You are on page 1of 90

ANALISIS TOKSIKOLOGI FORENSIK

Buku Ajar

disusun oleh: Dr.rer.nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, Apt., M.Si. JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA BUKIT JIMBARAN

KATA PENGANTAR Dengan mengucapkan syukur ”Om Awighnam Astu Nahma Sidham” semoga tiada aral yang melintang dan memperoleh wara nugraha Ida Sang Hyang Widhi Wasa. Bahan ajar ini disusun agar dapat memperkaya literatur dan memberi gambaran tentang Analisis Toksikologi Forensik. Analisis toksikologi forensik adalah integrasi berbagai disiplin ilmu diantaranya kimia analisis dan prinsipprinsip dasar toksikologi, yang mencangkup aplikasi dan telaah tentang racun, yang berhubungan dengan tindakan melawan hukum ”kriminal”. Pada tulisan ini diawali dengan sub bahasan: ”Pengantar Menuju Ilmu Forensik” yang menjelaskan definisi forensic science dan bidang ilmu yang tercangkup dalam forensik sains, kemudian dilanjutkan dengan sub bahasan ”Pengantar Toksikologi” yang memberi gambaran tentang pengertian ilmu toksikologi dan sejarah perkembangan ilmu toksikologi. Agar mahasiswa lebih mengerti bagaimana tokson dapat menimbulkan efek keracunan pada sub bahasan berikutnya dibahas ”Fase Kerja Toksik”. Sub bahasan ”Analisis Toksikologi Forensik” dibahas dalam bab IV, karena sebagaian besar sampel analisis toksikologi merupakan materi biologi, maka dalam bab berikutnya dibahas sifat dan cara penanganan materi biologi dalam analisis toksikologi. Bab berikutnya membahas metode analisis yang digunakan dalam penyelenggaraan analisis toksikologi forensik. Sangat disadari tulisan ini masih jauh dari sempurna, namun langkah/usaha sekecil apapun akan sangat berarti sebagai daya awal untuk langkah yang lebih besar. Menyadari hal tersebut penulis sangat mengharapkan masukan dan saran, dari berbagai pihak guna menyempurnakan materi ini. Saran dan masukan dapat dialamatkan ke penulis Jimbaran, Juli 2008 Hormat kami ttd Penulis

Pengantar Menuju Ilmu Forensik

1

BAB I 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. BAB II 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. BAB III 3.1. 3.2. 3.3. 3.4. 3.5. 3.6. BAB IV 4.1. 4.2. 4.3. 4.4. 4.5. BAB V 5.1. 5.2. 5.3. BAB VI 6.1. 6.2. 6.3. BAB VIII 7.1. 7.2. 7.3. 7.4. 7.5. 7.6.

halaman PENGANTAR MENUJU ILMU FORENSIK …………………………………………………… Pengantar ………………………………………………………………………………………… Ruang Lingkup Ilmu Forensik …………………………………………………………………... Peran ilmu forensik dalam penyelesaian kasus kejahatan ......... …………………………... Langkah-langkah Penyidikan ....................................................... …………………………. PENGANTAR TOKSIKOLOGI ...................................................... …………………………. Perkembangan Awal Toksikologi ................................................. …………………………. Pengertian Toksikologi dan Racun ........................................... ………………………….... Cakupan dan Subdisiplin Toksikologi ...................................... …………………………... Perkembangan Mutahir Toksikologi ......................................... …………………………... Prospek Masa Depan ................................................................ ………………………….. FASE KERJA TOKSIK ............................................................. ………………………….... Fase eksposisi ......................................................................... …………………………... Fase toksokinetik ................................................................... …………………………….. Fase Toksodinamik .................................................................. …………………………... Pemodelan Farmakokinetik ...................................................... …………………………... Parameter Farmakokinetik ...................................................... ………………………….... Biotransformasi (metabolisme) ................................................ …………………………... ANALISIS TOKSIKOLOGI FORENSIK .................................... ………………………….... Pendahuluan ................................................................................ ………………………... Bilamana memerlukan pemeriksaan toksikologik ........................ ………………………... Langkah-langkah analisis toksikologi forensik ............................. ………………………... Interpretasi temuan analisis ......................................................... ………………………... Kesimpulan .................................................................................. ………………………... CAIRAN BIOLOGI ....................................................................... ………………………... Sifat Beberapa Cairan Biologik Tertentu ..................................... ………………………... Pengambilan Sampel ………………………...………………………...………………………. Faktor-Faktor yang harus diperhatikan dalam Analisis obat dalam cairan biologi .......... REAKSI WARNA ......................................................................... ………………………... Interpretasi reaksi warna ............................................................. ………………………... Faktor Teknis ............................................................................... ………………………... Beberapa Reaksi Warna .............................................................. ………………………... KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS .................................................. ………………………... Fase Diam ................................................................................... ………………………... Penotolan sampel .......................................................................... ………………………... Sistem pelarut ................................................................................ ………………………... Pengembangan .............................................................................. ………………………... Deteksi Noda ................................................................................. ………………………... Faktor-faktor yang perlu diperhatikan pada KLT ........................... ………………………... 2

DAFTAR ISI

1 1 2 4 5 9 9 10 12 13 14 16 16 16 21 21 23 24 31 31 31 32 35 39 41 41 43 43 46 46 46 46 50 51 52 52 52 53 54

Pengantar Menuju Ilmu Forensik

........ Analisis Obat .....3.... 10.... 8.......………………………............6.5.... Sistem Pengumpulan Data dan Penampilannya ..................1.............................................. 11.. Hubungan spektra IR dengan struktur molekul . Teknik Sampling Pada IR ....................... ……………………….................................. 11..2.. 8...... ……………………….........5.................... Derivatisasi Pada Kromatograti Gas Cair ...................... Peralatan ...... Berbagai Teknik Yang Dikombinasikan Dengan Spektroskopi IR ……………………… Penerjemahan Spektrum IR ........2...................... Analisis Beberapa Kelompok Obat ... ………………………. ………………………... PENGGUNAAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (HPLC) DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI ....... 11............................................................. ………………………..... 11.... 11. 11. ………………………...... 8................................................................1.................................... PENGGUNAAN KROMATOGRAFI GAS DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI ................BAB VIII 8...... Kepustakaan Spektrum Massa ........................ 10...... ………………………............ Pemilihan Sistem HPLC .......................... BAB X 10. ………………………........................ Pendahuluan ..... ………………………........ ………………………..................... ……………………….4............ BAB XI 11................................ ………………………......... BAB IX 9...........4..... 10............1.............. Parameter Retensi .................................. 10........ ………………………...... 9........................................... ……………………….................... ………………………............................5.................................................... Spektrum IR obat-obatan yang sering disalahgunakan ........ Instrumen ......................... ………………………........3............. APLIKASI SPEKTROSFOTOMETRI INFRA MERAH DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI Pendahuluan ...........................1.............4................................2. Aliran Analit/Sampel dalam MS ..7........... Analisis Kuantitatif ........ ………………………................ 8..3.. ………………………...........................................2............. ………………………........................................... 55 55 55 57 57 58 60 60 64 66 66 66 66 67 68 73 73 73 74 75 77 78 78 Pengantar Menuju Ilmu Forensik 3 ...... APLIKASI SPEKTROMETRI MASSA DALAM ANALISIS PENYALAHGUNAAN OBAT ................. Analisis Kualitatif ............

Dalam investigasi dan identifikasi bercak darah yang mengering „a dried bloodstain”. B. Dalam padangan ilmu alam sesuatu sesuatu dianggap ilmiah hanya dan hanya jika didasarkan pada fakta atau pengalaman (empirisme). Pada pertengahan abad ke 19.BAB I PENGANTAR MENUJU ILMU FORENSIK klasifikasi ini masih kita kenal dan dimanfaatkan secara luas sampai sekarang. Dasar Pengantar Menuju Ilmu Forensik . Dalam perkembangan selanjutnya semakin banyak bidang ilmu yang dilibatkan atau dimanfaatkan dalam penyidikan suatu kasus kriminal untuk kepentingan hukum dan keadilan. ialah kebenaran yang selengkap-lengkapnya dari sutau perkara pidana dengan menerapkan ketentuan hukum acara pidana secara jujur dan tepat dengan tujuan untuk mencari siapakah pelaku yang dapat didakwakan melakukan suatu pelanggaran hukum.PW. baik deduktif maupun induktif dalam struktur bahasa tertentu yang mempunyai makna (logika) dan hasilnya dapat dikomunikasikan ke masyarakat luas dengan tidak mudah atau tanpa tergoyahkan (kritik ilmu) (Purwadianto 2000). Tujuan ini tertuang dalam Keputusan Menteri Kehakiman No. Dalam buku-buku ilmu forensik pada umumnya ilmu forensik diartikan sebagai penerapan dan pemanfaatan ilmu pengetahuan tertentu untuk kepentingan penegakan hukum dan keadilan. yang menjadi landasan proses peradilan pidana. dan O. Lattes menggolongkan darah ke dalam 4 klasifikasi. Francis Galton (1822-1911) pertama kali meneliti sidik jari dan mengembangkan metode klasifikasi dari sidik jari. Saferstein dalam bukunya “Criminalistics an Introduction to Forensic Science” berpendapat bahwa ilmu forensik ”forensic science“ secara umum adalah „the application of science to law”. mikroskopi. Ilmu pengetahuan tersebut sering dikenal dengan Ilmu Forensik. dan fotografi dimanfaatkan dalam penyidikan kasus kriminal (Eckert. pertama kali ilmu kimia. kebenaran ilmiah harus dapat dibuktikan oleh setiap orang melalui indranya (positivesme).07. 1980).1. Sehingga diharapkan tujuan dari hukum acara pidana. Alphonse Bertillon (1853-1914) adalah seorang ilmuwan yang pertamakali secara sistematis meneliti ukuran tubuh manusia sebagai parameter dalam personal indentifikasi. Tercatat pertama kali pada abad ke 19 di Perancis Josep Bonaventura Orfila pada suatu pengadilan dengan percobaan keracunan pada hewan dan dengan buku toksikologinya dapat meyakinkan hakim.M. Revolusi ini merupakan gambaran tanggungjawab dari petugas penyidik dalam penegakan hukum. observasi terhadap bukti fisik dan interpretasi dari hasil analisis (pengujian) barang bukti merupakan alat utama dalam penyidikan tersebut.03 tahun 1983 yaitu: untuk mencari dan mendapatkan atau setidaktidaknya mendekati kebanaran materiil. Pengantar Forensik biasanya selalu dikaitkan dengan tindak pinada (tindak melawan hukum). sehingga menghilangkan anggapan bahwa kematian akibat keracunan disebabkan oleh mistik. AB. analisis dan hasilnya mampu dituangkan secara masuk akal.01. dan selanjutnya meminta pemeriksaan dan putusan dari pengadilan guna menemukan apakah terbukti 4 1. Leone Lattes (1887-1954) seorang profesor di institut kedokteran forensik di Universitas Turin. Sampai awal 1900-an metode dari Bertillon sangat ampuh digunakan pada personal indentifikasi. Dewasa ini dalam penyidikan suatu tindak kriminal merupakan suatu keharusan menerapkan pembuktian dan pemeriksaan bukti fisik secara ilmiah. Hasil penelitiannya sekarang ini digunakan sebagai metode dasar dalam personal identifikasi. Ilmu Forensik dikatagorikan ke dalam ilmu pengetahuan alam dan dibangun berdasarkan metode ilmu alam. yaitu A. Bertillon dikenal sebagai bapak identifikasi kriminal (criminal identification). dapat tercapai yaitu mencari kebenaran materiil. Dalam penyidikan suatu kasus kejahatan. Itali.

identifikasi. individualisasi. Adanya pembuktian ilmiah diharapkan polisi. Pakar kriminalistik adalah tentunya seorang ilmuwan forensik yang bertanggung jawab terhadap pengujian (analisis) berbagai jenis bukti fisik. dengan menggunakan metode / teknik ilmu alam di dalam atau untuk kepentingan hukum atau peradilan (Sampurna 2000). dan serologi / biologi molekuler forensik. Sedangkan kriminalistik merupakan cabang dari ilmu forensik. jaksa. biologi. melakukan otopsi mediko legal apabila diperlukan. Secara umum ilmu forensik dapat diartikan sebagai aplikasi atau pemanfaatan ilmu pengetahuan tertentu untuk kepentingan penegakan hukum dan keadilan. analisis tanah. Seorang coroner adalah seorang dokter yang bertugas melalukan pemeriksaan jenasah. fotografi forensik. − pelayanan penelusuran keturunan. Dalam pembuktian dan pemeriksaan secara ilmiah. kriminalistik sebagaimana dengan ilmu forensik lainnya. antrofologi forensik. apakah mati wajar atau tidak wajar. analisis suara. melakukan penyidikan dan penelitian semua kematian yang terjadi karena kekerasan. Di Amerika Serikan juga dikenal dengan ”medical examinar”. kimia. tetapi juga berhubungan dengan orang hidup. seorang kriminalistik harus mendapatkan pelatihan atau pendidikan dalam penyidikan tempat kejadian perkara yang Pengantar Menuju Ilmu Forensik dibekali dengan kemampuan dalam pengenalan dan pengumpulan bukti-bukti fisik secara cepat. Kedokteran Forensik adalah penerapan atau pemanfaatan ilmu kedokteran untuk kepentingan penegakan hukum dan pengadilan. Kedokteran forensik mempelajari hal ikhwal manusia atau organ manusia dengan kaitannya peristiwa kejahatan. fisika. Sebelum melakukan tugasnya. analisis kimia. pemeriksaan sidik jari laten. 2 . − identifikasi mayat. seperti analisis (pengujian) senjata api dan bahan peledak. Sistem ini tidak berbeda jauh dengan sistem coroner di Inggris. pengujian perkakas (”toolmark examination”). analisis bukti impresi dan identifikasi. kita mengenal istilah ilmu forensik dan kriminologi. Ruang Lingkup Ilmu Forensik Ilmu-ilmu yang menunjang ilmu forensik adalah ilmu kedokteran. kekerasan terhadap anak dibawah umur. dan evaluasi dari bukti fisik. balistik forensik. tidak dapat dijamin tercapainya tujuan penegakan kebenaran dalam proses perkara pidana dimaksud. dan hakim tidaklah mengandalkan pengakuan dari tersangka atau saksi hidup dalam penyidikan dan menyelesaikan suatu perkara. 1.bahwa suatu tindak pidana telah dilakukan dan apakah orang yang didakwa itu dapat dipersalahkan. dia melakukan indentifikasi kuantifikasi dan dokumentasi dari bukti-bukti fisik. − meneliti waktu kapan kematian itu berlansung ”time of death” − penyidikan pada tidak kekerasan seperti kekerasan seksual. Dalam hal ini peran kedokteran forensik meliputi: − melakukan otopsi medikolegal dalam pemeriksaan menyenai sebab-sebab kematian. toksikologi forensik. pemeriksaan biologis (termasuk analisis serologi atau DNA). Dalam perkembangannya bidang kedokteran forensik tidak hanya berhadapan dengan mayat (atau bedah mayat). penyidikan ini juga bertujuan untuk mencari peristiwa apa sebenarnya yang telah terjadi. Karena saksi hidup dapat berbohong atau disuruh berbohong. Kriminalistik merupakan penerapan atau pemanfaatan ilmu-ilmu alam pada pengenalan. Di Inggris kedokteran forensik pertama kali dikenal dengan ”Coroner”. diinterpretasi dan dibuat sebagai laporan (keterangan ahli) dalam atau untuk kepentingan hukum atau peradilan (Eckert 1980). entomologi forensik. dan psikologi. maka dengan hanya berdasarkan keterangan saksi dimaksud. psikiatri forensik. analisis fisika. pemeriksaan dokumen. juga berkontribusi dalam upaya pembuktian melalui prinsip dan cara ilmiah.2. farmasi. Kriminalistik memiliki berbagai spesilisasi. Dari hasil analisisnya kemudian dievaluasi. kekerasan dalam rumah tangga. Di dalam perkara pidana. Cabang-cabang ilmu forensik lainnya adalah: kedokteran forensik. kemudian melalukan penyidikan untuk menentukan sifat kematian tersebut. pengumpulan / pengambilan. odontologi forensik. Biologi molekuler forensik lebih dikenal dengan ”DNAforensic”.

Toksikologi forensik merupakan gabungan antara kimia analisis dan prinsip dasar toksikologi. Kerja utama dari toksikologi forensik adalah analisis racun baik kualitatif maupun kuantitatif sebagai bukti dalam tindak kriminal (forensik) di pengadilan. dental protese (penggantian gigi yanng rusak). atau perbuatan bunuh diri. Antrofologi forensik. Tosikologi forensik menekunkan diri pada aplikasi atau pemanfaatan ilmu toksikologi untuk kepentingan peradilan. Pada kasus pembunuhan mungkin juga diperlukan otopsi spikologi yang dilakukan oleh spikiater. − analisis obat terlarang di darah dan urin pada kasus penyalahgunaan narkotika dan obat terlarang lainnya. tengkuk. Racun adalah senyawa yang berpotensial memberikan efek berbahaya terhadap organisme. Ilmu ini memperlajari jenisjenis serangga yang hidup dalam fase waktu tertentu pada suatu jenasah di tempat terbuka. struktur rongga rahang atas “sinus maxillaris”. keriput pada bibir. bidang ilmu ini berkembang berdasarkan pada kenyataannya bahwa: gigi. Psikiatri forensik. LOOMIS (1978) berdasarkan aplikasinya toksikologi dikelompokkan dalam tiga kelompok besar. dan patholog forensik. sifat zat tersebut. Entomologi forensik. struktur tulang palatal (langit-langit keras di atas lidah). Berdasarkan kharkteristik dari hal tersebut diatas dapat dijadikan sebagai acuan dalam penelusuran identitas seseorang (mayat tak dikenal). Bidang kerja toksikologi forensik meliputi: − analisis dan mengevaluasi racun penyebab kematian. tengkorak. serta mempelajari tindakan-tidankan pencegahan bahaya keracunan. dengan tujuan penelaahan ulang tingkah laku. Toksikologi forensik mencangkup terapan ilmu alam dalam analisis racun sebagi bukti dalam tindak kriminal. spikolog. Odontologi Forensik. dan masalah psikis sehingga dapat memberi gambaran sikap (profile) dari pelaku dan dapat menjadi petunjuk bagi penyidik. Toksikologi adalah ilmu yang menelaah tentang kerja dan efek berbahaya zat kimia (racun) terhadap mekanisme biologi. Sehingga bukit peta gigi dari korban. Berdasarkan jenis-jenis serangga yang ada sekitar mayat tersebut. kepribadian. obat terlarang di dalam cairan tubuh atau napas. penggunaan dooping). odontologi forensik dan juga dengan bidang ilmu lainnya Toksikologi Forensik. atau sidik bibir dapat dijadikan sebagai bukti dalam penyidikan tindak kejahatan. konsentrasi racun di reseptor. yang dapat mengakibatkan perubahan prilaku (menurunnya kemampuan mengendarai kendaraan bermotor di jalan raya. kejadian seseorang sebelum melakukan tindak kriminal atau sebelum melakukan bunuh diri. bentuk anatomi dari keseluruhan mulut dan penampilan morfologi muka adalah stabil atau konstan pada setiap individu. metode analisis racun baik kualitativ maupun kuantitativ dari materi biologik atau non biologik. paparan terhadap organisme dan bentuk efek yang ditimbulkan. seorang spikiater berperan sangat besar dalam bebagai pemecahan masalah tindak kriminal. Lebih khusus. rahang. toksikologi mempelajari sifat fisiko kimia dari racun. pola dari tulang trabekula. Psikogram dapat digunakan untuk mendiagnose prilaku. Bidang ini di Jerman dikenal dengan ”Verkehrsmedizin” Dalam prakteknya kedokteran forensik tidak dapat dipisahkan dengan bidang ilmu yang lainnya seperti toksikologi forensik. kondisi bioorganisme atau sistem bioorganisme.− di negara maju kedokteran forensik juga menspesialisasikan dirinya pada bidang kecelakaan lalu lintas akibat pengaruh obatobatan ”driving under drugs influence”. dan 3 . adalah ahli dalam mengidentifikasi sisa-sisa tulang. Masalah spikologi (jiwa) dapat memberi berpengaruh atau dorongan bagi seseorang untuk melakukan tindak kejahatan. serologi / biologi molekuler forensik. Entomologi adalah ilmu tentang serangga. tindak Pengantar Menuju Ilmu Forensik kekerasan dan kejahatan. toksikologi ekonomi dan toksikologi forensik. pola penumpukan krak gigi. Sifat racun dari suatu senyawa ditentukan oleh: dosis. perbaikan gigi (dental restoration). efek psikologi yang ditimbulkannya pada organisme. seorang entomolog forensik dapat menduga sejak kapan mayat tersebut telah berada di tempat kejadian perkara (TKP). tanda / bekas gigitan. yakni: toksikologi lingkungan. − analisis ada/tidaknya alkohol.

seperti indentifiksi bentuk tengkorak bayi pada kasus tertukarnya anak di rumah bersalin. Dalam penyidikan ini analisis kimia dan fisika diperlukan untuk menyidikan dari senjata api tersebut. Kerjasama bidang ini dengan kedokteran forensik sangat sering dilakukan. Pengujian anak peluru yang ditemukan di TKP dapat digunakan untuk merunut lebih spesifik jenis senjata api yang telah digunakan dalam kejahatan tersebut. Dari penyidikannya dapat memberikan informasi tentang jenis kelamin.Uji cairan tubuh lainnya (seperti: air liur. Dalam hal ini diperlukan juga mengidentifikasi jenis selongsong peluru yang tertinggal. Balistik forensik. barang bukti yang tertinggal. Antrofologi forensik mungkin juga dapat mendukung dalam penyidikan kasus orang hidup. Baik darah maupun cairan tubuh lainnya paling sering digunakan / diterima sebagai bukti fisik dalam tindak kejahatan. penelusuran paternitas (bapak biologis). perkiraan umur. seorang dokter kehakiman bekerjasama dengan toksikolog forensik untuk melakukan penyidikan. Misal analisis ditribusi logam-logam seperti Antimon (Sb) atau timbal (Pb) pada tangan pelaku atau terduga. darah pelaku atau korban. Berdasarkan temuan dari dokter kehakiman selama otopsi jenasah dan hasil analisisnya. Atau analisis ditribusi asap (jelaga) pada pakaian. Dalam hal ini barang bukti yang paling sahih adalah darah dan/atau cairan tubuh lainnya. berapa jarak dan dari arah mana penembakan tersebut dilakukan. Sistem penggolongan darah (sistem ABO) pertama kali dikembangkan untuk keperluan penyidikan (merunut asal dan sumber bercak darah pada tempat kejadian). pada kasus dimana sidik jari sudah tidak mungkin bisa diperoleh.mumi. meneliti apakah senjata yang telah digunakan dalam tindak kejahatan masih dapat beroperasi dengan baik. bidang ilmu ini sangat berperan dalam melakukan penyidikan kasus tindak kriminal dengan senjata api dan bahan peledak. dalam pembuktian dugaan tersebut. rambut. pemanfaatan bidang Pengantar Menuju Ilmu Forensik ilmu ini dalam proses peradilan meningkat dengan sangat pesat. 4 . Toksikolog forensik akan melakukan analisis toksikologi terhadap sampel biologi tersebut. Pada bidang ini memerlukan peralatan khusus termasuk miskroskop yang digunakan untuk membandingkan dua anak peluru dari tubuh korban dan dari senjata api yang diduga digunakan dalam kejahatan tersebut. Serologi dan Biologi molekuler forensik. potongan kulit) untuk menentukan sumbernya (“origin”). dan meneliti senjata mana yang telah digunakan dalam tindak kriminal tersebut. untuk mencari pelaku dari tindak kriminal tersebut. bahwa setiap individu memiliki kekhasan sidik DNA. toksikolog forensik akan menginterpretasikan hasil temuannya dan membuat kesimpulan keterlibatan racun dalam tindak kejahatan yang dituduhkan. Sejak awal perkembanganya pemanfaatan serologi / biologi molekuler dalam bidang forensik lebih banyak untuk keperluan identifikasi personal (perunutan identitas individu) baik pelaku atau korban. Seorang balistik forensik meneliti senjata apa yang telah digunakan dalam kejahatan tersebut. analisa DNA sangat diperlukan pada penyidikan kasus pembunuhan mutilasi (mayat terpotongpotong). Belakangan dengan pesatnya perkembangan ilmu genetika (analisi DNA) telah membuktikan. semen vagina atau sperma. Dilain hal. guna menganalisis efek luka yang ditimbulkan pada korban dalam merekonstruksi suatu tindak kriminal dengan senjata api. atau warna dari getah tumbuhan. Seperti pada kasus keracunan.Uji darah untuk menentukan sumbernya (darah manusia atau hewan. sehingga kedepan sidik DNA dapat digunakan untuk menggantikan peran sidik jari. Analisa serologi/biologi molekuler dalam bidang forensik bertujuan untuk: . untuk mengidentifikasi jarak tembak. untuk mengidentifikasi apakah memang senjata tersebut memang benar telah digunakan dalam kejahatan tersebut. ras. atau orang yang tidak terlibat dalam tindak kejahatan tersebut) . mencari senyawa racun yang diduga terlibat. dan waktu kematian. Seiring dengan pesatnya perkembangan bidang ilmu biologi molekuler (imunologi dan genetik) belakangan ini.

Dengan bantuan ilmu kedokteran forensik atau bidang ilmu lainnya. dan faktor lingkungan masyarakatnya. psikolog forensik. psikologi forensik. Ilmu-Ilmu forensik yang menangani tindak kriminal sebagai masalah teknis. misalnya pembunuhan atau bunuh diri. odontologi forensik. Apabila terjadi suatu kasus kejahatan. kimia forensik dan ilmu fisika forensik. Sehingga pada umumnya laboratorium forensik dimanfaatkan untuk kepentingan peradilan. dan psikiater forensik mempunyai peran penting dalam menyelesaikan kasus kejahatan. karena kematian diakibatkan oleh perbuatannya sendiri. serologi/biologi molekuler forensik. dalam pemutusan sangsi dari tindak pidana. Pada umumnya suatu laboratorium kriminalistik mencangkup bidang ilmu kedokteran forensik. Disamping itu. yaitu: 1.3. seperti faktor kejiwaan. 5 . Ilmu-ilmu forensik yang menangani tindak kriminal sebagai masalah manusia. Dalam melakukan perbuatannya. perlu ditelusuri faktorfaktor yang menjadi sebab seseorang itu melakukan kejahatan. yang hidup di tengah-tengah masyarakat. maka pada umumnya timbul pertanyaanpertanyaan seperti: − Peristiwa apa yang terjadi? − Di mana terjadinya? − Bilamana terjadinya? − Dengan alat apa dilakukannya? − Bagaimana melakukannya? − Mengapa perbuatan tersebut dilakukan? − Siapa yang melakukan? Pengantar Menuju Ilmu Forensik Pertanyaan peristiwa apa yang terjadi adalah mencari jenis kejahatan yang terjadi. Seseorang melakukan tindak kriminal mungkin didorong oleh latar belakang kejiwaannya. Peran ilmu forensik dalam penyelesaian kasus kejahatan Perdanakusuma (1984) mengelompokkan ilmu forensik berdasarkan peranannya dalam menyelesaikan kasus-kasus kriminal ke dalam tiga kelompok. karena pelaku dan objek penghukuman dari tindak kriminal tersebut adalah manusia. dan psikiatri/neurologi forensik. toksikologi forensik. Bidang kimia forensik mencangkup juga analisa racun (toksikologi forensik). Berdasarkan klasifikasi diatas peran ilmu forensik dalam menyelesaikan masalah / kasuskasus kriminal lebih banyak pada penanganan kejahatan dari masalah teknis dan manusia. kedokteran forensik. keluarga. Kejahatan dipandang sebagai masalah teknis. karena kejahatan merupakan perbuatan-perbuatan yang melanggar hukum. kimia forensik. Kejahatan sebagai masalah hukum adalah aspek pertama dari tindak kriminal itu sendiri. 3. Atas asas keadilan. Dalam kelompok ini termasuk kriminologi. 2. fisika forensik. Dalam kelompok ini termasuk ilmu kriminalistik. fotografi forensik. ilmu sidik jari. Dalam kelompok ini termasuk hukum pidana dan hukum acara pidana. dan entomogoli forensik.. 1. kodrat manusia sebagai mahluk sosial. sedangkan ilmu fisika forensik mempunyai cabang yang amat luas termasuk: balistik forensik. atau karena keadaan ekonomi keluarganya. ataupun karena pengaruh dari keadaan sosial masyarakatnya.Uji imonologi atau DNA individu untuk mencari identitas seseorang. khususnya perkara pidana. Ilmu-ilmu forensik yang menangani tindak kriminal sebagai masalah hukum. dapat disimpulkan penyebabnya adalah bunuh diri. Oleh sebab itu penyidik tidak perlu melakukan penyidikan selanjutnya guna mencari siapa pelaku dari peristiwa tersebut. Kejahatan sebagai masalah manusia. Untuk itu perlu diteliti berbagai aspek yang menyangkut kehidupannya. Dalam hal ini peran serta kriminolog. Oleh karena itu perbuatan yang dilakukan juga dipengaruhi oleh faktor internal (dorongan dari dalam dirinya sendiri) dan faktor eksternal (dipengaruhi oleh lingkungannya). manusia tidak terlepas dari unsur jasmani (raga) dan jiwa. karena kejahatan dari segi wujud perbuatannya maupun alat yang digunakannya memerlukan penganan secara teknis dengan menggunakan bantuan diluar ilmu hukum pidana maupun acara pidana.

171 dan 185 KUHAP.4. dan ia alami sendiri dan dengan menyebutkan alasan dari pengetahuannya tersebut. Dalam pasalpasal tersebut mengatur ketentuan keterangan saksi siapa-siapa yang berhak.1: Skema penyidikan (Sampurna 2000) langkah-langkah Alat bukti yang sah adalah alat bukti yang sesuai dengan hukum. ataupun keterangan dari orang lain (KUHAP pasal 185). Keterangan terdakwa Tindak Pidana Dilaporkan ke Ditemukan oleh polisi Penyelidikan Penyidikan Pernyataan dan Catatan Pemeriksaan TKP Identifikasi Bukti fisik Penyelidikan lanjutan Pemberkasan Pelimpahan Berkas ke Penuntut Umum Persidangan Gambar 1. Keterangan saksi b. yaitu orang yang mampu secara 6 Pengantar Menuju Ilmu Forensik . peradilan perkara pidana diawali oleh penyidikan yang dilakukan oleh penyidik tunggal (lebih tepatnya penyidik umum) yang dilakukan oleh kepolisian (Polri). Upaya penyidikan dilakukan setelah suatu peristiwa atau kejadian dianggap peristiwa hukum. Keterangan saksi tidak boleh berupa pendapat atau hasil rekaan saksi. 170. Langkah-langkah Penyidikan Dalam sistem peradilan pidana yang berlaku di Indonesia.1). atau berkompeten menjadi saksi pada suatu tindak pidana. Pembuktian dilakukan dengan mengajukan alat bukti yang sah ke depan persidangan. Sampurna (2000) menggambarkan proses penyidikan sampai ke persidangan (gambar 1. harus didukung oleh alat bukti sah lain. Pembuktian dari suatu perkara pidana adalah upaya untuk membuktikan bahwa benar telah terjadi tindak pidana yang diperkarakan dan bahwa si terdakwalah pelaku tindak pidana tersebut. tidak berhak. yaitu: a. yaitu peristiwa atau kejadian yang dapat mengganggu kedamaian hidup antar pribadi. Keterangan saksi dianggap sah apabila diajukan oleh sedikitnya dua orang saksi. Pengertian keterangan saksi menurut KUHAP adalah salah satu alat bukti dalam perkara pidana yang berupa keterangan dari saksi mengenai suatu peristiwa yang ia dengar. Petunjuk e. Keterangan ahli c. Upaya penyidikan pada umumnya bermuara pada proses penuntutan dan disusul oleh proses pengadilan. Lingkup antar pribadi khususnya antara seseorang (memikul kepentingan pribadi) dihadapkan dengan masyarakat atau negara yang memikul suatu kepentingan umum. Bila berasal dari satu orang saja.1. dalam pembuktian (penyidikan dan pemeriksaan bukti fisik) harus dilakukan pembuktian secara ilmiah. yaitu memenuhi prisip ”admissibility” (dapat diterima) sebagaimana diatur oleh perundang-undangan yang berlaku. Guna mendapatkan atau setidak-tidaknya mendekati kebenaraan materiil. Penyelasaian kasus-kasus kriminal diperlukan pembuktian peristiwa kasus yang terjadi sampai membuktikan pelaku yang terlibat dalam tindak kriminal tersebut. Menurut Kitab Hukum Acara Pidana (KUHAP) pasal 184 ayat 1 menyebutkan bahwa alat bukti yang sah terdiri dari 5 jenis. Ketentuan keterangan saksi diatur dalam pasal 168. ia lihat sendiri. Keterangan saksi juga harus diberikan oleh orang yang berkompeten. Proses ini dikenal sebagai upaya litigasi. Surat d. dalam khasus-khasus khusus (tindak kejahatan ekonomi dan pelanggaran Hak Asasi Manusia) pihak kejaksaan dapat melakukan penyidikan.

b) Surat yang dibuat menurut ketentuan peraturan perundang-undangan atau surat yang dibuat oleh pejabat yang menangani hal yang termasuk dalam tatalaksana yang menjadi tanggung jawabnya dan yang diperuntukkan bagi pembuktian suatu hal atau suatu keadaan. atau dialami sendiri. seperti percikan bercak darah. tanda-tanda seperti lembam mayat. Perngertian umum keterangan ahli. Orang disebut berkompeten apabila tidak di bawah umur dan tidak di dalam pengampuan. b) Bukti pola. surat dibuat atas sumpah jabatan atau dikuatkan dengan sumpah. d) Bukti yang dipindahkan (transfer). yaitu: a) Bukti transient. pola posisi furnitur. diminta keterangan dan dicatat dalam berita acara pemeriksaan. Bukti transfer terjadi karena kontak antara orang-orang atau benda-benda. maupun dengan tindak pidana itu sendiri. dll. yang merupakan bukti fisik yang paling klasik. disertai dengan alasan yang jelas dan tegas tetang keterangannya itu. atau ia alami sendiri. surat keterangan ataupun surat yang lain Pengantar Menuju Ilmu Forensik yang mempunyai hubungan dengan perkara yang sedang diadili. dll. dan harus segera dicatat dan didokumentasikan. jejak bibir di puntung rokok. yang karena persuaiannya. Yang dimaksudkan surat menurut penjelasan diatas adalah surat yang dibuat oleh pejabatpejabat resmi yang berbentuk berita acara. foto kopi. Petunjuk menurut KUHAP adalah perbuatan. Jika hal tersebut diberikan pada waktu pemeriksaan oleh tim penyidik atau jaksa penuntut umum. Petunjuk dapat berupa fotografi. c) Surat keterangan dari seorang ahli yang memuat pendapat berdasarkan keahliannya yang diminta secara resmi dari padanya. pola pecahan kaca/gelas. ketebalan dan arah geraknya asap. dilihat. apakah lampu menyala. kaset rekaman. suhu. Bukti ini sesuai dengan sifatnya hanya sementara dan akan dengan mudah hilang atau berubah. Dalam kriminalistik dikenal dua prinsip utama. atau antar orang dengan benda.hukum. akte. atau tapak ban mobil pada kasus kecelakaan bermotor). Keterangan tersebut diberikan sebelum mengucapkan sumpah janji di depan hakim. Sebagai contoh adalah: buah-buahan. yaitu: prinsip Locard yang menyatakan bahwa setiap kontak meninggalkan jejak ”every 7 . bercak darah di pakaian yang akan dicuci. menandakan bahwa telah terjadi suatu tindak pidana dan siapa pelakunya. rekaman vidio. misal sakit jiwa. sesuai dengan pasal 1 butir 28 KUHAP adalah keterangan yang diberikan oleh seorang yang memiliki keahlian khusus tentang hal yang diperlakukan untuk membuat terang suatu perkara pidana guna kepentingan pemeriksaan. trayektori proyektil. seperti derajat kekakuan mayat. distribusi lembam mayat. Alat yang paling terakhir menurut KUHAP adalah keterangan terdakwa. kejadian atau keadaan. Pasal 186 KUHAP menjelaskan bahwa: keterangan ahli dapat diberikan pada waktu pemeriksaan oleh penyidik atau jaksa penuntut umum yang dituangkan dalam suatu bentuk laporan dan dibuat dengan mengingat sumpah diwaktu menerima jabatan atau pekerjaan. ia ketahui sendiri. atau barang bukti lainnya yang diketemukan di tempat kejadian perkara (TKP). Bukti fisik yang diketemukan di TKP dapat dikelompokkan menjadi 4 (Sampurna 2000). d) Surat lain yang hanya dapat berlaku jika ada hubungannya dengan isi dari alat pembuktian yang lain. baik antara satu dengan yang lain. maka pada pemeriksaan di sidang. Barang bukti tersebut dapat digunakan sebagai rekonstruksi kasus atau penelusuran identitas pelaku. c) Bukti kondisional. dan posisi mayat. pola kebakaran. Pasal 187 memuat ketentuan tentang surat sebagaimana tersebutkan pada pasal 184 hurup c. Bukti seperti ini diketemukan oleh penyidik di TKP. Surat dapat berupa: a) Berita acara dan surat lain dalam bentuk resmi yang dibuat oleh pejabat umum yang berwenang atau yang dibuat dihadapannya. yang memuat keterangan tentang kejadian atau keadaan yang didengar. apakah pintu terkunci. merupakan keterangan dari terdakwa tentang apa yang ia lakukan. seperti tanda jejak sepatu. imprints dan indentation (tanda-tanda yang ditimbulkan akibat tekanan.

