Introduccion: La tcnica de blotting (transferencia) se basa en la transferencia de bandas de acidos nucleicos o protenas desde un gel hacia una membrana

de nitrocelulosa. Esto permite identificar La presencia de una banda por electroforesis La electroforesis permite la separacin ya sea de protena o acidos nucleicos en un gel. Cuando se trata de protenas se utiliza un gel de poliacrilamida mientras que para los acidos nucleicos uno de agarosa. Cuando lo que se intenta identificar es DNA, se denomina Southern Blot, para esto se utilizan molculas de DNA marcadas con radioactividad y que tengan una secuencia conocida y se identifican asi las bandas de gel que contienen secuencias complementarias a la muestra. Si se trata de RNA, se denomina Northern Blot, para esto se utilizan molculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida y se identifican tambin las bandas de gel que contengan las secuencias complementarias a la muestra. Desarrollo: Southern Blot: Este mtodo de biolgica molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja utiliza la tcnica de electroforesis en gel de agarosa para asi separar los fragmentos de ADN en razn de su longitud, esto luego es transferido a una membrana en la que se realiza la hibridacin de la sonda. Pasos: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Extraccion del ADN. Digestion del ADN. Electroforesis en gel de agarosa Ensayo Hibridacin con sonda radioactiva Autorradiografia Re-ensayo

Northern Blot: Empieza con la extraccin del RNA de un tejido homogenizado, el RNA mensajero entonces es aislado mediante una cromatografa. Estas muestras son entonces separadas por electroforesis en gel. Luego las muestras de RNA son separadas por tamao y transferidas a una membrana mediante capilaridad o transferencia al vacio. LA membrana de Nylon cargada positivamente es el medio mas comn que se utiliza en este tipo de mtodo, ya que los acidos nucleicos prestan una alta afinidad al estar cargados negativamente.

Luego de la transferencia el ARN es inmovilizado mediante la unin con enlaces covalentes que se forman con la membrana con la ayuda de luz ultravioleta o calor. Northern Blot reverso: Escribirlo

Diagramas:

Integrantes 5. 1. Generalidades 2. Northern blot 3. Southern Blot 4. Ventajas y desventajas 5. Apliaciones y conclusin. Aplicaciones: Tanto el Northern Blot como el Southern Blot son tiles para la identificacin de un patrn particular de expresin gentica ya sea en tejidos, rganos. Por lo tanto esta tcnica ha sido de gran ayuda en el campo de la medicina, el estudio de ciertas patologas en particular en el campo de la oncologa, ya que muestra los oncogenes de manera sobreexpresada y la desregularizacin de genes supresores tumorales al comparar el tejido con uno normal. Esta identificacin es til entonces para conocer las funciones de los genes, esto ya que luego de la separacin en cromatografa nos indica deleciones o errores en la transcripcin. Alterando la sonda es posible determinar que regin del RNA ha sido delecionada. Por otra parte es precuentemente utilizado en el mbito de la criminalstica.

Ventajas y desventajas: Estas tcnicas presentan la ventaja de detectar pequeos cambios en la expresin de genes que otras tcnicas como los microarrays no pueden detectar, se puede definir el tamao de la cadena de ARN, se pueden utilizar sondas con homologa parcial, medir el tamao y calidad del ARN antes de ser inmovilizado en la membrana y es posible mantenerla para posteriores estudios y reensayos. El problema reside es que es muy comn la degradacin de las muestras por RNAsas por contaminacin ambiental pero que puede ser evitada por esterilizacin de los materiales en uso y el uso de inhibidores de estas RNAsas

Conclusin