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RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES EN MEDIOS LIQUIDOS:
TECNICA DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP).


Cátedra de Microbiología General- Facultad de Ciencias Exactas- UNLP.

En muchas ocasiones, ya sea por un bajo número de microorganismos en las muestras a
analizar, por hallarse presentes microorganismos muy invasivos que se diseminan en la superficie de
medios sólidos, o por poseer la muestra microorganismos que no desarrollen en medios sólidos , se
hace necesario realizar recuentos en medios líquidos. La técnica empleada se denomina número más
probable (NMP) y tiene su fundamento matemático en las distribuciones de Poisson y binomial.

Fundamento matemático.

Para la aplicación del método deben cumplirse dos condiciones: que los microorganismos
estén distribuidos al azar y que la presencia de un solo microorganismo viable en el volumen
inoculado, dé lugar a desarrollo visible luego de la incubación.
Supongamos que de una muestra que posee "δ" microorganismos viables por ml se extrae una
alícuota de "v" ml, se inocula en un medio líquido apropiado y se incuba, el medio presentará
desarrollo visible si en el volumen "v" había al menos un microorganismo viable. La probabilidad de
que el medio no presente desarrollo al cabo de la incubación (p(0)) será igual a la probabilidad de
que en la alícuota no haya ningún microorganismo viable. Utilizando la distribución de Poisson
tendremos que:

(I)


Obviamente, cuanto mayor sea δ, menor será la probabilidad de que la alícuota no contenga
ningún microorganismo viable. Si tenemos que v = 1 ml y δ = 1 microorganismo viable/ml entonces
p(0)=exp(-1)= 0,37 pero con δ = 10 microorganismos viables/ml se obtendrá p(0)= 4,5 x 10
-5
.
Si se inocula una serie de 5 tubos con 1 ml de una muestra que contenga 1 microorganismo
viable/ml se tiene p(0)= 0,37 y, por lo tanto es de esperar que de los cinco tubos inoculados, 2 no
presenten desarrollo (5 x 0,37 ~ 2).
La probabilidad de obtener "s" tubos sin desarrollo sobre "n" tubos totales inoculados con un
volumen "v" de una muestra con δ microorganismos viables/ml, puede ser calculada utilizando la
distribución binomial:




(II)


p(0)=e
-v.δ

P
\
|
.
|
n
s
=
n!
s!.(n-s)!
.e
-δ.v.s
.(1-e
-δ.v
)
n-s


2
La función II presenta un máximo. El valor de δ para el cual la probabilidad es máxima se
denomina número más probable. Este valor representa el número de microorganismos que con más
probabilidad dará la combinación de tubos positivos y negativos obtenida.
El valor de δ no podría calcularse si todos los tubos resultaran positivos o negativos. Por ese
motivo en la práctica se inoculan distintas series de tubos con diferentes cantidades de muestra o
diluciones. Para cada serie habrá una ecuación como la II, y la probabilidad de obtener las
combinaciones de tubos positivos y negativos de todas las series será:

(III)





Como se muestra en la figura 1, la ecuación III también presenta un máximo y el δ
correspondiente a ese máximo será el NMP.


0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,00 10,00 20,00 30,00
microorganismos/ml
p
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d


Figura 1: Probabilidad, según la distribución binomial, de obtener un resultado 5 2 0 (tubos
positivos) para un ensayo donde se inoculen 3 series de 5 tubos cada una utilizando volúmenes de 1,
0.1 y 0.01 ml.

Para hallar el NMP, debe derivarse la ecuación III con respecto a δ, e igualar a cero la función
resultante. La ecuación IV muestra el resultado de la derivación:


(IV)


i i i i i
s n v s v
i i i
i
e e
s n s
n
i
k
P
÷ ÷ ÷
÷
÷
=
=
[
) 1 .( .
)! ( !
!
1
. . . o o

0 .
) 1 (
. ). (
.
.
1
= ÷
÷
÷
=
÷
÷
=
¿ i i v
v
i i i
k
i
v s
e
e v s n
F
i
i
o
o


3



En la figura 2 se ha representado gráficamente la función correspondiente a la ecuación IV. El
valor del número de microorganismos, para el cual F se hace 0 es el número más probable.















Figura 2: Gráfico de F (ecuación IV) en función del número de microorganismos por ml (δ) para un
ensayo donde se obtuvo un resultado 5 2 0 (tubos positivos), inoculando 1, 0.1 y 0.01 ml de muestra
respectivamente.

Nótese que no puede despejarse δ de la ecuación IV, por lo cual debe recurrirse a algún
método para resolver ecuaciones no explícitas. Es por esto, que diversos autores han confeccionado
tablas donde se hallan los valores de NMP para distintas combinaciones de tubos positivos y
negativos. En las tablas se encuentra el número de tubos positivos aunque, como se mostró, los
cálculos se realizan a partir de los tubos negativos.
Queda claro que para utilizar las tablas debe emplearse la misma combinación de volúmenes
y número de tubos que figura en las mismas. Si se utiliza una técnica diferente, debe resolverse la
ecuación IV. En la tabla 1 se muestran los valores de NMP para distintos resultados obtenidos
utilizando una técnica particular.








Tabla 1: Valores de NMP para un ensayo con tres cantidades de muestra. n1=1, n2=5, n3=5; v1=45
ml, v2=10 ml, v3=1ml.
-1
0
1
2
3
4
5
0,00 10,00 20,00 30,00
microorganismos/ ml
d
e
r
i
v
a
d
a


4


Tubos positivos NMP/ml
---------------------------------------------------------
1 0 0 0.012
1 1 0 0.029
1 2 0 0.050
1 2 1 0.071
1 3 0 0.081
1 3 1 0.11
1 4 0 0.13
1 4 1 0.17
1 4 2 0.22
1 5 0 0.24
1 5 1 0.35
1 5 2 0.54
1 5 3 0.92
1 5 4 1.61
------------------------------------------------------



5

BIBLIOGRAFIA

1-Meynell, G. G. y Meynell E. 1969. Aspectos cuantitativos de los experimentos microbiológicos.
Capítulo 6 en Bacteriología experimental. Editorial Omega, Barcelona.

2-Guinea, J.; Sancho, J. y Parés, R. 1979. Enumeración viable por el método del NMP. Capítulo 6 en
Análisis microbiológico de aguas. Aspectos aplicados. Editorial Omega, Barcelona.

3-Cochran, W. G. 1950. Estimation of bacterial densities by means of the "most probable number".
Biometrics 8: 370-379.

4-Best, D. J. 1990. Optimal determination of most probable numbers. Int. J. Food Microbiol. 11:
159-166.

5-Best, D. J. and Rayner, J. C. W. 1985. A comparison of MPN and Fisher- Yates estimators for the
density of organisms. 27: 167-172.



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