Pemanfaatan Laboratorium Forensik Untuk Kepentingan Non-Litigasi. Laboratorium Kriminalistik Segabai Sarana Pembuktian Ilmiah. dalam Tim IBA Kriminalistik.) IKIP Semarang Press.A. Ghalia Indonesia. W. Donatus. A.. Toksikologi Dasar. maka setiap jejak yang ditinggalkan orang atau benda harus berbeda dengan jejak orang atau benda yang lain. 2000). Jakarta 6) Saferstein R. 1984. hal ini berdasarkan latar belakang keahliannya (ilmu yang mendasari dalam membuat keterangan). The C. Bab-bab tentang kedokteran forensik.. Ahli forensik dan kriminilalistik berperan dalam upaya pembuktian dengan menyediakan dua alat bukti yang sah. dan berbagai aspek lainnya.07. (terj.. Jakarta 8 . Laporan Kegiatan Buku II. Dalam memberikan atau menuliskan pendapat atau opini seorang ahli harus berdasar-kan hasil temuan atau data adekuat baik yang diperoleh dari pemeriksaan bukti fisik maupun dengan membandingkannya terhadap data di literatur. Penerbit Rineka Cipta. Mosby Company. St. Para ahli forensik dan kriminalistik cendrung bersikap sebagai Pengantar Menuju Ilmu Forensik pendukung saja di dalam suatu proses peradilan pidana atau perdata.PW. metode analisis. 5th Ed. Introduction to Forensic sciences.. 2000. 1980. sepanjang ketentuan yang berlaku. tetapi tidak ada dua objek yang identik. Lembaga Pengabdian Kepada Masyarakat Universitas Indonesia. referensi ilmiah yang terkini. Akan tetapi di lain sisi sesuai dengan Keputusan Menteri Kehakiman No..M. Gabungan kedua prisip ini dapat diturunkan suatu pernyataan bahwa apabila tidak ada dua orang atau benda yang identik. Louis. Proyek Pengembangan Kewirahusaan Melalui Itegratif Bahan Ajar Kriminalistik. New Jersey 7) Sampurna. 2000. B. melainkan diberi peluang untuk memberikan pendapat atau opini berdasarkan keahliannya. Keterangan ahli atau surat keterangan oleh ahli harus diberikan oleh seseorang ahli yang memenuhi persyaratan kualifikasi dan berisikan keterangan yang berada dalam lingkup keahliannya (bukan keterangan bersifat awam) (Sampurna. Pendapat ahli satu dengan yang lainnya tentang suatu hal tentu dapat berbeda. P.01. yaitu dari bersifat pasif menjadi akfit.1). Criminalistics. dalam Tim IBA Kriminalistik. A. Meskipun demikian harus diakui pula bahwa pada akhir-akhir ini memang sedang terjadi pergeseran peran ahli forensik.V. yaitu keterang ahli dan surat (yang dibuat oleh ahli). baik oleh institusi yang sama maupun institusi yang lain. Englewood Cliffs. A Simon & Schuster Co. Missori 2) Kansil. T. Sampurna (2000) menggambarkan bahwa ahli forensik maupun kriminalistik dapat terlibat pada setiap tahap peyidikan (lihat gambar 1. Bahan Bacaan 1) Eckert.. Lembaga Pengabdian Kepada Masyarakat Universitas Indonesia. 1995. Jakarta 3) Loomis. Untuk itu diperlukan kerjasama antara aparat penegak hukum dan ahli forensik. 1978. Laporan Kegiatan Buku II.03 tahun 1983 dituntut pembuktian secara ilmiah dengan tujuan untuk mendapatkan kebenaran materiil.contact leaves a trace” dan prinsip individualitas yang menyatakan bahwa dua objek mungkin tidak dapat dibedakan. kecanggihan teknologi dari alat yang digunakan memeriksa barang bukti. CST. Sehingga pemeriksaan kriminalistik harus diberi peluang untuk melakukan pemeriksaan ulang. Jakarta 5) Purwandianto. dan secara teknis dianggap benar. 1991. Dalam hal ini keterangan ahli tidak dibatasi dengan ketentuan tentang ”yang merupa-kan hal-hal yang dialami atau didengar atau dilihat sendiri oleh saksi”. Secara tradisi di Indonesia. Semarang 4) Perdanakusuma.. an Introduction to Forensic Science.G. bahwa sejak lama keputusan apakah di dalam pemecahan suatu kasus pidana atau perdata diperlukan buktibukti ilmiah tidak berada ditangan para ahli forensik atau kriminalistik melainkan di tangan para penegak hukum. Hal ini tentunya merupakan kendala dalam pembuktian secara ilmiah kasus pidana maupun penegakan hukum. Proyek Pengembangan Kewirahusaan Melalui Itegratif Bahan Ajar Kriminalistik. Pengantar hukum kesehatan Indonesia. serta menggunakan prinsip dan metode ilmiah yang diakui.

disamping itu dia juga dikenal sebagai toksikolog dijamannya.C. yang selalu pada anak panahnya terdapat racun. Untuk mencegah peracunan. nabati. besi. dan mineral. Perkembangan Awal Toksikologi Sejak perkembangan peradaban manusia dalam mencari makannya. terpentine. bahwa efek berbahaya (toksik) yang ditimbulkan oleh zat racun (tokson) telah dikenal oleh manusia sejak awal perkembangan beradaban manusia. dan selanjutnya mempelajari ilmu kedokteran di Paris. Dalam tulisannya (1814-1815) mengembangkan hubungan sistematik antara suatu informasi kimia dan biologi tentang racun. Ia adalah orang Spayol yang terlahir di pulau Minorca. perak. yaitu besar pada jaman Mesir dan Romawi kuno adalah Pendacious Dioscorides (A. Oleh manusia efek toksik ini banyak dimanfaatkan untuk tujuan seperti membunuh atau bunuh diri. Pernyataan-pernyataan ini menjadi dasar bagi konsep hubungan dosis reseptor dan indeks terapi yang berkembang dikemudian hari. bermanfaat serta diperlukan oleh tubuh agar dapat hidup atau menjalankan fungsinya. yang pertama kali meletakkan konsep dasar dasar dari toksikologi. Disamping banyak lagi nama besar toksikolog pada jaman ini. tananaman. adalah seorang dokter tentara.C. yaitu dengan menghambat laju absorpsi racun dari saluran pencernaan. Orfila juga merancang berbagai metode untuk mendeteksi racun dan menunjukkan pentingnya analisis kimia sebagai bukti hukum pada kasus kematian akibat keracunan. Dia banyak menulis racun bisa ular dan didalam bukunya juga menggambarkan. bahwa orang Mesir kuno telah memiliki pengetahuan penangkal racun.D. dikenal sebagai bapak Materia Medika. Hal ini membuktikan. tembaga. emas.) di dalam Charaka Samhita disebutkan. Dia adalah orang pertama.). dan penangkal racun gigitan ular. seng. toksikolog besar. Usaha ini seiring dengan perkembangan toksikologi itu sendiri. 50). Paracelcius adalah nama samaran dari Philippus Aureolus Theophratus Bombast von Hohenheim (1493-1541). Sedangkan di India (500 . dan di dalam Susrata Samhita banyak menulis racun dari makanan. tentu telah mencoba beragam bahan baik botani. yang menjelaskan nilai pentingnya analisis kimia guna membuktikan bahwa simtomatologi yang ada berkaitan dengan adanya zat kimia tertentu di dalam badan. hanya dosis yang membuatnya menjadi tidak beracun”. yaitu dari akar kata tox.600 B. Di dalam bukunya dia Pengantar Toksikologi mengelompok-kan racun dari tanaman. Orfila 9 . Di dalam ”Papyrus Ebers (1552 B. timbal. Dimana panah pada saat itu digunakan sebagai senjata dalam peperangan. Sumbangan yang lebih penting bagi kemajuan toksikologi terjadi dalam abad ke-16 dan sesudahnya. Dalam postulatnya menyatakan: “Semua zat adalah racun dan tidak ada zat yang tidak beracun. maupun dari mineral. Hippocrates (460-370 B.BAB II PENGANTAR TOKSIKOLOGI 2. Kata racun ”toxic” adalah bersaral dari bahasa Yunani.1. yang hidup antara tahun 1787 sampai tahun 1853. hewan. dan verdigris (kerak hijau pada permukaan tembaga). evaluasi yang lebih kritis terhadap usaha ini baru dimulai oleh Maimonides (1135 . opium. Dalam kontek ini kata makanan dikonotasikan ke dalam bahan yang aman bagi tubuhnya jika disantap. Namun.C.) orang Mesir kuno memuat informasi lengkap tentang pengobatan dan obat.1204) dalam bukunya yang terkenal Racun dan Andotumnya. Sedangkan kata racun merupakan istilah yang digunakan untuk menjelaskan dan mengambarkan berbagai bahan ”zat kimia” yang dengan jelas berbahaya bagi badan. hiosiamus. yang aman dan berbaya. dikenal sebagai bapak kedokteran. hewan. seperti antimon (Sb). timbal. dimana dalam bahasa Yunani berarti panah. bersifat sebagai racun. Pada awak karirnya ia mempelajari kimia dan matematika. Matthieu Joseph Bonaventura Orfila dikenal sebagai bapak toksikologi modern. terdapat satu nama yang perlu mendapat catatan disini. Melalui pengalamannya ini ia mengenal makanan. bahwa tembaga. orang senantiasa berusaha menemukan dan mengembangkan upaya pencegahan atau menawarkan racun. Di Papyrus ini juga memuat ramuan untuk racun.

mengakibatkan DDT akan terakumulasi (tertimbun) dalam waktu yang lama di jaringan lemak. dengan penekanan pada mekanisme efek berbahaya zat kimia itu dan berbagai kondisi di mana efek berbahaya itu terjadi. Oleh sebab itu. Perbandingan sangat kurang informatif. Terdapat dua aspek yang harus diperhatikan dalam mempelajari interakasi antara zat kimia (zat aktif biologis) dengan organisme hidup. konsentrasi racun di reseptor. stupefying or narcotic. yaitu: corrosives. dimana dalam konsentrasi yang sangat rendah (10-9 mg/kg berat badan). acrids. Efek atau kerja toksik seperti ini lebih dikenal dengan efek toksik yang bersifat kronis. maka perlu untuk mengidentifikasi mekanisme biologi di mana efek berbahaya itu timbul. narcoticacid. 10 . Ia dapt juga membahas penilaian kuantitatif tentang berat dan kekerapan efek tersebut sehubungan dengan terpejannya (exposed) makhluk tadi. sifat zat tersebut. sudah dapat mengakibatkan efek kematian. kecuali jika pernyataan tersebut melibatkan informasi tentang mekanisme biologi yang sedang Pengantar Toksikologi dipermasalahkan dan juga dalam kondisi bagaimana zat kimia tersebut berbahaya. pendekatan toksikologi seharusnya dari sudut telaah / studi tentang berbagai efek zat kimia atas berbagai sistem biologi. yaitu kerja farmakon pada suatu organisme (aspek farmakodinamik / toksodinamik) dan pengaruh organisme terhadap zat aktif (aspek farmakokinetik / toksokinetik) aspek ini akan lebih detail dibahas pada sub bahasan kerja toksik. dimana telah diketahui bahwa sifat DDT yang sangat sukar terurai dilingkungan dan sangat lifofil. namun pada dosis tersebut memberikan efek yang mematikan bagi serangga. Dalam bukunya Traite des poison. Pengertian Toksikologi dan Racun Secara sederhana dan ringkas. akan terjadi absorpsi DDT dari lingkungan ke dalam tubuh dalam waktu relatif lama. dia membagi racun menjadi enam kelompok. Pada umumnya efek berbahaya (efek farmakologik) timbul apabila terjadi interaksi antara zat kimia (tokson atau zat aktif biologis) dengan reseptor (tempat berikatnya tokson). pendekatan ini melahirkan suatu bidang toksikologi modern. Telah dipostulatkan oleh Paracelcius. M. astringents. Sehingga apabila menggunakan istilah toksik atau toksisitas. Sedangkan toksisitas merupakan sifat relatif dari suatu zat kimia.B. Sehingga apabila batas konsentrasi toksiknya terlampaui. Orfila memainkan peranan penting pada kasus LaFarge (kasus pembunuhan dengan arsen) di Paris. bahwa sifat toksik suatu tokson sangat ditentukan oleh dosis (konsentrasi tokson pada reseptornya).2. adalah salah satu contoh tokson. Adalah biasa untuk mengatakan bahwa satu zat kimia lebih toksik daripada zat kimia lain.J. selain itu karena ia memperkenalkan metodologi kuantitatif ke dalam studi aksi zat tokson pada hewan. Namun sebaliknya apabila kita terpejan oleh DDT dalam waktu yang relatif lama. Misal insektisida rumah tangga (DDT) dalam dosis tertentu tidak akan menimbulkan efek yang berbahaya bagi manusia. Sifat toksik dari suatu senyawa ditentukan oleh: dosis. Artinya kehadiran suatu zat yang berpotensial toksik di dalam suatu organisme belum tentu menghasilkan juga keracunan. 2. dengan metode analisis arsen. Hal ini disebabkan karena konsentrasi tersebut berada jauh dibawah konsentrasi minimal efek pada manusia. toksikologi dapat didefinisikan sebagai kajian tentang hakikat dan mekanisme efek berbahaya (efek toksik) berbagai bahan kimia terhadap makhluk hidup dan sistem biologik lainnya. paparan terhadap organisme dan bentuk efek yang ditimbulkan. kondisi bioorganisme atau sistem bioorganisme. ia membuktikan kematian diakibatkan oleh keracuanan arsen.bekerja sebagai ahli medikolegal di Sorbonne di Paris. Toksisitas merupakan istilah relatif yang biasa dipergunakan dalam memperbandingkan satu zat kimia dengan lainnya. terbit pada tahun 1814. dalam kemampuannya menimbulkan efek berbahaya atau penyimpangan mekanisme biologi pada suatu organisme. dan septica atau putreficants. Karena sifat fisiko kimia dari DDT. Toksin Clostridium botulinum. Orfila dikenal sebagai bapak toksikologi modern karena minatnya terpusat pada efek zat tokson. barulah akan muncul efek toksik. Apabila zat kimia dikatakan berracun (toksik). yaitu toksikologi forensik. maka kebanyakan diartikan sebagai zat yang berpotensial memberikan efek berbahaya terhadap mekanisme biologi tertentu pada suatu organisme.

Pada seorang anak yang tanpa menyadarinya telah memakan buah Atropa belladonna. pada mulanya dikembangkan sebagai zat kimia untuk perang. Namun pada penggunaan lebih dari 7 gram pada orang dewasa dan 150 mg/kg pada anakanak akan menimbulkan efek toksik. dilihat sebagai kerja samping yang tidak diinginkan. baru bekerja toksik pada dosis yang melebihi 10 g. dari sudut pandangan ahli mata merupakan efek terapi yang dinginkan. memungkinkan untuk membedakan apakah kerjanya sebagai obat atai sebagai zat racun. frekuensi kerja dan waktu kerja. Kerja medriatik (pelebaran pupil).Akumulasi pencemaran . Kimia analisis dibutuhkan untuk mengetahui jumlah toksikan yang melakukan ikatan dengan reseptor sehingga dapat memberikan efek toksik.Terapi Gambar 2. Immunologi Patologi Biologi Kimia Matematika Toksikologi Fisiologi Kesehatan masyarakat Lingkungan: . Hanya tujuan penggunaan suatu zat yang mempunyai kerja farmakologi dan dengan demikian sekaligus berpotensial toksik. Oleh sebab itu ungkapan kerja terapi maupun kerja toksik tidak pernah dinilai secara mutlak. Dengan demikian.1). Toksikologi modern merupakan bidang yang didasari oleh multi displin ilmu. Semua kerja dari suatu obat yang tidak mempunyai sangkut paut dengan indikasi obat yang sebenarnya. tetapi juga pada kemungkinan untuk berkontak dengannya dan pada jumlah yang masuk dan diabsorpsi.1: Hubungan ilmu dasar dan terapan dengan cabang toksikologi. kemudian digunakan sebagai insektisida dan kini juga dipakai untuk menangani glaukoma. seperti Pengantar Toksikologi kimia. Seperti penelitian racun (glikosida digitalis) dari tanaman Digitalis purpurea dan lanata. maka mediaris maupun mulut kering harus dilihat sebagai gejala keracuanan. resiko keracunan tidak hanya tergantung pada sifat zatnya sendiri. fisika.Diagnosis . Bila seorang ahli penyakit Farmakologi dalam menggunakan zat yang sama untuk terapi. ia dengan dapat dengan bebas meminjam bebarapa ilmu dasar.Kesehatan lingkungan kerja Ekonomi (dari segi manfaat): . namun kerja hambatan sekresi. biologi. Antara kerja (atau mekanisme kerja) sesuatu obat dan sesuatu tokson tidak terdapat perbedaan yang prinsipil. Bidang ilmu biokimia diperlukan guna mengetahui informasi penyimpangan reaksi kimia pada organisme yang diakibatkan oleh 11 . Inhibitor asetilkolinesterase jenis ester fosfat. justru diperoleh senyawa obat baru.Pencemaran . Tidak jarang dari hasil penelitian toksikologi. Ilmu toksikologi ditunjang oleh berbagai ilmu dasar. guna mempelajari interaksi antara zat tokson dan mekanisme biologi yang ditimbulkan (lihat gambar 2. yang diturunkan dari zat racun yang terdapat di dalam semanggi yang busuk. lazimnya keadaan ini manjadi terbalik. Dengan kata lain tergantung dengan cara kerja. ia hanya relatif.Perkembangan obat.Aspek medikolegal .Berbeda dengan metanol. yaitu diperoleh antikuagulan yang bekerja tidak langsung. zat tambahan pada makanan dan pestisida Forensik: . dapat dinyatakan sebagai kerja toksik. matematika. Pengobatan parasetamol yang direkomendasikan dalam satu periode 24 jam adalah 4 gram untuk orang dewasa dan 90 mg / kg untuk anak-anak.

Ia menangani studi efek toksik “toksisitas” di berbagai bidang. − dalam bidang industri kimia sebagai pelarut. Tosikologi forensik menekunkan diri pada aplikasi ilmu toksikologi untuk kepentingan peradilan. Sedangkan dari hasil analisis kuantitatif dapat 12 . Perubahan biologi akibat paparan tokson dapat termanisfestasi dalam bentuk perubahan sistem kekebakan (immun) tubuh. dan toksikologi mekanistik. sehingga ancaman kegagalan pengobatan (kematian) dapat dihindarkan. karena ahli farmakologi harus memahami tidak hanya efek bermanfaat zat kimia. yaitu: − bidang kedokteran untuk tujuan diagnostik. Mengadopsi konsep dasar yang dikemukakan oleh Paracelcius. Kerja utama dari toksikologi forensik adalah analisis racun baik kualitatif maupun kuantitatif sebagai bukti dalam tindak kriminal (forensik) di pengadilan. Cakupan dan Subdisiplin Toksikologi Toksikologi sangat luas cakupannya. dari suatu tokson. LOOMIS (1979) berdasarkan aplikasinya toksikologi dikelompokkan dalam tiga kelompok besar. fisiologi. serta hubungannya dengan biologi. manusia menggolongkan efek yang ditimbulkan oleh zat tokson menjadi konsentrasi batas minimum memberikan efek. dampak negatif dari akumulasi residu senyawa kimia pada lingkungan.3. dan racun hewan terhadap kesehatan. Farmakologi pada umumnya menelaah efek toksik. komponen.zat tokson. Toksikologi ekonomi membahas segi manfaat dan nilai ekonomis dari senobiotik. mikroskopi. Hasil analisis toksikologi dapat memastikan diagnose klinis. Bidang yang paling berkaitan dengan toksikologi adalam farmakologi. produk minyak bumi. tetapi juga efek berbahayanya yang mungkin diterapkan pada penggunaan terapi. − dalam pertanian sebagai pestisida zat pengatur pertumbuhan. Agar dapat menetapkan batasan konsentrasi ini toksikologi memerlukan dukungan ilmu kimia analisis. kesehatan lingkungan kerja. pencegahan. immonologi. tumbuhan beracun. yaitu dalam menunjukan wujud perubahan / penyimpangan kasar. Pengantar Toksikologi − dalam industri makanan sebagai zat tambahan baik langsung maupun tidak langsung. kertas dan pulpa. seperti pencemaran lingkungan. toksikologi klinik. dan konstrasi tertinggi yang dapat menimbulkan efek kematian. peyerbuk bantuan. dan zat tambahan pada makanan hewan. atau penyimpangan submikroskopi dari normalnya. mekanisme kerja toksik. yakni: toksikologi lingkungan. Untuk mengetahui efek berbahaya dari suatu zat kimia pada suatu sel. hubungan dosis respon. Toksikologi lingkungan lebih memfokuskan telaah racun pada lingkungan. Dari hasil analisis kualitatif dapat dipastikan bahwa kasus keracunan adalah memang benar diakibatkan oleh instoksikasi. Untuk menegakan terapi keracunan yang spesifik dan terarah. Di dalam industri kimia juga dipelajari pengaruh logam (misal dalam dalam pertambangan dan tempat peleburan). serta lebih terarah. dimana diagnose ini dapat dijadikan dasar dalam melakukan terapi yang cepat dan tepat. seperti toksikologi analisis. lebih dikenal dengan efek farmakologi). Ilmu statistik sangat diperlukan oleh toksikologi dalam mengolah baik data kualitatif maupun data kuantitatif yang nantinya dapat dijadikan sebagai besaran ekspresi parameter-parameter angka yang mewakili populasi. dan terapeutik. maupun kimia instrmentasi. dan bahan antara bagi plstik serta banyak jenis bahan kimia lainnya. daerah konsentrasi dimana memberikan efek yang menguntungkan (efek terapeutik . Analisis toksikologi klinik dapat berupa analisis kualitatif maupun kuantitatif. jaringan atau organisme memerlukan dukungan ilmu patologi. Perubahan biologis yang diakibatkan oleh zat tokson dapat diungkap melalui bantuan ilmu patologi. untuk itu diperlukan bidang ilmu immunologi guna lebih dalam mengungkap efek zat toksik pada sistem kekebalan organisme. biokimia. toksikologi hukum. toksikologi ekonomi dan toksikologi forensik. diperlukan kerjasama antara dokter dan toksikolog klinik. Masih dijumpai subdisiplin toksikologi lainnya selain tiga golongan besar diatas. batas konsentrasi dimana sudah memberikan efek berbahaya (konsetrasi toksik). LU (1995) mengelompokkan ke dalam empat bidang. 2. toksikologi kerja.

tidak jarang penyemprotan pestisida berlebih justru dilakukan pada produk pertanian satu-dua hari sebelum panen. mengakibatkan 13 . pestisida. Pemakaian pertisida yang tidak benar juga merupakan salah satu penginduksi toksisitas kronik (menahun). mengakibatkan neurotksis. Ikan terkontaminasi ini dikonsumsi oleh penduduk disekitar teluk. Keracunan mungkin terjadi akibat pejanan tokson di tempat kerja. masyarakat menuntut perbaikan kondisi kesehatan dan kehidupan. seperti pupuk. Toksikologi kerja merupakan subbagian dari toksikologi lingkungan. dan ini membentuk dasar bagi toksikologi hukum. Penyakit Minamata di Jepang pada tahun 1950an diakibatkan karena pembuangan limbah industri yang mengandung metil merkuri ke teluk Minamata. salah satunya meningkatnya jumlah produksi pangan. telah mengakibatkan keracunan syaraf pada 16 ribu penduduk. Hal ini mungkin dapat mengkibatkan efek buruk yang akut maupun kronik. Mich. sehingga dapan juga mengakibatkan berkurangnya atau bahkan musnahnya predator insek tersebut. banyak diantaranya dalam jumlah besar.diperoleh informasi tingkat toksisitas pasien. juga dengan menentukan syarat penggunaan zat kimia lainnya. Seperti pada tahun 1930 di Detroit. telah ditengarai mengakibatkan mutasi genetika dari insektisida tersebut. Dalam hal ini diperlukan interpretasi konsentrasi toksikan. diantaranya makanan bergizi. dan standar yang membatasi atau melarang penggunaan zat kimia yang sangat beracun. pakaian. yang merupakan limbah buangan pabrik di Ingris pada saat itu. peraturan. Pemakaian pestisida. atau berlebih justru memberi beban pencemaran terhadap lingkungan. Banyaknya kasus keracunan masif akut dan keracunan kronis. tidak termakan oleh insek. dengan jalan demikian akan diperoleh buah atau sayuran yang ranun. sehingga pada akhirnya melahirkan mutan insek yang justru resisten terhadap pestisida jenis tertentu. Dari perubahan konsentrasi di darah akan diperoleh gambaran apakah toksisitas pada fase eksposisi atau sudah dalam fase eleminiasi. Meningkatnya jumlah penduduk dunia menuntut. Efek toksik yang ditimbulkan oleh kesehatan dan keselamatan kerja merupakan masalah bidang toksikologi kerja. terjadi peningkatan jumlah kematian penduduk akibat penyakit jantung dan paru-paru. Di London. Untuk memenuhi tujuan ini. Pengantar Toksikologi Tidak jarang pemakaian pestisida yang tidak sesuai dengan atuaran. baik di darah maupun di urin. biasanya diperlukan analisis toksikan yang berulang baik dari darah maupun urin. karena pestisida kemungkinan dapat terakumulasi secara perlahan di dalam tubuh konsumen.4. kontaminasi ginger jake oleh Tri-o-kresil. 2. transportasi. yang diakibatkan oleh pencemaran lingkungan akibat proses produksi. Melalui berbagai cara bahan kimia ini kontak dengan penduduk. Perkembangan Mutahir Toksikologi Dalam perkembangan beradaban modern. dari terlibatnya manusia pada proses produksi. perubahan ekosistem. berbagai jenis bahan kimia harus diproduksi dan digunakan. Untuk mengetahui tepatnya tingkat toksisitas pasien. distribusi ke konsumen. Hal ini disebabkan oleh kontaminasi udara oleh Belerang dioksida dan partikel tersuspensi. mutu kesehatan yang tinggi. dengan tujuan buah atau daun sayuran tidak termakan insek sebelum panen. dan terakhir pada tingkat pemakai. Profil semacam itu hanya dapan ditentukan lewat berbagai jenis penelititan toksikologi yang relevan. pada tahun 1952. karena pembasmian pada salah satu insteksida akan berefek pada rantai makanan dari organisme tersebut. Dalam hal ini diperlukan bahan kimia. melalui konsumsi buah atau sayuran yang sebelumnya diberikan pestisida sebelum panen. Petani berkeinginan mendapatkan untung yang tinggi dari hasil pertaniannya.rebisida. yang lebih seksama. Toksikologi hukum mencoba melindungi masyarakat umum dari efek berbahaya tokson dengan membuat undang-undang. Diperkirakan berribu-ribu bahan kimia telah diproduksi secara komersial baik di negara-negara industri maupun di negara berkembang. Namun tindakan ini justru membahayakan konsumen. Gambaran lengkap tentang efek toksik sangat diperlukan untuk menetapkan peraturan dan standar yang baik. yang mengakibatkan ikan di teluk tersebut terkontaminasi oleh metil merkuri.

serta melakukan evaluasi dan pemantauan efek toksik senyawa kimia yang telah beredar dan dimanfaatkan oleh masyarakat. Karena itu. ”sistem penilaian berlapis” memungkinkan keputusan dibuat pada berbagai tahap pengujian toksikologik. Pengantar Toksikologi Karena banyaknya orang yang terpejan dengan bahan-bahan kimia ini. imunotoksikologi. morfologik pada tingkat subsel. Pencapaian di bidang ini telah terbukti dapat membantu para mengambil keputusan (pemerintah) yang bertanggungjawab dalam menjalankan surveilan medik yang sesuai pada pekerja atau masyarakat yang terpejan. persyaratan yang lebih ketat sebelum suatu bahan kimia baru dapat dilepas pemakaiannya ke masyarakat. 14 . Banyak lagi metode uji invitro yang sangat bermanfaat dalam menunjang perkembangan ilmu toksikologi itu sendiri. Untuk memenuhi kebutuhan ini. di Eropa Barat terjadi kasus keracunan yang dikenal dengan kasus Talidomid. Kemajuan yang dicapai dalam bidang biokimia dan toksikokinetik. ahli toksikologi modern harus mencoba mengidentifikasikan berbagai indikator pejanan dan tanda efeknya terhadap kesehatan yang dini dan reversibel.deposisi (pengendapan) metil merkuri di dalam tubuh. Sampai saat ini masih kontropersial didiskusikan. Salah satu contoh. pada saat yang tepat untuk melindungi kesehatan masyarakat baik sebagai individu yang bekerja maupun masyasakat yang terpejan. belakangan diketahui bahwa salah satu dari bentuk rasemat Talidomid ini memberikan efek menghambat tertumbuhan organ tubuh pada janin di masa kandungan. ”Petanda biologik” semacam itu dimaksudkan untuk mengukur pejanan terhadap toksikan atau efeknya di samping untuk mendeteksi kelompok masyarakat yang retan. Oleh karena itu. serta perkembangan ilmu biologimolekular berperan dalam memberikan pengertian yang lebih baik tentang sifat. lebih banyak indikator toksisitas. Prosedur ini sangat berguna dalam pengujian karsinogenisitas. dan imunotoksisitas karena besarnya biaya yang terlibat dan banyaknya sistem uji yang tersedia. dimana prosedur pengujian toksisitasnya menjadi semakin komplek. Efek samping yang muncul dari pemakaian ini adalah terlahir janin dengan pertumbuhan organ tubuh yang tidak lengkap. Misalnya perkembangan bidang ilmu tersebut dapat memberikan berbagai metode uji toksikologi secara invitro. Pada akhir 1950-an sampai awal tahun 1960-an. Hal ini penting untuk menentukan ketentuan keputusan. Disamping itu. beberapa kreteria telah diajukan dan dipakai untuk memilih menurut prioritasnya bahan kimia yang akan diuji. seperti uji senyawa yang mengakibatkan kerusakan sel hati ”hepato toksik” dapat dilakukan langsung pada kultur sel hati secara invitro. yang telah mengungkapkan beragamnya sifat dan sasaran efek toksik. dengan tujuan menekan mual-mutah yang sering muncul pada trimester pertama pada kehamilan. maka kita harus berupaya mencari pengendalian yang tepat sebelum terjadi kerusakan yang hebat. disini dilihat tingkat pertumbuhan sel dan perubahan DNA yang dialamai oleh sel akiat pejanan toksikan uji. dimana target uji langsung pada tingkat sel. muntah. bila mungkin. Kejadian-kejadian di atas dan peristiwa tragis keracunan masif lainnya telah menghasilkan program pengujian yang lebih intensif. kasus pencemaran lingkungan di Indonesia akibat proses produksi adalah kasus teluk Buyat. salah satunya mengakibatkan kebutaan. Contoh yang menonjol adalah penggunaan penghambat kolinesterase sebagai indikator pejanan pestisida organofosfat dan berbagai parameter biokimia untuk memantau pejanan timbal. atau uji toksikan yang mempunyai sifat sebagai karsinogen juga dapat dilakukan pada kultur sel normal. Karena efeknya tersebut pada waktu itu banyak diresepkan pada ibu-ibu hamil. tempat. mutagenisitas. toksikologi genetika. Talidomid adalah senyawa kimia yang pertama disintesa untuk obat menekan rasa mual. dan cara kerja berbagai toksikan. ada kebutuhan untuk mempermudah tugas penilaian toksikologik atas begitu banyak bahan kimia. sehingga dapat dihindarkan penelitian yang tidak perlu. Menggunakan indikator biologi seperti jenis ikan tertentu untuk memantau tingkat cemaran limbah cair insdustri sebelum dinyatakan aman untuk dilepaskan ke lingkungan. Metil merkuri adalah senyawa toksik yang mengakibatkan penyakit neurologik berat. Pada gilirannya ini menuntut lebih banyak penelitian pada hewan.

toksikologi dapat menyediakan bahan kimia alternatif yang lebih aman untuk pertanian.C. sel. kama data tersebut harus memenuhi standar tertentu. Semarang 3. sedangkan penilaian resiko digunakan dalam hubungan dengan efek bahan yang diketahui tidak berrabang batas atau ambang batasnya tak dapat ditentukan. Toksikologi juga berperan dalam pengembangan obat baru. dan ”nilia ambang batas” dari toksikan yang masih dapat ditolerir.(terj. dan kebutuhan konsumen melalui penentuan hubungan strukter-toksisitas. Sistem ini memiliki banyak keuntungan. (terj. 1985. yang dibandingkan dengan pertanian konvensional sangat sedikit membutuhkan tanah. 2000. Bahan Bacaan: 1. Pengantar. uji mutagenesis. telah terbukti memberikan bebagai kemajuan jika dibandingkan pertanian konvensional. Ling. miningkatkan keragaman penelitian terutamanya yang berkaitan dengan mekanisme keracunan. T. Wattimena. Inc. Philadelphia 15 .. dan bentuk-bentuk kehidupan yang lebih rendah. pembuktian dosis yang aman. Nugroho. Jakarta 2.E. Penilaian tentang keamanannya merupakan tantangan dang tunggung jawab toksikologi. Hanley & Belfus. ahli toksikologi akan selalu terlibat dalam menentukan batas pejanan yang aman atau penilaian resiko dari pejanan.J.). Ariens. Kemanan makanan semacam ini membutuhkan evaluasi keamanan yang memadai. Meluasnya bidang cakupan dan makin banyaknya subdisiplin toksikologi seperti digambarkan di atas memberikan gambaran tersendiri tentang kemajuan akhir dalam toksikologi. Pengurangan sifat toksik mungkin dapat dicapai dengan mengubah toksisitas sasaran atau dengan mengubah sifat toksokinetiknya.R.Y. dimana standar ini dapat diterima secara international. Melalui rekayasa genetika pada tanaman pertanian telah terbukti diperoleh bibit unggul. Agar data-data tersebut dapat diterima secara umum. UI Press. Donatus. Batas pejanan yang aman mencangkup ”asupan (intake) harian yang diperbolehkan.). Toksikologi Dasar.M.E.. merupakan andalan dalam meningkatkan pasokan makanan kita. maka lebih sering digunakan organ terisolasi.) IKIP Semarang Press.A. Organ Sasaran. F. Oleh sebab itu maka data toksisitas yang dihasilkan dimana saja sebaiknya dapat diterima secara international. serta penelitian toksokinetik.. 4. Pada akhirnya. Gadjah Mada University Press.5.. Karena imbauan masyarakat untuk mengurangi penggunaan hewan coba dengan alasan Pengantar Toksikologi prikemanusiaan. sudah menjadi prasat dalam pengembangan obat baru harus dibarengi baik uji toksisitas akut maupun toksisitas krinis.. penentuan hubungan dosis-efek dan dosisrespon. dengan persyaratan uji yang ketat.Yogyakarta..A. biotransformasi. L. seperti pengujian yang lebih cepat dan lebih murah. Bersama dengan ilmu-ilmu lain.Salah satu wujud perlindungan kesehatan masyarakat. Toksikologi Dasar. Toksikologi Umum. Simonis. dan Penilaian Resiko. ahli toksikologi harus terus memperbaiki prosedur uji untuk mengurangi hasil positif palsu dan negatif palsu. Penentuan ini merupakan penelitian menyeluruh tentang sifat toksik. 2. Mingkatnya kebutuhan akan uji toksikologik. Untuk itu lembaga terkemuka dunia mengeluarkan standar seperti yang dikeluarkan oleh Lembaga pengawas obat dan makanan Amerika (FDA) mengeluarkan “Good Laboratory Practice” . Loomis. (terj. dan terus melakukan penelitian yang dirancang untuk meningkatkan pemahaman yang lebih baik akan pentingnya efek toksik sehingga penilaian keamanan/resiko berbagai tokson dapt dilakukan dengan hasil lebih memuaskan. Dengan meningkatnya tuntutan ini akan mendorong perbaikan prosedur pengujian yang lebih sederhana dan handal. Prospek Masa Depan Kemajuan di bidang bioteknologi pertanian. seperti misal pengujian karsinogen “uji kanker”. E. Asas. Lu. 1995.J. Mutschler. 1978. menggunakan “petanda biologik” (biomarker) yaitu kultur sel kanker. A. jaringan biakan. namun pada kenyataannya terdapat keterbatasan akan fasilitas dan sumber daya manusia yang memenuhi syarat. industri. Toxikology Secrets.

dll). metamfetamin. Paparan dapat melalui kulit. metamfetamin. oral. III Zat aktif tersedia untuk memberikan efek Ketersediaa n biologik Interaksi toksonreseptor dalam organ efektor . LSD. morfin. Sedangkan pemasukan xenobiotika langsung ke sirkulasi sistemik (injeksi). anti depresan trisiklik. amfetamin) marijuana. barbiturate. rektal.Distribusi Metabolism e Ekskresi Fase: Toksokinetik Kontak/ Penggunaa Efek Fase: Eksposisi Fase: Toksodinamik Gambar 3. methamfetamin fentanyl. inhalasi.Adsorpsi . 3. atau vaginal. Kerja toksik pada umumnya I . heroin. topikal.BAB III FASE KERJA TOKSIK Dua aspek yang perlu diperhatikan dalam menelaah interaksi senobitika dengan organisme hidup yaitu: kerja senobiotika pada organisme dan reaksi atau efek yang ditimbulkan. benzodiazepin. nikotin. daun ganja. kokain. sehingga xenobiotika akan telarut di dalam cairan saluran pencernaan.1. Xenobiotika yang terlarut akan siap terabsorpsi secara normal dalam duodenal dari usus halus dan ditraspor melalui pembuluh kapiler mesenterika menuju vena porta hepatika menuju hati sebelum ke sirkulasi sistemik. kloroform.Bentuk farmasetik hancur . maka terlebih dahulu kapsul/tablet akan terdistegrasi. dapat dikatakan bahwa xenobiotika tidak mengalami proses absorpsi. saluran pernafasan (inhalasi) atau dengan cara injeksi.Zat aktif melarut Zat aktif tersedia untuk diabsorpsi Ketersediaan Farmasetik II merupakan hasil sejumlah besar proses biologi yang komplek. Pada pemakaian oral (misal sediaan dalam bentuk padat).1. Paparan xenobiotika (rute administrasi) dapat melalui oral. Fase eksposisi: Dalam fase ini organisme terpapar (terkontak) dengan senobiotika. toksokinetik dan fase toksodinamik (lihat. Secara umum kerja toksik dapat digambarkan dalam rantai kerja yang terdiri dari: fase eksposisi. Tabel 3.1). Beberapa contoh rute pemakaian obat-obat terlarang Rute Oral Inhalasi Merokok Intravenus Intranasal Dermal Drugs (Obat-Obat terlarang) cannabinoide. Gam.1: Rantai fase kerja tokson (racun) pada organisme 3. kokain. heroin. Fase Kerja Toksik 16 . Crack ”kokain”. fensilidin kokain. alkaloid dengan titik didih yang rendah (nikotin. meskalin. eter. ecstasy pelarut-pelarut perangsang (terpentin. opiate.

Pada pemakaian oral (misal sediaan dalam bentuk padat). Untuk mengakhiri efek yang timbul. topikal. distribusi. sifat fisikokimia tokson dan konsentrasinya. Jika tubuh terpejan oleh xenobiotika. serta proses eleminasi (proses hilangnya xenobiotika dari dalam tubuh). Perubahan konsentrasi xenobiotika ditentukan oleh: dimana dan berapa cepat xenobiotika diabsorpsi menuju ke sirkulasi sistemik. hasil interaksi tokson dengan reseptor akan menimbulkan efek farmakologi. untuk mengertikan faktor-faktor yang dapat mendorong penyalahgunaan xenobiotika tersebut. Tubuh mengenal drug sebagai senyawa asing atau xenobiotika. suspensi atau larutan). sirop. metabolisme dan eliminasi (ADME) terangkum dalam fase toksokinetik. aerosol. Paparan xenobiotika (rute administrasi) dapat melalui oral. oleh tubuh tokson akan dimetabolisme dan dieliminasi dari dalam tubuh. rektal. dapat dikatakan bahwa xenobiotika tidak mengalami proses absorpsi. jika xenobiotika terlalu non polar. Sifat-sifat farmakokinetik suatu xenobiotika digunakan oleh farmakolog. Pada pemakaian intravenus obat dapat langsung ditranspor ke reseptor. dan durasi dari efek farmakodinamiknya.1. salep. serta dari mana dan berapa cepat dieksresi dari dalam tubuh (Mutschler dan Schäfer-Korting. Secara umum toksokinetik menelaah dari mana dan berapa laju absorpsi tokson dari lingkungan ke sistem peredaran darah. inhalasi. Laju resorpsi tokson ditentukan oleh daerah paparan (topikal.3. yang mengkaji perubahan konsentrasi (kinetika) dari xenobiotika di dalam tubuh organisme sebagai fungsi waktu. maka dia akan terlarut cukup kuat dalam lapisan lipofil dari membran sel.2. konsentrasi xenobiotika di reseptor. Absorpsi (Proses Invasi) Semua proses transfer tokson dari lingkungan menuju sistem peredaran darah dirangkum kedalam proses invasi. bagaimana enzim tubuh merubah struktur molekulnya. durasi efek. yang ditandai oleh masuknya xenobiotika dari tempat kontak (paparan) menuju sirkulasi sistemik tubuh. Laju absorpsi xenobiotika ditentukan oleh sifat membran biologis dan aliran kapiler darah tempat kontak serta sifat fisiko kimia dari xenobiotika itu sendiri. Toksokinetik (farmakokinetik) menelaah perubahan konsentrasi tokson terhadap waktu di dalam organisme.2. bagaimana distribusinya ke seluruh tubuh. maka terlebih dahulu kapsul/tablet akan terdistegrasi. bentuk farmasetik tokson (tablet. Farmakokinetik dapat juga dipandang suatu bidang ilmu. Proses absorpsi. Kelarutan xenobiotika akan sangat mempengaruhi laju absorpsinya. Proses ini semua menentukan efficacy (kemampuan xenobiotika mengasilkan efek). atau vaginal. proses ini juga digambarkan sebagai resorpsi. 1997). Demikian juga jika terlalu polar xenobiotika ini akan mudah terlarut di dalam saluran cerna namun transport melalui membran biologis akan terhambat. Sedangkan pemasukan xenobiotika langsung ke sirkulasi sistemik (injeksi). proses resorpsi. bagaimana terdistribusi di dalam tubuh organisme. Tokson dapat teresorpsi umumnya berada dalam bentuk terlarut atau terdispersi molekular. bagaimana enzim tubuh memetabolismenya. dari mana dan bagaimana tokson atau metabolitnya dieliminasi dari dalam tubuh. rute pemakaian ini tentunya akan memberikan efek yang paling maksimum dan onset aksi yang singkat. maka tubuh akan berusaha menghancurkan dan kemudian mengeliminasi senyawa xenobiotika ini dari dalam tubuh. intensitas dan qualitas efek dari obat. Farmakokinetik melibatkan proses invasi (masuknya xenobiotika ke tubuh). efektifitas dari xenobiotika. Xenobiotika yang terlarut ini akan terabsorpsi secara normal dalam duodenal dari usus halus dan ditraspor melalui pembuluh kapiler mesenterika menuju vena porta hepatika menuju hati sebelum ke sirkulasi sistemik. Rute pemakaian obat akan mempengaruhi onset dari aksi. ilmuwan klinik dan toksikolog untuk mengembangkan pengobatan. oral. trasportasi dan distribusi (pergerakan xenobiotika di dalam tubuh). Proses invasi disebut juga dengan absorpsi. Fase toksokinetik Efek toksik timbul jika tokson terabsorpsi kemudian ditransfer bersama sistem peredaran darah menuju reseptor. inhalasi atau injeksi). sehingga xenobiotika akan telarut di dalam cairan saluran pencernaan. 3. Namun pemakaian intravenus pada penyalahgunaan obat 17 . serta dijadikan dasar untuk mengetahui kapan dan Fase Kerja Toksik dalam bentuk apa xenobiotika tersebut masih dapat dideteksi setelah selang waktu pemakaian dan menginterpretasikan efek-efek xenobitika tersebut.

seperti: difusi pasif. melalui finocitose. WEISS M. atau fagocitose) atau melalui poren. oleh sebab itu pada kasus ini pemakaian melalui inhalasi dan merokok merupakan alternatif yang lebih poluler dikalangan junkies. Namun pemakain ini sangat berresiko ketimbang pemakaian secara inhalasi atau merokok. 3. Oleh sebab itu efek akan lebih cepat timbul. Distribusi Setelah tokson mencapai sistem peredahan darah. Setelah heroin sampai di sirkulasi sistemik. (1990) membagi distribusi ke dalam konveksi (transpor tokson bersama peredaran darah) dan difusi (difusi tokson di dalam sel atau jaringan). dari sini akan terdistribusi ke seluruh tubuh.5 20 Hati 2. Demikian juga pada pemakain heroin secara inhalasi. Transprot tokson intra. Pada paparan melalui oral bentuk farmasetik (tablet. karena sering ditemui muncul penyakit bawaan lain pada pemakaian injeksi. hepatitis. atau injeksi secara intravenus. maka rute pemakaian ini sangat digemari oleh para junkis. difusi aktif (melalui sistem transport tertentu . dengan merokok.2: Laju aliran darah pada berbagai organ pada orang dewasa Organ Prosen (%) dari Prosen (%) dari berat badan volum jantung per menit Aliran darahnya bagus: Ginjal 0.8 24 pencernaan Aliran darahnya kurang bagus: Kulit 10 6 Otot-otot 40 23 Aliran darahnya jelek: Jaringan Lemak 18 5 Fase Kerja Toksik Laju aliran darah (ml/min/100g organ) 400 85 54 400 84 70 5 5 2. Heroin biasanya digunakan dengan cara menguapkan dan kemudian uap dihirup. maka heroin sangat cepat menuju otak. ikatan dengan protein plasma). Sirkulasi sistemik sangat memegang peranan penting dalam transport xenobiotika antar organ dan jaringan di dalam tubuh.1 18 . maka drug akan sangat cepat terabsorpsi di alveoli paruparu. Transpor Transport dapat di kelompokkan ke dalam dua proses utama. Absorpsi ini sebagaian besar berlangsung di pembuluh kapiler usus halus. Sehingga laju peredaran darah di dalam organ atau jaringan juga akan menentukan kecepatan distribusi xenobiotika di dalam tubuh. efek eforia akan relatif sama tercapainya dibandingkan dengan pemakaian secara intravenus. kemudian melalui pembuluh Tabel 3.terlarang lebih banyak menimbulkan resiko yang berbahanya. Karena sangat cepatnya timbulnya efek pada pemakaian intravenus.dan inter organ di dalam tubuh diprasaranai oleh sistem peredaran darah.”cariier”. Difusi tokson melalui membran biologi dapat berlangsung melalui berbagai proses difusi. seperti infeksi HIV. sehingga intesitas eforia akan cepat tercapai. dll) akan terdispersi dan melarut di dalam cairan saluran pencernaan.5 100 Jantung 0. Laju difusi suatu tokson sangat ditentukan oleh sifat fisikokimanya (lipofili. Pemakaian ”crack” (bentuk kokain yang digunakan secara merokok) dengan menghisap akan menimbulkan onset aksi yang sangat singkat.2.8 28 Otak 2. Difusi berperan penting dalam transport suatu tokson diantara ekstra dan intra selular. Bentuk terlarut melalui pembuluh kapiler pada saluran pencernaan akan terabsorpsi. ukuran melekul. dan selanjutnya melalui pembuluh darah arteri dibawa ke otak.5 4 Lambung dan usus saluran 2. kapsul. derajat ionisasi.0 12 Paru-paru 1. yaitu konveksi (transport xenobiotika bersama aliran darah) dan difusi (transport xenobiotika melalui membran biologis). bersama darah akan terdistribusi ke seluruh tubuh.2. kapiler mesenterika menuju vena porta hepatika menuju hati sebelum ke sirkulasi sistemik. Jika drug dihisap melalui hidung atau bersamaan dengan rokok.

