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DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE KJELDAHL

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a. OBJETIVO: Determinar, mediante el método de Kjeldahl, el porcentaje de proteína presente en una muestra biológica. 2. FUNDAMENTO: El nitrógeno presente en los compuestos orgánicos se puede determinar mediante el método de Kjeldahl, en un proceso que comprende tres pasos: digestión, destilación y titulación. DIGESTIÓN: El nitrógeno presente en una muestra biológica se extrae al digerir la muestra con ácido sulfúrico concentrado, en presencia de un catalizador y con calentamiento fuerte. Este proceso se realiza en un balón Kjeldahl. El dióxido de carbono que se produce se evapora o se disuelve en la solución. N, C, H, O + H2S04 Muestra biológica catalizador calor > C02 + H20 + NH4HSO4

DESTILACIÓN: A la solución anterior se le adiciona, dentro de un destilador especial - denominado destilador Kjeldahl- hidróxido de sodio concentrado, con lo cual se neutraliza el ácido sulfúrico residual y el sulfato ácido de amonio (NH4HSO4) formado en la digestión se transforma en amoniaco: indicador NH4HSO4 + NaOH — > NH3 + Na2S04 + 2 H20 Amoniaco El amoniaco se destila y se recibe en una solución débilmente acida (con ácido bórico) que, además, contiene un indicador. Este indicador cambia de rosado, en medio ácido, a azul, en medio básico. El amoniaco con el agua forma hidróxido de amonio (NH4OH) que es alcalino y, por tanto, cambia el color del indicador y sirve para comprobar la presencia del amoniaco. TITULACIÓN: NH3 + HOH > NH4OH

El amoniaco liberado se puede titular con ácido clorhídrico o con otro ácido exactamente titulado:

NH4OH + HC1

» NH4CI + HjO

Debido a que el método de Kjeldahl es sencillo, bastante exacto» no requiere de un equipo sofisticado y los resultados son reproducibles, se utiliza comúnmente para Simultáneamente con el anterior es conveniente realizarbiológicas. A partirun blanco, en determinar el nitrógeno presente en muestras todo el proceso con del contenido de el nitrógeno se puede calcular el porcentajemi de agua destilada, cual la muestra biológica se reemplaza por 1 de proteína. El cálculo se basa en el hecho de que en una muestra animal o vegetal casi todo el nitrógeno presente se encuentra formando parte de las proteínas. En las proteínas el nitrógeno constituye

25 se obtiene la cantidad aproximada de proteína presente en una muestra dada.2 % en etanol) a. sangre.100 g de K2S04 y 1 g de Selenio) Acido sulfúrico concentrado Acido bórico al 4 % NaOH al 40 % HC1 0. haba. 3. DESTILACIÓN: Ponga a calentar el equipo de destilación. Una vez caliente. En caso de que queden adheridos. agregue lentamente hidróxido de sodio al 40 % hasta que el contenido del balón adquiera un tono café . limpio y seco. cebada. Coloque el balón en el digestor y caliente suavemente durante quince minutos para evaporar el agua. etc). o 1 mi de leche.aproximadamente el 16 por ciento en peso: Proteína = 100 « 6. Mantenga estas condiciones hasta que el contenido adquiera un tono verde amarillento (aproximadamente después de 60 -120 minutos) y deje enfriar el balón al aire. clara de huevo (la muestra trabajada para humedad y cenizas) Mezcla catalizadora. 1g de mezcla catalizadora y 5 ml de ácido sulfúrico concentrado.1 N Iindicador de Tashiro ( Este se prepara mezclando un volumen de rojo de metilo al 0. arveja. maiz. clara de huevo. Deposite el contenido en el balón de destilación.25 Nitrógeno 16 O sea que multiplicando la cantidad de nitrógeno obtenido por 6. con cinco volúmenes de verde de bromocresol al 0. Aumente la temperatura de tal forma que los vapores de ácido sulfúrico lleguen sólo hasta la mitad del cuello del balón. etc. maiz. ( 60 g de CuS04. agregue 200 mg de muestra biológica sólida (harina de fríjol. etc. ayúdelos a rodar hasta el fondo con una pequeña cantidad de agua destilada.) o 1 mi de muestra líquida (leche. MATERIALES Y REACTIVOS: 1 balón Kjeldahl de 250 mi digestor Kjeldahl destilador Kjeldahl 1 erlenmeyer de 125 mi 1 bureta Muestra biológica: harina de fríjol.2% en etanol. Hay diferentes formulaciones. Lave las paredes internas del balón Kjeldahl con unos 20 o 30 mi de agua destilada y agréguelo al balón de destilación. Procure que todos los reactivos lleguen al fondo del balón y no queden adheridos a las paredes. PROCEDIMIE NTO: DIGESTIÓN: En un balón Kjeldahl de 250 mi.

Compare este valor con el que se encuentra en la literatura. TITULACIÓN: El destilado recogido sobre el ácido bórico se titula con ácido clorhídrico 0. b. Se deja pasar vapor durante cinco minutos más. Para hallar el porcentaje de nitrógeno presente en la muestra se puede utilizar la siguiente fórmula (dedúzcala): % N = 1400 fVa .25 TRABAJO DE INVESTIGACIÓN.oscuro. realizando todas las partes del proceso que se realiza a la muestra. N /Pm Donde: Vm volumen de HCL. se cierra la llave de paso y se retira el erlenmeyer. se saca la punta del condensador de tal manera que quede por encima de la superficie del líquido. en mililitros. Blanco: Se trabajo un balón para digestión y en lugar de muestra se coloca el equivalente en agua. Consulte cinco alimentos con sus características nutricionales.1 N hasta obtener una coloración similar a la del ácido bórico original (rosado).Vh). En el extremo del condensador coloque un erlenmeyer de 125 mi con 20 ml de ácido bórico al 4 % y tres gotas de indicador de Tashiro. gastado en la titulación del blanco N = normalidad del ácido clorhídrico peso de la muestra. Se3 continúa el proceso hasta que la solución de ácido bórico vire completamente a azul. se deja pasar vapor tres minutos más. en miligramos P= porcentaje de proteína es igual a % N x 6. La punta del condensador debe estar bajo la superficie de la solución de ácido bórico. gastado en la titulación de la muestra Vb volumen de HC1. en militros. . RESULTADOS: Determine el porcentaje de proteína en la muestra biológica utilizada. justifique su respuesta. entre ellos tres de interés en su carrera.