
Toate organismsmele
au materialul genetic reprezentat de ADN si ARN (Avery,1944, pneumococ) folosesc aceleasi nucleotide purine:
pirimidinice:
Adenina (A), Guanina (G); Citozina (C), Timina (T) Uracil (U)
replicarea semiconservativ repararea leziunilor ADN, restricie i modificare transcrierea traducerea informaiei genetice n proteine.
reproducere asexuala:
Fiziune binara
Dogma centrala ADN-ul este depozitarul informatiei genetice transcrisa in ARN si apoi in proteine la nivelul ribozomilor
Exceptie: retrovirusurile - Reverse Transcriptaza: ARN => ADN
(Avery 1944, pneumococ)
Variabilitatea
STRUCTURA ADN
(Watson &Crick 1953)
Chimic = acid nucleic
schelet zahr - fosfat,
5 -> 3 3-> 5
baze azotate
purinice adenin, guanin pirimidinice (timin, citozin ) legturi de H, pe baza complementariti: (A=T; C=G).
Perechile de baze succesive => dublu helix ARN Zahar: riboza Uracil <= Timina
STRUCTURA ADN
ADN
Functional (unitati de informatie genetica)
codon (ex. CCA) => gene => loci => Genom Uman: perechi de baze 3.3 x 109 ~ 21.000 gene Bacterii ~
perechi de baze: mil-5 mil 1000-5000 gene
STRUCTURA ADN
Molecula de ADN
continu din punct de vedere chimic. Segmentat- funcional = gen. structurale reglatoare secvene semnal.
A. Plasmide 1. Portiuni mici de ADN dublu catenare, circulare 2. Repliconi (independent de cz) 3. 2 - 30 gene Plasmide conjugante
F factor pilul de sex R factor - multiple drug resistance (MDR plasmid); Hfr integrate in cz = recombinare frecventa => prin conjugare => raspandire
http://www.biosci.uga.edu/almanac/bio_103/notes/may_30.html.
structura bacteriofagi
Structure of phage T4
REPLICAREA ADN
diviziunea etape: iniiere, alungire, terminare. despiralizarea moleculei superhelicoidale
de ADN, realizat de ADN giraza (topoizomeraza 2). punct de origine - zona ori , 1-2 furci de replicare. direcia 5' - 3'. ter, 180, fa de punctul ori.
funcie de corectare i exonucleazic verific complementaritatea bazelor inserate i ndeprteaz bazele incorect inserate
REPARAREA LEZIUNILOR ADN Sistemul S.O.S (save our sequence) codificat de un complex de gene, normal represate. leziuni ADN necorectate => se activeaz. infidel supravieuirea bacteriilor modificate morfologic i funcional
2 enzime complementare
E de moficare => metilarea nucleotidelor Endonucleaze de restrictie: taie materialul nerecunoscut
Gena insulinei umaneHuman insulin gene Gena hormonului de crestere Prepararea antigenelor
Metilarea
Marcarea catenei parentale Gruparile metil adougate dupa replicare
Endonucleazele de restrictie
Taie ADN-ul in fragmente Actiune site-specifica fiecarei endonucleaze in
parte
Molecule santinela => distrug ADN (ex. Viral) ADN-ul metilat este rezistent la restrictie
Iniierea transcrierii:
ARN polimeraza, recunoaterea promoterului: ataeaz, despiralizeaz ADN. Alungirea m ARN-ului: copiat o singur caten a ADN-ului: catena pozitiv sau catena sens
la distan fa de genele structurale nu face parte din operon, dar codific proteina reglatoare
Reglai prin mecanisme de control pozitiv i negativ. Biosinteza protein - enzimelor la bacterii este reglat prin:
inducie, represie.