Namun pada kenyataannya. .3).sifat kimia Senyawa yang larut lemak akan lebih mudah terdistribusi ke seluruh jaringan tubuh. adalah organorgan yang memiliki laju aliran darah (perfusi) yang baik.laju aliran darah dari organ dan jaringan. 19 . sehingga pada umumnya senyawa lipofil akan mempunyai volume distribusi yang jauh lebih besar ketimbang senyawa yang hidrofil. Senyawa-senyawa lipofil akan dapat menembus membran biologis dengan baik. jantung. Perlu ditegaskan di sini bahwa. haruslah melewati membran biologis. Model yang paling sederhana untuk memahami jalu difusi xenobiotika di dalam tubuh adalah model kompartimen tunggal.Pada tabel 3. Difusi xenobiotika melalui membran biologis dapat berlangsung melalui berbagai proses. difusi aktiv.kelarutan . maka bersama darah melalui sirkulasi sistemik siap untuk didistribusikan ke reseptor dan ke seluruh tubuh. Pada model ini tubuh dipandang seperti satu ember besar. tubuh dibagi menjadi berbagai ruang difusi (kompartimen). Ketika xenobiotika mencapai pembuluh darah. Karena laju aliran darah dalam organ-organ ini sangat baik.2 menggambarkan perbedaan jalu aliran darah di berbagai organ tubuh. Jadi kemampuan suatu xenobiotika untuk terdistribusi di dalam tubuh dinyatakan sebagai parameter yang disebut dengan volume distribusi. yang dikenal dengan „poren“.sifat membran biologis . sehingga pada kapiler ini terdapat lubang-lungang yang besar. sedangkan senyawa yang polar (larut air) haruslah melewati lubang-lunag di membran biologis. pada jendela ini terjadi pertukaran cairan yang sangat intensiv.ikatan antara protein plasma dan protein jaringan . dimana faktor-faktor tersebut dapat dikelompokkan menjadi dua. para ilmuan farmakokinetik mengumpamakan bahwa xenobitika di dalam tubuh akan terdistribusi di dalam suatu ruang. TetraHidro-Canabinol (THC) (zat halusinogen dari tanaman ganja) adalah sangat larut lemak. yaitu: a) faktor biologis: . Distribusi Terdapat banyak faktor yang dapat mempengaruhi proses distribusi dari suatu xenobiotika. dengan panjang keseluruhan diduga sekitar 95000 km. melalui poren dan juga melalui jembatan intraseluler. jarak jendela dalam kapiler ini adalah tidak beraturan (contoh:tubulus ginjal). Secara keseluruhan luas permukaan kapiler tubuh (orang dewasa) diperkirakan berkisar antara 6000-8000 m2. Struktur membran basal dapat dibedakan menjadi: . Difusi Pada pemodelan farmakokinetik. maka xenobiotika akan sangat cepat terdistribusi homogen di dalam organ tersebut. yang memiliki sejumlah volume tertentu. . seperti: difusi pasiv. tidak terdapat hubungan antar sel-sel endotel.kapiler yang berjendela.perbedaan pH antara plasma dan jaringan b) faktor sifat molekul xenobiotika . Di bagian luar kapileredotel ini diselimuti oleh membran basal yang sangat halus dan elastis. Fase Kerja Toksik Laju penetrasi xenobiotika melewati membran biologis akan ditentukan oleh struktur membran basal dan juga sifat lipofilitasnya. yaitu membran yang menyeliputi sel-sel di dalam tubuh. agar xenobitika dapat ditransportasi dari saluran kapiler pembuluh darah menuju sel-sel pada jaringan tubuh. hati. Pembagian ruang ini hanya didasarkan pada laju distribusi xenobiotika. otak. oleh sebab itu dapatlah dimengerti. dimana difusi xenobiotika hanya ditentukan oleh daya konveksi di dalam ember. pembagaian kompartimen ini hanya merupakan langkah abstraksi guna mempermudah pemahaman ruang distribusi (difusi) xenobiotika di dalam tubuh. Jumlah poren dalam membran biologis adalah terbatas.ukuran molekul . lambung dan usus.kapiler yang sangat tertutup (contoh: barier sawar darah otak) . Organ tubuh seperti ginjal. jika dibandingkan pada organ-organ yang memiliki laju aliran darah relatif lambat.kapiler yang terbuka. yang dapat dilewati oleh plasma darah (contoh: hati). paru-paru. bahwa senyawa lipofil akan terdistribusi lebih cepat dibandingkan senyawa hidrofil (lihat tabel 3. Untuk memudahkan memahami sejauh mana suatu xenobiotika terdistribusi di dalam tubuh.

hidung. desulfurisasi. Biotransformasi pada umumnya berlangsung di hati dan sebagian kecil di organ-organ lain seperti: ginjal.2. saluran pencernaan. Berbeda dengan resorpsi tubular. Molekul-molekul dengan diameter yang lebih besar dari 4 nm atau dengan berat lebih besar dari 50 kilo Dalton (k Da) tidak dapat melewati filtrasi glumerular. oleh sebab itu THC memiliki bersifat agak hidrofil.hati ( empedu ) . Secara umum proses biotransformasi dapat dibagi menjadi dua fase. Proses utama ekskresi renal dari xenobiotika adalah: filtrasi glumerula.lapisan lendir di mulut . dealkilasi.kapilar-kapiler di kulit dan otot . Pada filtrasi glumerular. Yang dimaksud proses eliminasi adalah proses hilangnya xenobiotika dari dalam tubuh organisme. sekresi tubular melibatkan proses transport aktiv.barier sawar darah otak darah ( liquor) darah ( otak ) .darah ( hati ) . dan resorpsi pasiv tubular. xenobitika polar akan terperfusi sangat lambat atau sama sekali tidak xenobiotika lipofil dan hidrofil dapat lewat 3.lapisan lendir (mata.5 l/kg. Proses biokimia yang dialami oleh ”xenobiotika” dikenal dengan reaksi biotransformasi.3: Permeabilitas beberapa membran biologis (H Nau. kelenjar susu. dan jalur eksresi lainnya (kelenjar keringan. kelenjar ludah.lapisan lendir penanjang saluran pencernaan . Dalam fase pertama ini tokson akan mengalami pemasukan gugus fungsi baru. otot. Jalur eliminasi yang paling penting adalah eliminasi melalui hati (reaksi metabolisme) dan eksresi melalui ginjal. Tabel 3. tidak terionisasi.kulit Membran lipid dengan „Poren“ . Etanol (alkohol). terdistribusi di dalam cairan intra. Resorpsi pasiv tubular ditentukan oleh gradien konsentrasi xenobitika antara urin dan plasma di dalam pembuluh tubuli. 1994) Membran lipid . Fase Kerja Toksik Xenobiotika yang terikat dengan protein plasma tentunya tidak dapat terekskresi melalui ginjal. yang pada umumnya tidak diperlukan lagi oleh tubuh. Oleh sebab itu hanya senyawa dengan ukuran dan berat lebih kecil akan dapat terekskresi.tubulus ginjal . Xenobiotika yang masuk ke dalam tubuh akan diperlakukan oleh sistem enzim tubuh.sehingga THC akan sangat mudah terdistribusi jaringan lemak. Ginjal sangat memegang peranan penting dalam mengekskresi baik senyawa eksogen (xenobiotika) maupun seyawa endogen.plasenta . ukuran melekul memegang peranan penting. senyawa yang jaringan lemak. sebagian besar volume distribusi yang relatif besar (4-14 l/kg). deaminasi. kelenjar mamai. saluran pencernaan. yaitu fase I (reaksi fungsionalisasi) dan fase II (reaksi konjugasi). Volume distribusi (Vd) menyebabkan THC sangat lama tertambat di etanol adalah 0. paruparu). dan ini akan memperlambat laju ke seluruh jaringan dan akan terdeposisi di eliminasi THC. rekasi reduksi 20 . Eliminasi seatu xenobiotika dapat melalui reaksi biotransformasi (metabolisme) atau ekskresi xenobiotika melalui ginjal.3 Metabolisme dan Ekskresi Metabolisme dan ekskresi dapat dirangkum ke dalam eliminasi. pengubahan gugus fungsi yang ada atau reaksi penguraian melalui reaksi oksidasi (dehalogenasi.glomerulus ginjal (Filtrasi) hanya xenobiotika lipofil.darah ( kelenjar mamai) . oksidasi alkohol dan oksidasi aldehida).paru-paru . empedu. hidroksilasi. kantung kemih) . sehingga senyawa tersebut akan mengalami perubahan struktur kimia dan pada akhirnya dapat dieksresi dari dalam tubuh. kulit atau di darah. hal itu pun ekstraseluler tubuh. sekresi aktiv tubular. pembentukan oksida. paru-paru.dan Karena kelarutannya yang tinggi.

khususnya reaksi reduksi dan hidrolisis. glukuronidase) umumnya terikat pada membran dari retikulum endoplasmik dan sebagian terlokalisasi juga pada mitokondria. – • • • • • Pengambilan ion logam penting untuk kerja enzim – Inhibisi penghantaran elektron dalam rantai pernafasan Inhibisi pada transport oksigen karena gangguan pada hemoglobin Interaksi dengan fungsi umum sel Gangguan pada sintesa DNA dan RNA Kerja teratogenik Reaksi hipersensitif (alergi) 3. asam urat. Oleh sebab itu kompartemen disini tidak dapat didefinisikan sebagai suatu ruang. Mekanisme Utama Interaksi tokson-resptor adalah: • Interaksi dengan sistem enzim – Inhibisi enzim tak bolak-balik • Contoh: inhibisi asetilkolenesterase oleh organofosfat – Inhibisi enzim secara reversibel – Pemutusan reaksi biokimia – Inhibisi fotosinteses pada tanaman – Sentesis zat mematikan Fase Kerja Toksik . Sistem enzim yang terlibat pada reaksi fase I umumnya terdapat di dalam retikulum endoplasmik halus. Karena kompartemen merupakan gambaran sifat kinetik. melainkan lebih merupakan suatu proses kombinasi satu dengan yang lain. yang sampai saat ini masih banyak digunakan. amidase. biliribun. dalam waktu bersamaan akan ada molekul xenobiotika yang berikatan dengan reseptor dan ada terdapat juga molekul yang lain mengalami reaksi metabolisme. melainkan suatu poses yang memiliki laju yang sama (Weis 1990). disposisi. Kompartemen model adalah pemodelan klasik. maka tokson siap berinteraksi dengan reseptor. bahwa semua proses farmakokinetik terjadi tidaklah seperti alur blok yang diskret (satu proses akan diikuti oleh proses yang lain apabila proses sebelumnya telah tuntas berakhir). Setelah molekul xenobiotika diabsorpsi dan menuju sirkulasi sistemik. dan eliminasi dari suatu xenobiotika di dalam tubuh. sedangkan sistem enzim yang terlibat pada reaksi fase II sebagian besar ditemukan di sitosol. Pada fase II ini tokson yang telah siap atau termetabolisme melalui fase I akan terkopel (membentuk konjugat) atau melalui proses sintesis dengan senyawa endogen tubuh. dll). alkilasi. dan lainnya). Kurva konsentrasi suatu xenobiotika di dalam cairan tubuh merupakan jumlah dari proses invasi. metilasi. seperti efek toksik alergi. Enzim ini (seperti monooksigenase. Enzim-enzim yang terlibat dalam biotransformasi pada umumnya tidak spesifik terhadap substrat. yang mengkarakterisasi sifat-sifat absorpsi. mutagenesis. dan eliminasi.4. disamping itu ada bentuk terikat sebagai enzim terlarut (seperti esterase. bakteri flora usus juga dapat melakukan reaksi metabolisme. sulfoterase). Disamping memetabolisme xenobiotika. pembentukan asam merkaptofurat.(reduksi azo. Selain organ-organ tubuh. Proses invasi digambarkan sebagai fungsi input „I(t)“ dan proses ini menggambarkan bagaimana suatu xenobiotika mencapai sirkulasi sistemik. yang digunakan untuk menggambarkan sifat disposisi (perubahan konsentrasi sebagai fungsi waktu) xenobiotika di dalam tubuh. distribusi. Proses ini yang dimaksud dengan kombinasi satu dengan yang lain. seperti: Konjugasi dengan asam glukuronida asam amino. teratogenesis. Pemodelan Farmakokinetik Dalam mempelajari farmakokinetik suatu xenobiotika haruslah disadari. Poses distribusi dan eliminasi dirangkum ke dalam 21 3. reduksi nitro reduksi aldehid atau keton) dan hidrolisis (hidrolisis dari ester amida). Fase Toksodinamik Setelah tokson didistribusikan ke reseptor (tempat kerja tokson).3. schok anafilaktik. asam sulfat. maka akan siap di transportasi ke seluruh tubuh. Kompartemen model adalah gambaran kinetik. atau ada molekul yang langsung dieksresi oleh ginjal. sistem enzim ini juga terlibat dalam reaksi biotransformasi senyawa endogen (seperti: hormon steroid. Kualitas efek ini sebanding dengan konsentrasi tokson di reseptor. maka seharusnya pengertian suatu kompartemen dilandasi (dibatasi) atas laju dari suatu proses. Hasil interaksi ini diimplementasikan sebagai efek farmakologik (efek racun yang ditimbulkan.

2004). model psiologi. sehingga konsentrsi profil suatu xenobiotika dapat ditulis sebagai: Jika suatu xenobiotika diberikan secara intravenus dan perubahan konsentrasinya mengikuti hukum kinetika orde ke pertama. Alkohol adalah salah satu xenobiotika yang perubahan konsentrasinya di dalam tubuh manusia mengikuti hukum kinetika orde ke nol. Operasi ini ditandai dengan asterik (*). maka fungsi profil konsetrasinya dapat dinyatakan sebagai berikut: [C ](t ) = D iv Div ∑ α i e −λ t i n (3. Metabolit kinetik adalah analisa matematis dari profil konsentrasi senyawa induk dan metabolit yang terbentuk.2) αi dan λi = parameter diposisi n = jumlah fungsi eksponensial (jumlah dari kompartemen) t = waktu D iv p Ap ku p Up Am Gambar 3. yaitu: model kompartemen klasik.3) i =1 [C ](t ) = I (t ) * fd (t ) (3. Dalam menganalisis metabolit kinetik digunakan istilah senyawa induk (p) dan juga metabolit primer (mi).1: Skema model dari metabolit kinetik A U Div p : Jumlah total xenobiotika di dalam tubuh : Jumlah xenobiotik yang eliminasi melalui ginjal : Dosis intravenus : Senyawa induk ke km ku m : Konstanta laju eliminasi : Konstanta laju metabolisasi : Konstantan laju eliminasi melalui urin : Metabolit Analisis metabolit kinetik berdasarkan model kompartemen klasik dan psiologi didasarkan pada pengandaian model terstruktur. Laju invasi dan disposisi mengikuti hukum kinetika orde ke pertama artinya laju invasi dan disposisi berbanding lurus dengan konsentrasi xenobiotika. dan model komparten terbuka (Wirasuta. km ke m fd (t ) = ∑ α i e −λit i =1 n (3.fungsi disposis“fd(t)“. Dalam model ini juga diasumsikan bahwa laju distribusi dari 22 . dimana perubahan konsentrasi senyawa induk dan Fase Kerja Toksik metabolitnya memenuhi hukum kinetika orde pertama dan eleminasi senyawa induk berlangsung melalui hati (reaksi metabolisme) atau melalui ginjal (ekskresi). mengikuti hukum kinetika orde ke pertama. Oleh sebab itu disini dipandang perlu untuk menjelaskan model metabolit kinetik. Memperhatikan hubungan konsentrasi senyawa induk dan metabolit pada setiap waktu dapat menggambarkan keseluruhan jaringan proses farmakokinetik. Sehingga kurvakonsentrasi-waktu (konsentrasi profil) suatu xenobiotika merupakan gabungan dari fungsi input dan disposisi dari xenobiotika tersebut. yang artinya alkohol dieliminasi dari tubuh dengan kecepatan yang konstan. Persamaan matematis dari fungsi ini dapat ditulis dengan menggunakan operasi konvulasi. hanya sedikit xenobiotika mengikuti orde ke nol. melainkan juga metabolitnya. Sampai saat ini terdapat beberapa model untuk menganalisa metabolit kenetik dari suatu xenobiotika.1) = adalah sama dengan fungsi input I(t) Perubahan konsentrsi dari sebagaian besar xenobiotika di dalam tubuh. Secara umum fungsi diposisi ini digambarkan sebagai jumlah fungsi eksponential: Target analisis toksikologi tidaklah hanya senyawa induk. Konstelasi konsentrasi antara senyawa induk dan metabolitnya sebagai fungsi waktu merupakan hal yang penting bagi toksikolog forensik dalam menginterpretasikan hasil analisis berkaitan dengan pertanyaan kapan suatu paparan itu terjadi.

senyawa induk dan metabolitnya di dalam tubuh adalah sangat cepat dibandingkan dengan laju eleminasinya (Pang 1981.1). pada saat ini terjadi kesetimbangan kecepatan trasport antara kedua kompartemen.001 60 120 180 240 0 120 240 360 480 600 720 Waktu (min) Waktu (min) Gambar 3. profil konsentrasinya mengikuti model disposisi dua-kompartemen.8) ( )  n m  αi m    ∑ + s λ im  i =1  ( )     (3.001 0 Fase Distribusi Fase Eliminasi 10 Fase Eliminasi 1 0. Tranformasi persamaan tersebut ke daerah Laplace memberikan persamaan berikut ini: np  αi  iv p  (3. Konsep dari model ini didasarkan pada asumsi bahwa perubahan konsentrasi xenobiotika dan metabolitnya di dalam tubuh mengikuti hukum kinetik orde pertama. Pang dan Kwan 1982.1985.1 0. sehingga dalam melakukan analisis matematik metabolit kinetik xenobiotika seperti ini akan sangat komplek.2: Kurva konsentrasi-waktu xenobiotika A (kiri) dengan metabolitnya B (kanan) mengikuti hukum kinetika orde ke pertama. sehingga profil konsentrasi suatu xenobiotika dapat digambarkan sebagai jumlah persamaan eksponential. dimana persamaan matematis diselesaikan dengan menggunakan Transformasi Laplace (Weiss 1998.3) Dimana profil jumlah metabolit di dalam tubuh adalah: Am (t ) = (k k m D iv p em − ke p ) (e − ke p t −e − ke mt ) (3. Berikut ini gambaran skematis model metabolit kinetik pada model satu kompartemen: Perubahan jumlah xenobiotika dapat dituliskan sebagai berikut: A p (t ) = D iv pe − ke pt (3. Wirasuta 2004). dimana setelah injeksi A sangat cepat terdistribusi (fase distribusi).5) [ p](s ) = D p ∑    i =1  s + λi p  ( ) Menurut persamaan (3.1 0. yang ditandai dengan penurunan konsentrasi yang sangat cepat. fungsi ini ditulis sebagai: 23 Reaksi biokimia pembentukan metabolit primer dan transport metabolit yang terbentuk dari tempat reaksi metabolisme ke sirkulasi sistemik membutuhkan waktu. transit-metabolisme „„Ψp_m (t)“ (Weiss 1998). Houston 1982). A setelah intravenus. Masalah ini akan lebih mudah dipecahkan apabila analisa matematisnya dengan menggunakan model kompartimen terbuka. maka fungsi ini dikenal dengan fungsi waktu-transitmetabolisme-hepatika.01 0. kemudian diikuti dengan fase elminasi.9) Konsentrasi (mg/ml) Konsentrasi (mg/ml) 10 1 0.01 0. Jika xenobiotika (senyawa induk „p“ diberikan secara intravenus maka profil konsentrasinya seperti yang tertulis dalam persamaan (3). Laju rekasi dan tranport ini dikenal dengan fungsi waktuFase Kerja Toksik . maka profil konsentrasi metabolit primer adalah: [m]( s) = I m ( s) fd m ( s) [m](s) = F p_m CL p Ψ p_m (s) D iv p  αi p  ∑  s + λi i =1 p  np (3. Waktu paruh (t½) fase eliminasi biasanya digunakan oleh toksikolog forensik untuk menghitung/meraka kapan xenobiotika ”drug” pada waktu awal ”initial time” pemakaian.4) Banyak xenobiotika di dalam tubuh tidak mengikuti model satu kompartemen. Jika metabolisme berlangsung di hati.

I m ( s ) = F p_m CL p Ψ p _m ( s ) [ p ]( s ) 1998) Fp_m (Weiss (3. disebut dengan volume distribusi dalam keadaan tunak. Hurup z menandakan fase akhir disposisi. hati). Oleh karena itu volume distribusi tidak mengandung suatu arti fiosologik yang sebenarnya dari Dengan asusmsi.5.10) 2 V =D iv [C ]o (3. dapat dihitung dengan : t 1 i = ln 2 λ l (3. Volume distribusi. dimana kelihatannya suatu xenobiotika Fase Kerja Toksik dalam clearance dengan tetapan laju eliminasi pada fase terminal (λz).12) Oleh karena clearance total sama dengan D [ AUC ]∞ o .6) λp_m= konstanta waktu dari fungsi-waktutransit-metabolisme Fungsi input dari biosintesa metabolit primer „Im(s)“ adalah: terdistribusi atau di mana dianggap xenobiotika tersebut terlarut.Ψ p_m ( s ) = λp (s + λ p ) (3. Volume distribusi area adalah volume hipotetik yang dihitung melalui persamaan berikut: V ß = Varea = D λ z [ AUC ]∞ o (3. V ß = Varea = CL λz (3. Tanpa perlu memperhatikan berapa jumlah atau konsentrasi xenobiotika pada keadaan awal. seperti volume dari kompartimen sentral (Vc) dan volume kompartemen perifer atau kompartemen jaringan (Vp). Tiap jaringan dapat mengandung suatu konsentrasi xenobiotika yang berbeda sehubungan dengan perbedaan afinitas xenobiotika terhadap jaringan tersebut. maka Vß dapat dinyatakan Dari persamaan di atas tampak bahwa untuk laju eliminasi orde ke pertama. Waktu paruh pada fase akhir disposisi (fase eliminasi) dikenal sebagai waktu paruh terminal (t1/2 Z). Waktu paruh dari metabolit yang diperoleh dari penghitungan secara logaritma kurvakonsentrasi-waktu metabolit dari senyawa induk biasanya disebut dengan waktu paruh semu ”apparance half life time” (t1/2 app). Fase ini biasanya ditunjukkan oleh proses farmakokintik yang paling lambat. Waktu paruh setiap fase disposisi. Waktu paruh (t1/2) adalah waktu yang dibutuhkan oleh xenobiotika tereliminasi menjadi setengah konsentrasi awalnya. ml/min). Perubahan ini mungkin diakibat oleh perubahan fungsi organ tubuh (ginjal. Clearence dapat juga dimengerti dengan jumlah volume dari xenobiotika yang mampu dieliminasi oleh organ (organismus) persatuan waktu. bahwa tubuh manusia dapat diandaikan sebagai satu ruang distribusi (model satu kompartemen).13) Volume distribusi area dipengaruhi oleh laju eliminasi obat pada fase terminal dan clearance total obat dari dalam tubuh.11) Dalam kinetika kompartemen ganda kita dapat menganggap secara matematik volume hipotetik. maka waktu yang diperlukan untuk berkurang menjadi separuhnya adalah konstan Volume distribusi (Vd) adalah volume virtual.7) = Fraksi dari senyawa induk „p“ yang terbentuk menjadi metabolit primer = Clearance senyawa induk CLp Ψp_m (s) = Fungsi waktu-transit-metabolisme dari senyawa induk membentuk metabolit primer 3. Volume distribusi menyatakan suatu faktor yang harus diperhitungkan dalam memperkirakan jumlah xenobiotika dalam tubuh dari konsentrasi xenobiotika yang ditemukan dalam kompartimen cuplikan. dimana laju eliminasinya memenuhi hukum kinetika orde pertama. Parameter Farmakokinetik Clearance (CL) adalah satuan kemampuan dari organisme (organ tubuh) untuk mengeliminasi suatu xenobiotika. t½ adalah konstan. dimana laju obat masuk dan keluar dari dan ke kompartemen perifer adalah sama. Untuk sebagaian besar xenobiotika dianggap bahwa xenobiotika bersetimbangan secara cepat dalam tubuh. yang dihitung pada keadaan tunak ”steady state”. Sedangkan volume 24 . maka pada pemakaian injeksi intravenus ”injeksi bolus” ratio antara dosis dan konsentrasi awal ([Co]) adalah menunjukkan volume distribusi xenobiotika tersebut. Oleh sebab itu satuan clearance adalah volume perwaktu (misal.

Pada prinsipnya senyawa yang hidrofil akan dengan mudah terekskresi melalui ginjal. Reaksi fase II disebut juga reaksi konjugasi. seperti bromobenzen melalui Reaksi Fase I Reaksi Fase II Metabolit Fase I Metabolit Fase II Konjugasi dengan: . disamping itu ada bentuk terikat sebagai enzim terlarut (seperti esterase. bakteri flora usus juga dapat melakukan reaksi metabolisme. Ekskresi ini adalah jalur utama eliminasi senyawa asing (xenobiotika) dari dalam tubuh. sebab melalui reaksi fase ini (oksidasi. asam urat. kemungkinan akan menimbulkan bahaya yang sangat serius.3: Proses dan reaksi penting dalam biotransformasi menghasilkan suatu gugus fungsi. Jika senyawa tersebut tidak mengalami perubahan kimia. biliribun. saluran pencernaan. dll). reduksi atau hidrolisis) 25 Fase Kerja Toksik . reduksi dan hidrolisis. Sedangkan reaksi fase II adalah pengkopelan hasil reaksi fase I (metabolit fase I) dengan suatu senyawa endogen. Rekasi fase I melibatkan reaksi oksidasi. yaitu reaksi fase I dan fase II. Bromobenzen epoksid akan terikat secara kovalen pada makromlekul jaringan hati dan mengakibatkan nekrosis hati.asam glukoronat . sistem enzim ini juga terlibat dalam reaksi biotransformasi senyawa endogen (seperti: hormon steroid. kulit atau di darah. Reaksi oksidasi fungsionalisasi. yaitu terdeposisi di jaringan lemak.sulfat . sulfoterase).1. Selain organ-organ tubuh. otot.6. Ekskresi senyawa ini akan belangsung dengan sangat lambat.distribusi pada keadaan tunak dipengaruhi perubahan eliminasi obat. glukuronidase) umumnya terikat pada membran dari retikulum endoplasmik dan sebagian terlokalisasi juga pada mitokondria. Biotransformasi (metabolisme) Senyawa-senyawa lipofil setelah terfiltrasi glumerular akan direabsorpsi melalui tubili ginjal menuju sistem peredaran darah. Gambar 1 menggambarkan reaksi-rekasi penting yang terjadi dalam biotransformasi. Sistem enzim yang terlibat pada reaksi fase I umumnya terdapat di dalam retikulum endoplasmik halus. Biotransformasi pada umumnya berlangsung di hati dan sebagian kecil di organ-organ lain seperti: ginjal. Biotransformasi belangsung dalam dua tahap. Senyawa lipofil ini akan tingal dalam waktu yang cukup di dalam tubuh.6. sedangkan sistem enzim yang terlibat pada reaksi fase II sebagian besar ditemukan di sitosol. Namun ada beberapa xenobiotika setelah termetabolisme mengalami peningkatan aktivitasnya (bioaktivasi). Enzim-enzim yang terlibat dalam biotransformasi pada umumnya tidak spesifik terhadap substrat. 3. Sehingga sebagian besar senyawa-senyawa lipofil terlebih dahulu oleh tubuh dirubah menjadi senyawa yang lebih bersifat hidrofil. amidase. Reaksi Fase I selanjutnya pada fase ke II akan terkonjugasi Reaksi fase I ini juga disebut dengan reaksi a. Enzim ini (seperti monooksigenase. Disamping memetabolisme xenobiotika. khususnya reaksi reduksi dan hidrolisis. kelenjar susu. Pada umumnya biotransformasi akan mengakhiri efek farmakologi dari xenobiotika (detoksifikasi / inaktivasi). paru-paru. yang 3. tidak oksidasi membentuk bentuk bromobenzen epoksid. Proses perubahan biokimia dari xenobiotika dikenal dengan biotransformasi.asetat l t ti Xenobiotika Oksidasi Reduksi Hidrolisis Gabar 3.

Sistem enzim CYP-450 monooksigenase mengkata-lisis reaksi seperti berikut (I: inaktivasi efek toksik. Substrat xenobiotika bereaksi dengan bentuk teroksidasi CYP-450Fe3+ membentuk komplek enzim-subtrat.Reaksi oksidasi mempunyai peranan penting pada biotransformasi. A: aktivasi efek toksik) : 1. Hidroksilasi dari alkileter. membentuk species oksigen terakivasi. R-OH Fe3+ Fe3+ IOI F e 3+ substrat (R-H) menjadi R-OH begitu juga oksidasi CYP-450Fe3+ . khususnya reaksi-reaksi yang melibatkan sistem enzim oksidase. Reaksi oksidase multi level ini digambarkan secara skematis pada gambar 3.8-dihidridiol → Bezo(a)piren-7. dengan itu CYP-450 reduktase teraktivasi dan satu elektron diserahkan pada CYP-450. Sistem Sitokrom P-450 Substrat R-H tertempel pada Sitokrom (CYP). Oksidase mengoksidasi melalui masuknya oksigen (elektron). Berbeda dengan dioksigenase. Hidroksilasi dari rantai karbon dan alkilen: R-CH2-CH2-CH3 → R-CH2-CH2-CH2-OH atau RCH2-CHOH-CH3 contoh: I : Butan → Butanol Etilbenzol → Fentilbenzol Tetrahidrokanabinol (THC) → 11-OH-THC A: Hexan → 2. Bentuk reduksi dari komplek CYP450Fe2+—xenobiotika bereaksi dengan molekul oksigen dan kemudian mendapatkan elektron yang ke dua dari NADPH. alkiltiol R-CH2O(S)-CH3 → R-CH2(s)OH + HCHO I : Papaverin → O-Desmetilpapaverin A: Kodein → Morphin 5.10-epoksid 26 .4. Komplek CYP-450. yang diperoleh dari flavoprotein reduktase yang sama. Sistem enzim yang yang mengkatalisis rekasi oksigenase ini memerlukan sistem sitokrom P450 dan NADPH-sitokrom P-450 reduktase. Hidroksilasi dari aromatik menjadi fenol I: Fenitoin → Hidroksifenition 3. H2O RH F e 3+ NADPH + e H+ NADPH + H+ Fp e RH CYP b5 Fe 2+ + 2 H* Fe3+ O22RH Fe3+ O2RH Fe2+ O2 RH RH O2 Gambar 3. Melalui mono-oksigenase akan dimasukkan satu atom oksigen ke dalam xenobiotika dan molekul oksigen yang lainnya akan direduksi menjadi air.8-dihidrodiol-9. CYP450 tereduksi dapat menerima satu melekul O2 dan oksigen mendapat satu elektron dari CYP450. Hidroksilasi alkilamin I: Imipramin → Desimipramin Diazepam → Nordiazepam Lidokain → Monoetilglisinsilidid Cocain → Norcocain A: Dimetilnitroamin → Metilnitrosoamin 4. Sistem enzim yang mengkatalisis reaksi ini dikenal dengan mikrosomal oksidasi fungsi campur (microsomal mixed-function oxidase. yang akan mereduksi komplek dari CYP-450Fe3+— xenobiotika.4. NADPH dan molekul oksigen. monooksigenase dan dioksigenase. Sitokrom P-450 adalah hemoprotein dengan suatu kharakter puncak absorpsi dari bentuk terreduksi COkompleknya pada panjang gelombang 450 nm. kedua atom oksigen akan dimasukkan ke dalam xenobiotika. Enzim sitokrom P-450 terletak di retikulum endoplasmik dari beberapa jaringan. Oksidasi pada sitokrom P-450 sangat memegang peranan penting dalam biotransformasi xenobiotika. O2 dan R-H akan terpecah dengan memberikan oksigen pada Fase Kerja Toksik RHC CHR I : Karbamazepin → Karbamazepinepoksid A:Trikloretilen → [Trikloretilenepoksid] Benzo(a)piren-7. MFO).6-Hexandiol (→ Hexandion) 2. Epoksidasi dari alifatis atau aromatis rantai ganda O RCH=CHR O R-H OH R . Langkah terakhir satu atom oksigen terlepas sebagai H2O dan atom oksigen yang lain ditransfer ke dalam substrat dan bentuk teroksidasi CYP-450Fe3+ terregenerasi. Sitokrom P-450 reduktase mendapatkan satu elektron dari NADPH.

