Una va alternativa de inflamacin de la piel en psoriasis inducida por imiquimod, en ausencia de la sealizacin del receptor A IL-17

Dra. Adriana De La Torre

El Malki K et al.A n Alternative Pathway of Imiquimod-Induced Psoriasis-Like Skin Inflammation in the Absence of Interleukin-17 Receptor A Signaling. J Invest Dermatol 2013; 133: 441-451

 Enfermedad crnica inflamatoria ms comn en la piel Afecta 2-3 % poblacin mundial Compleja interaccin factores genticos y ambientales: estrs Artritis psorisica y comorbilidades: Sindrome metablico, aumento de la resistencia a la insulina y riesgo cardiovascular

Pptidos antimicrobianos endgenos: catelicidinas y defensinas sobreexpresados en psoriasis capaces de desencadenar autoinmunidad mediante activacin de clulas dendrticas plasmacitoides de la piel
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 Eje IL-23/IL-17 involucrado en psoriasis Clulas Th17 claves en la patognesis de psoriasis Piel de ratones: signos clnicos de psoriasis inyeccin intradrmica de IL-17

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Mimetiza en ratones modelo de psoriasis Ligando del receptor toll-like 7/8 Potente activador de la respuesta inmune En humanos predispuestos: lesiones eritematosas semejantes a la psoriasis En ratones: aplicacin tpica causa lesiones psoriasiformes, hiperqueratosis, acantosis y eritema Infiltracin de neutrfilos, clulas mononucleares, clulas TCD4, clulas Th17, clulas dendrticas Clulas T , tipo de linfocitos, en dermis humana, y epidermis murina, secreta IL17A, luego de la inyeccin de IL-23, morfologa dendrtica, Papel importante en el desarrollo de psoriasis
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1. Deteccin de IL-17RA

RNA obtenido del bazo de ratones extrado por Rneasy Mini kit: tipo salvaje (WT)C57BL/6 , controles IL-17RAFl, IL-17RAdel Transcriptasa reversa obteniendo DNAc DNA complementario amplificado con primers especficos para receptor A de IL-17A Glyceraldehydo-3-fosfato deshidrogenasa como referencia gnica 2. IMQ induce psoriasis: Ratones 8 semanas IL-17RAdel y controles (WT), afeitados y se aplica IMQ 5 % y crema placebo, en oreja (5 mg) y espalda (55 mg), por 4-9 das OD
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3. Inyecciones intradrmicas de IL-23: 20 l de bfer fosfato salino con 500 g de IL-23 recombinante en orejas por 8 das Se midi el grosor de la oreja antes y despus de la inyeccin a partir del da 0, diariamente A los 8 das sacrificados 4. PASI modificado en ratones: eritema, descamacin, grosor de la piel en psoriasis inducida por IMQ 5. Citometra de flujo: Clulas obtenidas de ganglios linfticos y bazo para medir CD11b, GR1, F4/80, CD3, CD4, receptor FITC de clulas T Clulas lavadas y permeabilizadas para medir intracelular: IL-17A, IL-6, IL-22, IFN-
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6. PCR-transcriptasa reversa RNA total aislado de la piel por mini kit Rneasy DNA complementario obtenido 7. Histologa: Inmunofluorescencia de criosecciones de 10 m Ac usados: F4/80, mieloperoxidasa, CD4 e IL-17A 8. Anlisis estadstico: T de Student no pareada de dos colas Anlisis unidireccional de varianza. Valores P<0.001, P<0.01, and P<0.05

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Investigar el impacto de la sealizacin de la IL-17A en psoriasis a travs de la generacin de ratones con deleccin del receptor A para IL-17A (IL-17RAdel) con aplicacin de IMQ

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a. Construccin de la cepa IL-17RAdel b. IL-17RAdel ratones (carril 3) no expresan IL-17RA ARNm.