Operon model
Francois Jacob and Jacques Monod
Structure of a typical operon. Image from Purves et al., Life: The Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com)
Operonul lactozei
Gene structurale
-Galactozidaza ( Gal => Glu + Lac -Galactozid permeaza (transport activ Lac) -Galactozid transacetilaza
Operonul lactozei
Gena reglatoare => proteina reglatoare
Allosterica Locus activ
recunoaste secvente semnal Interactioneaza cu ADN
Operonul lactozei
Operonul lactozei
Control pozitiv prin proteina CAP
Dependenta de cAMP fenomenul de diauxie Monod Glu represie catabolica operon Lac http://www.youtube.com/watch?v=T9Wszg7F hxE
promoter operator
Operonul Triptofanului
Control negativ
Nu Trp => represorul nu represeaza operatorul => operatorul transcrie genele structurale => se sintetizeaza Trp Trp in mediu = co-repressor Trp legat de represor => modificare conformatie Se leaga de operator Impiedica functionarea ARN polimerazei => stop
sinteza
Operonul Triptofanului
Control prin atenuare = atenuarea
transcrierii in functie de cantitatea de Trp din mediu <iframe width="420" height="315" src="http://www.youtube.com/embed/SiO AQ-VjQQY" frameborder="0" allowfullscreen></iframe>
GENETIC BACTERIAN II
Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian Variabilitatea Rolul materialulul genetic extracromozomial
Mutaia Transfer de material genetic
Planul cursului
VARIABILITATEA
Mutatia Definitie, Proprietati Mecanism molecular Tipuri de mutatii Tipuri de mutante Soarta mutantelor in natura
Variabilitatea
= modificare caractere fenotipice
microorganisme
deosebesc descendenii de parental descendenii ntre ei. st la baza evoluiei se produce prin modificri n genotip, la nivel molecular.
MUTAIA definitie
modificri n secvena de nucleotide cromozomul bacterian, plasmide. spontan brusc transmisibil la descendeni
Rezultatul: Mutant
MUTAIA proprietati
Rata mutaiei: o celul din 1 milion - 10 milioane
Constanta: specie, caracter Probabilitatea 2 mutaii concomitente: 10-12 pana la 10-14, imposibil - ordinul de multiplicare a bacteriilor este de 109. Frecventa Proportia de mutantii din populatie F (rata, viteza mx, etapa multiplicarii)
Momentul e important !
Tipuri de mutatii
Criterii de clasificare
Modificarile la nivelul genotipului mecanismele moleculare ale mutatiei Efectul asupra secventei de nucleotide Efectul asupra polipeptidului codificat Efectul asupra fenotipului
Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei
Substitutii de baze azotate; Deletii de baze azotate Aditii de baze azotate Inversii de baze azotate Cauza:
Cel putin 2 bp isi schimba pozitia cu 180. defecte de replicare, reparatii insuficiente/incorecte
Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei
Substitutia tranzitie,
transversion Datorata
Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei - amplitudine
punctiforme, extinse Punctiforme predominant
Substitutie micro-deletii micro-aditii Afectata o pb,
Exinse,
TIPURI DE MUTAII
TIPURI DE MUTAII
initial : AUGUUUCAUAGUGGU
AUG N Formil Metionine UUU Fenil Alanine CAU Histidine Microdeletie: C AGU Serine GGU Glycine
modificata: AUGUUUAUAGUGGUG;
AUG N Formyl Methionine UUU Phenyl Alanine AUA Isoleucine GUG Valine
TIPURI DE MUTAII
2. Mutaii napoi
TIPURI DE MUTANTE
Mutante morfologice Mutante de cultur Mutante metabolice Mutante antigenice Mutante de patogenitate: Mutante de rezisten la antibiotice Mutante de rezisten la bacteriofagi litici Mutante duble: bacterii acapsulate devin nepatogene Mutante tcute (silenioase) Mutante condiionat letale:
TIPURI DE MUTANTE
Mutante de patogenitate:
patogenitate crescut, care se rspndesc n populaie patogenitate sczut, folosite la prepararea vaccinurilor.
TIPURI DE MUTANTE
Mutante condiionat letale:
ex. mutantele termo-sensibile, ale virusurilor gripale, folosite pentru prepararea vaccinului antigripal
Proteina - AA schimbat functioneaza normal la 32C dar nu la 37C
(alterarea configuratiei la T crescuta).
vaccin experimental
37C => cannot infect the lungs and cause pneumonia, but 32C (nose) replicate and induce immunity
TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice prin modificarea :
proteinei de transport a antibioticului n bacterie, a intei de aciune; a afinitii enzimei de inactivare a AB: ex. modificarea lactamazelor (penicilinaze, cefalosporinaze), care inactiveaz lactaminele conduce la dobndirea rezistenei bacteriilor la lactamine (peniciline, cefalosporine); modificri cantitative: ex. lactamazele devin din inductibile, constitutive.
TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice
TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice
Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian
Variabilitatea
Mutaia
Planul cursului
Conjugare
Plasmide
Transformarea Transductie
ADN liber Bacteriofagi Transpozoni = elemente genetice mobile (TGE)
Transpozitie
CONJUGAREA BACTERIANA
cromozomial) ntre bacterii donatoare (D) i receptoare (R) prin: pili de sex G(-) feromoni G(+) Plasmide
minicromozomi
Plasmide
Gene de control a replicrii proprii Gene de interaciune cu alte molecule de ADN Sistem genetic de fertilitate sau de transfer
plasmide conjugante: au operonul Tra plasmide neconjugante nu au operon Tra plasmide episomale: capabile s existe autonom i/sau integrat. recombinare situs specific
Plasmide
criptice,
nu codific caracter bacterian, intervin n transfer de material genetic
Episomale, criptice Recombinare omoloaga se poate integra n cromozomul bacterian rar o bacterie din 105 bacterii F+. Rezult o bacterie Hfr
CONJUGAREA BACTERIANA
se transmit epidemic n populaiile bacteriene. pe vertical pe orizontal - conjugare bacterian, ntre specii / genuri diferite: ex. de la bacil coli la bacil dizenteric Conjugarea R+-R mecanismul primordial de dobndire a rezistenei fa de antibiotice, la Gram negative rezistena n bloc fa de antibiotice Bacteriile multiplu rezistente la antibiotice se selecteaz - mediul spitalicesc
Plasmide
Plasmidele col Bacteriocinele
gene pentru sinteza de colicine - bacteriocine proteine de tip antibiotic B.productoare sunt imune meninerea microbiocenozelor normale ale organismului
feromoni de sex
produsi de bacterii receptoare Structura chimica - peptidic Efect afrodisiac Produsi de bacteriile donatoare
proteine de ataare
Transformarea
transfer de ADN liber natural
de la o bacterie donatoare (D)- exogenot la o bacterie receptoare (R) - endogenot autoliza bacteriilor extracie chimic
artificial
Transformarea
Transformarea
Proteinele rec. A
gsirea zonei de omologie ntre exo i endogenot, ruperea n anumite poziii i reunirea catenelor, endogenotul primete de la exogenot gen activ
pentru capsul
Consecin: integrarea
Transformarea
starea de competen
accept fragmentul de ADN, Tranzitorie 5-15 minute alterez suprafaa bacteriei receptoare
protein de competen
Etapele transformrii
Absorbia
fragmentului de ADN pe suprafaa celulei receptoare ADN-ului n bacteria receptoare Taiere, unire ADn exogenot-endogenot recombinare omoloaga, doar ntre celule ale aceleai specii sau specii strns nrudite
TRANSDUCTIA
Structura:
Bacteriofagi
Form : lineari - cilindric filamentoi icosaedrici Bacteriofagii cu cap i coad ROL: Transducia
Conversia lizogen
TRANSDUCTIA
generalizat : prin bacteriofagi litici recombinare omoloag
orice fragment al cromozomului bacterian.
