You are on page 1of 28

14.

nedelja: Pitanja za ulazni test


1.

ta su imunodeficijencije i kako se dele? Koje su imunodeficijencije prouzrokovane poremeajima komponenti uroene imunosti (primeri)? Koje su imunodeficijencije prouzrokovane poremeajima T- i B-limfocita (primeri)? Kako se odreuje broj pojedinih populacija leukocita u perifernoj krvi? Kako biste u uzorku krvi pacijenta odredili broj, izdvojili i funkcionalno ispitali subpopulacije limfocita (B-elije, pomonike T-elije, citotoksine T-elije)?

2. 3. 4. 5.

6. 7. 8. 9.

ta je to protona citofluorimetrija i kakva je njena primena? Koji su osnovni markeri T-limfocita, B-limfocita i NK elija? Kako se indukuje i meri proliferacija T- i B-limfocita? Kako se odreuju ukupni imunoglobulini u perifernoj krvi, a kako specifini imunoglobulini za odreene antigene?

10. ta su to provokacioni testovi, kone probe rane i kasne preosetljivosti (primeri)?

Molimo vas da na sledei seminar donesete: 1. Popunjen indeks

ifra predmeta: IMUN Naziv nastavnog predmeta: Imunologija Godina: II Status predmeta: O ESPB: 3 Predavanja: 15 Vebe: 10 Ostalo: 20

Molimo vas da na sledei seminar donesete:


i 2. Popunjenu anketu o nastavi iz Imunologije koja se nalazi odtampana u Priruniku za nastavu iz Imunologije (poslednja strana) Molimo vas da date i komentare

Ispitivanja elija imunskog sistema

Ispitivanja elija imunskog sistema


Izdvajanje elija Odreivanje broja

Funkcionalna ispitivanja in vitro

Izdvajanje MN periferne krvi pomou gradijenta gustine

Krv

Mononuklearne elije periferne krvi

Limfoprep Gustina 1.077 g/ml

centrifugiranje

Eritrociti i Granulociti

Izdvajanje MN periferne krvi pomou gradijenta gustine

Krv

Mononuklearne elije periferne krvi centrifugiranje

Limfoprep Gustina 1.077 g/ml

Eritrociti i Granulociti

Razdvajanje elija pomou paramagnetnih kuglica MACS


Heterogena populacija elija inkubirana sa antitelima U magnetnom polju obeleene Nakon uklanjanja magnetnog obeleenim magnetnim esticama elije ostaju vezane za kolonu a polju obeleene elije se ispiraju se nanosi kolonu od eline neobeleene se ispiraju i na sakupljaju vune

Odreivanje broja elija


Na osnovu morfologije i bojenja
leukocitna formula iz komore i krvnog razmaza

Na osnovu veliine i granuliranosti


automatski brojai elija

Na osnovu specifinih povrinskih molekula


T-limfociti: CD3, CD4, CD8....

B-limfociti: Ig, CD19, CD20...


NK elije: CD16, CD56...

Protoni citofluorimetar FACS

Protona citofluorimetrija
Smea elija obeleenih fluorescentnim antitelima

Mlaz tenosti koji nosi fluorescentno obeleene elije

Zelena fotomultiplikatorska cev (PMT) Crvena PMT

Granuliranost Veliina

Protona citofluorimetrija
Smea elija obeleenih fluorescentnim antitelima

Mlaz tenosti koji nosi fluorescentno obeleene elije

Zelena fotomultiplikatorska cev (PMT) Crvena PMT Granuliranost Veliina

Histogramski prikaz

Dot plot prikaz

Protona citofluorimetrija (klinika primena)


Imunofenotipizacija (identifikacija i kvantitiranje populacija i subpopulacija limfocita) Karakterizacija elija kod limfoproliferativnih bolesti, tumora i imunodeficijencija Odreivanje produkcije reaktivnih oblika kiseonika i azota Odreivanje sadraja DNK (elijski ciklus)

Protona citofluorimetrija (istraivaka primena)

Identifikacija aktivacionih molekula (npr. povrinski aktivacioni markeri, intracelularni Ca++, fosforilacija intracelularnih proteina) Detekcija specifinih intracelularnih proteina (npr. citokina)
Detekcija i kvantitiranje apoptoze elija

Funkcionalna ispitivanja fagocita


Hemotaksa Adherencija

Ingestija Respiratorni prasak Intracelularno ubijanje

Funkcionalna ispitivanja NK elija


Citotoksinost Produkcija citokina

K 562

IFN- (ELISA)

Ispitivanje funkcija NK elija


Citotoksinost (oslobaanje
51Cr

K562)

Obeleavanje ciljnih elija sa 51Cr

NK elije sa obeleenim ciljnim

Ubijene elije oslobaaju 51Cr

Ispitivanje elija steene imunosti


(T i B-limfocita)
Odreivanje broja elija

Ispitivanje funkcionalnih svojstava


T-elija
(proliferacija, produkcija citokina, citotoksinost)
B-elija (proliferacija, produkcija antitela)

Ispitivanje funkcija T-limfocita


Proliferacija
Stimulacija: poliklonskim aktivatorima (mitogenima: PHA, ConA) antigenima

Meri se inkorporacijom 3H timidina u novosintetisanu DNK

Pacijent A.B. D.G.

medijum 43031 23084

ConA 43905389 1200227

Ispitivanje efektorskih funkcija B i T-limfocita


Produkcija antitela (B-limfociti)
(Nefelometrija, RID, ELISA)

Produkcija citokina (T-limfociti)


(ELISA)

Citotoksinost (CTL)
(Citotoksini test)

Nakon ovog seminara moete da odgovorite na sledea pitanja

Kako se izdvajaju elije imunskog sistema?


Izdvajanje na gustinskom gradijentu MACS Protona citofluorimetrija (FACS)

II

Kako se odreuju broj i fenotipske karakteristike elija imunskog sistema?


Diferencijalna leukocitna formula Protona citofluorimetrija (FACS)

III Kako se ispituju funkcije elija imunskog sistema in vitro?


Fagociti (hemotaksija, fagocitoza, respiratorni prasak, ubijanje) NK elije (citotoksinost, produkcija IFN- ) T-elije (proliferacija, citotoksinost, produkcija citokina) B-elije (proliferacija, produkcija antitela)

1. Izdvajanje elija iz krvi vri se na osnovu a. produkcija citokina i citotoksinost 2. Povrinski markeri T-limfocita su 3. Povrinski markeri B-limfocita su 4. Povrinski markeri NK elija su b. ELISA c. kod obolelih od hronine granulomatozne bolesti d. citotoksinim testom

5. Ubilaka aktivnost NK elija se odreuje


6. Respiratorni prasak fagocita je smanjen

e. razlike u gustini i povrinskim markerima


f. CD3 i CD4 ili CD8

7. Efektorske funkcije T-elija su


8. Za merenje nivoa produkcije citokina koristi se 9. Za merenje koliine antitela koriste se 10. Proliferacija T-limfocita se ispituje 1.__ e 2.__ f 3.__ g 4.__ j 5.__ d

g. membranski imunoglobulini, CD19, CD20


h. nefelometrija, RID, ELISA i. stimulacijom sa T-elijskim mitogenima j. CD16 i CD56 6.__ c 7.__ a 8.__ b 9.__ h 10.__ i

Sledea nedelja
Predavanje Sekundarne imunodeficijencije Seminar Prikaz klinikih sluajeva