CCl4.Alkoholdehidrogenase. Sistem enzim oksidatif lainnya. fenacetin. benzo(a)piren. aflatoksin. kodein. Sistem enzim oksidatif selain dua sistim di atas adalah: . heterisiklik amin 7a-testosteron 15a-testosteron Dietilnitrosamin Resorufin Cocain Etotoin. aflatoksin B. Isoenzim CYP2D6 bertanggungjawab pada rekasi N. Flavinmonooksigenase. Sistem standard untuk mengelompokan keluarga CYP-450 multigen adalah berdasarkan kesamaan sequensi dari individual proteinnya. Oksidatif desaminasi RCH(CH3)-NH2 → RCHOH(CH3)-NH2 → RCOCH3 + NH3 7. Pemutusan ikatan azo menjadi amin primer melalui pembentukan hidrazo melibatkan 27 . khususnya mendehidrasi etanol menjadi aldehid. N-oksidatif membentuk N-oksida atau Hidroksil-amin (R)3N → (R)2N-OH I : Amitriptilin → Amitriptilin-N-oksid A: Naftilamin → Naftilaminhidroksilamin 11. Aktifitas dari CYP-450-isoenzim ini kadang dapat dipisahkan. Fase Kerja Toksik Tabel 3.Monoaminoksidase. rekasi reduksi mempunyai peran minor dalam biotransformasi. Sehingga terdapat perbedaan kinetik N.4: Bentuk-bentuk spesifisitas substratnya* CYP-450 Substrat CYP1A1 CYP1A2 CYP2A1 CYP2A2 CYP2A6 CYP2B1 CYP2B2 CYP2C CYP2C9 CYP2D6 CYP2E1 CYP3A CYP3A4 CYP3A2 CYP4A1 CYP4A2 CYP-450 dan PAH. Sistem enzim ini merubah amin sekunder menjadi hidroksilamin dan amin tersier menjadi N-oksida. metosuksimid Naproksen Debrisoquin.Aldehid oksidase. heksobarbital. sehingga pada kelompok populasi ini kodein terjadi hambatan dalam N-demetilasi menjadi morfin. . Disamping oksidatif yang dikatalisis oleh CYP-450 terdapat juga oksidatif yang tidak tergatung pada CYP-450. S-oksidatif membentuk sulfoksida dan sulfona R1-CH2-S-CH2-R2 → R1-CH2-SO-CH2-R2 → R1CH2-SO2-CH2-R2 I : Fenotiasin → Solfoksid → Sulfon A: Temefos → Temefos-S-oksid 10. Reaksi reduksi Dibandingkan dengan reaksi oksidasi. CYP3 dan CYP4). yang terdiri dari 16 subfamili (SCHMOLD 2003). telah dilaporkan pada kelompok populasi tertentu diketemukan ganganguan dalam polimorfismus dari isoenzim ini. mengoksidasi aminbiogen (seperti: Catekolamin) b. Oksidatif desulfurasi (R-O)3P=S → (R-O)3P=O A: Paration → Paraokson 8. Oksidasif dehalogenasi RCH2X → RCHXOH → RCHO + HX I: Benzilklorid → Benzaldehid Lindan → Triklorfenol 9. spartain. propanolol Umumnya senyawa bermolekul kecil. Apabila lebih dari 40% asam amino yang teridentifikasi memiliki kesaman sequen maka akan dikelompokkan ke dalam satu keluarga gen CYP-450. CYP2. namun terdapat beberapa famili yang aktivitasnya tumpang tindih. inaktivasi atau bioaktivasi dari substrat. apabila dalam satu famili mempunyai kesamaan lebih dari 55% sequensi maka akan dikelompokkan ke dalam satu subfamili. midazolam Nefedifin. etiletradiol. dll Eritromizin. Perbedaan ini mempunyai pengaruh yang sangat relevan terhadap kenetik. Gugus karbonil melalui alkoholdehidrogenase atau citoplasmik aldoketo-reduktase direduksi menjadi alkohol. Alkohol: Oksidatif membentuk aldehid Sekarang ini telah dilaporkan 4 keluarga gen dari CYP-450-isoenzim (CYP1. Tabel 1 memberikan kelompok CYP-450 insoenzim dan kespesifisitas subtratnya. arilamin. progesteron. stirol. benzol.dan Odealkilasi. Satu keluarga gen CYP-450 dibagi pula menjadi beberapa sub keluarga.atau Odealkilasi pada sekelompok populasi tersebut.6. etanol. dan banyak lagi substrat yang lain Fluokinolon Asam-asam lemak * dikutip dari SCHMOLD (2003) Sekitar 5% penduduk asia memiliki kelainan genetik polimufismus CYP2D6. yaitu sistem enzim flavonmonooksigenase. merubah aldehid menjadi asam karboksilat . kafein.

metilasi. sehingga sangat cepat tereksresi melalui ginjal Fase Kerja Toksik bersama urin dan / atau melalui empedu menuju saluran cerna.asam amino (khususnya glisin). Enzim ini dikelompokkan ke dalam dua famili. diantaranya ester.teraktivasi asam asetat. amid dan fosfat.teraktivasi sulfat. alkohol alifatik dan amin aromatik. UGT2B7 agak kurang spesifik dibandingkan dengan UGT1A1 hanya mengkatalisis morfin menuju morphin-3glukuronid (COFFMANN et al. namun pemutusan ester jauh lebih cepat dari pada amida. 1998). diantaranya: NADPH-CYP450-reduktase. a. Jumlah cadangan koenzim PAPS biasanya terbatas dan mudah habis. 1996). . senyawa sulfidril dan senyawa amin. . xenobitika atau metabolit fase I mengalami deaktivasi. seperti: Senyawa karbon tetraklorida atau halotan. Enzim ini terikat di retikulum endoplasmik dan terdapat sebagian besar di bagian sisi-luminal dari hati atau organ lainnya. b. Pada umumnya melalui reaksi fase II. 3. Koenzimnya adalah PAPS (3’-fosfoadenosin-5’-fosfosulfat). yaitu UGT1 dan UGT2 (FICHTL 1998). R-OH R-NH2 PAPS R-O-SO3H R-NH-SO3H Konjugasi sulfat biasanya sebagian besar terhadap senyawa-senyawa endogen dan relativ jarang dengan xenobiotika. ginjal dan usus. Proses ini dikenal dengan siklus enterohepatik. -NH2 dan COOH. baik dalam keadaan terikat dengan mikrosomal maupun terlarut. Glukuronat juga mengkonjugasi senyawa endogen. . Glukuronidasi dari gugus alkohol atau fenol adalah reaksi konjugasi yang paling sering pada reaksi fase II. seperti bilirubin. . Kosubstrat dari reaksi ini adalah Asam-uridin-5’-difosfo-α-D-glukuronat (UDPGA). Br dan I). namun ada dari subfamilinya yang mempunyai spesifisitas yang tinggi. Enzim yang mengkatalisi reaksi konjugasi ini adalah UDP-glukuroniltransferase (UGT). Reaksi fase II Reaksi fase II melibatkan beberapa jenis metabolit endogen yang mungkin membentuk konjugat dengan xenobiotika atau metabolitnya. c. Glukuronidasi.oligopeptida dan ikatan dengan turunan asam merkapturat.banyak enzim-enzim.Pemutusan ester atau amida menjadi asam karboksilat dan alkohol (atau amin) melalui esterase atau amidase. Hasil reaksi konjugasi bersifat sangat polar. Glukuronid adalah jenis konjugasi yang paling umum dan penting. sehingga pada peningkatan 28 . konjugasi ini dikatalis oleh UGT1*1. Ester atau amida dihidrolisis oleh enzim yang sama.Hidrolisis dari acetylen (glikosida) melalui enzim glikosidase. UGT2B7 adalah enzim yang mengkalisis konjugasi morfin menuju morfin-3glukuronid dan morfin-6-glukuronid dengan perbandingan residu yang berbeda (COFFMAN et al.2. Biohidrolisis Banyak xenobiotika yang mengandung ikatan jenis ester dapat dihidrolisis. Konjugasi ini adalah untuk gugus fungsional: fenol.6.teraktivasi asam glukuronat. . Namun belakangan ini telah dilaporkan beberapa metabolit fase II justru mengalami aktivasi. Reaksi ini dikatalisis oleh sulfotranferase. seperti morfin-6glukuronida mempunyai aktivitas antianalgesik yang lebih poten dari pada morfin.Perubahan epoksida menjadi vicinalen diol melalui enzim epoksidihidratase . Enzim hidrolitik terdapat juga di saluran pencernaan. Enzim-einzim ini akan menghidrolisis metabolit fase II (bentuk konjugat menjadi bentuk bebasnya). Pembentukan konjugat memerlukan adanya pusat-pusat reaktif dari substrat. disamping itu juga asam-asam karboksilat. Selanjutnya bentuk bebas ini dapat kembali terabsorpsi menuju sistem peredaran darah. yang diketemukan dalam fraksi sitosolik jaringan hati. Enzim UGT dilain hal agak kurang spesifik.dan juga extra selular. . Reaksi-reaksi biohidrolisis yang penting adalah: . Reaksi-reaksi penting pada fase II adalah kunjugasi dengan : . biasanya gugus -OH. Konjugasi Sulfat. Enzim-einzim ini berada di intra. Reduktif dehalogenasi sangat beperan penting dalam detoksifikasi dari senyawa-senyawa alifatis halogen (Cl.

jumlah substrat konjugasi sulfat menjadi jalur reaksi fase II yang kurang menonjol. c. Konjugasi dengan Asam amino (glisin). Konjugasi ini dikatalisis oleh konjugat asam amino dan koenzim-A. Asam karboksilat karboksilat, asam arilasetat dan asam akrilat yang mengalami substitusi aril dapat membentuk konjugat dengan asam amino, terutama glisin. d. Ikatan dengan turunan asam merkatofurat (konjugasi glutation). Reaksi konjugasi ini berlangsung dalam beberapa tingkat, sebagian belangsung secara spontan dan juga dikatalisis oleh glutation-Stransferase. Pada awalnya terbentuk konjugat glutation-substrat kemudian mengalami pemecahan enzimatik dari kedua asam amino. Melalui asetilasi dari sistein membentuk produk akhir berupa turunan N-asetilsistein (asam merkaptofurat) yang mudah diekskresi. Glutation dapat berkonjugasi dengan epoksid yang terbentuk akibat oksidasi dari halogen aromatik. Epoksida ini bersifat sangat elektrofilik yang sangat reaktif. Metabolit ini dapat bereaksi dengan unsur-unsur sel dan menyebabkan kematian sel atau pembentukan tomor. Konjugasi glutation akan berikatan dengan metabolit elektrofilik, dengan demikian akan mencegah metabolit ini berikatan dengan sel. Dengan demikian konjugasi glutation sangat berperanan penting dalam pencegahan tembentukan tomor (sel kanker). Selain itu glutation dapat berkonjugasi dengan senyawa alifatik tak jenuh dan menggantikan gugus nitro dalam suatu senyawa kimia. e. Asetilasi. Xenobiotika yang memiliki gugus amin aromatik, yang tidak dapat dimetabolisme secara oksidatif, biasanya akan diasetilisasi dengan bantuan enzim N-asetil transferase dan asetil koenzim A. Asetilasi merupakan fransfer gugus asetil ke amin aromatik primer, hidrazin, hidrazid, sulfoamid dan gugus amin alifatik primer tertentu.
Acetil-CoA + RNH2 AT CH3CONHR + HSCoA

mengakibatkan perbedaan laju asetilasi (asetilasi cepat dan lambat). Hal ini dapat memberikan makna toksikologis penting pada populasi tertentu terhadap laju eliminasi dari substratnya, seperti: isoniazid, hidralazin, atau prokainamid. f. Metilasi. Di dalam biotransformasi, reaksi metilasi relatif sangat jarang, karena UDPGA tersidia lebih luas sehingga lebih mudah terbentuk glukuronid. Reaksi ini dikatalisis oleh metiltransferase. Koenzimnya adalah SAM (Sadenosinmetionin). Contoh N-metilasi (noradrenalin, nicotinamid, metadon)
R1 C R2 C NH R1C R2C NCH3

3.6.3 Faktor-faktor yang metabolisme xenobiotika.

mempengaruhi

Genetik, lingkungan dan psiologik adalah faktor-faktor yang dapat mempengaruhi reaksi biotransformasi (metabolisme). Faktor terpenting adalah genetik yang menentukan polimorfisme dalam oksidasi dan konjugasi dari xenobiotika, penggunaan dengan obatobatan secara bersamaan, paparan polutan atau bahan kimia lain dari lingkungan, kondisi kesehatan dan umur. Faktor-faktor ini diduga bertanggungjawab terhadap penurunan efisiensi biotransformasi, perpanjangan efek farmakologi dan peningkatan toksisitas. Induksi enzim, banyak xenobitika dapat meningkatkan sintesa sistem enzim metabolisme (induksi), induksi sistem enzim tertentu dapat meningkatkan laju biotransformasi senyawa tertentu. Contoh xenobiotika yang bersifat inkduksi enzim adalah fenobarbital. Fenobarbital dapat meningkatkan jumlah CYP450 dan NADPHsitokrom c reduktase. Inhibisi enzim, penghabantan sistem enzim biotransformasi akan mengakibatkan perpanjangan efek farmakologi dan meningkatnya efek toksik. Inhibisi sistem enzim CYP2D6 oleh quinidin, secara nyata dapat menekan metabolime spartain, debrisoquin atau kodein. Faktor Genetik, Telah dikenal dari hasil penelitian pengembangan dan penemuan obat baru, bahwa variabilitas genetik berperan penting pada reaksi metabolisme. Perbedaan 29

Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat dua kelompok isoenzim N-asetil transferase (NAT1 dan NAT2). Genotif isoenzim NAT2 memiliki sifat plomorfismus, sehingga
Fase Kerja Toksik

variabilitas ini dapat disebabkan oleh Genotipe dari masing-masing sel, sehingga dapat mengakibatkan kekurangan atau kelebihan suatu sistem enzim. Pada kenyataanya perbedaan aktivitas metabolisme ditentukan oleh fenotipe, yang tergantung pada genotipe dan satuan dari ekspresinya. Perbedaan fenotipe ini mengantarkan peneliti untuk mengelompokkan individu ke dalam populasi pematabolit cepat ”extensive metabolizer” dan pemetabolit lambat ”poor metabolizer”. Dalam berbagai kasus penekanan metabolisme melalui pengontrolan laju polimorfisasi dari enzim dapat mengakibatkan peningkatnya efek samping (efek toksik) pada pemetabolit lambat. Sebagai contoh faktor genetik adalah cacat pada system enzim glukuse-6-fosfatdihidrogenase, hal ini diakibatkan oleh kerusakan genetik dari X-kromosomal. Contoh lainnya adalah polimorfismus dari sistem enzim CYP2D6 yang lebih dikenal dengan polimorfismus spartain atau debrisoquin, polimorfismus sistem enzim CYP2C19 (polimorfismus mefenitoin dan polimorfismus N-asetil-transferase. Hampir 10% dari orang eropah memiliki gangguan dalam polimorfismus sistem enzim CYP2D6, yang mengakibatkan lambatnya metabolisme dari spartain, debrisoquin, kodein. Penyakit, Hati adalah organ utama yang bertanggungjawab pada reaksi biotransfromasi. Penyakit hepatitis akut atau kronis, sirosis hati dan nekrosis hati secara signifikan dapat menurunkan laju metabolisme xenobiotika. Pada sakit hati terjadi penurunan sintesa sistem enzim dan penurunan laju aliran darah melalui hati. Senyawa yang memiliki clearance hati (eliminasi persatuan volume) yang tinggi, penurunan laju aliran darah di hati secara signifikan akan menurunkan laju metabolismenya. Dilain hal senyawa-senyawa dengan clearan hati rendah, penurunan laju metabolisme pada kasus ini lebih ditentukan oleh penurunan aktivitas enzim metabolisme. Umur, pada bayi telah dikenal, kalau sistem einzim biotranformasi belum sempurna terbentuk. Pada bayi yang baru lahir (fetus) sistem enzim-enzim, yang terpenting (seperti: CYP-450, glukoronil-trensferase dan Acetiltransferase) belum berkembang dengan sempurna. Pada tahun pertama sistem enzim ini berkembang lebih sempurna, dan pada
Fase Kerja Toksik

tahun ke lima fungsi sistem enzim biotransformasi telah mendekati sempurna seperti pada orang dewasa. Namun pada orang lanjut usia terjadi degradasi fungsi organ, hal ini juga mengakibatkan penurunan laju metabolisme. Faktor lingkungan. Pengaruh faktor fisik dan faktor sosial dalam biotransformasi masih sanga sedikit diketemukan di literatur. Namun faktor-faktor ini sering didiskusikan sebagai salah satu faktor, yang dapat berpengaruh pada laju metabolisme. Bahan Bacaan: 1. BENET, L.Z., KROETZ D.L. and SHEINER L.B., (1996), “Pharmacokinetics The dynamics of drug absorption, distribution, and elimination”, in HARDMAN J.G., GOODMAN GILMAN A.., LIMBIRD L.E., “Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics”, 9th edn, McGrawHill, New York p. 3-27. 2. COFFMAN, B.L., KING, C.D., RIOS, G.R. und TEPHLY, T.R. (1998),”The Glucuronidation of opioids, other xenobiotics and androgens by human UGT2B7Y (268) and UGT2B7H (268)”, Drug Metab. Dispos., 26: 73-77 3. COFFMAN, B.L., RIOS, G.R. und TEPHLY T.R. (1996),” Purification and properties of two rat liver phenobarbital-inducible UDPglucuronosyltransferases that catalyze the glucuronidation of opioids”, Drug Metab. Dispos., 24: 329-333 4. FICHTL B et al. , Allgemeine Pharmakologie und Toxikologie, in FORTH W et al. (Ed) Allgemeine und Spezielle Pharmakologie und Toxikologie 7. ed, Spektrum Akademiker Verlag, Berlin 1998, S. 3- 102. 5. LU, F.C. (1995), “Toksikologi dasar, asas, organ sasaran, dan penilaian resiko”, UIPress, Jakarta. 6. MUTSCHLER E. Und SCHÄFER-KORTING M. (1997) “Arzneimittel-Wirkungen Lehrbuch der Pharmakologie und Toksikologie” Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbH, Stuttgart. 7. SCHMOLD A. (2003), “Wirkungsbedingunen von Giften“, in MADEA, B. und BRINKMANN B., “Handbuch gerichtliche Medizin, Band 2.“, Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York. S. 14-30 30

BAB IV ANALISIS TOKSIKOLOGI FORENSIK 4.1. Pendahuluan Toksikologi forensik adalah salah satu dari cabang ilmu forensik. Menurut Saferstein yang dimaksud dengan Forensic Science adalah ”the application of science to low”, maka secara umum ilmu forensik (forensik sain) dapat dimengerti sebagai aplikasi atau pemanfaatan ilmu pengetahuan tertentu untuk penegakan hukum dan peradilan. Guna lebih memahami pengertian dan ruang lingkup kerja toksikologi forensik, maka akan lebih baik sebelumnya jika lebih mengenal apa itu bidang ilmu toksikologi. Ilmu toksikologi adalah ilmu yang menelaah tentang kerja dan efek berbahaya zat kimia atau racun terhadap mekanisme biologis suatu organisme. Racun adalah senyawa yang berpotensi memberikan efek yang berbahaya terhadap organisme. Sifat racun dari suatu senyawa ditentukan oleh: dosis, konsentrasi racun di reseptor, sifat fisiko kimis toksikan tersebut, kondisi bioorganisme atau sistem bioorganisme, paparan terhadap organisme dan bentuk efek yang ditimbulkan. Tosikologi forensik menekunkan diri pada aplikasi atau pemanfaatan ilmu toksikologi untuk kepentingan peradilan. Kerja utama dari toksikologi forensik adalah melakukan analisis kualitatif maupun kuantitatif dari racun dari bukti fisik dan menerjemahkan temuan analisisnya ke dalam ungkapan apakah ada atau tidaknya racun yang terlibat dalam tindak kriminal, yang dituduhkan, sebagai bukti dalam tindak kriminal (forensik) di pengadilan. Hasil analisis dan interpretasi temuan analisisnya ini akan dimuat ke dalam suatu laporan yang sesuai dengan hukum dan perundanganundangan. Menurut Hukum Acara Pidana (KUHAP), laporan ini dapat disebut dengan Surat Keterangan Ahli atau Surat Keterangan. Jadi toksikologi forensik dapat dimengerti sebagai pemanfaatan ilmu tosikologi untuk keperluan penegakan hukum dan peradilan. Toksikologi forensik merupakan ilmu terapan yang dalam praktisnya sangat didukung oleh berbagai bidang ilmu dasar lainnya, seperti kimia analisis, biokimia, kimia instrumentasi, farmakologi-toksikologi, farmakokinetik, biotransformasi.
Analisis Toksikologi Forensik

Secara umum tugas toksikolog forensik adalah membantu penegak hukum khususnya dalam melakukan analisis racun baik kualitatif maupun kuantitatif dan kemudian menerjemahkan hasil analisis ke dalam suatu laporan (surat, surat keterangan ahli atau saksi ahli), sebagai bukti dalam tindak kriminal (forensik) di pengadilan. Lebih jelasnya toksikologi forensik mencangkup terapan ilmu alam dalam analisis racun sebagi bukti dalam tindak kriminal, dengan tujuan mendeteksi dan mengidentifikasi konsentrasi dari zat racun dan metabolitnya dari cairan biologis dan akhirnya menginterpretasikan temuan analisis dalam suatu argumentasi tentang penyebab keracunan dari suatu kasus. Menurut masyarakat toksikologi forensik amerika “society of forensic toxicologist, inc. SOFT” bidang kerja toksikologi forensik meliputi: - analisis dan mengevaluasi racun penyebab kematian, - analisis ada/tidaknya alkohol, obat terlarang di dalam cairan tubuh atau napas, yang dapat mengakibatkan perubahan prilaku (menurunnya kemampuan mengendarai kendaraan bermotor di jalan raya, tindak kekerasan dan kejahatan, penggunaan dooping), - analisis obat terlarang di darah dan urin pada kasus penyalahgunaan narkotika, psikotropika dan obat terlarang lainnya. Tujuan lain dari analisis toksikologi forensik adalah membuat suatu rekaan rekostruksi suatu peristiwa yang terjadi, sampai sejauh mana obat atau racun tersebut dapat mengakibatkan perubahan prilaku (menurunnya kemampuan mengendarai, yang dapat mengakibatkan kecelakaan yang fatal, atau tindak kekerasan dan kejahatan). 4.2 Bilamana toksikologik memerlukan pemeriksaan

Dalam tabel berikut ini digambarkan kasuskasus yang umumnya di negara maju memerlukan pemeriksaan toksikologi forensik. Kasus-kasus tersebut dapat dikelompokkan ke dalam tiga kelompok besar yaitu: a) kematian akibat keracunan, yang meliputi: kematian mendadak, kematian di penjara, kematian pada kebakaran, dan kematian 31

medis yang disebabkan oleh efek samping obat atau kesalahan penanganan medis, b) kecelakaan fatal maupun tidak fatal, yang dapat mengancam keselamatan nyawa sendiri ataupun orang lain, yang umumnya diakibatkan oleh pengaruh obat-obatan, alkohol, atau pun narkoba, c) penyalahgunaan narkoba dan kasus-kasus keracunan yang terkait dengan akibat pemakaian obat, makanan, kosmetika, alat kesehatan, dan bahan berbahaya lainnya,

yang tidak memenuhi standar kesehatan (kasus-kasus forensik farmasi). Dari sekian contoh kasus-kasus yang perlu dilakukan pemeriksaan toksikologik, lalu timbul pertanyaan: Siapa yang memutuskan untuk melakukan pemeriksaan tersebut dan siapa yang berkompeten untuk melakukan pemeriksaan tersebut? Sudah barang tentu yang memutuskan untuk melakukan adalah tim penyidik dan yang melakukan adalah seorang yang berkompeten yaitu “toksikolog forensik”. Lalu dimana lembaga toksikolog forensik tersebut di negara kita?
Litigasi Kriminal: Pembunuhan Sipil: klaim tanggungan asuransi, tuntunan kepada fabrik farmasi atau kimia Kriminal: pembunuhan Sipil: gugatan tanggungan dan konpensasi terhadap pemerintah Kriminal: pembunuhan Sipil: klaim tanggungan asuransi
Malpraktek kedokteran, gugatan terhadap fabrik farmasi Klaim Malpraktek, tindak kriminal, pemeriksaan oleh komite ikatan profesi kedokteran (”IDI”) Gugatan terhadap ”employer”, Memperkerjakan kembali

Tabel 4.1. Kasus-kasus toksikologi forensik yang melibatkan Jenis Kasus Pertanyaan yang muncul
Kematian yang tidak wajar (mendadak) Kematian di penjara Kematian pada kebakaran Apakah ada keterlibatan obat atau racun sebagai penyebab kematiannya? Kecelakaan, pembunuhan yang melibatkan racun atau obat terlarang? Apakah ada unsur penghilangan jejak pembunuhan? Apa penyebab kematian: CO, racun, kecelakaan, atau pembunuhan? Berapa konsentrasi dari obat dan metabolitnya? Apakah ada interaksi obat? Apakah pengobatannya tepat? Kesalahan terapi? Apakah ada keterlibatan racun, alkohol, atau obat-obatan? Apakah kematian akibat ”human eror”? Apakah sakit tsb diakibatkan oleh senyawa kimia di tempat kerja?Pemecatan akibat terlibat penyalahgunaan Narkoba? Meyebabkan kematian? Adakah keterlibatan alkohol, obatobatan atau Narkoba? Kecelakaan, atau pembunuhan? Apakah kesalahan pengemudi? Mengemudi dibawah pengaruh obatobatan atau Narkoba? Penyalahgunaan atau pasient yang sedang mengalami terapi rehabilitasi narkoba Identifikasi bentuk sediaan, kandungan sediaan obat, penggunaan obat palsu.

Kematian atau timbulnya efek samping obat berbahaya akibat salah pengobatan Kematian yang tidak wajar di rumah sakit Kecelakaan yang fatal di tempat kerja, sakit akibat tempat kerja, pemecatan

Kecelakan fatal dalam menyemudi Kecelakaan tidak fatal atau mengemudi dibawah pengaruh obat-obatan Penyalahgunaan Narkoba

Kriminal: Pembunuhan, kecelakaan bermotor Sipil: klaim gugatan asuransi Kriminal: Larangan Mengemudi dibawah pengaruh Obat-obatan atau Narkona Sipil: gugatan pencabutan atau pengangguhan SIM Kriminal: Sipil: rehabilitasi

Farmaseutikal dan Obat Kriminal: pengedaran obat ilegal. palsu, atau tidak memenuhi Sipil: tuntutan penggunan obat palsu syarat standar ”Forensik terhadap dokter atau yang terkait Farmasi” Sumber: Finkle, B.S., (1982), Progress in Forensic Toxicology: Beyond Analytical Chemistry, J. Anal. Tox. (6): 57-61

4.3.

Langkah-langkah forensik

analisis

toksikologi

Secara umum tugas analisis toksikolog forensik (klinik) dalam melakukan analisis 32

Analisis Toksikologi Forensik

dapat dikelompokkan ke dalam tiga tahap yaitu: 1) penyiapan sampel “sample preparation”, 2) analisis meliputi uji penapisan “screening test” atau dikenal juga dengan “general unknown test” dan uji konfirmasi yang meliputi uji identifikasi dan kuantifikasi, 3) langkah terakhir adalah interpretasi temuan analisis dan penulisan laporan analisis. Berbeda dengan kimia analisis lainnya (seperti: analisis senyawa obat dan makanan, analisis kimia klinis) pada analisis toksikologi forensik pada umumnya analit (racun) yang menjadi target analisis, tidak diketahui dengan pasti sebelum dilakukan analisis. Tidak sering hal ini menjadi hambatan dalam penyelenggaraan analisis toksikologi forensik, karena seperti diketahui saat ini terdapat ribuan atau bahkan jutaan senyawa kimia yang mungkin menjadi target analisis. Untuk mempersempit peluang dari target analisis, biasanya target dapat digali dari informasi penyebab kasus forensik (keracunan, kematian tidak wajar akibat keracunan, tindak kekerasan dibawah pengaruh obat-obatan), yang dapat diperoleh dari laporan pemeriksaan di tempat kejadian perkara (TKP), atau dari berita acara penyidikan oleh polisi penyidik. Sangat sering dalam analisis toksikologi forensik tidak diketemukan senyawa induk, melainkan metabolitnya. Sehingga dalam melakukan analisis toksikologi forensik, senyawa matabolit juga merupakan target analisis. Sampel dari toksikologi forensik pada umumnya adalah spesimen biologi seperti: cairan biologis (darah, urin, air ludah), jaringan biologis atau organ tubuh. Preparasi sampel adalah salah satu faktor penentu keberhasilan analisis toksikologi forensik disamping kehadalan penguasaan metode analisis instrumentasi. Berbeda dengan analisis kimia lainnya, hasil indentifikasi dan kuantifikasi dari analit bukan merupakan tujuan akhir dari analisis toksikologi forensik. Seorang toksikolog forensik dituntut harus mampu menerjemahkan apakah analit (toksikan) yang diketemukan dengan kadar tertentu dapat dikatakan sebagai penyebab keracunan (pada kasus kematian). 4.3.1. Penyiapan Sampel
Analisis Toksikologi Forensik

Spesimen untuk analisis toksikologi forensik biasanya diterok oleh dokter, misalnya pada kasus kematian tidak wajar spesimen dikumpulkan oleh dokter forensik pada saat melakukan otopsi. Spesimen dapat berupa cairan biologis, jaringan, organ tubuh. Dalam pengumpulan spesimen dokter forensik memberikan label pada masing-masing bungkus/wadah dan menyegelnya. Label seharusnya dilengkapi dengan informasi: nomer indentitas, nama korban, tanggal/waktu otopsi, nama spesimen beserta jumlahnya. Pengiriman dan penyerahan spesimen harus dilengkapi dengan surat berita acara menyeran spesimen, yang ditandatangani oleh dokter forensik. Toksikolog forensik yang menerima spesimen kemudian memberikan dokter forensik surat tanda terima, kemudian menyimpan sampel/spesimen dalam lemari pendingin “freezer” dan menguncinya sampai analisis dilakukan. Prosedur ini dilakukan bertujuan untuk memberikan rantai perlindungan/pengamanan spesimen (chain of custody). Beberapa hal yang perlu diperhitungkan dalam tahapan penyiapan sampel adalah: jenis dan sifat biologis spesimen, fisikokimia dari spesimen, serta tujuan analisis. Dengan demikian akan dapat merancang atau memilih metode penanganan sampel, jumlah sampel yang akan digunakan, serta memilih metode analisis yang tepat. Penanganan sampel perlu mendapat perhatian khusus, karena sebagian besar sampel adalah materi biologis, sehingga sedapat mungkin mencegah terjadinya penguraian dari analit. Pemilihan metode ekstraksi ditentukan juga oleh analisis yang akan dilakukan, misal pada uji penapisan sering dilakukan ekstraksi satu tahap, dimana pada tahap ini diharapkan semua analit dapat terekstraksi. Bahkan pada uji penapisan menggunakan teknik “immunoassay” sampel tidak perlu diekstraksi dengan pelarut tertentu. Sampel urin pada umumnya dapat langsung dilakukan uji penapisan dengan menggunakan teknik immunoassay. Namun tidak jarang harus mendapatkan perlakuan awal, seperti pengaturan pH dan sentrifuga, guna menghilangkan kekeruhan. Pemisahan sel darah dan serum sangat diperlukan pada persiapan sebelum dilakukan uji penapisan 33

beberapa senyawa yang memiliki struktur dasar morfin seperti. dalam hal ini darah dilarutkan dengan metanol. Pada analisis menggunakan GC/MS. asetilkodein. menggunakan dua pelarut yang terpisah. b) teknik immunoassay. Pengelompokan ini berdasarkan struktur inti molekulnya. Ekstraksi satu tahap sangat diperlukan apabila uji penapisan tidak menggunakan teknik immunoassay. dll. Uji Penapisan “Screening test” Uji penapisan untuk menapis dan mengenali golongan senyawa (analit) dalam sampel. Sebagai contoh. namun alat dan bahan dari teknik ini semuanya harus diimpor. Jika di dalam matrik terdapat obat dan metabolitnya (antigentarget) maka dia akan berikatan dengan “antidrug antibody”. Obat narkotika dan psikotropika secara umum dalam uji penapisan dikelompokkan menjadi golongan opiat. Penyiapan sampel umumnya meliputi hidrolisis. turunan benzodiazepin. Teknik immunoassay umumnya memiliki sifat reabilitas dan sensitifitas yang tinggi. ekstraski. golongan senyawa anti dipresan tri-siklik. turunan asam barbiturat. Extrelut®. sehingga teknik ini menjadi relatif tidak murah. kemudian dielusi dengan pelarut tertentu.2. Penyiapan sampel yang baik sangat diperlukan pada uji pemastian “identifikasi dan kuantifikasi”. dan pemurnian analit. kodein. Uji penapisan seharusnya dapat mengidentifikasi golongan analit dengan derajat reabilitas dan sensitifitas yang tinggi. sifat kimia maupun efek farmakologi yang ditimbulkan. heroin. monoasetil morfin. kokain. Prinsip dasar dari pemisahan ekstraksi cair-cair berdasarkan koefisien partisi dari analit pada kedua pelarut atau berdasarkan kelarutan analit pada kedua pelarut tersebut. Teknik ini menggunakan “anti-drug antibody” untuk mengidentifikasi obat dan metabolitnya di dalam sampel (materi biologik). Terdapat berbagai metode / teknik untuk mendeteksi 34 . yang terdiri dari berbagai campuran baik senyawa endogen maupun senyawa eksogen “xenobiotika”. serta senyawa turunan opiat lainnya yang mempunyai inti morfin. Bund Elut Certify®. morfin-6-glukuronida. kannabinoid. turunan amfetamin. dll). Pada ekstraksi cair-padat analit dilewatkan pada kolom yang berisi adsorben fase padat (SPE. atau ekstraksi cair-padat. disini diambil senyawa golongan opiat. Prosedur ini haruslah mempunyai efesiensi dan selektifitas yang tinggi. Metode ekstraksi dapat berupa ekstraksi caircair. terutama pada teknik kromatografi. penyiapan sampel termasuk derivatisasi analit secara kimia. namun dalam pengerjaannya memerlukan waktu yang relatif lebih lama. Si-Gel C-18. Analisis Toksikologi Forensik 4. yang diterima sudah mengalami hemolisis atau menggupal. dihidrokodein serta metabolitnya. serta dalam pengerjaannya memerlukan waktu yang relatif singkat. sedangkan selektifitas yang tinggi diperlukan untuk menjamin pengotor atau senyawa penggangu terpisahkan dari analit. morfin-3-glukuronida. seperi salilisasi.3. Terdapat teknik uji penapisan yaitu: a) kromatografi lapis tipis (KLT) yang dikombinasikan dengan reaksi warna. Karena pada umumnya materi biologik merupakan materik yang komplek. kodein-6-glukuronida. Serum pada umumnya dapat langsung dilakukan uji penapisan menggunakan teknik immunoassay. Atau juga ekstraksi bertingkat “metode Stas-Otto-Gang” untuk melalukan pemisahan analit berdasarkan sifat asam-basanya. turunan metadon. morfin. a) teknik immunoassay Teknik immunoassay adalah teknik yang sangat umum digunakan dalam analisis obat terlarang dalam materi biologi. dimana senyawa ini memiliki struktur dasar morfin. Dibandingkan dengan immunoassay. misal menggunakan kromatografi lapis tipis dengan reaksi penampak bercak tertentu. Perolehan kembali yang tinggi pada ekstraksi adalah sangat penting untuk menyari semua analit. Disini analit digolongkan berdasarkan baik sifat fisikokimia. Tidak jarang sampel darah. metilisasi. biasanya diikuti dengan modifikasi pH pelarut. namun jika tidak ada antigentarget maka “anti-drug antibody” akan berikatan dengan “antigen-penanda”. relatif murah dan pelaksanaannya relatif cepat. sepernatannya dapat langsung dilakukan uji penapisan menggunakan teknik immunoassay. dan kemudian disentrifuga. KLT relatif lebih murah. Derivatisasi ini pada umumnya bertujuan untuk meningkatkan volatilitas analit atau meningkatkan kepekaan analisis.pada darah.

dengan memadukan data indeks retensi dan spektrum UV-Vis analit. seperti: kromatografi gas spektrofotometri massa (GC-MS). namun harus lebih spesifik. KLT-Spektrofotodensitometri. Seperti pada metode GC-MS. Isolat akan dilewatkan ke kolom CG. dan teknik lainnya. b) kromatografi lapis tipis (KLT) KLT adalah metode analitik yang relatif murah dan mudah pengerjaannya. analit akan terfragmentasi menghasilkan pola spektrum massa yang sangat kharakteristik untuk setiap senyawa. Untuk meningkatkan sensitifitas KLT sangat disarankan dalam analisis toksikologi forensik. 4. Pola fragmentasi (spetrum massa) ini merupakan sidik jari molekular dari suatu senyawa. dan radio immunoassay (RIA). Umumnya uji pemastian menggunakan teknik kromatografi yang dikombinasi dengan teknik detektor lainnya. Analit yang terpisah akan memasuki spektrofotometri massa (MS). uji penapisan dengan KLT dilakukan paling sedikit lebih dari satu sistem pengembang dengan penampak noda yang berbeda. 35 Analisis Toksikologi Forensik . Sebelumnya analit diisolasi dari matrik biologik. Disamping melakukan uji indentifikasi potensial positif analit (hasil uji penapisan). karena kemungkinan antibodi yang digunakan dapat bereaksi dengan berbagai senyawa yang memiliki baik bentuk struktur molekul maupun bangun yang hampir sama. namun hal ini belum cukup untuk tujuan analisis toksikologi forensik. Konfirmatori test paling sedikit sesensitif dengan uji penapisan. maka dapat mengenali identitas analit. kemudian jika perlu diderivatisasi. Prinsip dasar uji konfirmasi dengan menggunakan teknik CG-MS adalah analit dipisahkan menggunakan gas kromatografi kemudian selanjutnya dipastikan identitasnya menggunakan teknik spektrfotometrimassa. Obat batuk yang mengandung pseudoefedrin akan memberi reaksi positif palsu terhadap test immunoassay dari anti bodi. bukan untuk menarik kesimpulan. Dengan memadukan data indeks retensi dan spektrum massanya. Kombinasi ini tentunya akan meningkatkan derajat sensitifitas dan spesifisitas dari uji penapisan dengan metode KLT. sehingga dapat menentukan secara spesifik toksikan yang ada. maka dengan GC akan terjadi pemisahan toksikan dari senyawa segolongannya atau metabolitnya. kromatografi cair kenerja tinggi (HPLC) dengan diode-array detektor. dengan perbedaan sifat fisikokima toksikan dan metabolitnya. Secara simultan kombinasi ini dapat digunakan untuk uji pemastian. Reaksi silang ini tentunya memberikan hasil positif palsu. Hasil dari immunoassay test ini dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan. maka identitas dari analit dapat dikenali dan dipastikan. Untuk laboratorium toksikologi dengan beban kerja yang kecil pemilihan teknik single test immunoassay akan lebih tepat ketimbang teknik multi test. cloned enzyme-donor immunoassay (CEDIA). namun biaya analisa akan menjadi lebih mahal. Pemilihan teknik ini sangat tergantung pada beban kerja (jumlah sampel per-hari) yang ditangani oleh laboratorium toksikologi. Uji pemastian “confirmatory test” Uji ini bertujuan untuk memastikan identitas analit dan menetapkan kadarnya.ikatan antigen-antibodi ini. namun KLT kurang sensitif jika dibandungkan dengan teknik immunoassay. enzyme multiplied immunoassay technique (EMIT). di sini bergantung dari metode fragmentasi pada MS. Oleh sebab itu hasil reaksi immunoassay (screening test) harus dilakukan uji pemastian (confirmatori test). Dengan teknik kombinasi HPLC-diode array detektor akan memungkinkan secara simultan mengukur spektrum UV-Vis dari analit yang telah dipisahkan oleh kolom HPLC. indeks retensi dari analit yang terpisah adalah sangat spesifik untuk senyawa tersebut. Meningkatnya derajat spesifisitas pada uji ini akan sangat memungkinkan mengenali identitas analit. kromatografi cair . Misal dipasaran teknik ELISA atau EMIT terdapat dalam bentuk single test maupun multi test.3.3. Dengan menggunakan spektrofotodensitometri analit yang telah terpisah dengan KLT dapat dideteksi spektrumnya (UV atau fluoresensi).spektrofotometri massa (LC-MS). Pada prisipnya pemisahan menggunakan GC.metamfetamin. fluorescence polarization immunoassay (FPIA). seperti “enzyme linked immunoassay” (ELISA).

sehingga dalam analisis toksikologi forensik pada pembuktian kasus penyalahgunaan heroin ilegal akan mungkin diketemukan morfin dan kodein. inhalasi)? Dalam praktis analisis menggunakan teknik GC-MS. 2005). Karena pada kenyataanya telah diatur dalam KUHAP. pertanyaan-pertanyaan yang mungkin muncul pada kasus ini adalah: . Analisis Toksikologi Forensik Heroin menurut UU no 22 tahun 1997 termasuk narkotika golongan I. Berapa besar dosisnya? c. menurunnya kemampuan mengendarai kendaraan dalam berlalulintas. Seorang toksikolog forensik berkewajiban menerjemahkan temuan tersebut berdasarkan kepakarannya ke dalam suatu kalimat atau laporan. namun pada praktisnya banyak faktor yang mempengaruhi.kapan paparan tersebut terjadi (kapan racun tersebut mulai kontak dengan korban)? . namun pada kenyataanya sampai saat negara belum mampu memikul beban tersebut. Interpretasi temuan analisis Temuan analisis sendiri tidak mempunyai makna yang berarti jika tidak dijelaskan makna dari temuan tersebut. yang dapat menjelaskan atau mampu menjawab pertanyaan yang muncul berkaitan dengan permasalahan/kasus yang dituduhkan. adalah sangat mutlak dalam penegakan hukum. biotransformasi. atau HPLC-Diode array detektor memerlukan biaya analisis yang relatif mahal ketimbang KLT-Spektrofotodensitometri. sehingga interpretasi temuan analisis toksikologi forensik. Menurut UU narkotika ini (pasal 84 dan 85). misal dari hasil uji penapisan menggunakan teknik immunoassay 36 . Efek apa yang ditimbulkan? d. Dilain hal kodein (narkotika golongan III) di dalam tubuh akan sebagian termetabolisme menjadi morfin. bahwa biaya yang ditimbulkan akibat pemeriksaan atau penyidikan dibebankan pada negara. Sedangkan hasil uji pemastian (confirmatory test) dapat dijadikan dasar untuk memastikan atau menarik kesimpulan apakah sesorang telah menggunakan obat terlarang yang dituduhkan. yang merupakan hasil asetilasi dari kodein. interpretasi temuan analisis oleh seorang toksikolog forensik adalah merupakan suatu keharusan (Wirasuta. khususnya dalam kaitan menjawab pertanyaan narkotika apa yang telah dikonsumsi. Terdapat beberapa pertanyaan yang harus dijawab oleh toksikolog forensik dalam melakukan analisis: a.pada uji ini juga dilakukan penetapan kadar dari analit. dengan kaitannya dalam menjawab pertanyaanpertanyaan yang muncul baik dari penyidik maupun hakim sehubungan dengan kasus yang terkait. Pertanyaan-pertanyaan tersebut dapat terungkap dari hasil analisis toksikologi dan didukung oleh penguasaan ilmu pendukung lainnya seperti farmakologi dan toksikologi. Misal analisis toksikologi forensik ditegakkan bertujuan untuk memastikan dugaan kasus kematian akibat keracunan atau diracuni. Data temuan hasil uji penapisan dapat dijadikan petunjuk bukan untuk menarik kesimpulan bahwa seseorang telah terpapar atau menggunakan obat terlarang. Sehingga disarankan dalam perencanaan pengadaan /pemilihan peralatan suatu laboratorium toksikologi seharusnya mempertimbangkan biaya operasional penanganan sampel. mengacu pada hukum yang berlaku di Indonesia (UU no 5 th 1997 tentang spikotropika dan UU no 22 th 1997 tentang Narkotika). 4.4. dan III memiliki konsekuensi hukum yang berbeda. Berkaitan dengan analisis penyalahgunaan obat-obatan terlarang. II.senyawa racun apa yang terlibat? . atau narkoba apa yang telah disalah gunakan)? b.berapa besar dosis yang digunakan? . Kapan tubuh korban terpapar oleh senyawa tersebut? e. LC-MS. Pernyataan ini terdengar sangatlah mudah. Untuk lebih jelasnya disini akan diberikan suatu perumpamaan kasus. Hal ini pada kenyataannya sering menjadi faktor penghambat dalam penyelenggaraan laboratorium toksikologi. dan farmakokinetik. injeksi.melalui jalur apa paparan tersebut terjadi (jalur oral. Data analisis kuantitatif analit akan sangat berguna bagi toksikolog forensik dalam menginterpretasikan hasil analisis. menyatakan bahwa penyalahgunaan narkotika golongan I. namun metabolitnya (morfin) masuk ke dalam narkotika golongan II. Namun pada kenyataannya heroin illegal juga mengandung acetilkodein. Senyawa apa yang terlibat dalam tindak kriminal tersebut (senyawa apa yang menyebabkan keracunan.