TRANSDUCIA
Conversia lizogena
proprieti fenotipice prin bacteriofag temperat transmisibil la descendeni Factorii de patogenitate - tox ine bacteriene :
toxina difteric - bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli (asemntoare toxinei
bacilului difteric shiga)
Recombinarea
Omoloaga Situs specifica Situs nespecifica (ilegitima)
Recombinarea
Omoloaga: noul ADN inlocuieste ADN-ul
existent
Depinde de proteina rec A Intre secvente identice sau foarte asemanatoare de ADN Mecanismul molecular: - Taiere - Replicare segmentara a ADN-ului - Unirea catenelor noi de cele vechi - Rezolvarea: reunirea capetelor prin ligaze Efect: detectabil / nedetectabil
Recombinare omoloaga
apare in transformare integrarea plasmidelor F n cromozomul
bacterian - conjugare cointegrarea plamidelor
Ex. Variatia antigenica pili gonococci
Rezultatul:
Secvente repetitive directe (repetitii directe), Secvente repetitive inversate (repetari inversate) => inversie
Recombinarea
Situs nespecifica (nelegitima)
Insertii / deletii ambele Pl + cz; Bf + cz
variabilitate a caracterelor
bacteriene, proprieti noi,
patogenitatea bacterian, modificarea structurii antigenice, dobndirea unor proprieti metabolice, rezistena la antibiotice/ali factori
antibacterieni
PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Codificate de bacteriofagii tem perai :
toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli
PATOGENITATE BACTERIAN
B. Adezine bacteriene - plasm ide , proprietatea de aderare specific de epitelii, mucoase, prin pili de aderare,
tulpinile enteropatogene ale bacilului coli, care ader prin pili de mucoasa duodenojejunal, tulpinile uropatogene ale bacilului coli, care ader de mucoasa urinar.
ex. invazia epiteliului colic de ctre bacilul dizenteric tulpini enteroinvazive de E. coli (EIEC).
TRANSPOZITIA
ELEMENTE GENETICE MOBILE
Planul cursului
TGE Definitie TGE clasificare Transpozitia Transpozoni
La capete au
ITR (inverted terminal repeats) Structura de atasare 5-9 bp
TGE - clasificare
1) Transpozoni (Tn) 2) Integroni
Zone de ADN care primesc fgm de ADN, gene
3) Retropozoni (retroni)
Fragmente mobilizabile de ADN Transcrise prin ARN Au ADN reverse transcriptaza. ARN-ADN hibrid
reverse transcriptase
Transpozitia
Mutarea TGE
Pe aceasi molecula ADN in pozitii diferite Intre molecule de ADN diferite Cromozom bacterian plasmida Cromozom bacterian bacteriofag
specifica transpozon inserat doar in zone specifice ale moleculei de ADN, Recombinare situs specifica.
Transpozoni (Tn):
3 clase
Transpozoni Clasa II
Copy & Paste =
transpozitie replicativa
E: cointegrat-rezolvaza
fuziunea a 2 plasmide, una dintre
acestea deinnd un transpozon Replicare 2 plasmide separate Fiecare are transpozon Cu gene de rezistenta
Plasmidele R = colectie
de Tn cu gene r
Capacitate mare de transpozitie replicativa. ~ 100 copii => mutatii cu frecventa ridicata
Inactivarea genei Activarea genei alaturate Deletii Insertii
Integroni
Secventa de ADN stabila
Pe plasmide Pe cromozom
achizitioneaza Tn (gene r)
Integreaza in casete gene de rezistenta pentru diferite tipuri de antibiotice Prin recombinare site-specifica 3 tipuri de integraze Casetele de gene cu gene de R la AB exista autonom in citoplasma.
Retronii (retropozoni)
secvente de ADN care codifica o revers transcriptaza HIV = structura de retropozon (si alte retrovirusuri) Asociate frecvent cu ADN profag Exista la multe bacterii
patogenitatea bacterian, modificarea structurii antigenice, dobndirea unor proprieti metabolice, rezistena la antibiotice/ali factori antibacterieni
PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Codificate de bacteriofagii tem perai :
toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli
PATOGENITATE BACTERIAN
B. Adezine bacteriene - plasm ide ,
ex. invazia epiteliului colic de ctre bacilul dizenteric tulpini enteroinvazive de E. coli (EIEC).
exist peste 60 plasmide cu gene de rezisten la lactamine; Plumb, mercur, argint, arsen - utilizate ca antiseptice,
Patogenitate bacterian
Dr. Carmen Costache
Patogenitate bacterian
Planul cursului Patogenitate definitie, proprietati Virulena DL 100%, DL 50% Relaia microorganism organismul uman Postulatele lui Koch/Postulate moleculare Microorganismele i patogeneza Evitarea mecanismelor de aprare a gazdei Producerea infeciei
Exotoxine Endotoxine Flora normal (microbiocenoza) Clasificarea patogenetica a microorganismelor
PATOGENITATE BACTERIAN = capacitatea unui microorganism de a produce o boal infecioas. Relatia: gen sau specie microbian specie animal o specie bacterian mbolnvire la o anumit specie Clasificare/nomenclatura infecii la animale - zoonoze; infecii umane - antroponoze
ex. gonoree, sifilis, febra tifoid
PATOGENITATE BACTERIAN
Virulena
apreciere cantitativ a patogenitii determinat n condiii de laborator efectul microorganismului sau a unui produs al acestuia
n vivo, pe animale de laborator sau n vitro, pe culturi de celule.
