南京医科大学附属南京第一医院

网织化血小板检测操作
程序

号:Sop-CL-FCM-011

Central Laboratory Of Nanjing First

期:2009-03-05

Hospital Affiliated To Nanjing

本:第一版

中心实验室

Medical University

第 1页

 共 2 页

一、目的:
保证流式细胞仪检测外周血网织化血小板计数的工作质量,旨在保证网织
化血小板计数检测正确的操作程序和控制检测结果的精确度。
二、修改程序:
本 标 准 操 作 程 序 的 改 动 , 可 由 任 一 使 用 本 SOP 的 工 作 人 员 提 出 , 并
报经下述人员批准签字:质量主管、授权人(科主任),方可改动。
三、适用范围:
外周血网织血小板检测。
四、 溯源:
美国 BD 公司 Retic-COUNT Reagent 产品说明书(CAT:349204)。
五、实验原理:
网织化血小板是新近从骨髓中释放入血液中的年轻的血小板。在它的内部含
有较多的残存 RNA,类似于尚未完全成熟的网织红细胞。TO 染料(噻唑橙)能通
过活细胞膜,与血小板中残存 RNA 结合。一旦 TO 染料与 RNA 结合,其荧光强度
增强 300 倍(绿色荧光),利用流式细胞仪可检出含 RNA 的网织化血小板的百
分率。
六、主要试剂:
1、Retic-COUNT Reagent (美国 BD Biosciences 公司;CAT:349204)
2、CD61-PE
七、实验操作:
1、标本采集:使用 EDTA-K2 抗凝真空采血管,抽取静脉血 2ml。

2、染色和固定细胞:
(1) 标本管编号 A,300g 离心 3min,制备富血小板血浆;另取流式专用

管一只 A1。
(2) A1 管加入 CD61-PE 10ul。
(3) A1 管中加入富血小板血浆 10Ul,混均。
(4) 置室温,避光孵育 15min。
(5) 加入 FACSLysing 溶血液 0.1ml,置室温,避光孵育 10min。
(6) 加入 Retic-COUNT Reagent 0.5ml,室温,避光 30min。

3、混匀后上机检测;仪器自动分析结果;打印实验报告。
八、参考值:
外周血网织血小板:0.92-3.98%
九、临床意义:
外周血液中血小板减少通常有三种原因:1、血小板破坏过多;2、血小
板生成障碍;血小板贮存池异常。如果是第一种情况,网织血小板增高,
如 ITP 等免疫病引起的血小板减少;如果是第二种情况,则网织血小板数
量减少,如再生障碍性贫血、脓毒血症引起骨髓增生减低。通过网织血小板
的检测,可发判断血小板减少的原因。
十、质量控制:
1、富血小板血浆中有少量红细胞不影响检测结果。
2、因 TO 与血小板有较多的非特异染色,因此,掌握 TO 浓度、染色时间、实
验温度是必要的。
3、网织血小板与成熟血小板没有明确的界线,做正常对照是必要的。
4、界定网织血小板的“MARK”,以 SSC-TO 较好。

授 权 人

质 量 主 管

操 作 人 员

生 效 日 期

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