MICROBIOLOGIA APLICADA

Manual de Laboratorio

APENDICE “B”
PREPARACION DE COLORANTES

194

............... 2 g Etanol (95%)....................... 1 g Agua destilada.................MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio I....... TINCION SIMPLE...... a) Cristal violeta y oxalato de amonio............................... II..................... el 90%)............... (Reactivo de Hucker) Solución A: Cristal violeta (pureza del colorante de por lo menos. c) Azul de metileno........................................... Cristal violeta...... 100 mL Preparación: − Disolver el colorante en el agua...................... − Agregar el agua y filtrar............ 0..... 100 mL Preparación: − Disolver el colorante en alcohol........ a) Safranina. Azul de metileno.......... 100 mL Preparación: − Disolver el colorante en el agua.. Safranina...............5 g Agua destilada........................................ 3 mL Etanol de 96%. TINCION DE GRAM........ b) Cristal violeta.... 20 mL Agua destilada......... 20 mL 195 ...

. 300 mL Preparación: − − − − − Combinar el yodo y el yoduro de potasio con la ayuda de un mortero........................... Alcohol etílico (95%)........................................ d) Safranina.............................. Agregar agua suficiente para obtener un total de 300 mL... Almacenar la solución en una botella oscura y con tapón de vidrio.......... 0............. Agitar fuertemente.......... (Lugol) Yodo (químicamente puro)................... 80 mL − Mezclar cada uno de los solutos en su disolvente respectivo...............MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio Solución B: Oxalato de amonio........ 500 mL Acetona...... − Mezclar las dos soluciones y filtrar.... 1000 mL 196 ................... 0................. Safranina (pureza del colorante..8 g Agua destilada......... 1 g Yoduro de potasio... Lavar el contenido de éste con pequeñas alícuotas de agua destilada................25 g Alcohol etílico (95%)........... − Dejar la solución de oxalato de amonio en reposo durante una noche o calentar ligeramente hasta que se solubilice. c) Alcohol acetona....... b) Solución de yodo yodurado......... 2 g Agua destilada............ 10 mL Agua destilada.................... 90%)......... 300 mL Preparación: − Mezclar los ingredientes respectivos de cada combinación para su uso....................................

. − Guardar en frasco oscuro..... b) Safranina al 0.... (Método de Schaeffer y Fulton) a) Verde de malaquita al 5%.......5 g Agua destilada. Disolución acuosa saturada de AlK (SO4)2· 12H20 ó AlNH4 (SO4)2· 12H2O.. 0.. 5 g Agua destilada.................. 100 mL Preparación: − Disolver el colorante y filtrar...... Safranina......... Verde de malaquita.............. (Método de Leifson) Colorante de Leifson*... 40 mL Alcohol etílico al 95%. 20 mL Disolución acuosa al 20% de Acido tánico.................... TINCION DE ESPORAS........ − Filtrar.......MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio Preparación: − Disolver el colorante en el alcohol........... III................ − Filtrar................................................ − Agregar el agua destilada.....5%.......................... TINCION PARA FLAGELOS..................... 10 mL Agua destilada.................................... IV................ − Almacenar en frasco con tapón de vidrio..... 100 mL Preparación: − Disolver el colorante en el agua y dejar en reposo durante una hora y media.. 15 mL Disolución saturada en alcohol etílico al 95% 197 ..

......... 100 mL − Disolver el reactivo........... 100 mL − Disolver el reactivo..........2 g Etanol (95%)... * Se encuentra en el comercio en forma de polvo.................. Solución C: Cloruro de sodio.............. Solución B: Acido tánico..................... (Alternativa) Solución A: Fucsina básica...... − Guardar en frasco de vidrio y mantener bien tapado................. V....MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio de fucsina básica.... 100 mL − Disolver el colorante... 3 g Agua destilada..................... Esta solución es estable a temperatura ambiente..... Si la mezcal no se usa pronto adicionar fenol al 0................... TINCION DE FLAGELOS.. − Filtrar y tapar perfectamente para evitar la evaporación.... B y C......... 1..5 g Agua destilada..... − Guardar en un frasco bien tapado.................................2% para prevenir el desarrollo de hongos........... 198 ............ Preparación: − Mezclar cantidades iguales de las soluciones A.... 3 mL Preparación: − Mezclar los ingredientes en el orden citado... 1.........

0.............. p-rosa anilina o azul de metileno....................... VI......0 mL Cristales de fenol Q.. 20....................... 1 g Agua destilada................ Agua destilada. 100 mL Preparación: − Disolver el colorante en el agua.....20... Guardar en frasco de vidrio.............20..... 199 .................. Agregar el ácido y la glicerina................ 20......................................0 mL Azul de algodón................. LACTOFENOL AZUL DE ALGODON.. Calentar a 70 °C..........0 g Acido láctico......... Adicionar el colorante......05 g Preparación: − − − − − Disolver el fenol en el agua...................MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio NOTA: La solución es estable por 5 semanas a temperatura ambiente y en refrigeración dura varios meses...............0 mL Glicerina.................... Colorante de contraste...... P....

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