Se determin cantitatea cea mai mic de microorganism sau produs, care produce mbolnvire sau moarte pe sistemul de testare biologic. Doza letal (DL) 100% = cantitatea cea mai mic de microorganisme, sau de produs bacterian, capabil s cauzeze moartea tuturor animalelor inoculate.
n practic: DL 50% (diferene mari legate de nivelul rezistenei naturale a animalelor inoculate).
PATOGENITATE BACTERIAN
Virulena
PATOGENITATE BACTERIAN
Microorganismele patogene produc boal cnd ptrund n organismul uman (pathos = boal; gennan = a produce). Prezena /creterea microorganismelor NU determin ntotdeauna boal !!!!
Parazitism
obligatoriu facultativ
intracelular (ex. Chlamydia) in interiorul celulei, n afara celulei/ medii de cultur Origine:
cavitatea oral & tractul respirator superior (Nazofaringe) intestin piele vagin uretra
PATOGENITATE BACTERIAN
Speciile microbiene patogene pot fi: 1. bacterii cu patogenitate cert (patogeni primari): produc ntotdeauna boal la ptrunderea n organismul uman.
Salmonella tiphy - febra tifoida; Yersinia pestis (pesta, ciuma); Shigella spp. (dizenteria bacilar) Treponema pallidum (sifilis);
PATOGENITATE BACTERIAN
2. Conditionat patogeni
Staphylococcus, Candida spp.
PATOGENITATE BACTERIAN
Gazd:
leziuni preexistente: ex. persoane cu leziuni valvulare, la care Streptococi viridans pot ajunge n snge (ex. dup extracii dentare) i pot produce endocardit.
PATOGENITATE BACTERIAN
3. Microorganisme oportuniste: la persoanele imunocompetente => infecii asimptomatice sau cu evoluie clinic uoar la imunodeprimai => infecii grave, uneori letale.
PATOGENITATE BACTERIAN
PATOGENITATE BACTERIAN
1. 2. 3.
4.
Un microorganism = agent etiologic dac respect postulatele lui Koch. Agentul etiologic al unei boli infecioase trebuie s fie prezent n toate cazurile de boal. Agentul etiologic trebuie s poat fi izolat pe medii de cultur Agentul etiologic izolat i meninut n laborator n cultur pur trebuie s reproduc infecia prin inocularea la animale de experien, de la care trebuie s fie reizolat pe mediu de cultur. Trecerea printr-o infecie trebuie s conduc n organismul bolnav la instalarea unei imuniti specifice fa de agentul etiologic respectiv.
Postulate moleculare
Descriu factorii de virulen 1. Genele de virulen sau produii acestora trebuie s fie prezeni 2. Prezena genelor de virulen transform un non-patogen ntr-un patogen 3. Genele de virulen trebuie s fie exprimate n timpul infeciei 4. Anticorpii mpotriva produilor genelor de virulen sunt protectori.
