P. 1
Ląstelės biofizikos seminaras

Ląstelės biofizikos seminaras

|Views: 16|Likes:

More info:

Published by: Vykinta Parčiauskaitė on Mar 06, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PPTX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

03/06/2013

pdf

text

original

1. Ląstelės tūrio vaidmuo molekulinėje ir ląstelės biologijoje 2.

Ar cholesterolis nuslopina membranų su lipidiniais plaustais suardymą kurį sukelia antimikrobiniai peptidai?

2013.02.18

1

Ląstelės tūrio vaidmuo molekulinėje ir ląstelės biologijoje
Roles of cell volume in molecular and cellular biology
Jean-Marc Dubois, Beatrice Rouzaire-Dubois
2

• K+ir Cl- kanalai, kartu su kitais jonais ir molekulėmis (pvz. ATP ir Ca2+) - pagrindiniai veiksniai reguliuojantys ląstelės tūrį • Ląstelės tūris yra atsakingas dėl kai kurių ląstelėje vykstančių procesų per:
membranos įtempimą o intraląstelinių molekulių koncentraciją
o 1 pav. Žmogaus gliomos ląstelės
3

Jonų kanalų aktyvacijoje ir nešiklių aktyvume 7. Hormonų ir neuromediatorių išskyrime 5. Metabolizme 4 . Proliferacijoje 2.Kokiuose ląstelės procesuose yra svarbus jos tūris? 1. Genų ekspresijoje 6. Apoptozėje 3. Migracijoje 4.

: DNR sintezę ir mitozę sukelia depoliarizacija • Užblokavus K+ kanalus mitogenezė ir ląstelės proliferacija nuslopinama 2 pav. Ląstelės dalijimasis 5 .Proliferacija • Vykstant ląstelės ciklui ląstelės padvigubina savo turį • 1970m.

o proliferacijos inhibicija vis tiek vyksta 3. Priklausant nuo ląstelės tipo depoliarizacija gali veikti mitozę skirtingai 6 . Hipotezė • Sumažėja ląstelės elektrocheminis gradientas.1. K+ kanalų blokavimas ne visada depoliarizuoja ląstelę. Netinka vėžinėms ląstelėms – jos nejautrios ekstraląstelinio kalcio koncentracijai 2. todėl mažiau Ca2+ pereina į ląstelę • Nepaaiškina iki galo K+ kanalų įtakos: 1.

Ląstelės proliferacijos greičio priklausomybė nuo ląstelės tūrio (žiurkės gliomos ląstelės) 7 . macromolecular crowding) 3 pav. kurie įtraukti į ląstelės ciklo eigą.2. Hipotezė • Baltymų. aktyvumas priklauso nuo juos supančio vandens koncentracijos • Kai mažai vandens (mažas ląstelės tūris) – didelės makromolekulių koncentracijos keičia kitų molekulių esančių ląstelėje savybes (reiškinys vad.

K+ ir vandens praradimo. • Vyksta citoplazmos kondencacija – ji būtina. kad apoptozė įvyktų 4 pav. tačiau vien to neužtenka. Apoptozės eiga Jurkat lastelėse (T limfocitų linija skirta studijuoti leukemiją) 8 .Apoptozė • DNR fragmentacija • Mitochondrijos suardymas • Apoptozinis tūrio sumažėjimas dėl Cl-.

išskyrimą. Tai sukelia K+ ir Cl. Ląstelės formos pasikeitimo ir tai lemiančių medžiagų judėjimo schema 9 . o vandens prarandama.Migracija • Vėžinės ląstelės intensyviai migruoja • Gliomos ląstelės: izotoninėmis sąlygomis keičiantis ląstelės tūriui ir formai intraląstelinio Ca2+ pagausėja. • Kryptingi judesiai budingi visoms ląstelėms: o Ca2+ patenka per mechaniškai aktyvuojamus katijonų kanalus. regulatory volume increase) 5 pav. centrinę adheziją (ang. focal adhesion) ir ląsteles migraciją • Normalios ląstelės palaiko tūrio didėjimo kontrolę (ang. įvyksta Ca2+ sąlygotas Ca2+ jonų išskyrimas ir susikaupia mikrodomenuose o Tai indukuoja citoskeleto dinaminius pokyčius.

Egzokrininė kasos ląstelė. sukeltas ląstelės išsipūtimas. vaizdas gautas skanuojančiu elekroniniu mikroskopu 10 .Hormonų išskyrimas • Hipoosmotinio streso arba izoosmoliarinės terpės. indukuoja peptidinių hormonų ir fermentų išsiskyrimą • Priežastis: biofizikinis efektas sekrecijos pūslelėms 6 pav. kurioje yra skvarbios molekulės.