Metabolit glukuronida dari morfin dan kodein tidak dimasukkan ke dalam senyawa narkotika. dimana metabolitnya memungkinkan memberi reaksi positif (reaksi silang) terhadap test antiamfetamin-antibodi. toksik. Senyawa obat tersebut antara lain: a) golongan obat bebas yang digunakan sebagai dekongestan dan anoreksia. yang ditemukan pada kasus kematian akibat Analisis Toksikologi Forensik penyalahgunaan narkotika. maka dapat ditarik kesimpulan bahwa paparan melalui jalur oral. Tingkat konsentrasi toksik berhubungan dengan gejala membahayankan nyawa. Seorang toksikolog forensik dituntut juga dapat menerangkan absorpsi toksikan dan transportasi/distribusi melalui sirkulasi sistemik menuju organjaringan sampai dapat menimbulkan efek yang fatal. maka dimungkinkan untuk menurunkan informasi lamanya waktu paparan telah terjadi sebelum kematian (Wirasuta 2004). lengan. Secara umum hasil analisis urin menyatakan adanya paparan toksikan sebelum kematian. Dilain hal banyak senyawa obat. Interpretasi tingkat konsentrasi dalam darah dan jaringan dapat dibagi menjadi tiga katagori: normal atau terapeutik. kejangkejang. karena obat batuk dekstrometrofan mungkin memberikan reaksi positif. pseudoefedrin dan fenilpropanolamin. Demikian juga apabila konsentrasi yang tinggi ditemukan di paru-paru atau pada organ viseral lainnya mengindikasikan paparan melalui inhalasi. Dari jumlah volume urin dan konstelasi jumlah toksikan dan metabolitnya di dalam kantung kemih. mefenorex. Penetapan rute pemakaian biasanya diperoleh dari analisis berbagai spesimen. dimetilamfetamin. yang hanya berdasarkan data hasil analisis uji penapisan. seperti: koma. Hasil analisis urin biasanya kurang berarti dalam menentukan efek toksik/psikologi dari suatu toksikan. Pada interpretasi hasil analisis pada kasus kematian. Ditemukannya toksikan dalam konsentrasi yang cukup tinggi baik di saluran pencernaan maupun di darah. dinyatakan sebagai penyebab keracunan. clobenzorex. apakah konsentrasi toksikan yang ditetapkan cukup sebagai menyebabkan kematian atau penyebab keracunan. diketemukan pada kematian akibat keracunan sianida). menjadi lebih komplek. c) obat / senyawa obat. Tingkat konsentrasi kematian dinyatakan sebagai konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian. Sedangkan pada 37 . Contoh: sianida pada konsentrasi yang tinggi (0. seperti: efedrin. merupakan petujuk paparan melalui injeksi. dll). dimana amfetamin atau metamfetamin sebagai metabolitnya. Tingkat konsentrasi normal dinyatakan sebagai keadaan.diperoleh dalam sampel darah dan urin tertuduh memberikan reaksi positif terhadap golongan opiat. mefentermin. b) golongan keras (dengan resep): benzofetamin.22 mg/l. dimana menurut UU Narkotika. penyalahgunaan golongan tersebut memiliki konsekuen hukum yang berbeda. dll (United Nation. Dilain hal senyawa golongan opiat terdistribusi ke dalam golongan narkotika I sampai III. dan fentermine. fenfluramine. 1995). fenmeterzine. seperti: etilamfetamin. Hasil ini tidak cukup untuk membuktikan (menuduh) terdakwa telah mengkonsumsi obat terlarang narkotika golongan opiat. kerusakan hati atau ginjal.17-2. Dalam menginterpretasikan tingkat konsentrasi di dalam darah dan jaringan sebaiknya memperhatikan tingkat efek spikologis yang sebenarnya dan semua faktor yang berpengaruh dari setiap tingkat konsentrasi yang diperoleh dari spesimen. Bekas suntikan yang baru pada permukaan tubuh (seperti telapak tangan. seorang toksikolog forensik dituntut mampu menjawab pertanyaan spesifik seperti: rute pemakaian toksikan. Kebanyakan efek farmakologik/psikologi xenobiotika berhubungan dengan tingkat konsentrasinya di darah dan tempat kerjanya (reseptor). Oleh sebab itu tingkat konsentrasi di darah adalah sebagai indikator penting dalam mencari faktor penyebab kematian/keracunan. dapat dijadikan cukup bukti untuk menyatakan toksikan tersebut sebagai penyebab kematian. Interpretasi ini diturunkan dari data konsentrasi toksikan baik di darah maupun di jaringan-jaringan. dimana pada umumnya konsentrasi toksikan yang lebih tinggi ditemukan di daerah rute pemakaian. dan lethal. dengan berdasarkan data laju eksresi toksikan dan metabolitnya. dimana tidak menimbulkan efek toksik pada organisme. Kenyataan ini akan membuat interpretasi toksikologi forensik. Jika ditemukan toksikan dalam jumlah besar di saluran pencernaan dan hati.

Germany): Berdasarkan Berita Acara Pemeriksaan dari penyidik dilaporkan telah diketemukan mayat di kamar mandi sebuah cafe. biasanya dalam waktu yang lama. Dari penetapan kadar alkohol di darah dan urin terdapat alkohol 0. Keberadaan logam tersebut dibawah tingkat konsentrasi toksik mengindikasikan bahwa korban telah terpapar logam berat akibat polusi lingkungan.morfin: 0.730 µg/ml. Terdapat udema paru-paru. dan bau aromatis dari organ tubuh seperti saluran cerna.460 µg/ml 38 . rataan: 0.170 µg/ml. bahwa hasil reaksi positif dengan teknik immunoassay belum cukup bukti untuk memastikan/menuduh seseorang telah mengkonsumsi obat terlarang.665 µg/ml.kodein: 0. timbal. sedangkan pada konsentrasi yang sama mungkin menimbulkan efek kematian pada orang yang baru menggunkan. seorang ahli toksikologi membuat interpretasi akhir dari suatu kasus.morfin: 0. memperhatikan semua faktor toksokinetik. Hal ini sering dijumpai pada kasus kematian akibat menyalahgunaan heroin.040 µgml . oxazepam: 0.darah sebelum di hidrolisis: .1 promil dan 0.044 µg/ml .170 µg/ml Golongan benzodiazepin yang terdeteksi di darah adalah: diazepam: 1. yang dapat berakibat pada penekanan efek farmakologis yang diinginkan. dan merkuri tidak diperlukan untuk fungsi normal tubuh. status immunologi. kodein: 0.277 µg/ml)” dan “non-lethal related heroine (0. Faktor lain yang juga harus mendapat perhatian adalah fenomena farmakologi seperti toleransi. . Göttingen.275 µg/ml. sifat farmakokinetik dari toksikan) seharusnya juga dipertimbangkan dalam menginterpretasikan hasil analisis. kaki. Faktor-faktor yang mempengaruhi respon individu terhadap tingkat konsentrasi toksik (seperti: usia. Contoh-contoh di atas dengan jelas memaparkan.morfin: 0.urin sebelum hidrolisis: .800 µg/ml. Konsetrasi morfin yang tinggi mungkin tidak mengakibatkan efek toksik pada junkis yang telah berulang memakai heroin.086 µg/ml. status nutrisi.400 µg/ml. masih dapat ditolerir sebagai tanpa efek toksik.konsentrasi yang sangat kecil (0.darah setelah hidrolisis: . .2. Lebih lanjut berikut ini diberikan ilustrasi kasus dan interpretasi dari hasil analisis toksikologi forensik yang lengkap: Contoh: Ilustrasi kasus toksikologi forensik (data dikutif dari kasus yang masuk ke Institut of Legal Medicine of Goerg August University.006 mg/l pada perokok). jenis kelamin/status hormonal. dimanakan ditemukan tumpang tindih rentang konsentrasi morfin di darah pada kasus “lethal related heroine (0. Pada uji konfirmasi dengan menggunakan alat GC-MS diperoleh hasil: . Toleransi adalah suatu keadaan menurunnya respon tubuh terhadap toksikan sebagai hasil paparan yang berulang sebelumnya.010 . Bahaya kematian sering dijumpai pada pemakaian dosis tinggi oleh pencadu. yang memulai kembali menggunakan heroin setelah lama berhenti menggunakannya. Dilengan kanannya masih tertancap jarum suntik. .046 µg/ml)” (Wirasuta 2004). berat badan. kelainan patologik dan penyakit bawaan.urin setelah hidrolisis : . seperti arsen. rataan: 0. kelainan fungsi organ.1 promil. . Dokter spesialis Forensik menyimpulkan kematian diduga diakibatkan oleh keracunan obatobatan. Beberapa logam berat. telapak tangan.kodein: 0.026 µg/ml . dan dengan membandingkan hasil analisis dengan laporan kasus yang sama dari beberapa pustaka atau pengalaman sendiri. Penurunan respon dapat diakibatkan oleh adaptasi selular pada suatu konsentrasi toksikan.200 µg/ml.kodein: 0.010 -0. nordazepam: 0. sianida berperan dalam pembentukan vitamin B12. Dalam jumlah kecil sianida juga diabsorpsi dan dibangkitkan selama merokok. yang bertujuan mencari faktor penyebab keracunan. dimana dosisnya didasarkan pengalaman pribadi saat efek tolerasi masih timbul. Hasil otopsi melaporkan terdapat baik bekas suntikan yang masih baru maupun yang sudah menua dilengan kanan dan kiri.004 mg/l pada orang sehat dan 0.6-asetilmorfin: 0. genetik. Hasil analisis toksikologi forensik: Uji skrining menggunakan teknin immonoassay test (EMIT) terdeteksi positif golongan opiat dan benzodiazepin. Analisis Toksikologi Forensik Melalui pengamatan ulang riwayat kasus. temazepam: 0. Oleh sebab itu mendeteksi sianida di darah pada tingkat dibawah konsentrasi toksik.morfin: 0.200 µg/ml. toksodinamik.060 µg/ml.

Guna mengetahui obat apa yang telah dikonsumsi oleh korban. evaluasi longitudinal dan transversal. dll). seorang toksikolog forensik akan merunut balik apa yang telah dikonsumsi korban. . Di dalam tubuh diazepam akan termetabolisme melalui N-demitelasi membentuk desmitldiazepam (nordazepam) dan kemudian akan terhidrolisis membentuk oksazepam. Berkas berita acara pemeriksaan ini dikenal dengan keterangan ahli. farmakokinetik. baik efek tunggal dari opiate dan benzodiazepin maupun efek kombinasi yang ditimbulkan dalam pemakaian bersama antara opiat dan benzodiazepin.Kontrol konstelasi yaitu membandingkan dari berbagai data analisis. Kontrol plausibilitas mencangkup: . berdasarkan hasil analisis dan alur metabolisme dari suatu senyawa obat. perlu dilakukan validasi prosedur analisis. Menyacu informasi konsentrasi toksik (“lethal concentration”) dapat diduga penyebab kematian dari korban. Sedangkan pemakaian diazepam secara bersamaan akan meningkatkan efek heroin dalam penekanan sistem pernafasan. Heroin di dalam tubuh dalam waktu yang sangat singkat akan termetabilisme menjadi 6-asetilmorfin. Hal ini akan mempercepat kematian. Keracunan oleh heroin ditandai dengan adanya udema paru-paru. 2) Tataran biologis. harus dilakukan validasi terhadap semua prosedur analisis dan mengevalusai sumber-sumber yang mungkin memberikan kesalahan analisis. 39 . Di darah dan urin terdapat morfin dan kodein baik dalam bentuk bebas maupun terikat dengan glukuronidnya namun di urin terdeteksi juga 6-asetilmorfin. Morfin akan terkonjugasi menjadi morfin-glukuronidanya. USP. konstelasi data yang ditimbulkan dikontrol berdasarkan sifat farmakokinetik dari toksikan dan metabolitnya. Efek toksik yang ditimbulkan oleh pemakaian heroin adalah dipresi saluran pernafasan. data ini dikontrol berdasarkan data medikal misalnya data analisis tidak sesuai dengan data yang telah diperoleh dari populasi manusia atau sangat jauh menyimpang secara statistik. Dari hasil analisis seorang toksikolog forensik sudah dapat menyimpulkan bahwa korban telah mengkonsumsi heroin.Dalam menginterpretasikan hasil temuannya seorang toksikolog forensik harus mengulas kembali efek toksik dan farmakologi yang ditimbulkan oleh analit. Untuk mendapatkan data analisis yang valid. Dalam tataran ini kesalahan dapat diakibatkan oleh faktor metode analisis. sebagaian kecil akan termetabolisme membentuk temazepam. Sehingga dari temuan analisis dapat disimpulkan korban juga telah mengkonsumsi diazepam. Misal membandingkan data analisis toksikan dan metabolitnya di darah dan di urin.Kontrol data ekstrim. AOAC. Interpretasi akan menjadi bernar secara ilmiah apabila didasarkan pada data analisis yang valid. Berdasarkan data farmakokinetik dari heroin serta metabolitnya dan juga konstelasi dari konsentrasi morfin bebas dan terikatnya dapat diambil duga kematian terjadi lebih kurang dari satu sampai dua jam setelah pemakaian heroin (perkiraan ini didasarkan atas model farmakokinetik dari Wirasuta 2004). 1995). yang diperoleh dari matrik biologis yang berbeda tetapi seri data tersebut masih memiliki parameter yang saling bergantungan. 1990. variansi matrik biologis dari sampel memungkinkan ikut memberikan sumbangan kesalahan terhadap hasil analisis. sesuai dengan kentuan yang diatur secara international (misal mengikuti ketentuan validasi prosedur analisis yang dimuat dalam Farmakope International. yaitu: 1) Tataran teknis analisis yang menghasilkan data analisis. dan kemudian membentuk morfin. Untuk mendapatkan data analisis yang valid/sahih. yaitu: kontrol plausibilitas. dan harus didukung oleh pemahaman ilmu toksikologi-farmakologi. biotransformasi yang baik. Semua temuan dan hasil interpretasi ini dibuat dalam suatu laporan (berita acara pemeriksaan) yang akan diserahkan kembali ke polisi Analisis Toksikologi Forensik penyidik. Mengevaluasi/menganalisis validasi dari hasil analisis dapat ditinjau dari tiga tingkat faktor utama yang menentukan hasil analisis (DFG. Terdapat tiga langkah yang dapat dilakukan dalam mengevaluasi data analisis dari sudut pandang tataran biologis.

(2004). VCH Verlag. B. S. The Pharmaceutical Press. Criminalistics. Tujuan dari krontrol plausibilitas adalah untuk mencari kesalahan analisis. 1975. Data temuan hasil uji penapisan dapat dijadikan petunjuk bukan untuk menarik kesimpulan bahwa seseorang telah terpapar atau menggunakan obat terlarang. 2. 4. 40 . B. 3) Tataran nosologi (ilmu pengelompokan penyakit). and post-mortem material. 3.. Weinheim. dengan didasarkan sifat farmakokinetik. yang diperoleh dari selang waktu pengambilan sampel (penerokan) yang berbeda dibandingkan satu sama lainnya. DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft)... Data analisis (toksikan dan metabolitnya) dari pasien yang sama. Handbuch gerichtliche Medizin. hal ini bertujuan untuk mengetahui sifat perubahan biologis (misal: laju eliminasi) yang terjadi pada pasien tersebut. 1980. New Mexico. Berlin 8. didasarkan terhadap sifat farmakokinetik (toksokinetik) dan reaksi biotransformasi dari toksikan dan metabolitnya. Ac. Springer-Verlag.5. M. interval konstrasi toksik atau “lethal dosis”. Gerichtliche Medizin.V. Eckert. Orientierende Angaben zu therapeutischen und toxischen Konzentrationen von Arzneimitteln und Gifften in Blut. Dari hasil pembandingan data analisis tersebut. Missori 4.. Moffat.G. kesalahan dapat ditimbulkan akibat kesalahan dalam mendiagnose keracunan atau mungkin muncul akibat kesalahan menginterpretasikan temuan patologis atau psiologis pasient (korban).. und Brinkmann B.. 2) Analisis meliputi uji penapisan dan uji konfirmasi yang meliputi uji identifikasi dan kuantifikasi. Madea. Lebih lanjut data ini dapat dijadikan dasar untuk memperkirakan waktu terjadinya eksposisi. Mueller B. New York 6. Weinheim. Sedangkan hasil uji pemastian (confirmatory test) dapat dijadikan dasar untuk memastikan atau menarik kesimpulan apakah sesorang telah menggunakan obat terlarang yang dituduhkan Bahan Bacaan 1. W.S. Mosby Company. SpringerVerlag. Jackson. (1990). 1986. evaluasi ini Analisis tongitodinal. and Widdop.. Clark’s isolation and indentification of drugs in pharmaceuticals. Englewood Cliffs. 2nd Ed. Band 2.. Saferstein R:. sehingga diharapkan diperolehnya data analsis yang sahih. J. Berlin. New Jersey. 1995. Kesimpulan Toksikologi forensik mencangkup terapan ilmu alam dalam analisis racun sebagi bukti dalam tindak kriminal. seperti interval waktu konsentrasi efek terapeutik. yang diambil dari interval waktu tertentu. Data dari kelompok kontrol mungkin dapat berupa data konsentrsi toksikan/obat. oder Urin. body fluids. A Simon & Schuster Co. 5. maka dapat dijadikan dasar untuk menduga/mengontrol konsentrasi aktuel (waktu terjadinya keracunan). Analisis transversal. Serum. (1995). Kerrigan. St. Analisis toksikolog forensik (klinik) dapat dikelompokkan ke dalam tiga tahap yaitu: 1) penyiapan sampel. DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft). an Introduction to Forensic Science.. Louis.. VCH Verlag. dimana dari tataran teknik analitik tidak teridentifikasi. New Mexico Department of Health Scientific Laboratory Division Toxicology Bureau. Drug Toxicology for Prosecutors Targeting Hardcore Impaired Drivers. Heidelberg. Kesalahan ini mungkin muncul karena keracunan dapat menampakkan kelainan patoligis.Kontrol trend data: data analisis yang diperoleh dari satu pasien (korban) dievalusi terhadap perubahan waktu. 5th Ed. London 7. Moss. dengan tujuan mendeteksi dan mengidentifikasi konsentrasi dari zat racun dan bentuk metabolitnya dari dalam cairan biologi dan akhirnya menginterpretasikan temuan Analisis Toksikologi Forensik analisis dalam suatu argumentasi tentang penyebab keracunan dari suatu kasus. The C. Einfache toxikologische Laboratoriums-untersuchungen bei akuten Vergiftunen.V. data analisis yang diperoleh dari satu pasien dibandingkan dengan kelompok kontrol. Introduction to Forensic sciences. dan 3) interpretasi temuan analisis dan penulisan laporan analisis.

Inc. I M. 10. Denpasar Analisis Toksikologi Forensik 41 . (Ed. cocaine.. SOFT / AAFS.) (2005). Wirasuta I M. Peran kedokteran forensik dalam penegakan hukum di Indonesia. (2004).G. Penerbit Udayana.G. United Nations. I M. Penerbit Udayana. (2005).A. New York 11. United Nation International Drug Control Programme. Toxicology Section).A.. (Ed. Hambatan dalam pengegakan Undang-Undang No 22 th 1997 tentang Narkotika. khususnya pada penyalahgunaan narkotika golongan opiat ditinjau dari sifat farmakokinetiknya. et al.G.) and AAFS (the American Academy of Forensic Sciences. Wirasuta. (2005).G..9. Wirasuta.A. cannabinoids. (2002). Tantangan dan tuntuan di masa depan. Cuvillier Verlag. Peran Toksikologi forensik dalam penegakan hukum kesehatan di Indonesia.A. 12. (1995) Recommended methods for the detection and assay of heroin. dalam Wirasuta. dalam Wirasuta. et al. I M. Forensic Toxicology Laboratory Guidelines. Denpasar 13. Peran kedokteran forensik dalam penegakan hukum di Indonesia. I M.A. Ein Beitrag zur Verbesserung der Opiatbefundinterpretation.) (2005).. Tantangan dan tuntuan di masa depan. SOFT (Society of Forensic Toxicologist. Untersuchung zur Metabolisierung und Ausscheidung von Heroin im menschlichen Körper. Göttingen.G. amphetamine and ring-substituted amphetamine derivates in biological specimens manual for use by national laboratories.

Dari sekian banyak materi biologi. darah. dan penghilangan langsung protein dengan ultrafiltrasi atau dialisis dapat juga menghilangkan obatnya. Walaupun obat bebas merupakan satuan yang penting secara psiologik. sampel padat atau semi-solid dihancurkan terlebih dahulu dengan prosedur mekanik. osmosis yang dihasilkan menyebabkan sel menggelembung dan pecah. Materi biologi adalah campuran komplek. urin. dapat terpisah dari cairan jernih (plasma) dengan sentrifugasi sederhana. maka konsentrasi obat bebas adalah sangat rendah. Tetapi jika darah tidak diperlakukan dengan hati-hati. sisa muntahan. Protein sangat berbeda secara fisikokimia dengan molekul obat yang bermolekul kecil. Jika darah dibiarkan tanpa penambahan agen anti koagulan. Sebaliknya jika ditambahkan anti-koagulan dan dibuat plasma. Darah manusia atau hewan terdiri dari cairan jernih yang terdapar yang mengandung protein tersolubilisasi.BAB V CAIRAN BIOLOGI Cairan biologi (darah. hingga biasanya yang diukur adalah obat total dalam plasma atau serum. tetapi penyebab yang paling umum adalah perubahan dalam kekuatan ion dari cairan sekitarnya misalnya dengan penambahan air. Selain itu setiap pengukuran langsung obat dapat menghilangkan obat total yang ada. tetapi plasma atau serum dibuat terlebih dahulu. oleh pembekuan. sel-sel ini akan pecah dan metodelogi pemisahan akan semakin sulit. Tahap pertama penyiapan sampel serum atau plasma untuk analisis adalah mendapatkan larutan dalam air yang bebas protein yang sesuai untuk diekstraksi dengan pelarut organik. atau perlakuan mekanik seperti misalnya penyadukan. dan hanya mengukur obat yang bebas. dan sel-sel yang tersuspensi. maka faktor ini tetap tinggal yang memberikan sedikit perbedaan jika plasma dan serum dianalisis. organ) adalah merupakan sebagian besar sample dari analisis toksikologi. Sifat Beberapa Cairan Biologik Tertentu a) Darah Darah merupakan cairan biologik yang paling kompleks. Masalahnya adalah merusak ikatan obat-protein dan kemudian obat total diekstraksi dan dianalisis. 5. plasma (serum) dan urine sample murupakan sampel yang memiliki frekuensi yang paling tinggi dalam toksikologi analisis forensik. maka penentuan obat total hanya menggunakan suatu faktor amptifikasi. lemak dan garam terlarut. Sel darah merah ini dapat pecah oleh pemanasan. maka sel darah merah akan menggumpal (clotting) dan cairan diatasnya yaitu serum dapat dienap tuangkan. Untuk memperbesar fluiditas. setiap manipulasi yang melibatkan perubahan volume harus dilakukan dengan salin (larutan NaCl fisiologik) isotonik. Kemudahan suatu sampel dianalisis akan bergantung pada derajat fluiditas. karena sebagian besar obat terikat pada protein. saliva. yang terdiri dari berbagai komponen. b) Serum dan Plasma Sifat umum serum dan plasma adalah mengandung protein dalam jumlah besar. Serum dalam banyak hal sama dengan plasma terkecuali tidak mengandung faktor pelarutan yang mengakibatkan terjadinya penggumpalan. Juga harus diketahui bahwa karena ikatan protein-obat merupakan prosentase yang tetap dari jumlah pada rentang konsentrasi yang lebar. Jika darah diekstraksi langsung. Pada umumnya darah tidak langsung diekstraksi. Konstituen utama sel darah merah (eritrosit).1. Oleh karena itu. tetapi pada umumnya masalah yang akan timbul pertama-tama adalah bagaimana cara pemisahan obat dari materi endogen yang ada. Tetapi sering kali ada afinitas yang sangat kuat antara protein dengan obat. harus ditangani dengan hati-hati untuk mengurangi pecahnya sel darah merah. maka kesimpulan keseluruhan masih tetap berlaku. Metode yang paling sederhana dan 42 Cairan Biologik . Beberapa metode analisis tertentu cukup spesifik untuk digunakan langsung menetapkan obat dalam cairan biologik.

ikatannya adalah reversibel. dan berbeda dengan faktor yang menggangu analisis. Akhirakhir ini banyak digunakan asetonittril. ketodase. dan mengisolasi filtrat yang terjadi. dibandingkan dengan prosedur ekstraksi langsung. ketodase. Sejumlah enzim lain yang juga dapat digunakan dapat dilihat pada tabel berikut Tabel 5. papain Fenobarbaital Tripsin. Protein juga dapat didenaturasi menggunakan enzim proteolitik. ketodase Difenhidramin Substilisin. papain. diketahui adalah bahwa perubahan dalam konstituen plasma dapat memberi impact pada level obat dalam plasma. Hidrolisis menggunakan enzim adalah sangat berguna untuk prosedur skrining umum jika tidak mungkin untuk mengoptimasikan prosedur ekstraski yang biasa untuk obat tertentu. Caranya adalah dengan menambahkan dapar yang sesuai dengan volume sama. proteinase. yang seringkali dipengaruhi waktu dan sifat makanan. Ekstraksi juga dapat dilakukan tanpa mendenaturasi protien terlebih dahulu. Adsorben yang digunakan harus cukup kuat untuk merebut obat dari proteinnya 43 . Walaupun enzim seperti ini sering digunakan pada penyimpanan jaringan untuk analisis.paling tua adalah mengendapkan proteinnya. komposisinya sangat stabil. bahkan juga dalam pasien. Oleh karena itu pada pH yang tepat. Walaupun obat terikat kuat dengan plasma Cairan Biologik protein. Penemuan kembali sejumlah obat seperti benzodiazepin. Protein terdenaturasi oleh pengendapan. fenitoin dan asam salisilat dari plasma lebih efisien jika digunakan enzim ini. Dapat digunakan metanol atau etanol dan paling tidak dua volume etanol untuk mengendapkan semua protein yang ada dalam plasma. Sebaliknya kandungan lemaknya dapat bervariasi. Aluminium klorida merupakan pereaksi yang paling aman untuk mengendapkan protein dalam darah total. Pereaksi asam yang populer untuk pengendapan protein adalah asam triklorasetat.5 dan protein total serta konsentrasi garamnya dapat dikontrol. pada mana plasma dicampur dengan volume sama asetonitril. asam perklorat. substilisin. tripsin. memerlukan tahap partisi spesifik untuk menghilangkan lipida. Pemecahan ikatan protein-obat ini dapat juga dengan kolom adsorben untuk memekatkan obatnya yang kemudian dielusi dengan pelarut organik. Enzim proteolitik yang dapat digunakan pada penyiapan sampel biologik untuk analisis obat Obat yang hedak dianalisis Enzim Amitriptilin Subtilisin. yang dapat digunakan untuk analisis obat antikuvulsan dan analgetik. tripsin.1. Akan tetapi pereaksi yang merupakan asam kuat ini dapat mempunyai efek merugikan pada obat yang hendak diekstraksi dan penggunaannya harus diuji terlebih dahulu dengan senyawa murni/standard. dan asam tungstat. Keuntungan dari cara ini adalah bahwa tidak diperlukannya tahap filtrasi atau dekantasi dan dapat digunakan sebagai prosedur rutin untuk sejumlah besar sampel. Selain itu dapat juga digunakan aluminium klorida atau amonium sulfat. kemudian larutan sebelah atasnya dapat digunakan untuk analisis. maka kesetimbangan ikatan dapat digeser sedemikian hingga memberikan ekstraksi yang efesien ke dalam pelarut organik. protease Diazepam Tripsin. sampel dapat langsung diekstraksi dengan pelarut organik.7. Penemuan kembali yang rendah disebabkan baik oleh mengendapnya obat dengan protein atau oleh degradasi. larutan dijenuhkan natrium bisulfat-natrium klorida. enzim substilisin telah berhasil digunakan untuk merusak protein plasma. proteinase Klorpormazine Substilisin. Lemak ini dapat mempengaruhi analisis dan terutama untuk sampel yang berlemak. proteinase Walaupun plasma merupakan cairan yang amat kompleks. tripsin.3 . dan jangan digunakan langsung sebagai pereaksi umum. pH plasma jarang terletak diluar 7. kemudian diekstraksi dengan 2-3 kali volume pelarut organik. dan ikatan obat-protein dirusak dan diharapkan obat tetap dalam larutan. protease Fenitoins Substilisin. Ketidak stabilan obat pada pH rendah di atas dengan penggunaan pelarut organik untuk denaturasi dan mengendapkan protein. Jika partisi bentuk yang tak terinonisasi ke dalam pelarut organik cukup tinggi. Yang harus juga.

beberapa jenis resin seperti XAD-2 dan S-X3. kateter vena yang dipasang tetap pada infus. Sampel urine Yang perlu diperhatikan dalam sampling urine adalah: 1) selang waktu pengambilan akan berpengahur terhadap volume yang ditampung. c) Urine Urine. Untuk mengatasi hal ini biasanya ditambahkan amilalkohol. Seperti contoh Tris(2butoksi-etil)fosfat (TBEP). Pada wadah ditandai dengan: tanda pengenal subjek. dalam beberapa hal biasanya ditambahkan pengawet seperti: timol.2. Jadi makin lama obat bersentuhan dengan sel menyebabkan makin besar penurunan kadar obat tersebut. 5. Setelah disentrifuga hati-hati dalam pemisahan. macam contoh (serum. Urine dapat mempunyai rentang pH yang lebar. dan perlu pengukuran volum urine (volum urin total). tidak seperti plasma. Untuk analisa plasma dan serum diperhatikan zat tambahan yang digunakan sehingga gangguan pada tahap analisis dapat ditekan sekecil mungkin. Penyawetan bertujuan untuk mencegah obat tidak terurai oleh bakteri. Dalam pengambilan darah harus diperhatikan agar sel darah merah tidak terhemolisis baik pada saat pengambilan dalam vena harus pelan-pelan. jarum dan tabung pengambil darah hampa. Penambahan antikoagulan (heparin) tabung Cairan Biologik tidak boleh dikocok melainkan tabung dibolakbalik secara pelahan-lahan. Yang perlu juga diperhatikan pada plasma atau serum adalah kemungkinan adanya enzim yang dapat melanjutkan degradasi obat. Darah diambil dari pembuluh vena dengan menggunakan: jarum dan spuit. bebas dari protein dan lipida. toluen. jika diabsorpsi akan menyebabkan urine basa. Sebagai adsorben dapat digunakan arang aktif. nomer klas untuk setiap sampel. terutama tergantung dari diet atau pengobatan. Sifat dan aktivitas estrase ini dapat tergantung dari pasiennya. b. Sehingga memberi kesalahan dalam penentuan obat dalam plasma. Yang menjadi kesukaran adalah bahwa adanya perbedaan yang besar dari volumen urine yang dihasilkan pada satu tenggang waktu. karena itu umumnya dapat langsung diekstraksi dengan pelarut organik. Jika darah atau serum yang hendak dianalisis perlu segera dipisahkan eritrositnya karena kadar obat menjadi menurun yang disebabkan oleh beberapa faktor seperti metabolisme obat oleh eritrosit dan penyerapan obat ke dalam sel darah. Wadah vial seharusnya inert. tertutup rapat dan tahan terhadap kondisi penyimpanan. formaldehid. darah total). Pengambilan Sampel Analisis toksikologi forensik biasanya menerima sampel dari kedokteran patologi forensik yang dilengkapi dengan Berita Acara Pengiriman Sampel. tanggal. jam pengambilan sampel. dan kloroform. volume sampel. suatu pengental yang terdapat pada tutup tabung pengental. harus hati-hati dan cocok untuk fraksi darah yang diperiksa agar senyawa obat terjamin kemantapanya untuk dianalisa. plasma. tenggang waktu perlakuaan /pengobatan. terutama esterase yang dapat menguraikan ester menjadi asam bebas dan alkohol. hingga dapat diekstrasi dengan pelarut yang sesuai. Dibandingkan dengan plasma atau serum. menyebabkan obat masuk ke dalam eristrosit. agar sel darah tidak terikut dipipet. ternyata dapat mendesak beberapa ikatan obat dengan protein. Perlu diperhatikan adsorpsi obat oleh dinding wadah karena kadar obat sangat kecil. sedangkan sebagian besar obat adalah larut lemak. nama kajian. Keuntungannya adalah bahwa jenis senyawa yang umum terdapat dalam urine adalah larut air. komposisinya bervariasi cukup besar yang dapat dilihat dari warna gelap urine malam dibandingkan dengan warna yang pucat dari urine yang dikumpulkan pada siang hari. Misalnya antasida. borat. dihindari hilangnya urine (tumpah selama pengambilan sampel). Komposisi urine keseluruhan tergantung pada diet yang memang menyebabkan warna yang berbeda. analisis biasanya 44 . 2) untuk mencegah tumbuhnya bakteri dalam sampel sebaiknya didinginkan dalam lemari pendingin. a) Darah. Pemilihan tabung. Sebelum analisa urine perlu dikocok agar homogen.serta cukup lemah untuk melepaskan obat pada waktu dielusi.

A. sampel dikocok homogen sebelum dilakukan analisis. untuk memisahkan dua lapisan cairan yang bercampur atau untuk merubah fase organik yang lebih berat dari air menjadi lebih ringan seperti halnya campuran eter-kloroform. Sifat kimia pelarut pengekstraksi juga dapat menimbulkan efek yang tidak dikehendaki. Cara yang paling banyak digunakan untuk penyimpanan adalah pendinginan di dalam freezer. Selain pada densitas. Pencairan sebaiknya jangan dilakukan dengan pemanasan yang tinggi karena mungkin dapat menguraikan obatnya.15 mL urine. sebagian besar senyawa katekol ternyata tetap akan teroksidasi menjadi senyawa koinon walaupun disimpan pada suhu -15 °C. Penandaan pada wadah dilakukan seperti pada sampel darah tetapi perlu dicatat volume urine total. maka sebaiknya pelarut pengekstraksi lebih ringan dari air. Untuk ini paling banyak digunakan adalah eter walaupun akan memberikan masalah pada waktu sentrifugasi. Selain itu bekuan cairan/materi biologi dapat mengakibatkan protein yang ada rusak yang natinya dapat menggangu analisis obatnya. karena volume sampel umumnya 45 . Pemilihan ini tentunya disesuaikan dengan apakah fase air atau fase organiknya yang hendak digunakan selanjutnya. Oleh karena kloroform / diklormetan mengandung pengawet / antioksidan seperti etanol yang dapat mengakibatkan adanya / terjadinya etilkloformat yang selanjutnya merupakan alat pada perubahan norkodein menjadi norkodein karbonat. Jika ekstraksi dilakukan dalam tabung sentrifuga terlebih-lebih jika sejumlah banyak sampel yang harus dianalisis. C. Karena pada waktu pencairan sampel sebelum dianalisis dapat terjadi efek konsentrasi terlokalisasi. densitas pelarut pengekstraksi juga harus diperhitungkan. fase air dapat dijenuhkan dengan garam seperti ammonium sulfat yang dapat juga memperkecil kecendrungan terbentuknya emulsi. Pada tahap ekstraksi. Sampel yang sudah mencair harus segera dianalisis untuk menghambat kerja enzim. Sebaliknya metil butil keton sebagai pelarut dapat bereaksi dengan amin primer. Jika hendak mengunakan corong pisah maka pelarut pengekstraksi sebaiknya lebih berat Cairan Biologik dari air.memerlukan 10 . Agar obat dapat terekstraksi dalam pelarut organik. Indometasin juga tidak stabil jika dibekukan. Oleh karena itu sebagai anti koagulan digunakan natrium forida dengan kadar 5 mg/ml karena dapat menginhibisi kerja enzim. Terjadinya turunan karbonat ini juga ditunjukkan jika antidepresan trisiklik diekstraksi dengan kloroform yang tidak mengandung etanol sebagai pengawet.3. dan etanol dengan kromatografi kolom alumina. Fosgen dapat dihilangkan dari kloroform dengan mencuci dengan air. terkecuali jika ditambahkan vitamin C sehagai anti oksidan. Ekstraksi Cara yang paling umum yang sering digunakan untuk pemurnian parsial obat adalah metode ekstraksi dengan pelarut organik. Etil asetat akan terurai pada pH lebih dari 9. Faktor-Faktor yang harus diperhatikan dalam Analisis obat dalam cairan biologi. Setelah beku obat belum tentu tetap stabil seperti misalnya apomorfin. Oleh karena itu pH fase air harus dioptimasi untuk masingmasing obat agar diperoleh bentuk tak terionisasi dengan sempurna. B. 5. Untuk pemisahan obat dalam cairan biologik secara ekstraksi cair-cair jarang digunakan corong pisah. Misalnya amin primer seperti etilamin akan bereaksi dengan keton dan aldehida membentuk basa Schiff. Dalam beberapa hal reaksi dapat terjadi tanpa diketahui dan obat dapat ditentukan tanpa kesalahan besar. Untuk memperbesar partisi senyawa ionik ke dalam fase organik. harus dalam bentuk tidak terionisasi. Penyimpanan Sampel Dalam penyimpanan ini yang harus diperhatikan adalah adanya enzim esterase serum. Pemisahan Fase/Lapisan. Kloroform dan diklormetan jika terkena udara akan terbentuk fosgen yang sangat rekatif.0 membentuk etanol dan asetat. pemilihan pelarut ini juga dapat didasarkan pada kemudahan menguapnya. Kerugian dari cara ini adalah terjadi efek apple jack yaitu obat akan terkonsentrasi dalam tetes pertama yang membeku hingga akan tinggal dipermukaan dan akan lebih mudah teroksidasi.

Adanya air dalam fase organik dapat merubah komposisi fase gerak pada HPLC. sengaja ditambahkan ke dalam sampel misalnya antikoagulan pada sampel darah dapat merupakan cemaran pada analisa menggunakan HPLC. Boca Raton.A. Moffat. E. C. larutan yang sudah bebas air dituangkan dengan meninggalkan garam yang terhidrasi sebagai bongkahan kecil di dalam tabung. Analysis of Drugs in Biological Fluids. Kerusakan yang paling umum adalah yang disebabkan oleh pembentukan emulsi yang bertahan akibat pengocokan kuat. pelarut diuapkan pada 40 °C memindahkan residu obat segera dan menggunakan standard internal. adsorpsi oleh wadah gelas dan menguapnya obat. Jika jumlah airnya hanya sesepora untuk menghilangkan air ini cukup dengan menyaring melalui kertas saring kering dengan kehilangan akan obat yang lebih kecil Cairan Biologik dibandingkan menggunakan natirium sulfat anhidrat.. CRC Press.Analisis Obat Dalam Cairan Biologi. seperti yang dialami oleh anti depresan trisiklik. sabun atau detergen. Residu penguapan dapat mengandung asam atau basa mineral. Yang juga harus diketahui adalah bahwa cemaran suatu prosedur tertentu belum tentu merupakan cemaran pada prosedur yang lain. Staf laboratorium dapat juga merupakan sumber cemaran. et al... Adanya cemaran yang sebenarnya berasal dari proses analisis. 2. Pengeringan Fase Organik Setelah dipisahkan dari fase air. The Pharmaceutical Press. Penguapan Sampai Kerring Pada tahap penguapan sampai kering ini sering kehilangan akan obat. Cemaran juga dapat berasal dari alat lab yang tidak bersih. Untuk memecahkan emulsi ini dapat dengan sentrifugasi. penjenuhan fase air dengan garam atau penambahan sejumlah sedikit alkohol. (1988). Pada GC penyuntikan garam atau protein yang larut air yang dikandung fase organik dapat menyebabkan terbentuknya tumpukan zat padat pada awal kolom atau airnya sendiri dapat menarik fase diam kolom. Sesepora air dapat dihilangkan dari fase organik dengan penambahan sedikit natrium sulfat anhidrat. London. filtrasi.kecil. Biasanya pemisahan dilakukan dengan tabung sentrifus. Penambahan alkohol sebaiknya tidak dilakukan jika dikehendaki reprodusibilitas ekstraksi yang baik. akibat terutama oleh bumping (muncrat). Jakarta 46 . . 3. karena jika fase organik hendak diuapkan sampai kering. Sumber Pencemaran Cemaran adalah senyawa yang tidak dikehendaki yang masuk ke dalam sampel selama proses pembuatan (cemaran endogen) yang sebenarnya merupakan sebagian masalah analisis. (1986). Masuknya cemaran dapat terjadi dari mulai tabung pengumpul spesimen. D. Pada pengocokan kuat akan terjadi gelembung gelembung kecil dari satu fase masuk ke campuran dua fase. Untuk mempercepat penguapan dapat ditambahkan beberapa tetes etanol. yang mungkin justru dapat menguraikan obatnya. Jadi pelarut yang diperuntukkan untuk spektroskopi misalnya dapar saja mengandung senyawa yang tidak mengabsorpsi yang memungkinkan mempengaruhi sifat kromatografi. fase organik harus betul-betul bebas air. (1985). Penguapan sampai kering dapat dilakukan dengan evaporator. Inc. pembekuan kemudian diikuti pencairan. Jika hal ini terjadi dapat diatasi dengan mengselanisasi alat gelas yang digunakan.. Chamberliain. Cemaran lain dapat berupa serat dan tisu atau jas Lab. maka gelembung ini akan bertahan. diaduk dengan batang pengaduk gelas. F. Clarke's Isolation and Identification of Drugs. Emulsi yang bertahan ini akan terbentuk jika dilakukan pengocokan kuat dengan adanya protein. KEPUSTAKAAN 1. dan jika tegangan permukaannya rendah. maka tetes terakhir air dapat menyebabkan diperlukannya kondisi yang labih kuat dibandingkan dengan kondisi yang dibutuhkan pelarut sendiri. S. senyawa kimia yang. J. Sriewoelan. 2nd ed. walaupun hal ini dapat menimbulkan terjadinya esterifikasi asam organik yang tidak dikehendaki atau pembentukan ketal dengan gugus okso.