Transmiterea:
Doza infectant 10-106 organisme
Microorganismele i patogeneza
Microorganismele i patogeneza
1. Modalitatea de transmitere:
fecal-oral (holera) interuman (tuberculoza) de la animale (rabia) cu ajutorul unor vectori
Insecte artropode (pureci capuse)
ciuma, boala Lyme
Microorganismele i patogeneza
bila pH-ul acid din stomac peristaltismul intestinal cilii tractului respirator IgA (anticorpi de la nivelul mucoaselor)
3. Evitare fagocitozei
Evitarea anticorpilor
1.Variaia antigenic
noi pili
2.IgA proteaze
Neisseria gonorrheae
3. Asemanatoare cu Ag proprii
capsula Streptococcus pyogenes = acid hialuronic, secretat i de esuturile gazdei
1. Exotoxine
necesit colonizare anterioar (holera) toxiinfecii alimentare chiar i n absena bacteriilor
Botulism toxina Staphylococcus aureus
3. Superantigene
Superantigene
Hiperstimuleaz sistemul imun
Se leag direct de antigenele de clas II MHC Activeaz limfocitele T
ENDOTOXINE
n peretele celular al G(-) LPZ Lipid A Cromozom Toxicitate scazut (MLD~100 ) febr, oc NU vaccin Stabile la 100C pentru 1 h Sepsis
EXOTOXINE
Secretate de unele G(+) i G(-) Polipeptide Plasmide/bacteriofagi Toxicitate nalt (MLD~ 1 g) Efecte variate Anticorpi = antitoxine anatoxine => vaccin Distruse la 60C (excepie enterotoxina stafilococic) Tetanos, botulism, difteria, etc.
ENDOTOXINE
Mecanismul de aciune - nespecific activare a diverselor celule (monocitelor, macrofagelor, limfocitelor, plachetelor sanguine i celulelor endoteliale) stimuleaz producerea citokinelor proinflamatorii
febr, prin aciunea pirogenului endogen ( IL1) modificri vasculare: vasodilataie, cretera permeabilitii vasculare n doze mari, endotoxina determin oc toxic,
acioneaz identic
ENDOTOXINE
PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Toxine bacteriene codificate de bacteriofagii temperai:
toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxine, la bacterii din genul Clostridium toxina Shiga-like, la bacilul coli (asemntoare toxinei b. dizenteric Shiga)
toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli
Exotoxine
Toxin difteric <= Corynebacterium diphteriae
bacteriofag temperat subuniti A-B
B legare A - enzim
Exotoxine
Toxina tetanic <= Clostridium tetani
Neurotoxin (tetanospasmina) Codat plasmidic
Exotoxine
toxina botulinic <= Clostridium botulinum
Neurotoxin Bacteriofag
Clostridium botulinum
Exotoxine
Bacillus anthracis => 3 exotoxine
factorul edem = adenilat ciclaz (AC) factorul letal ???? antigen protector
Streptococcus pyogenes
toxina eritrogenic
Responsibil de erupia din scarlatin
Bacteriofag
Exotoxine
E.coli enterotoxina termo-labil
Codat plasmidic activitate de adenilat-ciclaz => crete cAMP => inhibarea absorbiei Na Pierderea de electrolii (Cl) Diaree apoas Aceeai aciune a toxinelor V. cholerae, B. cerreus
Exotoxine
Bordetella pertussis Toxina pertusis inactiveaza inhibitorul adenilat-ciclazei => creste AC Cresterea cAMP => celulele devin foarte sensibile la stimuli => Tuse convulsiva
Antibiotice
Dr. Carmen Costache
Antibiotice
Planul cursului Definiie
Antibiotice vs Chimioterapice Antibiotice vs Antiseptice Spectru de aciune Tipuri de efect antibacterian
Combinatii de AB
Clasificare
Rezistena la antibiotice
Mecanisme de aciune
Antibiotice / chimioterapice
Antibioticele (AB): substane naturale, cu efect antibacterian, produse de microorganisme. Chimioterapicele (CH) : substane chimice cu efect antibacterian.
Datorit apariiei rezistenei bacteriene: => modificarea structurii antibioticelor de baz dintr-o familie, => derivaii semisintetici ai antibioticelor. AB/CH diferite dup
proveniena, mod de producere, dar au acelai efect.
Antibiotic Penicillin Cephalosporin Griseofulvin Bacitracin Polymyxin B Amphotericin B Erythromycin Neomycin Streptomycin Tetracycline Vancomycin Gentamicin Rifamycin
Organisms Penicillium chrysogenum Cephalosporium acremonium Penicillium griseofulvum Bacillus subtilis Bacillus polymyxa Streptomyces nodosus Streptomyces erythreus Streptomyces fradiae Streptomyces griseus Streptomyces rimosus Streptomyces orientalis Micromonospora purpurea Streptomyces mediterranei
Penicillium
Cephalosporium
Streptomyces griseus
Antibioterapia
origini: antibioza i toxicitatea selectiv. Antibioza Pasteur: cultur cu 2 microorganisme
producerea unei substane de ctre una din ele => oprete multiplicarea sau omoar cea de a 2-a bacterie.