Neuromediatorių išskyrimas • Miniature end plate potentials (MEPP) – mažos depoliarizacijos posinaptinėje terminalėje dėl vienos pūslelės išskirimo į sinapsinį plyšį • MEPP dažniu matuojamas nervo terminalės toniškumo efektas • Hypertoniniai tirpalai padidina fMEPP. Šis efektas laikinas. Potencialai raumens skaiduloje 11 . hipotoniniai – atvirkščiai. 7 pav.

Genų ekspresija Hypertoniškumas Ląstelės susitraukimas TonEBP ekspresija NaCl ir osmolitų kaupimas Tūrio didėjimo kontrolė 12 .

K+/H+ keitiklis (ang. 13 . exchanger). o po to netikėtą ilgai trunkantį išsipūtimą. Na+/H+ keitiklis .kotransporteris. Na+-K +-2Cl. kad tai dėl dėl TonEBP aktyvacijos. Manoma.Jonų kanalų ir nešiklių aktyvacija • Tūrio aktyvuojami: o nešikliai: K+-Cl. Ca2+/Na+ keitiklis.kotransporteris o Kanalai: K+ ir Cl- • Vanduo patekęs su osmosu reguliuojamas akvaporinais • Palaiko ląstelės tūrį pastovų ir reguliuoja balansą tarp ląstelės proliferacijos ir apoptozės • Chroniškas hypertoniškumas pirmiausia sukelia greitą ląstelės susitraukimą.

Metabolizmas • Astrocitų išsiputimas stimuliuoja glikogeno sintezę • Gliomos ląstelėse osmoliškumas paveikia intraląstelinį nukleozidų trifosfatų lygį.o jiems artimos aplinkos užpildymas (ang.neuronai 14 . molecular crowding) įtakoja jų aktyvumą 8 pav. riebiųjų rūgščių sintezės greitį ir citoplazmos pH • Specifinė lipidų sudėtis membranoje gali pakeisti jonų transporto baltymų funkcijas. Žalia – astrocitai. raudona .

K+ ir Clkanalai Jonų kanalų ir nešiklių aktyvacija Proliferacija Hormonų ir neuromediatorių išskyrimas Ląstelės tūris Metabolizmas Migracija Genų ekspresija Apoptozė 15 .Na+.

16 .

Ayyalusamy Ramamoorthy 17 . Brender. Michele F.Ar cholesterolis nuslopina membranų su lipidiniais plaustais suardymą kurį sukelia antimikrobiniai peptidai? Does cholesterol suppress the antimicrobial peptide induced disruption of lipid raft containing membranes? Austin J. Sciacca.M. Jeffrey R. McHenry.

stipriai katijoniški.Antimikrobiniai peptidai (AMP) • Maži. amfipatiniai peptidai žinomi dėl jų lizinių savybių ląstelių membranoms • Veikia selektyviai • Labiau renkasi bakterijų membranas. (B) tanatinas. (E) magaininas-2. (D) triušio kepenų defensinas-1. (C) polifemuzinas. (F) indolicidinas 18 . tačiau yra tokių kurie ardo ir eukrariotų 9 pav. AMP struktūrinės klasės: (A) žmogaus βdefensinas-2.

Jis padidina membranos standumą ir koheziją 10 pav. taip pat įtakoja AMP pasirinkimą. kuris pirmiausia randamas eukariotų membranose. DPPC ir cholesterolio kiekį 19 . Membranų fazių pasiskirstymas 25°C pagal DOPC.Membranų savybės • Bakterijų membranos sudarytos iš labiau rūgščių fosfolipidų ir yra labiau anijoninės • Eukariotų ląstelėse jie labiau sukoncentruoti vidinėje membranos pusėje • Cholesterolis.

Lo-Ld fazė • Tvarkingas skystos – netvarkinga skystos(angl. stipriai sumažina AMP poveikį 11 pav. kurioje yra cholesterolio. liquid ordered – liquid disordered (Lo-Ld)) fazės labai svarbi membranos peptidų organizacijai ir aktyvumui • Fazių separacija panaikina cholesterolio efektą nukreiptą prieš AMP sukeltą membranų pažeidimą • Lo fazėje membrana. Lo-Ld fazės skiriasi sudėtimi. lipidų uodegėlėlių tvarkingumu ir dvisluoksnio storumu 20 .

Medžiagos • Fosfatidilcholinai DOPC ir DPPC • • • • Cholesterolis Chloroformas ir metanolis Karboksifluorosceinas Peptidai 21 .