Ratones IL-17RAdel muestran forma ms leve de psoriasis inducida por IMQ en comparacin con los ratones controles
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d. Puntuacin diaria de descamacin, engrosamiento cutneo y eritema en ambas cepas

Diferencias estadsticamente significativas en eritema y PASI acumulativo. Descamacin y engrosamiento cutneo luego del da 4 no haban diferencias estadsticamente significativas
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e. Cuantificacin microscpica (H/E) de hiperplasia epidrmica a los 5 das de IMQ f. Orejas de cepas WT e IL-17RAdel con 20 ml PBS o con 500 g IL23

Aumento significativo del grosor epidrmico de orejas al inyectar IL-23 en ratones WT e IL-17RAdel

No hay diferencias estadsticamente significativas en engrosamiento epidrmico en ambas cepas WT e IL-17RAdel tratadas con Imiquimod
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Invasin de granulocitos, neutrfilos y macrfagos a la piel tratada con imiquimod

CD11+: monocitos macrfagos GR1+: neutrfilos

Porcentaje de clulas adquiridas in vivo y nmero de clulas

Aumento de clulas CD11b+ en ratones IL-17RAdel y WT tratados con IMQ No hay diferencias estadsticamente significativas en cuanto al infiltrado de neutrfilos entre cepas IL-17RAdel y WT
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Inmunofluorescencia de criosecciones de la espalda de IL-17RAdel y ratones controles luego de 9 das de placebo e IMQ MPO: Neutrfilos

F4/80: Macrfagos

Invasin de granulocitos neutrfilos y monocitos (rojo) en piel de ratones IL-17RAdel y WT tratados con IMQ
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Expresin de citoquinas por PCR-RT en la espalda de ratones IL-17RAdel y ratones controles tratada con imiquimod

Aumento de IL-17A, disminucin de IL-23p19 y GM-CSF estadsticamente significativo en piel de ratones IL-17RAdel
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Expresin de IL-6

Aumento de la produccin de IL-6 por las clulas TCD4+ en la piel tratada con IMQ de ratones IL-17Adel y WT
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Expresin de IL-22

Aumento de produccin de IL-22 en clulas T de orejas tratadas con IMQ de ratones IL-17Adel y WT
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 Deleccin completa del receptor para IL-17A (IL-17RAdel ratones) + IMQ desencadena ms lentamente psoriasis, y menos severa Sin embargo psoriasis puede desarrollarse sin sealizacin de IL-17 cantidades elevadas de citoquinas: IL-6, IL-22, y la quimioquina CXCL2, secretadas por clulas T y Modelo murino de Psoriasis-like inducida por IMQ Reproduce hallazgos clnicos de psoriasis humana Inmunolgicamente: microabscesos de neutrfilos y la infiltracin de clulas T y clulas Th17 (van der Fits et al., 2009)
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 Puntuacin PASI de ratones IL-17RAdel es menor en comparacin con grupo control al tratarlos con IMQ, a pesar de no existir diferencias en el engrosamiento cutneo entre ambas cepas Kelly et al. (2005), infiltrado macrofgico en ratones IL-17RA KO infectados con Toxoplasma gondii era menor pero no abolido totalmente Concuerda con hallazgos de este estudio, leve psoriasis en ratones IL-17RAdel con migracin de neutrfilos y macrfagos al sitio de la inflamacin

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 En ausencia de sealizacin IL-17, otras citoquinas secretadas por clulas T y clulas TH17, como IL-6 e IL-22 IL-6 induce la activacin de neutrfilos in vivo/ in vitro IL-6 aumenta proliferacin de queratinocitos, diferenciacin de monocitos a macrfagos y contribuye al reclutamiento de neutrfilos Aumento IL-6 en piel de ratones IL-17RAdel en comparacin con ratones WT(controles) + IMQ apoya IL6 en el desarrollo de la enfermedad en ausencia de sealizacin IL-17
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 En pacientes con psoriasis, aumento de clulas T en la piel afectada, producen grandes cantidades de IL-17A IL-23 estimula a clulas T promueven la inflamacin secretando IL-17, y tambin producen IL-22 IL-22 acta sobre los queratinocitos: activacin y la hiperproliferacin. Queratinocitos activados producen citocinas proinflamatorias, quimiocinas, y tambin pptidos antimicrobianos, capaces de reclutar clulas inmunes en la piel inflamada

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 Opciones teraputicas para psoriasis: Anti IL-6R (Tocilizumab) anti IL-12/IL-23 (Ustekinumab) Anticuerpo monoclonal contra IL-17A (Secukinumab)

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 Aplicacin tpica de imiquimod en piel de ratones induce inflamacin con hallazgos encontrados en psoriasis Inflamacin inducida por Imiquimod aparece en ausencia de la sealizacin IL-17 Adems del clsico eje IL-23/IL-17, existen otras vas eficientes para reclutamiento de neutrfilos e inflamacin, activadas en ausencia de IL-17 Desarrollo de frmacos antipsorisicos dirigidos a la va de sealizacin IL-17, IL-23, IL-6

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