2. Banyak senyawa kimia dapat memberikan warna tertentu jika berkontak dengan pereaksi tertentu. asam amida netral. atau juga tidak.BAB VI REAKSI WARNA Reaksi warna adalah prosedur kimia dalam pengujian senyawa dengan menggunakan pereaksi dengan mengamati warna yang terbentuk atau perubahan warna yang terjadi. atau tersier yang bersifat basa. ungu.1. golongan amin aromatik. sehingga pemilihan pereaksi dapat berdasarkan reaksi positif terhadap gugus fungsi tersebut.3. sekunder. karena sangat terbuka untuk memberikan deskripsi yang subjektif. 6. sehingga reaksi warna berhubungan dengan aspek gugus fungsi dari struktur senyawa obat tersebut. Lebih jauh rentang warna tersebut mungkin sangat luas atau sempit. atau dicatat warna yang dominan muncul merah . Kesimpulan akhir dari reaksi warna harus disertai reaksi pembandingan. Sifat khas senyawa nitrogen Nitrogen dalam bentuk nitrat dan nitrit. dan terdapatnya senyawa lain dalam sampel yang mungkin menimbulkan reaksi positif atau negatif palsu. Biru yang bervariasi mungkin dihasilkan dua warna seperti merah . oranye. rentang warna tersebut sangat tergantung pada kondisi percobaan. biru. Reaksi warna juga digunakan sebagai penampak noda pada plat KLT atau sebagai uji skrining maupun konfirmasi menggunakan KLT. Reaksi warna tidak dapat dijadikan dasar untuk mengidentifikasi satu senyawa obat. oleh karena itu perlu dijelaskan perubahan warna yang terbentuk selama melakukan uji. Faktor Teknis Pemilihan pereksi warna yang tepat untuk senyawa obat yang diduga terdapat dalam sampel didasarkan atas rumus bangun dari senyawa obat tersebut. Toksikolog harus memperhatikan keterbatasan reaksi warna dan sumber-sumber yang memungkinkan reaksi positif palsu. sebagai amonium kuarterner. 6. Fenomena ini jika diterapkan pada materi biologi tidak menimbulkan masalah. kuning. Warna yang dihasilkan oleh pereaksi tersebut mungkin spesifik untuk senyawa tersebut. sebagai amin primer. tetapi akan muncul masalah jika diterapkan pada sediaan farmaseutika. Rekasi warna dapat diterapkan langung pada sampel baik berupa sediaan atau dari spesimen cairan biologi. Beberapa Reaksi Warna 6. Reaksi golongan a. Interpretasi reaksi warna. Yang paling penting dari reaksi warna adalah skrining cepat dari sampel urine memungkinkan analisa tanpa ekstraksi lebih dahulu. Ataupun pemilihan pereaksi warna dapat didasarkan pada pereksi yang memang spesifik untuk senyawa bersangkutan. Warna yang dihasilkan harus dicatat apakah dihasilkan oleh bentuk asam atau bentuk basanya. 6. abu-abu. hijau. Seperti contoh senyawa obat dalam bentuk garam hidroklorida biasanya memberi warna merah dengan uji Mendelin's dan memberi warna biru oleh reagen Koppayi-Zwikker (sebelum ditambahkan pirolidin).3. jumlah analit yang terdapat dalam sampel. Pemeriksaan nitrat 47 .coklat atau terjadi perubahan warna merah → coklat. hitam. dengan mereaksikan baku pembanding pada kondisi Reaksi Warna yang sama. garam ion zwitter seperti asam amino: dan dalam bentuk lain.coklat. Rentang warna yang dihasilkan oleh rekasi warna tidak mungkin mengatakan dalam derajat. Warna yang ditunjukan dibagi menjadi warna dasar seperti: merah. sebagai senyawa nitro dalam ikatan dengan senyawa karbon. Jika dikenal strukturnya maka dapat diketahui gugus fungsi (golongan) yang terdapat didalamnya. sebab dalam hal tertentu bentuk asam dan basanya memberikan warna yang berbeda pada pH yang berbeda. dan ping.1. coklat. tetapi warna yang terbentuk mungkin positif terhadap sekelompok senyawa atau positif terhadap gugus fungsi tertentu.

Rekasi dapat juga positif jika zat dipasakan dulu dengan 3N HCl selama 3-15 menit dan kemudian didinginkan. Reaksi Warna Pemeriksaan amin sekunder Zat dilarutkan dalam 2 ml 3N HCl. Pemeriksaan senyawa nitro aromatik Sejumlah 50 mg zat dilarutkan dalam 3 ml etanol. dipanaskan sebentar. Kepada sisa penguapan ditambahkan 50 mg fenol. dan kemudian dituangkan ke dalam 2 ml perekasi Diazo II. direaksikan dengan 1 ml H2SO4 : terbentuk warna biru-hijau pekat yang bila hasil rekasi dituangkan ke dalam air berubah menjadi merah. Campuran didinginkan pada ± 15 °C lalu ditambahkan 3 tetes larutan natrium hipobromit ( 2 g NaOH dalam 7. terbentuk warna merah jingga atau endapan.5N KOHetanol. prokain. misalnya untuk klordiazepoksida. dan 200 mg Zn. Sesudah pemberian 3 ml HCl encer. Lima menit kemudian larutan diencerkan dengan 5 ml air dan dikocok dua kali. Morfin dan efedrin hanya memberikan sedikit endapan atau sama sekali tidak. g 2-naftol dalam 100 ml 3N NaOH.5 ml Brom. Selanjutnya larutan dituangkan ke dalam 2 ml pereaksi Diazo II. Hal itu terjadi pada sebagian besar turunan piridin.5 ml air + 0. 48 . Terbentuk warna merah tua (nikotinamida) i. PAS.25. Pada sisa larutan ditambahkan beberapa tetes larutan raksa (II) klorida 5 %. sampai mendidih. Larutan eter dicuci.Semua nitrat larut dalam air. lalu dilumerkan sebentar. Pereaksi Mayer: 1. furosemida. direkasikan dengan beberapa tetes kloroform dan basa alkali dalam etanol. 4 ml air.35 g HgCl2 dalam 100 ml larutan KI 5% Pemeriksaan amin alifatik primer ( reaksi Senfol) Larutan amin dalam etanol dituangi karbondisulfida sama banyak. Caranya: ke dalam larutan zat yang jernih. Pemeriksaan amin aromatik primer ( reaksi Diazo) Sejumlah 50 mg zat dilarutkan dalam 1 ml 3N HCl. Sejumlah 5 mg zat dicampur atau digerus dengan 10 mg 1-klor-2. sedangkan imipramin berwarna biru. Lalu 2 ml filtratnya direaksikan dengan 2 tetes pereaksi Diazo I. kemudian dengan 2 ml larutan NaNO2 1%. Reaksi tidak sama untuk semua senyawa basa amin. Rekasi positif antara lain untuk : efedrin (merah). Pemeriksaan golongan guanidin (reaksi Sakaguchi) Ke dalam larutan 1 mg zat dalam 5 ml air ditambahkan 1 ml larutan NaOH 10 % dan 1 ml larutan 1-naftol 0. tolbutamid (ungu). kemudian dipanaskan dengan api kecil. Pemeriksaan turunan piridin Pada pemanasan 100 mg zat dengan 100 mg natrium karbonat kering bau piridin tercium. ditambahkan beberapa tetes pereaksi. Terbentuk warna merah-ungu (streptomisin). Reaksi positif untuk benzokain. dan sulfonamida. tercium bau khas `mustard' jika ada amin alifatik primer. didinginkan pada 5°C. yang bersifat asam lemah akibat penambahan asam sulfat.4dinitrobenzol. didinginkan. Pereaksi Diazo I: 10 g NaN02 dalam 100 ml aquades Pereaksi Diazo II : 0. ditambahkan air sampai 10 ml). oksazepam. atau biru. ungu. Lumeran yang sudah dingin dilarutkan dalam 2 ml 0. Dengan menambahkan FeSO4 dan H2SO4 pekat terbentuk cincin berwarna coklat. Larutan direaksikan dengan 2 tetes pereaksi Diazo I. Pemeriksaan senyawa basa amin Dengan pereaksi Mayer senyawa basa amin membentuk endapan kekuning-kuningan. Etakridin sudah berwarna merah ketika ditambahkan Diazo I. Terbentuk warna kemerah-merahan. dipanaskan sampai karbondisulfida yang berlebih menguap. terbentuk warna jingga atau endapan. Tercium bau khas isonitril Pemeriksaan asam amino ( rekasi Ninhidrin) Kedalam 1 ml larutan zat yang netral ditambahkan 2 tetes larutan ninhidrin 1 % dalam air. etrakridin.05 % dalam etanol. setiap kali dengan 5 ml eter. kemudian dipanaskan. ii. misalnya pada nitrazepam dan klorazepam. asam askorbat (merah tua). campuran dipanaskan di penangas air selama 10 menit. dan akhirnya diuapkan sampai kering. Jika dibasakan warna hijau-biru semula timbul kembali (percobaan nitrosamin dan Liebermann) Pemeriksaan amin alifatik primer dan amin aromatik ( rekasi Isonitril) Sedikit zat dilarutkan dalam etanol. fenasetin.

Mengindikasikan terdapatnya senyawa berinti xantin. lalu ditambahkan tetes demi tetes air brom (1. c. Metode : Tempatkan satu tetes larutan etanol dari sampel pada kertas saring. Tets asam amalic Metode : Tambahakan ke dalam sampel beberapa tetes 10 M HLCl. tetapi bukan ikatan etilenik. Positif pada pemanasan : isoniasida. sukrosa setelah dihidrolisis dengan asam. Rekasi adisi dengan brom Sejumlah 50 mg zat dilarutkan dalam 2 ml asam asetat. Reaksi negatif tidak berarti sampel bukan non-aromatik. Jika warna diberikan setelah pemanasan dengan NaOH menunjukan adanya asam aromatik. lalu dipanaskan di penangas air. c. Positif pada suhu kamar : asam askorbat. tetapi jika tanpa NaOH menunjukkan adanya fenol. 6. sedangkan pada posisi para menunjukkan respon. Tambahkan kloroform 10 kali volum cairan kuning. lalu ditambahkan perekasi Schif yang tak berwarna dengan volum sama banyak. Apabila ada ikatan tak jenuh warna brom akan hilang. b. diasamkan dengan 3 N HCl sampai pH mencapai kurang dari 3.5H20 7 %. lelehkan bahan yang telah dikeringkan ( titik leleh 73°C). asam fenolat. orange. kuning. Perak Ammoniumnitrat Pereaksi: Ke dalam 20 ml peraknitrat 0. Rekasi blanko terhadap perekasi perlu dilakukan. diikuti beberapa kristal KCl. d. atau kuning berubah menjadi ping. tambahkan pereaksi Marquis dan amati warna yang terjadi. hidrokortison. dengan tambahan etanol bila perlu. gula pereduksi. coklat. Pereaksi Fehling II: 35 g KNa-tartrat + 10 g NaOH + air sampai 100 ml. tambahkan pereaksi sejumlah volum yang sama. Beberapa pereduksi juga positif adalah ikatan etinil. amati kembali rawna yang terbentuk Indikasi :Residu berwarna merah.b. tambahkan 2-3 tetes 2 M NH4OH. Ini terjadi jika atom karbon pada cincin terikat gugus hidroksil. Antimoni Pentaklorida Pereaksi: Keringkan sejumlah antimoni triklorida pada fosfor penta oksida. Pemeriksaan senyawa pereduksi Reaksi Fehling Ke dalam 1 ml campuran pereaksi Fehling I dan II sama banyak ditambahkan 20 mg zat. Metode 2: Tambahkan 2. merah atau violet setelah ditambahkam amoniumhidroksida. sorbitol yang sebelumnya dioksidasi dengan KMnO4. salah satu tabung tambahkan NaOH padat. Panaskan tabung dengan hati-hati hingga semua uap keluar. Amati warna yang terbentuk pada residu. Pemeriksaan aldehid Zat dilarutkan atau disupensikan dalam air. gugus hidroksil pada posisi meta tidak memberi respon.3 ml Br2 / 100 ml asam asetat). dan lewatkan gas klorin kering ke dalam lelehan sampai terbentuk cairan berwarna kuning. Warna mungkin diberikan oleh sesepora hidrokarbon aromatik. Indikasi : Merah.2. catat warna yang terjadi. Reaksi Warna Metode : Larutkan sampel ke dalam sesedikit air. kemudian uapkan sampai kering. tambahkan pereaksi. dan segera keringkan di atas uap air. Reaksi khusus Test asam amalic a. Indikasi : Berbagai variasi warna terbentuk oleh glikosida jantung dan warna tertentu oleh estrogen dan kortikosteroid. Setelah beberapa waktu terbentuk warna. kemudian panaskan di dalam tangas air pada 100°C selama 30 detik.3 tetes asam nitrat ke dalam sampel panaskan pada tangas air 100°C 49 . Perekasi Fehling I: larutan CuS04.1 M ditambahkan larutan ammonium pekat secukupnya untuk melarutkan peraknitrat yang tidak melarut.3. saring larutan ke dalam botol berwarna gelap dan simpan di dalam desikator. mengandung aldehid dengan gugus hidroksil lebih dari satu. atau hitam (pada suhu kamar) menunjukkan adanya senyawa pereduksi. ping. Bila ada reduksi terbentuk endapan tembaga (I) oksida berwarna merah-biru bata. :Warna merah dan orange Indikasi mengindikasikan bahwa sampel mengandung aromatik alam.0 g Br2 atau 0. Aromatik Metode 1: Tempatkan sejumlah sampel masingmasing ke dalam dua tabung reaksi. merah sampai ungu.

h. warna sudah terbentuk. Hanya kanabis memberikan warna ungu yang terekstraksi ke dalam kloroform. Formaldehid . dan minyak patcholi yang juga memberi rekasi positif. mefrosida (biru-kelabu). kanabinoid dan beberapa cincin indol memberikan warna merah yang berubah Reaksi Warna menjadi ungu jika diencerkan. glutetimida. coklat-orange diberikan oleh alkaloid. tryplamin tertrasiklin. Perubahan warna dari abu-abu . Jika Bismut hitam dengan tri-iodida terpisah tambahkan asam HCl 2M dan sedikit KI. Pereksi Duquinois Sejumlah sampel atau ekstrak eter simplisia. dinginkan tambahkan air 2-3 kali volum. Warna orange dapat diberikan oleh senyawa kortikosteroid non-aromatik tertentu ( Kortison). kofein. hidroklortiazida. aduk 50 . di dalam tabung reaksi. dan sakarin Na (berwarna biru hanya dengan perekasi Zwikker I).5 ml pereaksi dan sejumlah volume yang sama 10 M HCl. Basa hidroksida atau basa fosfat membentuk warna biru-hijau yang setelah ditambahkan pereaksi Zwikker II berubah menjadi biru tua atau ungu. Reaksi ini terutama positif untuk furosemida (biru kuat). f. panaskan perlahan-lahan amati warna yang terjadi. Pereksi Zwikker I: kobal (II) nitrat dalam metanol Peraksi Zwikher II : piridin 10 % dalam metanol. skunder. dan lurazepam (pink).violet. e. kemudian dipanaskan di penangas air samapi kering. Perekasi :Larutkan 2 g vanilin dan 0.5 ml hidrogen pereksida dan 5 tetes asam sulfat pekat.hijau. metaqualon) memberi hasil yang negatif.biru diduga diberikan oleh kanabis. Isoniasida dan beberapa zat lain menggangu rekasi hingga lebih baik jika zat dipisahkan dulu dengan ekstraksi.3 ml asetaldehid dalam 100 ml etanol. Senyawa lain juga berreaksi. uapkan ekstrak tambahkan 0. amati warna yang terbentuk. tioxanten. Pereaksi Dragendruff Larutkan sampel ke dalam 3 tetes 2M HCl. seperti contoh orange atau orange-merah setelah penambahan NaOH menunjukkan terdapat cincin benzen di dalam molekul. Pereaksi : Larutkan 0. beberapa fenol juga memberikan warna seperti kanabinoid. Peraksi harus dibuat segar. Sisa diberikan beberapa tetes 6N NH3. merah-orange. Reaksi Zwikker positif untuk barbiturat. j. positif adalah fenotiasin.5 g pdimetilaminobenzaldehid dalam 50 ml campuran larutan (60 volume etanol dan 40 volume asam sulfat). dan purin. Reaksi Zwikker Ke pada 10 mg zat dipelat tetes ditambahkan 10 tetes pereksi Zwikker I. dan zomepirak.biru. Peraksi harus disimpan dalam lempat yang gelap. amati warna yang terjadi. buat larutan menjadi basa dengan menambahkan NaOH 40%. larutkan 1 g KI ke dalam campuran tersebut. kemudian tambahkan air dengan hati-hati. Penambahan 2 tetes pereaksi Zwikker II menimbulkan warna ungu jika reaksi positif. Sewaktu menguap. Bila ada senyawa purin ( teofilin. tambahkan klorform kemudian dikocok. Indikasi : Perubahan warna dari tidak berwarna atau warna kekuningan dalam larutan asam menjadi warna gelap. Reaksi Mureksid Sejumlah 10 mg zat ditambahkan 1.asam sulfat Campurkan sampel dengan pereaksi panaskan pada 100 oC selama satu menit. Seyawa tertentu (contoh : diazepam. hidantoin. mungkin dihasilkkan oleh nitrofenol atau senyawa nitro lainnya.selama 1 menit. encerkan dengan 2 ml air. Encerkan dengan 20 ml air. Senyawa benzodiazepin umumnya memberikan warna orange kecuali bromazepam dan klozapin (kuning). beberapa sulfonamida. Pereaksi ke dalam 4 volume H2S04 tambahkan 6 volume larutan formaldehid. Warna ungu diberikan oleh alkaloid ergot. tetapi perlu dilakukan pembandingan dengan kopi yang disangrai. i. tersier. dan kuartener juga memberi reaksi positif. amati wama yang terekstraksi. tambahkan 2-3 ml perekasi. Amin primer. Pereaksi: Larutkan 1 g bismut subnitrat dalam 3 ml 10 M HCl untuk tujuan pemanasan. teobromin) terbentuk warna merah ungu. nipagin M. warna orange.p-Dimetilaminobenzaldehid Tambahkan ke dalam sampel di dalam tabung reaksi. bila perlu dipanaskan. yang kemudian diperkuat oleh oksidasi.

et.. Clarke `s Isolation and Identification of Drugs. 1986.A.Penerbit ITB. Catatan pereaksi ini tidak sama dengan pereaksi Marquis. biru-ungu.al. penangas air 100 °C selama 1 menit. abu-abu-ungu. C. Color Test. Identifikasi Obat. larutan akan panas lebih dari 1 jam. Reaksi positif diberikan oleh alkaloid base membentuk warna ungu.manggunakan pipet. 2 nd ed. Stevens. London. Kepustakaan. Bandung.. k. coklat-ungu.. Moffat. 128 . apabila memberikan warna buram panaskan dalam. 1. Kovar. Pereaksi : 2 ml Natriumplatina 5% dan 5 g KI ditambahkan air 98 ml kocok hingga larut. encerkan dengan 10 ml air.176 The Pharmaceutical Press. tambahkan 2-3 ml pereaksi. 2. 1987. HM. Pereaksi lodoplatinat Larutkan sampel dalam 2 tetes 2 M HCl. Reaksi Warna 51 . A.

1) Dalam kromatografi adsorpsi harga “K” ini dipengaruhi oleh suhu dan konsentrasi senyawa. Efisensi dari kromatografi cair dapat digambarkan seperti pada persarnaan Van Deemter dimana DA jarak titik awal ke pusat zone A setelah elusi dan DM adalah jarak dari titik awal ke tepi muka pelarut.BAB VII KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS Kromatograti lapis tipis (KLT) adalah suatu salah satu komponen dari campuran metode pemisahan campuran analit dengan diadsorpsi lebih kuat dari komponen yang mengelusinya melalui fase diam yang datar lainnya. laju linier dari fase gerak dan ukuran dari fase diam. maka derajat kromatografi adsorpsi. Proses difusi longitudinal dinyatakan sebagai B dan berhubungan dengan kecenderungan dari molekul analit Kromatografi Lapis Tipis ( ) Rs = 2 D A − D B (W A + WB ) (7. KLT dengan fase diam yang berukuran sangat kecil (3 .4) N=L H (7. Rf = D A DM (7. Empat parameter yang terpenting pada KLT adalah viskositas. Dalam KLT fase gerak kromatografi adalah koefisien distribusi/partisi ini berupa cairan. walaupun sebenarnya pemisahan dipengaruhi oleh luas permukaan mekanisme yang terjadi adalah kombinasi yang ada atau secara tidak langsung adsorpsi dan partisi. Walaupun begitu yang silika gel atau alumina sedangkan fase gerak merupakan faktor kunci setiap bentuk berupa cairan atau gas. Koefisien distribusi" partisi" (K) = Jumlah senyawa per satuan fase diam Jumlah senyawa per satuan fase gerak (7. HPTLC memerlukan waktu elusi yang singkat. jarak elusi yang lebih pendek dan jumlah elusi analit yang lebih sedikit dibandingkan dengan KLT. KLT termasuk fenomena permukaan. Kelandaian isoterm linier berbanding langsung dengan koefisien distribusi/partisi. hingga kondisi untuk mendapatkan pemisahan yang optimum adalah kondisi pada mana harga koefisien distribusi ini adalah sama dengan satu. Jika Rs ≥ 1 pemisahan 52 .6) dimana DA dan DB adalah jarak yang ditempuh noda A dan B. sedangkan WA dan WB adalah lebar noda/bercak A dan B. Hal ini dinyatakan sehagai: K ' = (1 − Rf ) Rf (7. Parameter migrasi analitik pada KLT dinyatakan dengan Rf. Hal ini akan menimbulkan pelebaran noda yang akan membuat pemisahan tidak efisien.2) Untuk menghitung kinerja KLT perlu mengidentifikasi parameter yang mungkin menurunkan harga H. Pemisahan akan terjadi jika senyawa antara ke dua fase dalam sistem. Faktor kapasitas relatif dari dua komponen merupakan ukuran kemampuan kolom/plat untuk memisahkan keduanya.5 µm) dikenal dengan KLT kinerja tinggi (HPTLC = High Performance Thin-Layer Chromatography).5) H=B µ + Cs µ + Cm µ (7. Jumlah plat teoritis (N) berhubungan dengan panjang plat KLT (L) atau panjang kolom pada kromatografi kolom dan H adalah tinggi plat teoritis (Height equivalent a theoretical plat) untuk bermigrasi dari konsentrasi tinggi di tengah-tengah noda pada KLT menuju zone konsentrasi yang lebih rendah di pinggiran noda. Dalam kromatografi dipengaruhi oleh ukuran partikel fase diam adsorpsi fase diam berupa padatan seperti (adsorpben). Karena adsorpsi merupakan pada plat penyangga. Cs dan Cm adalah konsentrasi analit pada fase diam dan fase gerak. Efisiensi pemisahan pada kromatografi dapat dinyatakan sebagai jumlah plat teoritis.3) Kemampuan sistem KLT untuk memisahkan dua komponen A dan B dapat dinyatakan sebagai resolusi (Rs): Dimana µ = laju linier fase gerak. temperatur. Pada suatu suhu tertentu hubungan antara jumlah senyawa pada fase diam dan jumlah senyawa yang ada pada fase gerak dapat dinyatakan secara grafik sebagai isoterem distribusi.

Adsorpben yang dapat digunakan diklasifikasi berdasarkan sifat kimia atau daya ikatanya. 6) Fase diam cair terikat secara kimia. Kerugiannya ialah tidak dapat digunakan pereaksi yang korosif seperti asam sulfat atau pereaksi destruksi lainnya. Adsorpben pada KLT adalah analog dengan yang digunakan pada kromatografi kolom. 2) Alunima. Fase Diam Sebagai fase diam pada KLT digunakan adsorpben dengan partikel halus yang dilapiskan pada lempeng penyangga kaca. 3) Kieselguhr (tanah diatome). Proses reaksi pengikatan meliputi pengaktipan permukaan silika dengan HCl sehingga terbentuk silanol pada permukaan silika. Faktor selektivitas (S) juga diukur sebagai daya resolusi S= k ' B D A (DM − D B ) = K ' A D B (DM − D D ) (7. hanya berbeda ukuran partikelnya.yang terjadi adalah sempurna.7) Batas Pengembangan WA WB DM DA DB Eluent Gambar 7. 4) Selulosa.1. merupakan adsorpben netral dengan aktivitas rendah. Silanol yang terbentuk 53 . Biasanya ditambah pengikat seperti selulosa atau amilum. hemihidrat sebagai pengikat agar melekat kuat pada pengangga dan mempercepat mengeringnya plat. Dapat ditambah indikator fluoresensi atau kalsium asetat. Dapat ditambahkan sebagai campuran pada silika Kromatografi Lapis Tipis Awal Penotolan gel yang akan memberikan adsorpben campur yang kurang aktif. Juga dapat ditambahkan CaSO4 dan indikator fluoresensi. sebagai adsorpben pada kromatografi lapis tipis memberikan lapis tipis yang sitatnya analog dengan kromatograti kertas dan memberikan lapis tipis yang cukup baik tanpa pengikat. 5) Poliamida. Tidak sebaik silika gel lebih reaktif secara kimia senyawa yang sensitif dapat terdegradasi. Juga dapat ditambahkan indikator fluoresensi yang akan berfluoresensi di bawah sinar UV pada 254 nm. Digunakan untuk pemisahan senyawa hidrofil. logam atau plastik. hingga bercak yang mengabsorpsi pada frekuensi ini berfluoresensi hijau kuning. 1. 1) Silika gel (asam silikat). pengikatan fase diam secara kimia pada penyangga menyangkut reaksi silika dengan dimetilklorsilan tersubstitusi. Diagram alat kromatografi lapis tipis 7. bersifat basa lemah. Sering ditambahkan CaSO4. Juga dapat ditambahkan CaSO4. Daya melekatnya tidak sebaik adsorben lainya. Daya resolusinya juga kecil. Mempunyai kapasitas yang besar dan banyak digunakan untuk pemisahan senyawa fenol. merupakan magnesium silikat. yang paling banyak digunakan dan bersifat asam lemah.

Cember seharusnya diisi dengan pelarut segar sekurang-kurangnya setiap hari. Sistem pelarut Yang menjadi permasalahan adalah bagaimana memperoleh suatu sistem pelarut yang sesuai karena melibatkan berbagai jenis fase diam yang berbeda dan sifat dari gaya yang terlibat dalam prosedur kromatografi.pelarut harus tidak toksik menyebabkan masalah kesehatan baik jangka . eter. kloroform. etil asetat. Fase gerak diisikan ke dalam bejana paling kurang satu jam sebelum digunakan. Reaksi esterifikasi : Fase diam ini umum digunakan pada HPLC namun sekarang telah banyak dijumpai pada KLT. Dalam beberapa sistem pelarut organik dan silika.3. Sistem ini lebih dikenal kromatografi fase balik. . dapat di lakukan dengan pinsil atau dengan jarum. Hanya hendaknya sistem multikomponen dihindari karena komposisinya dapat berubah dan akan terbentuk suatu gradien fase gerak dalam lapis tipis yang dapat menyebabkan reprodusibilitasnya berkurang. Sistem pelarut ini dapat berupa pelarut tunggal atau campuran beberapa pelarut. benzen dan 1-4 dioksan adalah pelarut yang bersifat karsinogen. 7. Sampel dan pembanding jika mungkin dilarutkan dalam pelarut organik yang non-polar dengan titik didih rendah agar mudah menguap setelah larutan ditotolkan. 7. Pemilihan fase gerak sangat tergantung pada jenis pemisahan yang hendak dicapai. 7. Dinding bejana dapat dilapisi dengan kertas saring tebal yang dibasahi pelarut pengembang untuk 54 Kromatografi Lapis Tipis . metilenklorida. asam asetat.2. . sikloheksan.direaksikan tersubstitusi dengan dimetilklorsilan ▓-Si -OH + Cl-Si(CH3)-R →Si-OSi(CH3)3R + HCl Untuk membuat berbagai macam fase terikat dilakukan dengan menganti-ganti gugus fungsi R yang terikat pada pereaksi sililasi.4. kloroform.tidak reaktif atau bereaksi secara kimia dengan analit atau fase diam. Diameter penotolan hendaknya sekecil mungkin (5 mm) umumnya lebih kecil. Beberapa hal yang dipertimbangkan dalam pemilihan pelarut adalah: .5 µL dari larutan 1%. Kloroform. Pemilihan tipe bejana tergantung dari tujuan analisisnya. Etilasetat . 5 . tetapi asetat dapat bereaksi dengan amonia menghasilkan sistem pelarut yang lemah. dan petrolium eter. sering ditambahkan amonia yang bertujuan untuk menangani masalah bercak berekor.amonia adalah campuran pelarut yang sangat berguna.tidak mudah meledak pada kondisi normal.tidak memberikan masalah pada pembuangan (ramah lingkungan). Untuk fase diam non-polar (sistem fase balik) biasanya digunakan fase gerak larutan berair. etanol. Untuk fase diam yang polar dapat digunakan fase gerak dari nonpolar (n-heksana) sampai paling polar. ▓-Si -OH + ROH → ▓Si-OR + H2O ▓-Si -OH + SOCl2 → ▓Si-Cl + SiO2 + HCl ↓ RMgBr (Gridnard) ▓-Si -R (gugus Si-C yang sangat stabil) Metode lain: untuk esterifikasi dari gugus silanol permukaan dengan alkohol atau konversi gugus silanol ke SiCl mengnunakan ionilklorida diikuti dengan senyawa organometalik.pendek maupun jangka panjang. Pengembangan Teknik pengembangan kromatografi lapis tipis sama dengan kromaografi kertas. aseton. . Yang sering digunakan adalah sistem bukan air seperti metanol. metanol. Penotolan sampel Titik penotolan harus ditandai terlebih dahulu. 1. benzen. Penotolan dapat dilakukan dengan pipet mikro atau pipet lamda atau jarum suntik mikro sebanyak 1. Secara umum pemilihan fase gerak harus dihindari menggunakan pelarut berbahaya atau beracun. Kloroform adalah pelarut yang sukar didegradasi dilingkungan.2 cm dari tepi bawah plat. asetonitril dan isopropanol.

Teknik pengembangan ini yang paling umum dalam KLT. Jika suatu campuran senyawa mengandung komponenkomponen yang polaritasnya sangat berbeda. mencelup atau melewatkan kromarogram melalui larutan pereaksi/larutan penampak bercak. kemudian untuk memastikan baru digunakan pereaksi selektif atau spesifik.5 Deteksi noda Kromatografi Lapis Tipis Cara deteksi noda tergatung dari adsorben dan bahan pengangga yang digunakan. Dalam hal ini lempeng dikeluarkan dari bejana setelah pengembangan pertama selesai. Setalah penyemprotan kromatogram dikeringkan. 2) Pengembangan ganda. Pemanasan dapat merubah warna tertentu atau memperbesar intensitas warna. 3) Pengembangan horizontal. Dengan pengembangan cara ini sampel ditotolkan pada satu sisi. Cara ini dapat digunakan untuk senyawa yang bergerak lambat. Dalam hal ini pemisahan kromatograti dilakukan pada batang pengaduk yang dilapisi dengan adsorben. Hanya saja harus dilakukan dengan hati-hati. Pelarut pengembang pertama dapat berupa pelarut polar misalnya metanol untuk memisahkan komponen polar. Teknik pengembangan ini pada kromatografi lapis tipis jarang digunakan karena sukar melakukannya dan membutuhkan suatu peralatan yang khusus. Teknik ini disebut leknik elusi gradien. Kemudian pengembangan dilanjutkan dengan pelarut non-polar misalnya sikloheksan sampai selesai. maka untuk mendapatkan pemisahan yang sempurna. Cara fisika lainnya adalah dengan menggunakan deteksi ionisasi nyala. Sering kali setelah direkasikan dengan pelarut penampak noda. adsorpben yang baik adalah adsorben anorganik. perlu dilakukan pengeringan/pemanasan dalam oven selama beberapa saat. Setelah pengembangan. Sebaiknya adsorben juga tidak mengandung bahan pengikat. dikembangkan dan dikeringkan. Reaksi dilakukan dengan meyemprot. batang pengaduk dilewatkan dengan cepat melalui nyala detektor ionisasi nyala. Dalam hal ini pengembangan dilakukan sampai tepi atau lapis tipis dan selanjutnya pelarut pengembangnya dihilangkan dengan jalan penguapan. 5) Pengembangan lewat. Sebagai peraksi umum dapat digunakan: a) Asam sulfat pekat. bewarna putih dan bahan penyangga dari kaca. dikeringkan di udara. Dapat menggunakan sinar UV 254 nm dan 366 nm Dapat menggunakan lapis tipis yang mengandung indikator fluoresensi untuk mendeteksi senyawa yang memadamkan fluorosensi dalam sinar UV atau senyawa yang tidak memadamkan fluoresensi sinar UV gelombang pendek. Deteksi secara kimia ini tergantung dari reaksi senyawa yang bersangkutan. Fase gerak dialirkan dengan pertolongan tekanan. akan memberikan bercak yang berwarna setelah atau tanpa pemasan. selektif atau spesifik.mendapatkan atmosfer jenuh akan uap pelarut dalam bejana. sebab jika tidak bercak akan mengarang hingga tidak 55 . Jika kromatogram dicelup pelarut penampak bercak yang digunakan. Pengembangan ganda ini biasanya dilakukan jika pemisahan terjadi belum sempurna dengan pengambangan tunggal. 1) Metode deteksi secara fisika. kemudian dikembangkan kembali dengan pelarut yang sama. Diketahui beberapa macam pengembangan yaitu: 1) Pengembangan menaik. Dengan cara ini dapat dipisahkan senyawa non-polar yang bermigrasi dengan muka perat pertama. Bila mengalisa suatu senyawa yang tidak diketahui maka digunakan pereaksi umum terlebih dahulu. hendaknya larutan ini tidak melarutkan senyawa bersangkutan. Kemudian dikembangkan dalam sistem pelarut pengembang yang lain dari/terhadap dengan posisi 90° pengembangan pertama. Untuk deteksi secara fisika atau kimia. 4) Pengembangan bertahap. 7. dapat dilakukan migrasi secara progresif dengan menggunakan pelarut pengembang yang berbeda. 2) Metode deteksi secara kimia. Pereaksi yang digunakan sebagai penampak noda ini dapat berupa pereaksi umum. 6) Pengembang dua demensi.

b) Klorinasi. Data juga digunakan asam sulafat 50 % dalam air. dinkubasi untuk beberapa saat lamanya. d) Campuran asam sulfat dengan oksidator kuat seperti serisulfat.. Untuk memastikan harus dilakukan pengembangan dengan sistem pelarut yang lainnya atau digunakan metode pengembang lainnya. 1985. kalium ionida dan amilum untuk gugus amina sekunder. Ho. Sebagai pereaksi selektif dapat digunakan : a) Ninhidrin untuk gugus amin primer. seperti asam perklorat 2%. belum berarti bahwa sampel hanya mengandung satu senyawa. kalium bikroomat dan asam nitrat memberikan noda yang mengarang setelah pemanasan. 3) Metode deteksi secara enzimatik dan biologik. asam ortofosfat 50% yang akan memberikan noda yang berfluorosensi.I. Mini Thinlayer Chromatography in The Detection of Narcotics in Urine from Subjects on A 56 Kromatografi Lapis Tipis .H. 2) Jika suatu sampel yang tidak diketahui memberikan satu noda setelah pengembangan dengan sistem pelarut tertentu. Kepustakaan 1. Analysis of Drugs in Biological Fluid. Leong Way.6 Faktor-faktor yang perlu diperhatikan pada KLT 1) KLT seperti metode kromatografi lainnya adalah metode pembandingan. d) Indikator asam-basa. Tetapi ada beberapa senyawa yang bereaksi secara iriversibel dengan iodium yaitu beberapa steroid aromatik yang mengandung cincin A. 7. Boca Raton.E. J. Sebagai pengganti asam sulfat dapat digunakan campuran amonium sulfat dan amonium hidroksida dengan perbandingan 1:1. 2. 3) Jika suatu senyawa yang tidak diketahui menunjukkan harga Rf yang sama dengan senyawa pembanding. b) Uap iodium.. kalium permanganat.H. c) Pereaksi Dragendorff atau iodoplatinat untuk gugus amin tersier dan amonium kuarterner. Asam-asam ini digunakan sebagai larutan dalam metanol. Caranya dapat dengan penyemprotan dengan larutan iodium 1% dalam metanol atau meletakkan kromatogram di atas wadah yang mengandung uap iodium. Asam fosfomolibdat 10% memberikan noda yang berwarna. seng klorida dan besi(III)klorida dalam pelarut organik memberikan noda berfluorosensi dengan senyawa. Perlu diketahui bahwa iodium yang sudah terikat akan terlepas kembali setelah beberapa waktu lamanya atau jika kromatogram dipanaskan dan warna coklat yang terjadi akan hilang.4-dinitrofenilhidrazin untuk senyawa oso. akan memberikan noda berwarna coklat.spesifik lagi karena pengarangan ini akan diberikan oleh semua senyawa organik... c) Asam lainya. belum berati bahwa kedua zat tersebut adalah identik. misalnya biru bromfenol untuk gugus asam atau basa. Tetapi karena larutan air tidak berpenetrasi ke dalam adsorben dapat memberikan penyemprotan yang tidak merata. Metode enzim digunakan untuk mendeteksi enzim atau mendeteksi substrat. Untuk memastikan maka harus dikembangkan dengan sistem pengembangan yang lain. f) Assay sulfanilat yang terdisosiasi untuk gugus fenol. Chamberlain. Loh. karena terbentuknya kompleks adisi lemah dengan beberapa senyawa. Amilase akan terlilhat sebagai bercak tak berwarna dengan latar belakang biru. Akan memberikan hasil yang lebih baik jika digunakan pelarut organik.K. g) 2. e) Halida logam seperti antimon triklorida. Untuk identifikasi suatu senyawa haruslah digunakan senyawa pembanding dan tidak dapat digunakan harga Rf yang ada dalam pustaka. CRC Press Inc. antimon pentaklorida. misalnya untuk amilase. e) Para-dimetil-amonium-benzaldehida untuk gugus amina aromatik atau cincin indol. kemudian disemprot dengan larutan iodium. Dalam hal ini lapis tipis disemprot dengan larutan amilum.

Roberson. et all 1989. Johnsan. Chrorrtatogr.Willard. 1988. A. and Post mortem Material. Chromatogr. H. 1972. et al. 577-579. 4th Ed. Chichester.... Mini Thin-layer Chromatography III: A Rapid and Sensitive Methode for The Estimation of Amphetamine and Methamphetamine. J. Bandung. 8. A. The Pharmaceutical Press. J... D. Leary. Recommended Methods for The Detection and Assay of Heroin. (Ed). 7. Identifikasi Obat. 65. Kovar.Unated Nation. 11. 6. California.. Harcourt Brace Publisher. Amphetamine Methamphetamine and RingSubstituted Amphetamine Derivaties in Biological Specimens Manual for Use by National Laboratories.. J. 189-293. New York.A. H. Moffat. 1986. et al.H. Kromatografi Lapis Tipis 57 .. Instrumental Methods of Analysis. Cannabinoids. Stevenson.. 65 1972.J. Second ed. Princiles of lnstrumental Analysis. T.C. S.L. E. hal. The Use of Thin-layer Chromatography in the Analysis of Drugs of Abuse. United Nations International Drug Control Programme. Bandung 10. 1995. 9. Methadone Maintenance Program. ITB. 1987. Gough. Analisis Obat Dalam Cairan Biologik. London.. 1991.Penerbit ITB. The Analysis of Drugs of Abuse. Skoog. 1992.3. Wadsbuorth Publising Company. Body Fluids.R.. Loh.. Penerbit ITB. J. Jhon Wiley& Sons. 5.C. Bandung. 3-22.Clark's Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals.. 4. Sriewoelan. 1991. Dasar Kromatografi Cair.H. New York. Cocaine...