Toxicitatea selectiv:
fixarea selectiv, specific a substanelor de corpul bacterian. nu se fixeaz i nu este toxic asupra altei bacterii sau asupra celulelor umane (eukariote)
Dezinfectante\Antiseptice
substane cu efect antibacterian, active n concentraii mari NU respect principiul toxicitii selective. se utilizeaz doar extern =>
ndeprtarea microorganismelor de pe suprafee
Indicele terapeutic
IT = Doza toxica/doza efectiva. Cu cat IT mai mare, cu atat AB este mai bun !
Spectrum Gram-positive bacteria Gram-positive bacteria Gram-positive bacteria Gram-negative bacteria Gram-negative bacteria Gram-positive negative cocci; some Gram negative bacilli Broad-spectrum Broad-spectrum Broad-spectrum Broad-spectrum Tuberculosis
Specru larg = active asupra majoritii genurilor, speciilor bacteriene: Spectru ultralarg: active asupra bacteriilor din mediul spitalicesc, multiplu rezistente la antibiotice.
Erythromycin
Efect antibacterian
Bacteriostatic: opresc multiplicarea
ex. Cicline (ex. Tetracicline), Cloramfenicol
Combinatii de AB
Sinergism Antagonism Indiferenta
Tipul infectiei
Inactivarea AB: pH, Tesut necrotic Rezistenta bacteriei la AB exprimata in vivo (inductie)
s ating inta de aciune s realizeze n bacterie o concentraie optim, care s inactiveze reversibil sau ireversibil inta de aciune.
Tratamentul cu antibiotice
Familii de antibiotice
AB care au
structur chimic, int de aciune mecanism de aciune comune.
Membrana citoplasmatic:
Polipeptide ciclice: ex. Colistin, polimixina B
Gramicidina, Tirociclina, Defensine, L - Antibiotice
Ribozomi: AB care inhib sinteza proteic 30 S: Aminoglicozide,Tetracicline, Spectinomicine 50 S: grupul MLS , Fenicoli
Macrolide, Lincosamide, Sinergistine Acid fusidic: factorul de elongare (EF)
Sulfonamide
Inhiba folat sintetaza: Sulfametoxazol
Asocierea Trimetoprim + Sulfametoxazol = Co-trim-oxazol (Biseptol) Sulfone: Dapsone PAS (acid paraaminosalicilic)
Familii de Antibiotice
Lactamine, grup Monobactam i gamma () Lactamine Aminoglicozide grup MLS: Macrolide, Lincosamide, Sinergistine Tetraclicline Fenicoli Quinolone Sulfamide Polipeptide ciclice, Glicopeptide Sulfamide Imidazoli Furani Rifamicine Tuberculostatice AB nencadrate n familii:
Fosfomicina, Cicloserina, Novobiocina, Acid fusidic,
Rezistena la -Lactamine
1. Modificarea permeabilitii bacteriene 2. Modificarea intei (PBP) 3. Inactivarea prin -lactamaze 1. Penicilinaze 2. Cefalosporinaze 3. BLSL 4. BLSE 4. Pompe de eflux
Familia -Lactaminelor Grup I: Derivai ai acidului 6-aminopenicilinic 1. Penami (peniciline) 2. Carbapenemi 3. Oxapenami (Clavani)
Familia -Lactamine
Grup II - Cefalosporine derivati de acid 7 aminocefalosporanic Primele izolate din tulpini de Cephalosporium (fung filamentos) Aceei aciune ca i Penicilinele Diferite generatii
Sulbactam, Tazobactam
Sulbactam + Ampicilin = Sultacilin (Unasyn) Sulbactam + Becampicilin = Sultamicillin; Tazobactam + Piperacilina = Tazocin
Familia -Lactamine
Generaia I Cefalexin, Cefalotin, Cefazolin Spectru ngust - E.coli, Klebsiella, Proteus i Gram + coci sensibili la Oxacilin.