Large unimellar vescicles (LUV)) homogeniškas mišinys 6. Mišinys (60°C) nufiltruotas ir gautas didelių vienmembranių pūslelių (ang. Tirpiklis chloroformas išgarintas azoto dujomis. 3. Šaldymo-šildymo procedūra 5.Lipidinių pūslelių paruošimas 1. DPPC ir cholesterolio tirpalų pagaminti 16 skirtingų koncentracijų tirpalai 2. Iš DOPC. Matuota fluorescencija iškarto po sąveikos su AMP 900s (bangos ilgis 518nm) 22 . Sausos lipidų plėvelės hidratuotos su karboksifluoresceino dažais 4.

AMP projekcijos amino rūgščių sekos ir fizikiniai parametrai 23 .Tyrimo eiga • Išmatuotas keturių AMP efektas skirtingoms membranoms: o Su lipidų plaustais (Lo-Ld fazėmis) (DOPC/DPPC/Chol) o Skysto kristalo fazės (Lα) o Kietosios gardelės fazės (DOPC/Chol ir DPPC/Chol) • Parinkti AMP – selektyvumas plataus spektro. skirtingi veikimo mechanizmai 12 pav.

Rezultatai 24 .

Kai AMP suardo membraną. tai padidina fluorescenciją 25 . išskiriamas karboksifluoresceinas iš pūslelių (LUV).13 pav.

turintis sočią oktano rūgšties grandinę. MSI-594 (sintetinis MSI-78 ir bičių toksino melitino hibridas) o kietosios gardelės Lβ (DPPC LUV) – MSI-843 (lipopeptidas. AMP poveikis vienos fazės membranoms. kuriose nėra cholesterolio 26 .AMP membranos pasirinkimas gali būti selektyvus pagal fazę kai nėra cholesterolio • 3 iš 4 AMP linkę rinktis membraną pagal tam tikrą specifinę fazę: o skysto kristalo Lα (DOPC LUV) – MSI-78. todėl labiau hidrofobiškas) o MSI-367 rinkosi bet kurias vienos fazės sistemas 14 pav.

nes cholesterolis sudaro vandenilinius ryšius su fosfolipidais ir taip konkuruoja su AMP 15 pav. AMP poveikis vienos fazės membranoms.Membranose be lipidų plaustų cholesterolis sumažina AMP poveikį • DOPC membranose 20% cholesterolio koncentracija – slenkstis (kai <20% .L0+Lα fazė. didėjant cholesterolio kiekiui 27 . >20% tik L0) • L0 fazė daugeliu atžvilgiu tarpinė tarp skysto kristalo ir kietosios gardelės: o o o o dviluoksnio storiu riebiųjų rūgščiu tvarkingumu klampumu elastingumu • L0 fazės membrana atspariausia.

AMP poveikis membranoms turinčioms lipidų plaustelius nepriklauso nuo cholesterolio kiekio Membranos suardymas dėl AMP kuriose yra dvi Lo-Ld fazės reikšmingai nemažėja didėjant cholesterolio koncentracijai. AMP poveikis dviejų fazių Lo-Ld membranoms. keičiantis cholesterolio kiekiui 28 . lyginant su vienos fazės membranomis 16 pav.

Išvados Cholesterolio koncentracijos padidėjimas membranose. kurios turi skirtingas fazes reikšmingai nesumažina AMP aktyvumo. 29 . kaip kad homogeniškose lipidų sistemos.

Ačiū už dėmesį! 30 .

Soft Matter 2009. vol.R. Rouzaire-Dubois B. p. Biochim Biophys Acta 2009. Thomas Membrane heterogeneity . Prog Biophys Mol Biol 108(3):93-7(2012) Dubois JM. Brender. Sciacca. Biophys. 2. J. The Boltzmann equation in molecular biology. 99.J. Issues 2–32009. issue 17. p. A.. 1788.M. Ouanounou G.. Acta 2012. 5. M. Does cholesterol suppress the antimicrobial peptide induced disruption of lipid raft containing membranes? Biochim. Soft Matter. Dubois JM and Rouzaire-Dubois B: Roles of cell volume in molecular and cellular biology. McHenry. 3019–3024. Stefan.from lipid domains to curvature effects. Marsh D: Cholesterol-induced fluid membrane domains: a compendium of lipidraft ternary phase diagrams.F. 87-93. Schmidt. 1818. A. Semrau.Pagrindiniai šaltiniai: 1. Prog Biophys Mol Biol. Ramamoorthy.. 3174 31 . 2114-2123. vol.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->