Dalam hal ini.6) T  Fc = Fa   C T  a   (8. Seperti metode analisis lainnya kromatografi gas juga memiliki keterbatasan. Laju aliran dalam kolom Fc . Ada dua jenis kromatografi gas yaitu kromatografi gascair jika fase diamnya berupa cairan dan kromatografi gas-padat jika fase diamnya berupa padatan. diukur pada outlet kolom pada suhu kamar.7) 8. maka harus dilakukan koreksi gradien tekanan atau koreksi dengan faktor kompresibilitas j terhadap volume retensi yang disesuaikan memberikan volume retensi bersih (netto ) VN ' V N = jV R dimana suhunya adalah suhu absolut. Bentuk obat yang disalahgunakan adalah komplek tidak homogen. Volume retensi eksperimantal VR adalah: (8. polaritas. dengan variasi yang luas pada volatilitas.3) VM = Fc t M dimana tM adalah waktu retensi suatu senyawa yang tidak ditambat oleh kolom. Sehingga diperlukan pertimbangan yang mendasar jika hanya menggunakan kromatografi gas sebagai salah satu alat metode analisis. berbeda dengan suhu lingkungan Ta.5) retensi senyawa dan karena mempunyai hubungan dengan koefisien partisi senyawa dapat digunakan untuk identifikasi senyawa. baik untuk analisis toksikologi maupun analisis senyawa obat itu sendiri. 8.1.1) dimana tud adalah waktu retensi udara. Dalam kromatografi gas.2) Dengan cara yang sama volume fase gerak kolom VM diberikan oleh persamaan: (8.BAB VII I PENGGUNAAN KROMATOGRAFI GAS DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI Jika dalam suatu sistem kromatografi sebagai fase gerak digunakan gas.4) dimana Pi dan Po adalah tekanan inlet dan outlet. Parameter Retensi Waktu retensi tR adalah waktu yang dibutuhkan untuk mengelusi maksimum zone dihitung dari waktu menyuntikan sampel. volume retensi yang dikoreksi V°R adalah : o VR = jV R (8. Di dalam kolom dapat terjadi penurunan tekanan dengan tiba-tiba yang akan menyebabkan variasi laju aliran gas sepanjang kolom. Kromatografi sering digunakan untuk analisis obat. Kromatografi gas-cair merupakan kromatografi partisi.2. Oleh karena itu volume retensi harus dikoreksi terhadap efek ini dengan faktor koreksi penurunan tekanan tiba-tiba j:   j = 2   3 ( ) ( ) Pi Po Pi Po 2 3 −1   −1  (8. H ubungan antara besaran-besaran ini adalah: T  V R = Fa   CT  a  (8. Peralatan 58 Penggunaan GC Dalam Analisis Toksikologi . Laju aliran Fa adalah laju aliran fase gerak (dalam ml / menit). VM seringkali disebut volume mati dan merupakan volume minimum gas pembawa yang harus dipindahkan sebelum suatu puncak dielusi. Keunggulan kromatografi gas adalah dapat memisahkan senyawa dan secara langsung dapat melakukan analisis kualitatif dan kuantitatif memiliki reprodusibilitas yang tinggi pada penggunaan rutin. akan berbeda dengan Fa jika suhu kolom Tc. Karena gas bergerak lebih lambat dekat inlet dari pada di outlet kolom. fase gerak dapat ditekan. Selain itu dikenal juga volume retensi yang ' : disesuaikan V R ' VR = V R − VM = t R FC − t ud FC o VR ini banyak digunakan untuk mengukur (8. dan reaktivitasnya. sedangkan gas padat merupakan kromatografi adsorpsi. maka tekniknya disebut kromatografi gas. Proses pemisahan pada kromatografi gas didasarkan atas prinsip yang sama seperti pemisahan kormtografi jenis lainnya.

sinyal listrik yang terjadi diamplifikasi dan direkam. didasarkan juga pada proses ionisasi gas. Terdapat beberapa jenis detektor yang digunakan pada kromatografi gas: i) Detektor konduktivitas termal (thermal condacctnIty detector. Pintu sampel. Skema alat kromatografi gas. Dalam hal ini efluen dialirkan ke nyala hidrogen. Senyawa dalam efluen akan terbakar dalam nyala dan menghasilkan ion. Sampel disuntikkan ke dalam aliran gas pada pintu sampel. Gambar 7. Kolom terbuat dari gelas/kaca atau logam berdiameter ⅛ atau 1/4 inci dengan panjangnya berkisar 30 meter. tetapi dalam hal ini gas pembawa yang terionisasi. Selektivitas dapat pemisahan dapat diprediksi dari perbedaan harga koefisien partisi komponenkomponen yang hendak dipisahkan. Gas pembawa biasanya adalah nitrogen atau helium. oleh karena itu banyak digunakan dalam analisis pestisida. adalah proporsional terhadap konsentrasi Penggunaan GC Dalam Analisis Toksikologi senyawa di dalam efluen. Jika suatu molekul senyawa mengandung atom elektronegatif kuat masuk kearah efluat. Nyala ditempatkan diantara dua elektroda yang diberi potensial. Detektor konduktivitas 59 . Pintu sampel dipanaskan agar sampel yang disuntikkan segera menguap dan dibawa oleh gas pembawa ke dalam kolom. Sampel biasanya disuntikkan sebagai larutan sebanyak 1 . ii) Detektor ionisasi nyala (flame ionisation detector.50 µL ke dalam aliran gas. sedangkan detektor penangkap elektron hanya memberikan respon terhadap molekul atau atom elektronegatif. TCD) yang didasarkan atas prinsip bahwa panas akan hilang dari kawat panas yang diletakkan di dalam gas dengan laju yang dipengaruhi oleh sifat dari gas. Dengan mengukur tahanan listrik kawat. iv) Nitrogen fosfor detektor (NPD) Dari keempat detektor ini detektor konduktivitas termal adalah universal dan memberikan respon terhadap semua senyawa. FID). ECD). detekrtor ionisasi nyala memberikan respon terhadap semua senyawa organik. kolom dan detektor berada dalam oven yang suhunya dikontrol.1. iii) Detektor penangkap elektron (electron capture detector. bukan senyawanya. Arus yang dibawa di antara elektroda ini oleh nyala. Detektor ini sangat resposif terhadap molekul yang mengandung halogen dan senyawa elektronegatif lainnya. Fase diam harus tidak mudah mengurai pada suhu yang digunakan untuk pemisahan dan harus mempunyai selektivitas yang mencukupi untuk campuran yang hendak dipisahkan. Perubahan dalam arus ini yang memberikan sinyal pada kromatogram. Ukuran sampel sebaiknya sekecil mungkin dan disuntikkan sebagai zone yang sempit untuk mengurangi lebar puncak yang terelusi. elektron akan ditangkap oleh senyawa yang akan mengakibatkan berkurangnya arus latar belakang. Setelah dari kolom aliran efluen melewati detektor yang akan memberikan sinyal listrik yang proposional pada beda antara kandungan eluat dan efluen. konduktivitas termal gas dapat diukur.1).Skema alat kromatografi gas terlihat pada gambar (8.

4.termal memberikan respon dalam jumlah mikrogram. Indek respon Faktor tambahan yang digunakan untuk menentuan identifikasi dari suatu senyawa adalah dengan membandingkan respon relatif senyawa tersebut pada dua detektor yang berbeda. dimana ini berarti memiliki daya diskriminasi yang optimum. pengaruh cara penyuntikan dan juga faktor keterulangan antara operator yang berbeda. kromatografi gas sebagai metode untuk mereduksi sejumlah jumlah kemungkinan dengan mengkunjugasikan dengan spektrofotometer atau teknik lainnya. Kelemahan metode ini adalah setiap lababoratorium menggunakan senyawa pembanding yang berbeda. kadang juga lababoratorium yang sama menggunakan pembanding yang berbeda untuk senyawa yang berbeda. 8.3. pada suatu katalog 1986 terdapat 440 pilihan. persen fase diam dan panjang kolom.03 %. 8. temperatur dan konsentrasi.3. detektor ionisasi nyala terhadap jumlah nanogram dan detektor penangkap elektron terhadap jumlah pikogram.Waktu tambat relatif Dari beberapa khasus telaah senyawa yang belum diketahui dengan menggunakan kramatografi gas dapat diperkecil dugaannya dengan membandingkan waktu tambatnya terhadap sejumlah senyawa pembanding. Variasi waktu tambat antara senyawa dan baku pembanding disebabkan oleh variasi dari radas-radas pada alat kromatograti gas. Penggunaan GC Dalam Analisis Toksikologi 8. 8. Pada fase polar beberapa obat tidak dapat dipisahkan menggunakan kolom SE 30.3. Sehingga fase diam ini sangat luas digunakan dan telah terkumpul data kepustakaan waktu retensi obat-obatan.3. tetapi menunjukan variasi yang besar yang disebabkan oleh jenis gas dan kecepatan laju elusi. waktu tambat dinyatakan sebagai hasil bagi / nisbah dari waktu tambat senyawa pembanding (waktu tambat relatif = RRf) pada kondisi yang sama. Contoh reprodusibilitas waktu tambat untuk menggunakan penyuntikan otomatis sebaiknya lebih kecil dari 0. 8. Untuk menghindari pergeseran waktu tambat akibat pengaruh konsentrasi (khususnya pada kolom polimer yang poros akibat pengepakan yang tidak sempurna) dapat diatasi dengan menggunakan konsentrasi yang sama. Untuk mendapatkan reabilitas yang tinggi perlu digunakan internal standard. Indek Waktu Tambat Metode berikutnya adalah metode Kovats atau indeks waktu tambat yang menggunakan nalkana sebagai standard. Analisa dari suatu senyawa dapat dilakukan dengan membandingkan waktu tambat senyawa yang diduga dengan baku pembanding. logaritmik waktu tambat dari alkana adalah sebanding dengan jumlah atom C-nya.3.2. Untuk mengurangi variasi ini data dikelompokan ke dalam sistem / variabel yang hampir berdekatan. sesuai dengan analit yang ditetapkan. pengaruh waktu. Data ini sangat penting untuk uji skrining. Beker menggunakan kolom OV-17 yang diujungnya terdapat pemisah dan detektor FID/NPD kofein sebagai internal standard. terdapat banyak pilihan fase diam. Analisis Kualitatif Terdapat dua pendekatan untuk melakukan analisis kualitatif: i) Pada khasus dimana terdapat indikasi kuat untuk mengidentifikasi senyawa yang diduga. kromatografi gas digunakan sebagai tahap untuk pembuktian senyawa kimia tersebut. Pemilihan senyawa pembanding sebaiknya dipilih senyawa yang telah sering digunakan untuk analisis pada laboratorium tersebut dan memberikan kinerja kromatografi yang baik. Biasanya data waktu tambat pembanding bukan merupakan data absolut.3. Langkah pertama. ii) Indikasi suatu senyawa tidak diketahui. Data dinyatakan sebagai: 57 .1. Pada kondisi isotermal. Pembandingan waktu tambat. Fase diam. Keuntungan dari metode ini adalah relativ tidak bergantung pada laju aliran gas. Frekuensi distribusi obat pada fase diam SE-30 dan OV-17 hampir mendekati rectangular. Di dalam literatur menunjukkan bahwa SE 30/OV-1 dan OV-17 adalah fase diam yang sangat luas digunakan untuk analisis obat.

8. tetapi kromatogram yang dihasilkan juga mengandung informasi yang memungkinkan untuk melakukan analisis kuntitatif. cara ini sebenarnya adalah analog dengan cara menggunakan kurva kerja/kurva standar dalam spektroskopi. Analisis kuantitatif meliputi pengukuran area/luas dan menentukan proporsionalitasnya. iii) Normalisasi luas puncak. Kuantitas yang didapat selanjutnya harus dikonversikan ke dalam jumlah atau persentase komponen yang terdapat dalam sampel. s = standard. Sampel yang tidak diketahui cheat ditentukan dengan menambahkan suatu bobot internal standard yang sama seperti pada pembuatan kurva kalibrasi kepada sampel. harus dilakukan koreksi. Suatu sampel yang tidak diketahui dapat dianalisis dengan mengkromatografinya pada kondisi yang sama. dan z dan bahwa respons kromatograti gas adalah sama untuk semua komponen dengan basis molar. dimana A adalah luas puncak dan W adalah bobot. Hal ini disebabkan kenyataan bahwa luas area dibawah kurva pada kromatogram adalah proporsional dengan jumlah senyawa yang terkandung oleh zone yang terelusi. dan membaca jumlah komponen konsenirasi yang bersangkutan pada kurva kalibrasi. campuran dikromatografi ratio luas puncak diukur. Kurva dibuat dari ratio As/Ais versus Ws/Wis. Satu seri sampel yang mengandung jumlah senyawa yang hedak dianalisis dalam jumlah yang berbeda dikromatografi pada kondisi yang sama.8) dimana U respon detektor terhadap analit dan S adalah serpon terhadap standard. kurva linier akan diperoleh dari As/Ais versus Ws/Wis karena Ais dan Wis adalah konstan pada rentang konsentrasi standard. yang merupakan suatu senyawa yang ditambahkan pada sampel. Cara ini dilakukan dengan menyiapkan kurva standard melalui kromatografi ratio bobot tertentu dari standard dan komponen sampel. harus mempunyai waktu tambat mendekati waktu tambat senyawa yang hendak ditentukan. Maka persentase komponen x dalam sampel adalah sama dengan persentase luas total pada kromatogram untuk x: (8.5. Karena semua kuantitas merupakan ratio. Analisis Kuantitatif Kromatografi gas terutama digunakan untuk analisis kualititatif campuran senyawa.Indeks respon = U NPD S NPD U FID S FID (8. Apabila radas kromatogram tidak dilengkapi dengan integrator. dan ratio bobot dibaca pada kurva. Kelemahan metode ini adalah bahwa Penggunaan GC Dalam Analisis Toksikologi diperlukan kondisi yang sama untuk standar dan sampel ii) Kalibrasi dengan sandard internal. Belakangan ini hampir semua peralatan analisis dikontrol oleh komputer. dengan menerapkan prinsip pengukuran luas segitiga. Ada tiga cara yang berbeda untuk melakukan hal ini: i) Kalibrasi dengan standard eksternal. maka luas kromatogram dapat dihitung. secara sederhana pengukuran puncak dapat dilakukan dengan mengasumsikan kromatogram sebagai segitiga. y. metode standard internal ini akan mengkonpensasi perubahan dalam kondisi kromatografi selama perubahan ini akan mempengaruhi baik standarard ataupun komponen sampel dengan cara yang sama. misalkan suatu sampel mengandung komponen x. dan is = standard internal. Dengan menambahkan jumlah standard internal yang sama ke dalam suatu rentang konsentrasi standard.9) 100 (luas x ) %X = (luas x + luas y + luas z ) Jika faktor respons adalah berbeda untuk berbagai komponen. Standard internal ini harus terpisah sempurna dari semua komponen yang terdapat dalam sampel. Kurva dari tinggi puncak / luas puncak versus ukuran konsentrasi sampel akan memberikan kurva kalibrasi linier. 8.4. sehingga sistem kromatografi otomatis luas ini dapat ditentukan dengan komputer. kelemahan pada metode di atas dapat diatasi dengan standard internal. Derivatisasi Pada Kromatograti Gas Cair 58 .

.Banyak senyawa dapat ditentukan dengan kromatografi gas.. Wadsbuorth Publising Company. Huizer. HH. memperkecil adsorpsi. Body Fluids.. cannabinoids. ITB. Seringkali senyawa yang labil jika dikromatografi akan mengalami dekomposisi termal dan/ atau penguraian katalitik seperti misalnya steroida. A. 2... (1986). Analisis Obat Dalam Cairan Biologik. 3. CRC Press Inc.. 8. The use of gas chhromatography for the detection and quantitation of abused drugs. tetapi seringkali tidak berhasil. Manisfestasi ini dapat diatasi dengan membuat derivat/turunan eter trimetilsilil yang akan memberikan puncak yang cukup simetris dan respons yang tidak saja linier tapi lebih baik dibandingkan dengan basa bebasnya.J. Derivatisasi ini juga dapat diterapkan untuk senyawa yang karena bobot molekulnya dan tekanan uapnya tidak dapat dikromatografi pada kondisi yang umum. D. Penerbit ITB. John Wiley & Sons. memperbaiki pemisahan dan spesifisitas terhadap gangguan atau "background". J. Dasar Kromatografi Cair. E. 6. J. Sebagai contoh morfin dan narkotik kerabatnya yang penentuan kadarnya mengalami kesukaran terlebih-lebih dalam jumlah sub-mikrogram. 4th Ed.. Instrumental Methods of Analysis. H. 23. Bandung.92. Boca Raton. Melalui pembentukan derivat/turunan pada mana gugus interaksi polarnya dilindungi (masking) oleh bagian non-polar dapat mengatasi interaksi adsorpsi. Harcourt Brace Publisher. Derivatisasi ini juga berguna jika menghadapi kerusakan yang terdiri dari gangguan blangko biologik dan latar belakang. (1992). Chichester. S. Willard.al. identifikasi yang lebih positif. Mengurangi suhu kolom dan penggunaan sistem all-glass dapat mengurangi sebagian masalah ini. Hal ini disebabkan oleh puncak yang berekor dan respon tergantung pada jenis kolornnya selain pada jumlah sampel yang disutikan. 5. Chamberlain. mempertinggi volatilitas untuk analisis. (1991). New York. Sehingga untuk dapat menganalisa senyawa seperti itu... 7.. (Ed). Gogh. T. Bandung. Second ed. California. Hal ini dapat menyebabkan puncak yang terdistorsi. Clark's Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals. The Analysis of Drugs Abuse. Principles of Instruniental Analysis. London. (1989). et. Johnsan. 4. New York Penggunaan GC Dalam Analisis Toksikologi 59 . (1985). Moffat. dari mempertinggi sensitfitas respons detektor.C.. Stevenson. et al. Derivat ini biasanya akan mempertinggi stabilitas dalam kromatografi berlangsung.. The Pharmaceutical Press. United Nation International Drug Control Programme. senyawa yang mudah menguap dapat ditentukan dengan mudah. Kepustakaan 1. (1988).R.. Skoog. Sriewoelan. stabilitas senyawa mungkin dapat dipertingi dan seringkali derivatisasi dapat mempertinggi volatilitas hingga analisis dapat dilakukan pada suhu yang lebih rendah. Dengan membuat derivat/turunan yang sesuai. Masalah akan muncul apabila menganalisa senyawa dengan titik didih yang tinggi atau senyawa tidak stabil pada suhu analisa. United Nations. (1995) Recommended methods for the detection and assay of heroin.A.. amphetamine and ring-substituted amphetamine derivates in biological specimens manual for use by national laboratories.. Analysis of Drugs in Biological Fluid. cocaine. A.L. puncak yang sangat lebar dan respons non-linier. and PostMoterm Material. (1991). Leary. dibuat derivat yang mudah menguap.

HPLC adalah salah teknik analisis yang tepat untuk kriteria tersebut di atas. 3) kolom. seperti cannabis. oktil. Pemilihan Sistem HPLC atau Bond-Elut atau merek lainnya. nonPada analisis toksikologi forensik sebelum ionik polisterin-divinil benzen-co polimer XADsampel diinjeksikan ke dalam kolom terlebih 2. opium. HPLC juga lebih fleksible dibandingkan kromatografi gas. atau kolom.BAB IX PENGGUNAAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI ”High Performance Liquid Chromatography (HPLC)” DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI Metode analisis obat pada penyalahgunaan obat-obatan seharusnya sederhana dan spesifik untuk obat-obatan tertentu atau untuk kelompok obat tertentu. HPLC memiliki beberapa keunggulan seperti: pengoperasiannya pada temperatur rendah sehingga dapat meminimalkan terjadinya dekomposisi termal. dan 4) detektor diperdadangan dengan nama dagang SepPak 9.1. padat dari materi biologi atau dari ekstrak Sehingga akan dapat mem-perpanjang umur kasar. sehingga tidak sehingga diperoleh fraksi analit. karena dapat memilih berbagai fase gerak atau fase diam yang akan digunakan untuk keperluan analisis. 2) sistem penyuntikan sampel. Pra-kolom dan ekstraksi fase padat dengan derivat etil.partikel kecil kemudian dielusi dengan pelarut yang tepat.2. dan seharusnya memberikan ketepatan dan ketelitian analisis yang tinggi. walaupun waktu dan uhasa yang keras akan menentukan apakah metode dapat diterapkan dosentilitas. Khususnya dalam menganalisis senyawa yang termolabil seperti analog gugus asam karboksilat dari kanabinoid yang sangat susah dianalisis menggunakan kromatografi gas. Penggunaan pra kolom dan ekstraksi fase dahulu dapat dilewatkan pada pra-kolom yang padat ini memungkinkan menginjeksikan memungkinkan terjadi ekstraksi obat pada fase materi yang relatif murni ke dalam kolom HPLC.1.1: Skema peralatan HPLC Peralatan HPLC terdiri dari empat bagian utama: 1) pompa untuk menyuplai fase gerak. dan sarana yang diinginkan. pertukaran ion. yang terbawa dalam sampel. Pra-kolom dikemas ke dalam kolom yang berukuran kecil yang banyak tersedia Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi 9.1. Sistem injeksi 60 . dapat digunakan untuk menganalisa senyawa non-volatile atau senyawa polar. Untuk memperpanjang umur kolom amfetamin. dan penetapan kadar senyawa obat dan metabolitnya. akan menyumbat kolom. HPLC fase batik menggunakan fase gerak (pelarut) larut air. Potensialitas HPLC sangat berguna untuk pemisahan. kesederhanaan. kemampuannya dalam memisahkan senyawa dengan perbedaan rentang polaritas yang luas.1. Gambar 9. identifikasi. Fase padat atau kolom tersebut dapat berupa silika terikat 9. Pada tahap ini obat pada HPLC biasanya dilengkapi Guard colum dipekatkan/terkonsentrasi pada fase padat dan yang berfungsi menahan partikel .

Setelah elusi gradien dimulai kekuatan pengelusi akan meningkat. stabil jika detektor peka terhadap aliran. Kelebihan utamanya ialah tandonnya yang tidak terbatas. 9. Pompa pendesakan tetap dapat dibagi menjadi pompa torak dan pompa semprit. kromatografi fase balik. tetapi tandonya terbatas. umumnya bergaris tengah 6 mm atau Iebih besar dan panjangnya 25 . Fase Gerak Pada kromatografi cair susunan pelarut atau fase gerak merupakan salah satu variabel (peubah) yang mempengaruhi pemisahan. seperti fase normal. mempunyai tokskositas rendah. silika. pertama yang paling penting. Elusi terprogram juga disebut elusi gradien. Berbagai macam pelarut dipakai dalam semua ragam HPLC. Metode yang paling luas digunakan untuk menginjeksikan sampel adalah sistem katup kitar "sampling pool" alat ini menyatu dengan HPLC. mengandung 20-50 µg obat. Fase gerak harus: murni. Perlu juga diperhatikan jika menginjeksikan pelarut dapar (dapar fosfat) sebab dapar tersebut dapat mengkristal jika tercampur dengan pelarut organik (fase gerak). Sistem ini biasa digunakan pada analisis rutin dengan jumlah sampel yang banyak.5 µL. Pompa torak mengasilkan aliran berdenyut. Terdapat berbagai variasi kolom yang digunakan untuk analisis obat. Mikro sampling injkesi dapat menginjeksikan volum 0.Cuplikan harus dimasukkan ke dalam pangkal kolom (kepala kolom).6 mm. memungkinkan memperoleh kembali analit/sampel dengan mudah jika diperlukan.1. Untuk mengelusi analit diperlukan tekanan 1000 2500 psi dan volume elusi 50 ml. sesuai dengan detektor. Biasanya semua sampel pada awal/ saat diinjeksikan tertahan pada kepala kolom. Elusi terprogram. 9. jadi memerlukan peredam denyut atau peredam elektronik untuk menghasilkan garis alas detektor yang. yang melihatkan perubahan komposisi fase gerak secara bertahap atau secara continu selama proses elusi. analog dengan pemrograman suhu pada GC.100 cm.3. Sistem Pompa Terdapat dua jenis pompa yang digunakan untuk memompakan fase gerak melalui kolom yaitu tekanan tetap dan pendesakan tekanan. Kolom dapat dikelompokkan menjadi dua kelompok : i) Kolom analitik: garis tengah dalam 2 . Sistem injeksi automatis banyak dijumpai pada sistem HPLC. tetapi ada beberapa sifat yang diinginkan berlaku umum.1. Dari semua persyaratan empat yang. harganya wajar. sebab nomer batch yang berbeda memberikan data indeks retensi yang berbeda.4. tanpa cemaran. tidak bereaksi dengan kemasan. mengandung partikel yang tersuspensi sehingga diperlukan mikrofilter sebelum diinjeksikan ke dalam kolom. Untuk memisahkan sampel dengan rentang harga k' yang luas biasanya digunakan elusi terprogram.5 . Panjang bergantung pada jenis kemasan. dapat melarutkan sampel/analit. Kolom Kolom merupakan jantung kromatografi keberhasilan atau kegagalan analitis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi kerja. Untuk analisis obat volume sampel yang diinjeksikan antara 20 50 µL. untuk kemasan mikro pelikel 10 -30 cm. diusahakan agar sedikit mungkin terjadi gangguan pada kemasan kolom.5. sangat susah untuk mendeteksi akhir dari suatu puncak (puncak yang dihasilkan berekor).100 cm. dan memerlukan waktu analisis yang sangat lama. Elusi isokratik adalah metode pengelusi dimana komposisi fase gerak mulai sampel di injeksikan ke dalam kolom sampai semua sampel terelusi adalah tetap. Pompa semprit menghasilkan aliran yang tak berdenyut. untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50 . dengan kerja injeksi pneumatik. Elusi isokratik untuk pemisahan sampel dengan rentang harga k' (koefisien partisi) yang luar biasanya memberikan resolusi yang tidak baik. Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi ii) Kolom preparatif . Sangat direkomendasikan untuk membeli kolom dengan nomer batch yang sama. Sampel dengan 61 . Analit yang diinjeksikan harus tidak.1. 9. dibawah kontrol komputer. dan dapat mamasukkan sampel antara 5-500 µL. oktadesil yang terikat dengan silika atau fase terikat rantai hidrokarbon yang lainnya Untuk analisis obat secara rutin pada periode waktu yang lama dan data waktu tambat digunakan sebagai uji skrining dan konfirmasi.

Beberapa contoh ion lawan adalah garam-garam asam heptan sulfonat. Metode elusi gradien ini tidak hanya dapat mengatasi puncak berekor tetapi juga akan memberikan resolusi yang lebih baik. kadang-kadang juga oleh Iampu cadmium (225nm) dan zink (212 nm). Lebar pita sempit berarti meningkatkan sensitititas (detektor). Panjang gelombang yang diemisikan oleh lampu ini tidaklah monokromatis tetapi intensitas radiasi panjang gelombang yang lainnya sangat rendah. sebagai konsekuensinya tidak semua senyawa obat dapat dideteksi menggunakan detektor ini. Prosedur ini tergatung pada kemampuan obat membentuk ion pada larutan dapar yang sesuai. Sistem ini memberikan analisis yang sangat selektif karena memberikan puncak yang lebih tajam. Tidak semua obat mempunyai panjang gelombang maksimum pada 254 nm. asetonitril metanol. Pada saat pita meninggalkan kolom . Detektor ini dikelompokkan menjadi tiga kelompok: detektor panjang gelombang tatap.harga k' yang. Masalah ini dapat diatasi jika molekul solut dapat berinteraksi dengan pelarut lebih polar. Pasangan ion obat dan ion lawan dielusi sebagai satu kesatuan pada sistem kromatograti fase balik. sehingga daya elusi dapat ditingkatkan. detektor panjang gelombang variabel atau panjang gelombang tersebar. dan akan tertahan lebih lama pada fase diam yang lifofilik. Kromatografi pasangan ion telah digunakan untuk analisis obat khususnya pada sistem kromatografi fase balik. dan tetrahidrofuran. yang memiliki harga k' berbeda. biasanya konsentrasi ion lawan dalam 5 mM. dan σg lebar pita gradien (satu kali standard deviasi).1. Laju pencampuran pelarut dapat secara linier atau eksponensial. Harga k. yang kecil pada waktu dari akan memberikan pita yang sempit. Ion lawan yang sesuai larut dalam pengelusi. daya elusi pelarut mengikuti derajat eluotropik.2)  k + 1   4    VM (1 + k ) N 2 (9. seperti pada elusi isokratik. Pada HPLC sudah dilengkapi radar (device) untuk mengatur pencampuran pelarut ini. Persamaan tersebut adalah : Waktu tambat: t g = t M k log(2. kecil akan terelusi terlebih dahulu. t waktu tambat pada elusi gradien. Interaksi antara solute dengan gugus siloksil bebas dari silika dan isoterm adsorpsi nonlinier adalah alasan utama yang menyebabkan noda berekor pada kromatografi fase normal. Harga k pada saat elusi dari solut seharusnya berada antara 1 < k < 10. Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi . k masing-masing sangat kecil ( ∞ 1). 62  N (α − 1)  k   (9. Pada rangkaian pelarut ini meningkat daya eluotropiknya: heksana < toluen < dietileter < kloroform < etilasetat < etanol < metanol < pirirdin < asam asetat. Persamaan dasar untuk elusi gradien dapat menggunakan persamaan k' diganti dengan k rata-rata selama elusi gradien berlangsung. tetraetil atau tetreapenilamonium halida untuk untuk obatobatan yang mengandung gugus karbonil aatau fenate 9. Detektor panjang gelombang tetap menggunakan panjang gelombang tertentu pada satu panjang gelombang. Masalahnya yang timbul juga tidak semua obat dapat dideteksi pada serapan maksimumnya. Detektor Detektor yang sering digunakan untuk analisis obat adalah UV detektor.6. biasanya dihasilkkan oleh lampu merkuri (254 nm). Dengan metode elusi gradien dimulai dengan pelarut non-polar hingga pelarut polar. Dengan secara konstan merubah komposisi fase gerak pada periode analisis.3 k o / k ) (9. Untuk menghilangkan radiasi ini ditambahkan filter antara sumber radiasi dan sel detektor. Pelarut ini paling sering digunakan dalam analisis obat.1) Resulusi: Rs =  Pemilihan sistem pengelusi untuk kromatografi partisi fase normal. dan nitrium lauril sulfat.3) Pelebaran pita: σ g = dimana ko adalah harga k' pada saat elusi gradien dimulai. diikuti oleh senyawa lain sesuai dengan peningkatan harga k' dan kekuatan pengelusi. detektor diode-array. Yang lebih penting dapat menurunkan waktu analisis campuran komplek. Pelarut yang umum digunakan pada HPLC fase balik adalah air (atau larutan dapar). HPLC modern menyediakan radas elusi gradien sampai menggunakan empat campuran pelarut yang berbeda.

02 Siklopentana 200 1.341 82 0.90 -0.56 VIa Etanol 210 1.1 0.7 0. Sifat dari pelarut yang digunakan untuk kromatografi cair (1) Pelarut UVa RIb BP (oC)c ηd ρe εf δg kelompok Isooktana 197 1.40 4.9 0. Kebanyakan diode array detektor aliran. menunjukan puncak terelusi adalah tidak Untuk HPLC yang menggunakan penghenti tunggal. c Titik didih dalam oC.60 4.1 0. e Parameter polaritas pelarut.78 3.08 4.350 35 0.5 VIa 0.0 Via Isopropanol 205 1.bulanol 1.9 V 1-2 Dikloroetan 1.9 I Dietil eter 218 1.398 89 0.01 1. h kelompok selektivitas pelarut. polikromatis yang dilewatkan ke sel detektor Detektor fluoresensi.43 4.4 0. g konstanta dielektri pada 20oC.326 65 0.47 0.3 VII Diklormetan 233 1.7 II Air 1.2 0.90 1.624 46 0.385 97 1.404 49 .70 17. Berbeda dengan diode array pada dua panjang gelombang yang berbeda.2 80.0 0. Walaupun sangat sedikit dilewatkan menuju monokromatis halokisi yang digunakan untuk analisis obat detektor mendispersikan radiasi polikromatis menuju fluoresensi memiliki keuntungan dalam Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi 63 .5 VIb Metanol 205 1.1 0.442 83 0. Sumber radiasi detektor mengukur serapan pada λmak analit yang panjang gelombang variabel menggunakan melewati sel detektor.28 3.6 III Etil asetat 256 1.36 1. masing celah diode merekam Untuk memecahkan masalah ini digunakan satu panjang gelombang.60 3.333 100 0.376 80 0.24 2.42 -0.3 0.2 0.0 6.443 61 0.4 V ter.97 Karbon disulfide 380 1.54 5. Radiasi barbiturat.32 2.8 VIII Etil metil keton 1.90 4.89 10. Sehingga masingdetektor panjang gelombang variabel atau masing celah tersebut dapat digunakan untuk diode array detektor.5 II Propanol 240 1.57 7.58 6. d Viskositas pada 25 oC.8 0. Detektor ini dapat juga digunakan detektor ditempatkan monokromator.01 1.3 I Benzen 280 1.53 4.46 4.4 0.30 5. susunan diode.65 37.88 Sikloheksana 200 1.389 99 0. radiasi untuk menentukan kemurnian analit yang monokromatis yang melewati sel detektor akan dipisahkan dengan cara mengukur sepektrum ditangkap oleh photocell.421 40 0.85 24.423 81 0. serapan spektra senyawa yang dideteksi dilengkapi dengan pengukuran rasio absorban dapat diukur.6 0.54 2.6 II Asam Asetat 1.44 10.3 III Tetrahidrofuran 212 1.370 1118 1.7 18.8 0. Antara sumber radiasi dan sel dielusi.82 20.30 0.356 56 0.34 0.457 77 0.359 78 1.372 69 0.41 3.2 VIII a pelarut tidak dapat digunakan untuk deteksi pada panjang gelombang tersebut b indeks Keterangan: refraksi pada 25 oC.4 I Isopropil eter 220 1.1 0.370 77 0.1 0.0 0. Oleh photo sel dari waktu ke waktu selama puncak tersebut intensitas radiasi dirubah menjadi sinyal listrik dielusi.385 82 3.70 12.Tabel 8.397 118 2.2 IV Asetonitril 190 1.82 20.405 66 0.24 Trietilamin 1.15 2.498 80 0.3 II Kloroform 245 1. 51 Aseton 330 1.90 3.18 2.94 n-heksana 190 1.34 5.384 82 1. atau semua diode lampu deuterium dan yang memberikan radiasi merekam radian power (intensitas) yang pada daerah UV.9 0.10 6.6 2.36 68 038 2.38 4.95 32.5 0.9 0.42 8.38 4.1 0.64 Karbontetraklorida 265 1.04 2.1 0. Apabila spektra puncak tersebut kemudian dimanipulasi sehingga dapat terbaca berubah selama pengukuran tersebut sebagai data adsorban atau transmitan.1. detektor tidak melewatkan radiasi seperti yang digunakan untuk penetapan monokrimatis ke dalam sel detektor.05 1.3 0.5 II Butanol 210 1.

3... seperti ekstraksi analit dari sampel. 1991. S. Bandung. The use of high performance liquid chromatography for the detection and quanitation of abussed drugs.London. Moffat. Principles of Instrumental Analysis.. 2. Stevenson. 1988. 5. tetapi banyak dapat dibuat manjadi turunan berfluoresensi dengan pereaksi fluoresen yang sesuai. Analisis obat-obatan pada penyalahgunaan obat harus mengikuti prototkol yang baku. cocaine.A. 8. United Nations.. 1 2 1 . Respon dari detektor ini muncul dari aliran elekro yang dihasilkan oleh reaksi redok pada permukaan elektroda. 4... Dengan diketemukan Fourier transform infrared (FTIR) spektrofotometer dimungkinkan digunakan sebagai detektor pada HPLC detektor ini akan sangat berguna untuk memonitoring penyalahgunaan obat-obatan karena dapat melakukan identifikasi absolut dari obat yang dianalisa. A. 9. Sriewoelan. Penerbit ITB. Instrumental Methods of Analysis... 1 . Perlu diperhatikan sifat mikrofilter yang kadang terlarut dengang pelarut organilk tertentu. sehingga data yang berhubungan dengan sampel obat harus dicatat.. Detektor ini tidak dapat digunakan secara sefektif dengan elusi gradien karena adanya perubahan pada baseline (perubahan indeks refraksi pelarut jika gradien berubah) atau jika pelarut mempunyai indek refraksi mendekati indeks refraksi zat terlarut.. 1991. D.H. Skoog.R. Wadsbuorth Publising Company. 1986.174.J. B.. Hanya saja detektor ini hanya dapat digunakan untuk menetukan obat yang dapat dioksidasi atau direduksi. Johnsan.L. Analisis obat menggunakan HPLC biasanya didahului oleh praperlakuan. dari penyumpulan sampel sampai pada penanganan Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi data analisis. A. seperti asam amino dapat dibuat menjadi turunan berfluoresensi dengan menggunakan reagent o-ftalaldehid atau fluorescamin. kususnya dalam batas deteksinya. Spcetrum IR yang direkam digunakan sebagai dasar untuk uji konfirmasi. Body Fluids. T. 1992..3) yang melaporkan penggunaan kromatografi untuk mendeteksi penyalahgunaan obat-obatan sampai tahun 1983. cannabinoids. Chamberlain. Tidak semua obat berfluoresensi.Clark's Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals. J. Leary. Semua historis data ini sebagai bukti di pengadilan. Analisis Obat Dalam Cairan Biologik.. Setelah sampel diekstraksi dapat langsung diinjeksikan ke dalam kolom melalui mikrofilter (biasanya berdiameter 2µm) atau sebelum diinjeksikan ekstrak kering kemudian dilarutkan ke dalam fase gerak. California. 4"' Ed. Detektor indek refraksi. (1995) Recommended methods for the detection and assay of heroin. Boca Raton. 7. Harcourt Brace Publisher. (Ed). CRC Press Inc. khususnya penampilan mikroskopi maupun makroskopiknya seperti. J. Morfin dapat dibuat berfluoresensi dengan pereaksi ferisianida membentuk apomorfin dengan intensitas fluoresensi yang kuat.. et all. 6.C. dan penandaaan yang terdapat pada sampel/pembungkus. Penggunaan HPLC didalhului oleh uji skrining. menggunakan reaksi warna atau reaksi skrining lainnya.sensitivitas dibandingkan dengan detektor UV. peryataan ini dikemukan oleh Gough dan Beker(2. Selain itu detektor ini sensitif terhadap perubahan suhu. Detektor ini sangat sensitive dan menunjukan selektivitas yang tinggi. 1989. John Wiley & Sons. New York. et. Chichester. detektor ini mengukur perubahan indeks refraksi eluen yang disebabkan oleh adanya senyawa yang pada waktu keluar dari kolom.2. Willard. 64 . K e p u st a k a a n . Dasar Kromatografr Cair. 1985. Goglt. Analysis ofDrugs in Biological Fluid. ITB. Metode ekstraksi tergantung pada jenis sampel dan sifat fisikokimia dari analit. The Analysis of Drugs of Abuse. Caddy.all. The Pharmaceutical Press. Detektor elektrokimia adalah representatif untuk monitoring penyalahgunaan obat. H. and PostMortenz Material. Analisis Obat Tidak semua analisis obat dapat dilakukan dengan menggunakan HPLC. pembungkus sampel. Second ed. E. Bandung.

J. 10. Academic Prees. Hyds. 1979... A.. M. Penggunaan HPLC Dalam Analisis Toksikologi 65 . 1035-1040 14. in in FIor'cy. 9 (Nov/Des). Analytical Profiles ofDrug Substances. (V d). Chao. Toxicology. Gsrriott. Lawry. 359-395. 7 Academic Prees. 1975. JJ ofAOAC... of Toxic olo gy .S. 1977. 217-222. New York 9. 1977. W. 13.C. 1977.T.. United Nation International Drug Control Programme. Macdonald. P. D.. Evaluation of Drug Extraction Procedures from Urine. New York.S. 79-101. Simultaneous Assay for Six Alkaloids in Opium. J. e all. Smit. . Beasly. Application of Reverse Phase lon-Pair Partition Chromatography to Drugs of Forensic Intere-t.K. T.C. S.. Plenum Press.. 888897. Solid-Phase Extraction and HPLC-UV Confirmation of Drugs of Abuse in Urine J.W. 7.D. J.W. 1985. Ferrara. 11.M. 103-346. Using High-Perfomence Liquid Chromatograpy.K. ofAOAC. Senkauski. New York. Albert.. Phenobarbital.H.A. in Florey.K. 12. H. Michatlis.A.K. 60 (5). 15. An. 265-272.amphetamine and ring-substituted amphetamine derivates in biological specimens manual for use by national laboratories. Ziegler. Analitical of Profiles Drugs Substances. Uiarcpam. Forensic Toxicology Controlled Substances and Dangerous Drugs. New York. 58 (5). Lurie Ira.F. 1992. 16. (Ed). Fusari...

