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Objetivos

Preparación de medios de cultivo
Curso: “Métodos en fitopatología” Dr. Pedro Mondino
24 de abril de 2009

„ Conocer a que denominamos medio de

cultivo en el laboratorio de Fitopatología. „ Reconocer la existencia de diferentes tipos de medio. „ Reconocer la utilidad de los diferentes medios de cultivo en el trabajo con patógenos de plantas.

Objetivos
„ El alumno debe:

Medios de cultivo
„ Los medios de cultivo de microorganismos

1) ser capaz de elaborar medios de cultivo con el fin de ser utilizados posteriormente para el aislamiento de hongos, bacterias o microorganismos epifíticos. „ 2) Desenvolverse con soltura en la utilización de protocolos.
„

(hongos, bacterias, levaduras) son esenciales en el Laboratorio de Fitopatología por lo que a diario se preparan y utilizan. „ Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.

Condiciones que debe reunir un Medio de cultivo
„ Para

Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo.
„ Un medio de cultivo para que permita el crecimiento

que los microorganismos crezcan adecuadamente, un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones:
„ contener los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios disponer de oxígeno „ temperatura adecuada „ humedad „ pH. „ exento de microorganismos contaminantes.
„

adecuado de microorganismos debe contener como mínimo: „ Carbono „ Nitrógeno „ Azufre „ Fósforo „ Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe, Ca, etc.).

1

Agar -15g Dextrosa . Ejemplos: un trozo de papa. Agar jugo de manzana. Peptona.01 g/l Sacarosa 30 g/l Agar-agar 15 g/l indefinida: Son medios cuya composición no se conoce con exactitud. Agar Malta. „ Medios líquidos.5 g/l Sulfato de magnesio heptahidratado 0. Medios de cultivo según su composición „ Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una Medios de cultivo según su composición „ Medios complejos o de composición „ „ „ „ „ „ „ „ composición química definida cuali y cuantitativamente. Ej: Medio Czapek. 2 . „ Ej: Agar Papa. Nitrato de Sodio 2 g/l Fosfato bipotásico 1 g/l Cloruro de potasio 0. Agar durazno.20g Infusión papa . „ Medio semisólidos.5 g/l Sulfato de hierro heptahidratado 0. Agar y jugo de vegetales. Papa. Medios complejos „ Agar Papa Dextrosa: „ Medio para el cultivo y conteo de levaduras y „ „ „ „ Medios de cultivo según su estado físico „ Los medios de cultivo utilizados pueden ser de hongos en general.Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo „ Estos nutrientes generalmente se aportan con Medios de cultivo según su composición „ Medios Naturales. extracto de levadura. etc. „ contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes. Consisten únicamente en un Extracto de malta. Generalmente se usan en trabajos de investigación.4g Agua destilada 1L diferentes tipos: „ Medios sólidos. material vegetal.

„ Sus características principales son: „ de alrededor del 5% Se licua completamente a temperaturas de 80 –100 ºC y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Medio Agar Agua „ Se trata de un medio sin el agregado de nutriente Medios de cultivo „ En ocasiones se añaden al medio de cultivo sustancias alguno.Medios de cultivo Medios sólidos de cultivo „ Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar „ El agar es un polisacárido extraído de algas. „ En los medios sólidos la proporción de Agar es siempre por encima del 15% Medios de cultivo „ El agar es el elemento solidificante más Medios semi-sólidos de cultivo „ En los medios semi-sólidos la proporción de Agar es empleado en la preparación de medios de cultivo. „ No afecta el crecimiento de hongos ni bacterias. Aislamiento de hongos a partir de tejido vegetal. „ No es utilizado por los microorganismos que crecen en él. 3 . „ Ensayos de evaluación de actividad antifúngica. „ También se pueden añadir sustancias que ejercen acción inhibitoria selectiva de ciertos microorganismos. „ Utilidad „ indicadoras de actividades metabólicas. Se logra que el crecimiento sea el resultado de la nutrición que posee el tejido vegetal.

preparación. „ Diferenciales: Medios de cultivo según su utilidad práctica „ Medios diferenciales: Son aquellos destinados a Medios de cultivo según su utilidad práctica „ Medios selectivos: Son aquellos que facilitar la discriminación de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios. favorecen por su diseño el crecimiento específico de un microorganismo particular o grupo de microorganismos. „ Ej: Agar Papa destrosado (PDA). „ En las estufas de cultivo se debe proporcionar una fuente adecuada de humedad para evitar así que se deseque el medio. es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas de los cultivos microbianos. conservación y uso. Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta Temperaturas de incubación „ En general los microorganismos patógenos de Condiciones adecuadas de humedad „ Un nivel mínimo de humedad. Agar Nutriente (NA) „ Selectivos: Son medios a los que se les agregan sustancias para inhibir el crecimiento de otros microorganismos. tanto en el plantas crecen a temperaturas en el entorno de 24 a 28 ºC. „ En ocasiones incubamos a temperaturas diferentes: A 37 ºC cuando queremos descartar el crecimiento de agentes de control biológico a la temperatura del cuerpo humano. 4 . de los medios de cultivo asegura la exactitud. confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos en los ensayos o experimentos. „ Ej: Agar Malta acidificado y con antibiótico para inhibir el crecimiento de bacterias. de microorganismos. „ Venturia inaequalis debe incubarse a temperaturas de entre 16 y 20 ºC „ medio como en la atmósfera.Medios de cultivo „ La exactitud en los procedimientos de Medios de cultivo según su utilidad práctica „ Generales: Sirven para el cultivo de una gran variedad fabricación. „ A 5ºC o menos cuando buscamos microorganismos adaptados a crecer en la cámara frigorífica.

Los anaerobios por el contrario crecen en ausencia de oxígeno. Ej.1 ml de la solución stock/100 ml de medio). de lo contrario solamente habrá crecimiento en la parte superior. 5 .Presencia de oxígeno „ Los microorganismos aerobios necesitan que el Presencia de oxígeno „ Los microorganismos aerobios necesitan que el oxígeno oxígeno llegue en forma adecuada al medio. „ Los medios de cultivo se esterilizan en el autoclave. llegue en forma adecuada al medio.4 „ Sulfato de estreptomicina al 0. 20 g/L „ pH = 5.02% „ (0. Erwinia Preparación de medio Agar Malta con antibiótico „ Receta del agar malta „ Extracto „ Agar Preparación de medio Agar Nutriente de malta 20 g/L. „ Receta NAD (Nutriente agar destrosa) „ Agar nutriente 23g 5g „ Agua destilada 1000 ml. „ Destrosa Preparación de medio Agar Nutriente „ 3 g de extracto de Carne de buey „ 5 g de peptona trípsica de gelatina „ 15 g de agar „ de cloruro sódico y glucosa „ agua destilada hasta 1000 ml Esterilidad de los Medios de cultivo „ Los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar otros microorganismos puedan interferir con el crecimiento del que queremos cultivar. „ En los medios líquidos se recurre a la agitación.

Medios de cultivo „ En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri. comienza a utilizar placas de vidrio planas „ Hoy existen de plástico. 6 . „ Procedimiento seguido para dispensar el medio en placas de Petri placas de Petri o tubos. Medios de cultivo „ Los medios se pueden utilizar en frascos.

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