Generaia a II-a Cefuroxim, Cefoxitin - Spectru extins bacterii Gram , unii anaerobi
Familia LACTAMINE
asemntoare lactaminelor. Reprezentani: Pirazolidinon,
BACITRACIN Spectru de aciune: ngust: doar pe bacteriile Gram pozitive. inta de aciune: Bactoprenolul - inhib reciclarea. Toxicitate: crescut => Administrare: local CICLOSERIN Spectru de aciune: Tuberculostatic
AB care acioneaz la nivelul peretelui celular bacterian Glicopeptide: Vancomicin (activa pe MRSA), Teicoplanin
Polimixine
AB izolate din Bacillus polymyxa Polimixin B distrug membrana citoplasmatic efect bactericid spectru ngust
AB care acioneaz la nivelul acizilor nucleici bacterieni Quinolone Imidazoli Furani Rifamicine
Quinolone
inhib sinteza ADN bacterian bactericid Bacterii Gram + i Gram Acid nalidixic, Ciprofloxacin, Norfloxacin, Ofloxacin
Aminoglicozide
bactericide spectru larg: bacili Gram negativi inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 30 S Streptomicin, Kanamicin, Gentamicin, Amikacin
Tetracicline spectru larg, bacteriostatic inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 30 S coci Gram + i , bacili Gram + Chlamydia, Mycoplasma i Rickettsia
Cloramfenicol spectru larg inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 50 S De elecie pentru febra tifoid (bacteriostatic pentru Salmonella) Bactericid: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae i Haemophilus influenzae Efecte adverse numeroase
Macrolide
inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 50 S Spectru larg coci Gram (+) i (), bacili Gram (+) Mycoplasma, Legionella, Chlamydia, Campylobacter , Helicobacter pacieni alergici la Penicilin Eritromicin, Azitromicin, Claritromicin
Lincosamine
Acioneaz pe subunitatea ribozomal 50 S Clindamicin, Lincomicin bacterii Gram + i Gram anaerobe: (Clostridium perfringens, Bacteroides fragilis)
Oxazolidine
Linezolid Spectru ngust DOAR bacterii G +,
VRE, MRSA
Subunitatea ribozomal 50 S
Sulfamide, Trimetoprim
Natural Dobndit
Dobndit: cnd o tulpin bacterian anterior sensibil la un anumit antibiotic devine rezistent Caracter de tulpin Ex. Staphylococcus aureus anterior sensibil la Penicilin, n prezent 90% dintre tulpinile de
Sa = tulpini rezistente la Penicilin
Mecanisme genetice
Rezistena apare indiferent de antibiotic rolul antibioticelor : selecie a tulpinilor rezistente. mecanisme cromozomiale
Mutaii => mutante rezistente => clon mutant
TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice
Mecanisme genetice
mecanisme extra-cromozomiale
Achiziia de material genetic extracromozomial Ex. plasmide R
Mecanisme
modificarea permeabilitii bacteriene modificarea transportului antibioticului in bacterie modificarea intei Enzime de inactivare a antibioticului Activarea pompelor de eflux Combinaii ale acestor mecanisme.
Antibiotic
Discovered
Resistance Identified
!!! Orice infectie bacteriana va fi tratata numai dupa identificarea bacteriei si efectuarea antibiogramei Metode:
Metoda dilutiilor Metoda difuzimetrica E-test
Antibiograma - Metoda diluiilor Citire si interpretare Mediu de cultura clar, limpede tulbure Se stabileste CMI (concentraia minim inhibitorie) CMI valoare diferit pentru fiecare bacterie i antibiotic
Cu o rigla se masoara diametrul zonei de inhibitie a dezvoltarii bacteriene (exprimat in mm) Se compara cu datele din tabelele standard Rezultatele se exprima:
Sensibil (S) Intermediar sensibil (IS) Rezistent (R)
Antibiograma E-testul
Combina avantajele cele doua metode Medii de cultura solide Benzi impregnate cu AB n concentraii descresctoare !!! Citire: locul n care zona de inhibitie intersecteaz banda = CMI
MICROORGANISM
ESEC TERAPEUTIC
ANTIBIOTIC/CHIMIOTERAPIC