Metabolismo y Fisiologa

Biologa Celular

Nutrientes
1- Fuente de energa luz qumica

2- Macronutrientes H K O Mg C Na N 95% Ca S Fe P 3- Micronutrientes (elementos traza) Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W 4- Factores de crecimiento Vitaminas Purinas y pirimidinas Aminocidos

Macronutrientes
Fuente de carbono - CO2 - Compuestos orgnicos Carbohidratos, azcares, protenas, aminocidos, lpidos, cidos grasos, glicerol NH4, NO3-, N2 Protenas, peptonas, aa, bases pricas y pirimdicas, urea Fosfatos Esteres del cido fosfrico Sulfuros y sulfatos Aminocidos sulfurados, vitaminas

Fuente de nitrgeno

- Inorgnica - Orgnica

Fuente de fsforo Fuente de azufre

- Inorgnica - Orgnica - Inorgnica - Orgnica

Tipos nutricionales

Fuente de energa

Fuente de C

Ejemplos

Cianobacterias, Luz CO2 bacterias Fotoauttrofos prpuras y verdes Compuestos Algunas Luz orgnicos bacterias Fotohetertrofos prpuras y verdes Compuestos Algunas Eubacterias y Quimioauttrofos o inorgnicos CO2 ej.: H2, NH3, muchas Archaea littrofos NO2-, H2S La mayora Quimiohetertrofos Compuestos Compuestos Eubacterias, orgnicos orgnicos algunas Archaea o hetertrofos

Condiciones para el crecimiento microbiano Medios de cultivo

Nutrientes
agua fuente de energa

Crecimiento
temperatura

fuentes de C, N, otros elementos

micronutrientes, factores de crecimiento

Condiciones de cultivo

pH
luz aireacin actividad de agua potencial redox

Factores de crecimiento
Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas

* aminocidos esenciales * vitaminas

ADN, ARN
sntesis proteica coenzimas

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los microorganismos en cultivo puro Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio slido Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de estras.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica
* lquidos
* slidos - solidificante: agar-agar, silico-gel * semi-slidos

Segn su composicin
* definidos o sintticos: composicin qumica conocida * no definidos o complejos: composicin qumica no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de carne, de levadura, de suelo, sangre

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya composicin permite el desarrollo de un grupo determinado Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl superior a la concentracin fisiolgica * diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l. Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Segn su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya composicin permite el desarrollo de un grupo determinado Ej.agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas, medios con NaCl superior a la concentracin fisiolgica * diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l. Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro

Cultivo en medio lquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formacin de velo o pelcula, o por sedimento.

Cultivo en medio slido

Puede ser en tubos o placas a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no daar el agar. b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. Tambin se llama siembra por picadura. c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estras o baado) o incorporada (mezclando el inculo con el agar semifundido)

Aislamiento
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una poblacin mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los microorganismos en cultivo puro Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra cuando el o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la muestra (suelo, alimentos), en medio slido Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin en la muestra, se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en medio lquido. Luego de varios pasajes se aisla por el mtodo de estras.

Cultivo puro
Las colonias se describen por examen macroscpico en funcin del tamao, la forma, el borde, la elevacin, la transparencia y el color. Esto resulta a veces muy til en la identificacin A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un examen microscpico que debe mostrar clulas razonablemente semejantes respecto al Gram y a la morfologa.

Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no selectivo por el mtodo de estras. Esto se conoce como reaislamiento.

Divisin celular: fisin binaria

Gemacin, ej. levaduras

Crecimiento de un microorganismo en medio de cultivo lquido

1- Fase de latencia 2- Fase exponencial 3- Fase estacionaria 4- Fase de muerte

Crecimiento en un volumen fijo de medio o cultivo cerrado (batch)

Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la siguiente cintica de crecimiento Fase lag - las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento bajo condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0 cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte) nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de divisin celular

Factores del ambiente

fsicos: temperatura, gases, pH, presin osmtica qumicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas biolgicos: otros microorganismos, micro y mesofauna, vegetacin, afectan las actividades microbianas

Los distintos factores actan simultneamente y resulta difcil el anlisis integrado de los efectos.

 Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15oC

organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada), bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados

Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos - rango: 0-35C, ptimo 20-30oC

Pseudomonas - crecen en el refrigerador

Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C

la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)

Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65oC

membrana contiene alto % de cidos grasos saturados enzimas estables al calor Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje

Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90oC

Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

Oxgeno
Clasificacin de los microorganismos segn el efecto del oxgeno: Aerobios obligados: requieren oxgeno (21% o ms) Ej. Bacillus, hongos, etc. microaeroflicos: lo requieren pero a niveles menores que el atmosfrico (5-10%) Ej. Azospirillum Anaerobios facultativos: no requieren oxgeno, pero el desarrollo es mejor con oxgeno. Ej. Levaduras, E. coli aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o presencia de oxgeno). Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp. . obligados: no toleran el oxgeno, muere en su presencia Ej. Methanobacterium, Clostridium

Cultivos en anaerobiosis
tubos con medio de cultivo llenos por completo. medios con sustancias que reaccionan con el oxgeno y lo excluyen. dispositivo especial (cmara anaerbica) cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada, centeno)

Otros gases

N2

componente principal de de la atmsfera (78%). Gas inerte: no es usado por la mayora de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO txico para la mayora de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4 CO2

liberado a la atmsfera por microorganismos metanognicos, gas con efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotrficas importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y anaerobios, fotosintticos o quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a niveles superiores a los atmsfericos, para ciertas sntesis

H2 poco usado, txico para la mayora de los microorganismos, brinda

energa a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP

pH

El pH es la acidez o alcalinidad de una solucin, medida por el log 1/(H+)

Clasificacin de los microorganismos segn su pH ptimo
Neutrfilo: pH ptimo 7 - Ej.: bacterias

patgenas humanas. Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de las archeobacterias y hongos. Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas ricas en carbonatos

Medios de cultivo
MEDIO SELECTIVO Y DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

Agar sangre
S. epidermidis en agar sangre

Agar sangre
HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

HEMLISIS COMPLETA

HEMLISIS PARCIAL

Pseudomonas aeruginosa Siembra en medio OF Metabolismo oxidativo

Prueba de la catalasa