Sistem data yang modern akan mengontrol operasional MS. Sistem pengolah data. Diagram balok komponen dari MS dapat dilihat pada gambar 10. Dengan berkembangnya teknologi sekarang banyak dijumpai MS yang digabungkan dengan instrumen lain seperti HPLC. NMR. direct probe inlet. 4. Sistem pengumpul ion. Sumber ion. 1. 10. Spektrum massa dari asal senyawa adalah karakteristik oleh senyawa tersebut. 3. 5. Penggabungan kromatografi dengan MS memerlukan sistem inlet yang khusus. 10.3. kromatografi inlet. dll). yang dapat memberikan informasi tentang berat molekul dan struktur molekul. Pendahuluan Dalam bab ini akan dibahas identifikasi dan kuantisasi obat menggunakan spektrometri massa. TLC. yang telah di skrining atau diduga sementara menggunakan teknik lain (R-X warna.2. MS menghasilkan partikel bermuatan yang terdiri dari susunan ion dan pecahan (fragmen) ion dari molekul asalnya dan urutan susunan ion ini sesuai dengan rasio massa/muatan ionnya. Bagian-bagian yang terpenting adalah: 1. Sistem Pengumpulan Data dan Penampilannya Sekarang ini spektrometer terhubung dengan berbagai bentuk sistem data sangat bergantung dari tujuan analisis. MS yang digabungkan sistem kromatografi gas/HPLC memungkinkan melakukan pemisahan dan mengidentifikasi secara langsung senyawa Spektroskopi Massa Sistem Pengolahan Data tersebut. Keuntungan utama MS dibandingkan metode instrumental analitik lainnya adalah mempunyai sensitivitas dan spesivitas yang paling tinggi untuk mengidentifikasi atau mengkonfirmasikan suatu senyawa yang telah Sampel diduga. Aliran Analit/Sampel dalam MS Fungsionalitas dari MS secara prinsip dapat dibagi menjadi 3 bagian fungsi utama: 1) menciptakan fragmen ion dalam bentuk gas dari sampel. 2) mengion/ion-ion tersebut sesuai dengan massanya (tepatnya rasio massa/muatan). Sampel inlet sistem. 3) mengeluarkan massa relatif dari fragmen ion-ion dari setiap massa. Diagram balok komponen dari MS Tujuan dari inlet sistem adalah memungkinkan untuk memasukkan sampel ke dalam sumber ion dengan kehilangan vakum yang sangat kecil. pengumpulan 66 . dan atau digabungkan dengan suatu analizer MS (tendem MS/ MS-MS). Inlet sistem Sumber ion Analizer Massa Detektor Sistem Vakum Gambar 10. Sistem vakum. UV-Vis. 6. Pada MS ada 3 jenis inlet sistem: batch inlet. 2. Spesivitas yang sangat tinggi dihasilkan karakteristik pola pemecahan/fragmentasi. Percepatan ion atau analizer massa (ion). Spektrometri massa merupakan teknik analisis yang sangat handal yang dapat memberikan bukti/data terdapatnya suatu obat yang diduga.1. MS utamanya telah digunakan untuk memastikan identitas suatu obat. GC.BAB X APLIKASI SPEKTROMETRI MASSA DALAM ANALISIS PENYALAHGUNAAN OBAT 10. Apabila spektrum massa dari suatu senyawa dilengkapi dengan data spektronik lainnya seperti IR. dapat dianalisis struktur molekul senyawa tersebut.1.

data dan memproses data termasuk pencarian dalam data kepustakaan. Keuntungan dari teknik ini adalah lebih sensitive dibandingkan merekam keseluruhan spektra. Kepustakaan Spektrum Massa Identifikasi obat yang positif diketahui memerlukan pembandingan terhadap spektrum massa yang ada pada data kepustakaan. atau deteksi ion ganda /”multiple-ion detection”/MID.4. Data sistem akan mensubstrak spektra dengan yang lainnya (spektra latar belakang) sehingga spektra analit bebas dari spektra latar belakang pengganggu. Jika MS secara berulang melakukan scaning dari sumber (inlet) GC rekonstruksi jumlah total muatan ion dari suatu analit dapat dilakukan. Juga berguna dalam mendeteksi obat-obat yang berbeda setelah semua spektra terekam. Khususnya terdapat tiga ion yang berbeda yang akan direkam yaitu termasuk ion molekuler yang utama dan dua ion yang lainnya sebagai ion diagnostik. tetapi hanya merekam sinyal karakteristik dari ion-ion tersebut untuk mengidentifikasi obat yang diinginkan. NMR untuk dapat digunakan dalam identifikasi obat yang tidak diketahui/obat baru. karena memerlukan data massa yang akurat. Pada analisis forensik toksikologi (senyawa obat) diperlukan MS beresolusi tinggi. Kromatogram ion tunggal sangat berguna dalam mendeteksi obat tertentu dalam suatu campuran. Intensitas absolut dari ion-ion direkam dan intensitas relatif yang mewakili ion molekuler dicek untuk memastikan memang pada rasio yang benar. Perfluorokerosene adalah senyawa kimia yang biasa digunakan untuk mengkalibrasi skala massa dari MS. Sistem data juga dapat memplot/merajah variasi intensitas masing-masing dari ion terhadap waktu. NMR). memerlukan waktu yang lebih sedikit untuk memonitor masing-masing ion. Jika analisis melakukan pencarian pembanding spektra secara manual dan menghabiskan banyak waktu dan sering muncul penafsiran yang subyektif dan memerlukan 67 . tetapi metode ini tidak sensitive. Metode yang lama spektra direkam di atas kertas yang sensitif dengan UV dan massa ditentukan secara manual dari masing-masing puncak spektra. komponen yang tidak terdeteksi dapat dihindari sehingga diperoleh semua spektra dari masing-masing komponen. Sistem data juga dapat secara simultan mengoperasikan data dari berbagai data Spektrofotometer (UV. Sistem ini jauh lebih menguntungkan daripada analisis mengumpulkan data spektra massa manual. apabila dibandingkan spektra massa normal. dan daftar formula empiris sangat berhubungan dengan semua data ion yang terfragmentasi. 10. Pada sistem data yang modern biasanya dilengkapi dengan fasilitas pencarian data spektrum pembanding pada data pustaka. prosedur ini dikerjakan secara automatis. Secara komersial terdapat banyak data kepustakaan tersimpan dalam disket-disket pencarian pembandingan data kepustakaan dapat dilakukan melalui internet di mana “home page” tertentu menyediakan jasa ini. dan jumlah senyawa yang dapat dianalisis akan sangat terbatas. metode ini dikenal dengan “single-ion Spektroskopi Massa chromatogram” (kromatogram ion tunggal). IR. Secara komersial seperti contoh “Environmental protection Ajency/National Institutes of Health Main Spectral Database”. sebab MS dengan resolusi rendah sering tidak berhasil dalam pencarian data dengan sistem data pustaka. Informasi spektra MS biasanya dipadukan dengan data spektra IR. Secara umum operasional data sistem adalah merekam massa dan intensitas ion pada saat spektrometer melakukan scaning. Sistem data tidak hanya dapat menangani operasi pengumpulan data spektra penetapan massa dari puncak tetapi juga dapat memanipulasi data sesuai dengan kebutuhan. Mode operasi dari teknik ini tidak merekam keseluruhan spektra. Sistem data spektra juga dapat merata-ratakan semua spektra dari puncak GC dengan membandingkan spektra dari puncak GC sebelumnya atau sesudahnya. Cara ini akan sangat lama pengerjaannya. Sistem data dapat dibeli terpisah atau telah disatukan dengan spektrometer. Total ion current atau jumlah total muatan ion adalah penjumlahan semua intensitas muatan ion terfragmen pada saat melakukan scaning. Intensitas absolut memungkinkan menentukan konsentrasi suatu obat dengan membandingkan dengan intensitas baku pembanding. Jika ingin mendeteksi obat tertentu yang diduga ada beberapa teknik analitik yang digunakan yaitu monitoring ion selektif / “selektif ion monitoring”/SIM yang juga dikenal sebagai monitoring puncak ganda / “multi peak monitoring”/MPM.

trifluoroasetil. Beberapa sistem ini juga menampilkan faktor kemurnian. dan karakteristik fragmentasi spektrum massanya. 246. dll. 295. 258. 374 CI negatif (hidrogen/metana) 410 CI negatif (hidrogen/metana) 413 CI negatif (hidrogen/metana) 454 CI negatif (hidrogen/metana) 457 CI negatif hidrogen metana) 409 CI negatif (hidrogen/metana) 412 EI 314. Tabel 10. IS=“internal standard Pada analisis kanabis dari produk ilegal dalam bentuk simplisia. Cara ini digunakan atau konfirmasi 68 . 299. Internal standard yang ideal adalah isotop berlabel yang analog dengan analit. 299. deuterasi. 316 EI 488. hasis. IS THC-trifluoroasetil THC-trifluoroasetil. Seperti contoh asam dapat dirubah menjadi bentuk metil esternya dan barbiturat dalam bentuk metil-barbiturat. Untuk analisis kuantitatif sebaiknya digunakan internal standard yang sesuai. 246. deuterasi. 258. 271.2 CI=“Chemical ionization” (ionisasi kimia).. 313 EI 375. (1991) A. 238 EI 314. 193 EI 314. Beberapa mg produk langsung dimasukkan ke dalam inlet probe kemudian diperoleh spektrum total. trifluoroasetil. H. 10. 258. seharusnya mempunyai sifat kimia yang sama dengan analit hal ini sangat penting jika dilakukan derivatisasi. Pada kasus ini faktor ketepatan yang bagus dengan faktor kemurnian rendah menunjukkan ketidak tepatan atau ketidak benaran. tidak terdapat dalam spektrum pembanding dan dapat menunjukkan adanya pengotor atau pengganggu. Pemurnian dapat menggunakan teknik kromatografi atau membuat derivatnya sebelum dikromatografi untuk meningkatkan kinerja kromatografi. kemurnian isotop. Oleh karena itu perlu prosedur “cleanup” atau pemurnian sebelum analisis MS. deuterasi. metilasi THC-COOH. 243.2 EI 317. Faktor ketepatan biasanya dengan skala 0-1000 adalah menampilkan spektrum yang tepat/cocok dan mengukur kedekatan antara spektrum senyawa yang tidak diketahui dengan spektrum data pustaka. deuterasi. Faktor ini dihitung dari puncak spektrum senyawa yang tidak diketahui. IS EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). Analisis Beberapa Kelompok Obat Pada sub bab ini dikhususkan pada pembahasan analisis obat-obat yang sering disalahgunakan (‘drugs”/obat ilegal) baik dalam bentuk sediaan atau bahan baku maupun yang terdapat dalam cairan biologi berada dalam konsentrasi yang sangat kecil dan dalam matriks yang sangat kompleks. Ion-ion yang karakteristik dapat diperoleh dengan melakukan Spektroskopi Massa scaning berulang. 246. IS THC-OH. Spektrum massa kanabis yang karakteristik Senyawa Model ionisasi CBN CBD ∆9-THC Kanabinoid (umum) THC-COOH. Dengan cara ini semua komponen dari kanabis dapat diamati dalam tabel 10. 473. IS THC-OH. “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. metilasi. bagaimanapun juga sebelum pemilihan isotop analog yang spesifik beberapa faktor harus dipertimbangkan seperti: massanya berbeda. 231. Kanabis ion-ion yang diamati (m/z) EI 310. deuterasi. IS THC THC. 231 EI 372. dapat dilakukan secara langsung. deuterasi. 1. 357. Penghitungan didasarkan atas perbedaan intensitas antara ion-ion yang tepat/cocok dalam spektra yang sesuai. Untuk menghindari penyimpangan atau kesalahan pembandingan spektrum yang tidak diketahui hasil dari pencarian data pustaka biasanya ditunjukkan beberapa spektrum yang hampir mendekati. 231 EI 314. 371 EI 491. Apabila ingin mendeteksi adanya campuran kanabinoid dapat dilakukan dengan membandingkan spektrum sampel dengan spektrum kontrol kanabinoid. IS THC-COOH trimetilsilil THC-COOH trimetilsilil. 299.pengalaman yang panjang dalam pekerjaan mencocokkan spektra.5. Analisis statistikal dapat dilakukan dengan mengadakan intensitas ion-ion terpilih.1. IS THC-COOH trifluoroasetil THC-COOH trifluoroasetil.

trifluoroasetil. 327.2. menunjukkan spektrum MS prominan ion molekuler terprotonisasi pada m/z 378. penta-fluoropropionil. 473 384. deuterasi. propionil.adanya daun. trifluoroasetil CI (Asetonitril) Kodein. 310. trifluorosetil EI Nalorfin. Spektrum massa opiat yang karakteristik Senyawa model ionisasi Diamorfin EI Diamorfin CI (Isobutana) Asetilkodein CI (Isobutana) kofein CI (Isobutana) Diamorfin CI (Nitrogen/10% oksida nitrat) 6-asetilmorfin.. Di dalam urine ditentukan sebagai metabolit utama dari THC yaitu asam 11-nor-∆9-THC-9 karboksilat (THC-COOH). Analisis kuantitatif internal standard seperti oksigen butana. trifluoroasetil CI (Asetonitril) 6-asetilmorfin. Untuk memperoleh data spektrum dari masingmasing kanabinoid sebelum injek ke inlet MS sebaiknya dilakukan proses pemurnian baik menggunakan GC atau HPLC. 364 395. 333 341. 282 195 370 (MH+). 361 473. 414 268. IS EI Morfin. 282 603. 383. pentafluoropropionil EI 6-asetilmorfin. atau menggunakan ekstraksi fase padat. ∆9 THC dan CBN dapat dideteksi langsung sebagai turunan trimetilsilil. Kanabis pada rokok dapat langsung dianalisis dari kondensat asapnya menggunkan GC-MS. 268 342. IS EI Asetilkodein EI Morfin. 390 577. 228. Penetapan kanabinoid dalam cairan biologi ditentukan sebagai metabolit kanabinoid. Analisis THC-COOH sebagai metabolit primer dari kanabinoid menggunakan MS diperlukan pemurnian sebelum dianalisa. 327. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. trifluorosetil EI Kodein. 256.414. pentafluoropropionil EI Morfin EI Aplikasi spektrosfotometri massa dalam analisis Toksikologi 69 . isotop deuterium dari THCCOOH. CI=“Chemical ionization” (ionisasi kimia). derivat trimetilsilil menggunakan N. 268. Beberapa kanabinoid sangat tidak stabil pada GC sehingga harus segera dianalisis GC setelah sililasi dan memerlukan penanganan khusus. Berbagai metode ekstraksi dapat diterapkan seperti ekstraksi menggunakan pelarut organik karena dikeringkan. 324 389. Sebagai derivat trimetilsilil menggunakan BSTFA diperoleh ion metastabil m/z 371 sesuai dengan M+ Æ (MCH3)+ dalam spektrum derivat THC. Opiat terkonyugasi dengan asam glukoronat. resin atau cairan dari kanabis dan pembandingan sampel berlainan didasarkan atas perbedaan konsentrasi. 215 EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). Analisis opiat menggunakan MS senyawanya seperti dilihat pada tabel 10. Pemurnian menggunakan HPLC seperti mengatasi masalah termolabil dari kanabinod sehingga dapat langsung menganalisis kanabinoid. 364 424. Kanabinoid (CBD). Pada analisis GC-MS dengan menganalisa THC-COOH sebagai derivat metil ester dengan metan-kimia ionisasi. IS EI Morfin. H. 282 478. THC-COOH dibuat dalam berbagai derivatnya seperti derivat metil ester menggunakan iodometan dan tetrametil hidroksida. 268 370 (MH+). Sebelum dimasukkan ke inlet MS metabolit tersebut dipisahkan dengan kromatografi (GC/HPLC). Metabolit ini diekskresi sebagai bentuk bebasnya atau B. 2. pentafluoropropionil EI Nalorfin. Tabel 10. 242. Analisis menggunakan GC-MS. 364 445. propionil EI 6-asetilmorfin. 440 477. 282 503. 310. (1991).O. pentafluoropropionil EI 6-asetilmorfin. Pada analisis menggunakan GC kanabinoid terlebih dahulu dibuat sebagai turunannya dengan sililasi. bis-(trimetilsilil) trifluoroasetat (BSTFA) ditambah 1% trimetilklorosilan (TMCS). ion-ion yang diamati (m/z) 369 (M+). 310.

IS EI 364. 85 Kokain EI 303 Kokain. IS EI 308 p-Fluorokokain EI 321 p-Fluorokokain. 268 LSD. 253. deuterasi.. Aplikasi spektrosfotometri massa dalam analisis Toksikologi 124 . Tabel 10. 182. N-trifluoroasetil. 4. 130. trimetilsilil. Analisis menggunakan GC-MS terhadap kokain ilegal perlu diperhatikan pengotor metil ekgonin yang dapat membentuk artefak di muka injektor dari GC pada temperatur tinggi (>250oC). Kokain Spektrum massa elektron impact dari kokain sangat karakteristik sehingga memungkinkan untuk identifikasi dengan membandingkan terhadap spektra standard. 82 Kokain.. piko-nano gram/mL. 279. (1991). 186. 159. deuterasi. 243. Benzoilekgonin dan ekgonin adalah metabolit utama dari kokain sehingga pada analisis kokain dalam materi biologi kedua metabolit tersebut dianalisa. psilosibin. meskalin. 168. 146. 82 Benzoilekgonin ester. Tabel 10. Senyawa model ionisasi ion-ion yang diamati (m/z) Ekgonin. IS EI 306. trimetilsilil EI 395. deuterasi. 182 Benzoilekgonin CI (Isobutana) 290. trifluoroasetil EI 263 Norkokain. H. trifluoroasetil. H. psilosin. IS EI 324 n-propilkokain EI 331 n-propilkokain. IS EI 266 Kokain CI (Isobutana) 304. D. Dalam cairan biologi LSD dianalisa sebagai bentuk tak termetabolisme LSD. deuterasi. Kokain ilegal biasanya dikotori dengan ekogenin. 293. metil ekogenin dan benzoil ekogenin. 185. trifluoroasetil CI negatif (metana) 501 EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). ergotamine Analisis LSD sangat sulit karena dosis yang sangat poten dari LSD sehingga dalam urine atau materi biologi hanya berada pada konsentrasi yang sangat kecil. 293. IS EI 398 (M+) LSD.C. Spektrum massa kokain yang karakteristik seperti diperlukan pemisahan sebelum analisis. IS CI negatif (metana) 429 N-Dimetil-LSD. (1991). 3. 240. 85 Benzoilekgonin ester EI 361. 2. deuterasi.5-dimetoksi-4-metil amfetamin. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. IS EI 306 Norkokain. CI=“Chemical ionzation” (ionisasi kimia). Spektrum massa LSD dan halusinogen lainnya yang karakteristik Senyawa model ionisasi ion-ion yang diamati (m/z) LSD. LSD dan Halusinogen lainnya Halusinogen yang paling sering disalahgunakan adalah LSD dan analognya. 124 EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). deuterasi. deuterasi. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. 73 LSD EI 323 (M+) Psilokin EI 204 (M+). trimetilsilil EI 395 (M+). deuterasi IS EI 334 Kokain EI 303 Kokain. 268. N-trifluoroasetil CI negatif (metana) 419 LSD. Analisis kuantitatif dilakukan dengan memonitor intensitas ion molekuler pada m/z 303 yang dibandingkan terhadap standard. deuterasi. 117 STP EI 166 LSD. metilester EI 82 Fenklikidin EI 200 Kokain EI 303. CI=“Chemical ionization” (ionisasi kimia).

trikloroasetil 2-metilfenetilamin. 287 240 254 282 427 429 140 DOB Amfetamin. 91 118. heptafluorobutirat. heptafluorobutirat N-Propilamfetamin. heptafluorobutirat Metamfetamin. 280. 118. 5. 105 294. 4-karbetoksiheksa-fluorobutiramida.E. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. CI=“Chemical ionization” (ionisasi kimia). 91 202. trikloroasetil Metamfetamin. Metode yang tepat untuk menganalisis amfetamin dan metabolitnya (amfetamin. 270 308. Untuk mengatasi hal ini biasanya digunakan teknik Senyawa ionisasi yang lain seperti ionisasi secara kimia atau merubah menjadi bentuk derivatnya yang akan memberikan spektrum massa yang bermakna untuk identifikasi. 4-karbetoksiheksa-fluorobutiramida. deuterasi.. 4-karbetoksiheksa-fluorobutiramida Metamfetamin. (1991). phidroksi metamfetamin dan p-hidroksi amfetamin) didahului dengan hidrolisis kemudian ekstraksi dan merubah menjadi turunan heptafluorobutiril dengan menggunakan fentermin sebagai standard internal (2). 266. 4-karbetoksiheksa-fluorobutiramida Amfetamin. 262 315. deuterasi. 186 188. deuterasi. Turunan Amfetamin Spektrum massa turunan amfetamin menggunakan teknik fragmentasi elektron impact atau tumbukan elektron sangat tidak memuaskan untuk digunakan sebagai dasar identifikasi.and l-amfetamin. trifluoroasetat EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). Umumnya senyawa turunan amfetamin mempunyai puncak dasar yang sama pada m/z 58. trikloroasetil. 248 298. Model ionisasi CI (amonia) EI EI EI EI EI EI EI EI EI EI CI (metana) CI (metana) EI Tabel 10. 118. karena ion-ion molekuler dari turunan amfetamin muncul sangat lemah bahkan sering tidak tampak.and l-amfetamin Turunan d. IS Amfetamin. H. IS Amfetamin. Aplikasi spektrosfotometri massa dalam analisis Toksikologi 70 . IS Metamfetamin. IS Amfetamin. IS Turunan d. Spektrum massa amfetamin yang karakteristik Ion-ion yang diamati (m/z) 274 (MH+).

seperti metaqualon. 191. Pencilidin Pola fragmentasi dari pencilidin yang karakteristik muncul spektra ion molekuler yang kuat pada m/z 243. Tabel 10. 164 5-{N-(1’fenilsikloheksil) amino} asam pentanoat. deuterasi. H. bromazepam adalah senyawa yang juga sering disalahgunakan dapat dilihat pada tabel 10. metilester. deuterasi. dan 1-{1-fenilsikloheksil}. fentanil. isotop 81Br). trimetilsilil 293 5-{N-(1’fenilsikloheksil) amino} asam pentanoat. deuterasi. IS CI negatif (metana) 312 (M+) Bromazepam CI (amonia) 318 (MH+. Spektrum massa yang karakteristik dari metaqualon. 100%).. 6.CI (metana) 4-hidroksi piperidin. Spektrum massa pencilidin yang karakteristik Senyawa model ionisasi ion-ion yang diamati (m/z) EI 249 (M+) 1-{1-(2-tienil)sikloheksil}piperidin EI 251 (M+) 1-{1-(2-tienil)sikloheksil}morfolin EI 235 (M+) 1-{1-(2-tienil)sikloheksil}pirolidin EI 245 (M+) 1-{1-fenilsikloheksil}morfolin EI 229 (M+) 1-{1-fenilsikloheksil}pirolidin PCE EI 203 (M+) PCC CI (metana) 193 (MH+). IS EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). aprazolam. trizolam. 7. 146 Alfentanil. 166 PCP. IS EI 161 Fentanil CI (metana) 337 (MH+) Fentanil.piperidino CI (metana) 248. IS CI negatif (metana) 306 Triazolam CI negatif (metana) 306 (M+) triazolam. 236 Alprazolam CI negatif (metana) 308 Triazolam. IS EI 289. dan benzodiazepin Senyawa model ionisasi ion-ion yang diamati (m/z) Metaqualon EI 250 (M+) Metaqualon CI (isobutana) 251 (MH+. Senyawa lainnya Spektrum beberapa massa yang karakteristik dari senyawa. IS CI (metana) 340 (MH+) Fentanil EI 245. metilester EI 294. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. CI=“Chemical ionization” (ionisasi kimia). pentobarbital. Tabel 10. heptafluorobutirat.6. 164 242 Sikloheksanol. 159 PCP. 4-fenil 4. Spektrum karakteristik pencilidin seperti dilihat pada tabel 10. EI deuterasi.F. heptafluorobutirat. heptafluorobutirat. IS=“internal standard “(baku dalam) Dikutif dari: Huizer. G. IS CI (metana) 243..7. 316 EI =“elektron impact”(tumbukan elektron). pentobarbital. (1991). (1991). 246. H. 282. 189. fentanil. CI=“Chemical ionisation” (ionisasi kimia). deuterasi. Kepustakaan: 124 Aplikasi spektrosfotometri massa dalam analisis Toksikologi . heptafluorobutirat CI (metana) 245 1-(1-fenilsikloheksil}morfolin. IS EI 373. deuterasi. trimetilsilil. 192. 235 (20%) Metaqualon CI (metana atau isobutana) 251 (MH+) Pentobarbiton EI 156 Pentobarbiton. 159 5-{N-(1’fenilsikloheksil) amino} asam pentanoat. 254. IS EI 304 5-{N-(1’fenilsikloheksil) amino} asam pentanoat.

.. A. et all. (Ed). Skoog.A. The Pharmaceutical Press. Principles of Instrumental Analysis.. 3.1. Second Ed. Chichester. D. John Wiley & Sons. J. The Analysis of Drugs of Abuse.. Clark’s Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals. H.. Harcourt Brace Publisher. 6. 1991. Gogh. T.. London. Practical Organic Mass Spectrometry. 5. H. Body Fluids..C. Wadsbuorth Publishing Company. 1989. Instrumental Methods of Analysis. John Wiley & Sons. Chapman. CRC Press Inc... Leary. The use of mass spectrometry for the detection and quantitation of abused drugs. Analysis of Drugs in Biological Fluid.H. New York..J. 4 th Ed. Chamberlain.. California Aplikasi spektrosfotometri massa dalam analisis Toksikologi 124 . 1986. A. 1992. et all.. 1985. 4. J..R. Willard. and PostMortem Material. J. Boca Raton 2. Moffat. Huizer. 1985.

1300-650 cm-1 (7. C=N. absopsi atau lemah-kuanya absopsi pada frekwensi yang spesifik sesuai dengan vibrasional dari gugus fungsi yang terikat pada molekul tersebut.00 µm).03 µm) C-H aromatik dan ikatan tak jenuh muncul pada 3000-3100 cm-1 (3. Sehingga interpretasi dari Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi . C=C. Pendahuluan Rentang panjang gelombang spektrum elektromagnetik inframerah (IR) adalah dari 0.00-6. dengan unsur bermassa atom 19 atau kurang. Dengan pengalaman yang tinggi dan berbagai data empirik dapat membedakan pita antara C=O. Kebanyakan instrumen spektrometri IR beroperasi pada daerah IR tengah. Dari spektrum IR dapat melakukan analisis kualitatif dan kuantitatif terhadap suatu molekul.dan IR jauh (400-20 Cm-1).00-6. Spektroskopi IR adalah salah satu instrumen yang sangat berguna bagi kimia suatu langkah awal dalam mengelusidasi struktur suatu molekul. Daerah gugus fungsi dapat dibagi lagi dengan interval 4000-2500 cm1 (2. Absorpsi/serapan diberikan oleh vibrasi dua atom dari molekul tersebut. Rentang frekwensi intermediet 2500-1540 cm-1 (4. seperti contoh C= C-H muncul sekitar 3300 cm-1 (3. absorpsi diberikan oleh vibrasi stretching hidrogen dari gugus fungsi yang karakteristik. Ikatan rangkap tiga muncul dari 2500-2000 cm-1 (4. biasanya disebut dengan daerah tak jenuh.69 µm) dan daerah sidik jari. IR tengah (4000-400 cm1).00-5. 2. setiap ikatan mempunyai frekuensi rentangan/stretching dan binding yang karakteristik dan dapat menyerap energi radiasi pada frekwensi tersebut.8 sampai 500 µm (12. Spektrum IR dapat dibagi menjadi 3 daerah: IR dekat (12. Identifikasi kimia dapat diperoleh dari vibrasi gugus fungsi/pita absorpsi gugus fungsi yang spesifik dari senyawa tersebut. 11.38 µm) pada daerah gugus fungsi.49 µm). bilangan gelombang serapan tergantung pada gugus fungsi yang memberikan absopsi dan telah diperiksa oelh keseluruhan molekul.50-4. Hubungan spektra IR dengan struktur molekul Untuk analisis kualitatif salah satu yang paling berarti pada spektrum IR dari suatu senyawa adalah posisi pita-pita absopsi gugus fungsi spesifik. Intensitas penyerapan vibrasi IR adalah sebanding dnegan momen dipolnya. dan absorpsi dari senyawa tersebut adalah karakteristik terhadap gugus fungsi dan struktur dari senyawa tersebut.38 µm) diberikan oleh frekwensi stretching ikatan tunggal dan vibrasi-vibrasi ikatan yang melibatkan gerakan ikatan gugus fungsi pada 73 11. Karena pada kuliah penetapan struktur molekul telah secara jelas dibahas sehingga pada bab ini dibahas secara umum.00 µm).50-7. Daerah sidik jari (1300-650 cm-1) (7.500-20 cm-1).44 µm). Frekwensi ikatan rangkap dua muncul antara 2000-1540 cm-1 (5. Pada suhu biasa (tertentu) molekul-molekul organik dalam keadaan vibrasi yang tetap.69-15. N=O.BAB XI APLIKASI SPEKTROSFOTOMETRI INFRA MERAH DALAM ANALISIS TOKSIKOLOGI suatu spektrum IR adalah mungkin untuk menentukan ada atau tidaknya gugus fungsi tertentu yang terikat pada molekul tersebut. dan S=O. 1. Momen dipol pada molekul hanya diberikanoleh vibrasi yang asimetrik ditimbulkan oleh eksitasi vibrasional. Daerah ini dibagi menjadi dua bagian besar yaitu daerah gugus fungsi (4000-1300 cm-1) (2. Semua senyawa organik mengabsorpsi radiasi IR. Daerah IR tengah adalah dasar yang sangat berguna dan sering digunakan untuk analisis kualitatif suatu molekul.Dari suatu data spektrum IR dapat mengestimasikan dugaan senyawa/gugus fungsi yang dapat melakukan identifikasi dengan membandingkan dengan data pustaka.23 µm). Frekwensi stretching dari -C-H sangat berguna untuk menetapkan jenis senyawa yang terdapat dalam sampel.500-4000 cm-1).33-3. Penyerapan radiasi IR oleh molekul akan menyebabkan eksitasi vibrasional yang akan mengakibatkan perubahan momen dipol pada molekul tersebut. dan alifatik pada 3000-3800 cm-1 (3.69-15.33-3.57 µm).

intensitas dengan Mickelson sangat banyak digunakan yang menurunkan sensitivitas. Untuk mengkalibrasi pembagi sinar “beam spliter”.molekulnya. tetapi secara kolektif pitapita serapan digunakan untuk identifikasi suatu material atau bahan senyawa. Pada keseluruhan alat spektrometer dispersive terdapat 5 bagian: sumber radiasi. sinar cahaya IR berkontak pada sampel karena penempatan sampel yang dengan pembagi sinar (B). Instrumen dispersive menggunakan prisma atau kisi untuk mendispersikan radiasi polikromatis.2. sehingga b. Interferometer meningkatkan resolusinya. radiasi dari polistirene biasa digunakan untuk sumber radiasi IR (A).1. dan ketepatan yang rendah. tersebut akan dipantulkan oleh cermin-cermin tersebut dan akan digabungkan oleh pembagi 74 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi . diteruskan menuju mengkalibrasi spektrum IR. Gambar 11. Tidak adanya terdiri dari cermin permanen dan bergerak dan reference internal. Lamanya waktu skening sekitar 15 Spektrometer FTIR menggunkan interferometer menit atau lebih untuk mendapatkan spektrum yang menganalisa informasi frekwensi dan resolusi yang tinggi. kisi atau monokromator. fotometer. Spektrometer non dispersive menggunakan filter interferensi. Pada saat menuju dispersive kemungkinan terjadadi efek panas interferometer. 11.Skematik sistem optik spektrometer IR dispersive double beam Masalah-masalah di atas telah dipecahkan oleh Terdapat beberapa kendala yang berhubungan FTIR modern. sumber lampu laser “tunable laser” atau interferometer yang sangat populer dalam spektrometri fourier transfer inframerah (FTIR) a. seperti kecepatan skening. sensitivitas. Sekitar terkadang menimbulkan masalah karena 50% cahaya dari pembagi cahaya diteruskan detektor merekam emisi radiasi IR dari sampel menuju cermin permanen (C) dan 50% yang sering terjadi kesalahan pembacaan serapan dipentulkan dari pembagi cahaya diteruskan oelh detektor yang diakibatkan oleh hamburan menuju cermin bergerak (D). karena spektrometer IR intensitas dengan merubah frekwensi IR menggunakan celah “slits” untuk menjadi auto frekwensi. Berkas cahaya radiasi yang dihasilkan oleh sistem optik. Spektrometer FTIR kegagalan sering diakibatkan oleh kegagalan mekanik. 3. Spektrum berikut. Dalam gambar 11. Cara kerja ketepatan frekwensi dan selalu dibutuhkan interferometer Mickelson digambarkan sebagai kalibrasi dengan spektrum reference. dengan spektrometer IR dispersive. Pada spektrometer interferometer. ruang sample. kisi. Dalam spektrometer ini terdapat banyak alat yang bergerak-gerak. Multiplisitas dari spektrum sangat penting untuk meyakinkan identifikasi dari masing-masing pita. hal ini berkas sinar dengan energi yang sama. yang membagi berdekatan dengan sumber radiasi. Spektrometer Inframerah Dispersive Disebut spektrometer dispersive karena spektrometer ini mendispersikan radiasi elektromagnetik inframerah menjadi berbagai frekwensi menggunakan alat pendifraksi seperti prisma. Instrumen IR instrumen dibagi menjadi 2 kelompok: dispersive dan non dispersive. dan detektor.

Rangkuman perbedaan IR dispersive dengan FTIR Dispesive IR FTIR .Terjadi perubahan resolusi dengan berubahnya .cahaya.Diperlukan berkas cahaya yang tinggi .Secara mekanik sederhana (hanya satu bagian yang bergerak . rentang spektra.Kecepatan scaning rendah . 4.Sampel jauh dengan sumber cahaya IR . Di dalam prakteknya sampel-sampel yang datang di Laboratorium Forensik umumnya dalam bentuk campuran dan tidak murni sehingga diperlukan pemurnian. Senyawa yang hendak dianalisa sedikitnya memiliki tingkat kemurnian 95% untuk meminimalkan spektra pengganggu dari pengotor. Cara-cara penanganan sampel 73 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi .Mungkin terjadi hamburan cahaya . Detektor mengukur frekwensi dan intensitas dalam kawasan audio.He-Ne-laser digunakan sebagai reference internal .2. Akhirnya berkas cahaya hasil interferensi ini diterukan menuju sampel sehingga akan terjadi absorpsi selektif oleh sampel.Tidak membutuhkan kalibrasi .Sensitivitas rendah . sebelum dilakukan analisis. senyawa yang diidentifikasi harus relatif murni dan jumlahnya harus cukup untuk menyerap radiasi dan mendeteksi radiasi yang diserap. Teknik pemurnian atau pemisahan yang tepat tergantung pada jenis sampel. 11. Teknik Sampling pda IR Pada penggunaan spektra IR.Digunakan berkas cahaya yang sedikit .1.Tidak terdapat referen internal . Skematik diagram spektrometer FTIR Tabel 11.Sampel dekat dengan sumber cahaya IR . Dispersive IR membutuhkan sampel 1 mg sedangkan FTIR dapat mendeteksi hingga nanogram.Diperlukan kalibrasi dengan suatu reference . Gambar 11.Hamburan cahaya tidak menggunakan detektor . Total interferensi yang terjadi tergantung dari posisi relatif cermin bergerak terhadap cincin permanen. konsentrasi analit dan demikian juga jenis pengotor yang terdapat.Sensitivitas tinggi .Kecepatan scaning tinggi .Resolusi konstan dari semua rentang spektra. berkas cahaya akan diteruskan menuju detektor.Banyak yang bergerak .Emisi radiasi sampel akan terukur oleh detektor .Emisi radiasi oleh sampel tidak termodulasi sehingga tidak terukur oleh detektor .

dan spektrum IR biasanya akan menunjukkan efek dari perbedaan-perbedaan ini dalam bentuk pergeseran frekwensi atau pita-pita tambahan dan sebagainya. Padatan juga dapat ditentukan dalam larutan tetapi spektra larutanmngkin memberikan kenampakan yang ebrbeda dari spektra bentuk padat. Bermacam-macam metoda telah dikembangkan untuk penyediaan cuplikan padat hingga dapat langsung diukur. diffusi reflektan. Beberapa teknik ini adalah sangat baru tetapi telah banyak dikenal dikalangan analisis forensik. NaCl harus dijaga tetap kering dan selalu dipegang pada ujung-ujungnya. Cuplikan cairan dapat juga ditentukan dalam larutan. maka cuplikan harus dimasukkan dalam sel gas. Teknik sampling yang lain Dalam beberapa tahun terakhir telah berkembang teknik sampling yang lain. Teknik sampling tradisional a. a. cairan atau padatan. atau pasta.1. bahkan dalam sel-sel yang dipanaskan. sehingga serapan dari pelarut dapat dikensel dan spektrum yang dicatat merupakan senyawanya sendiri. Ada tiga cara yang umum untuk mencatat spektra bentuk padatan: pelet KBr. karena gaya-gaya intermolekul akan berubah. kristal. dan spektrum dari larutan ini dicatat. maka digunkan CSl. 11. Metode ini termasuk spekular reflektan. beberapa dari teknik tersebut telah diterapkan dalam kimia forensik. Cuplikan dapat dilarutkan dalam pelarut seperti karbontetraklorida. serbuk. KBr harus kering dan akan baik bila penumbukan dilakukan di bawah lampu inframerah untuk mencegah terjadinya kondensasi uap dari atmosfer yang akan memberikan serapan lebar pada 3500cm-1.1-2. Mull. Larutan (biasanya 1-5%) ditempatkan dalam sel larutan yang terdiri dari bahan transaparan. Lapisan tipis padatan dapat dilapiskan pada kepingan NaCl dengan cara meneteskan larutan dalam pelarut yang mudah menguap pada permukaan kepingan NaCl dan dibiarkan hingga pelarut menguap. gel. Meskipun demikian untuk meyakinkan bahwa serapan dari pelarut tidak mengganggu spektrum dari cuplikan. Gas Untuk menangani cuplikan berbentuk gas. untuk cuplikan yang mengandung air dapat digunkan CaF2. mull. pasta kemudian dilapiskan di antara dua keping NaCl yang transparan. tetapi hal ini tidak pernah ada dan struktur yang dihasilkan selalu menunjukkan serapan yang berasal dari bahan pasta yang super impos dengan cuplikan yang sering digunakan sebagai bahan pasta adalah parafin cair (nujol). karbon disulfida atau kloroform. Bahan pasta harus transparan terhadap inframerah. Oleh sebab itu penting mencatat spektrum dengan caracara penanganan yang sesuai. Plimer-polimer berbagai lilin atau behan-bahan lemak sering memberikan hasil yang baik. dan fotoaqoustik detektion. Padatan Wujud cuplikan padat dapat bermacam-macam di antaranya. dan sebagainya. Spekular reflektan (pemantulan spekular) 76 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi .4. sel ini menghadap langsung pada berkas sinar.2. Sejumlah kecil senyawa-senyawa organik dapat ditentukan dalam bentuk gas. Cairan Cara yang paling mudah dalam penanganan cuplikan bentuk cairan adalah menempatkan cuplikan tersebut sebagai film yang tipis di antara dua lapis NaCl yang transparan terhadap inframerah. dibuat dengan mencampur cuplikan dengan setetes minyak. cermin internal yang digunakan dapat memantulkan berkas sinar berulang kali melalui cuplikan untuk menaikkan sensitivitas. b. amorf. Pelet KBr dibuat dengan menumbuk cuplikan (0. maka sebaiknya perlu dibuat spektrum dari pelarut yang digunkan untuk mengetahui serapanserapan yang diberikan. Sel yang kedua berisi pelarut murni ditempatkan pada berkas sinar referensi.tergantung daripada jenis sampel yaitu apakah terbentuk gas. dan lain-lain. Untuk spektra di bawah 250 cm-1.0% berat) dengan KBr kemudian ditekan hingga diperoleh pelet. kloroform. Karena digunakan NaCl maka setelah selesai segera dibersihkan dengan mencuci menggunkan pelarut-pelarut seperti toluena. total attenuasi reflektan. cairan atau padatan. 11. c. dan bentuk film / lapisan tipis. tetapi ada juga yang membentuk kristal yang tajam hingga tidak memberikan serapan. Gaya-gaya intermolekul sangat berbeda antara gas.4. Dalam bentuk yang dimodifikasi. Larutan.

d.2 Keuntungan utama difusi reflektan dibandingkan dengan spekular reflektan adalah spektrum yang diperoleh analog dengan spektrum IR secara tradisional.Spekular reflektan adalan suatu teknik di mana spketrum diperoleh dari pemantulan radiasi IR pada permukaan sampel. Cawan sampel ditempatkan dalam aksesories atau sampel dipekatkan pada bubuk kalium bromida dengan melarutkan sampel dalam kloroform kemudian dicampur dengan KBr. GC-FTIR Pemisahan sampel untuk kromatografi gas memungkinkan mendapatkan senyawa murni. Sekarang ini. Prosedur penyerapan sampel adalah sampel dicampur dengan logam alkali halida kemudian ditempatkan pada cawan sampel. Kelemahan utamanya adalah waktu yang lama diperlukan untuk menghasilkan spektrum dan aksesorisnya sangat mahal. Aksesoris ini dapat digunkan pada spekrometer dispersive atau FT-IR. Radiasi yang dipantulkan dikumpulkan oleh cermin kolimator. Diagram aksesoris difusi reflektan dari “spectra-tech” dapat dilihat pada gambar 11. Pada awalnya teknik adalah aliran terperangkap dalam suatu kopolimer tembus sinar IR. dikatakan kimia forensik telah mengenal kombinasi GC-FTIRMS. GC-FTIR juga dikombinasikan dengan MS. Diameter spektroskopi FT-IRanalisis termografimetrik (TGA-FTIR) dan FT-IR mikrospektroskopi juga digunakan untuk analisis obat. Radiasi dikumpulkan pada sudut yang sama dengan sudut datang. Teknik ini sangat jarang digunkan pada kimia forensik kimia obat karena memerlukan jumlah sampel yang besar. Telah dilaporkan jumlah sampel minimum yang dapat dianalisis adalah 20 µg masih memberikan spektr yang bagus. juga kromatografi cair superkritis. dan KLT. Panas terlokalisasi dihasilkan oelh penyerapan radiasi oleh sampel ditransfer dari permukaan sampel menuju atmosfer gas di atas permukaan sampel. Puncakpuncak serapan pemantulan spekular mungkin memberikan geseran menuju frekwensi yang lebih tinggi daripada spektrum absorpsi. Sehingga sinar IR langsung melewati aliran efluen. Diameter dari semua penggabungan ini spektroskopi IR berfungsi sebagai detektor. Suatu interferogram dibangkitkan yang ditransformasikan dan dirasiokan terhadap panas jenuh suatu bahan (karbon hitam). Hasilnya adalah spektrum fotoacoustik dari sampel. Untuk spektroskopi IR berbagai sistem kombinasi telah dikembangkan. Sistem “cryolect” dari Mattsun dan sistem 77 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi . Pada tahun terakhir ini. Perpindahan panas dari gas diukur melalui variasi tekanan yang dideteksi sebagai suara oleh mikroption bersensitivitaas tinggi. “Attenuated Total Reflectance” Teknik “attenuated total reflectance” (ATR) sama seperti spekular reflektan dan difusi reflektan. Perkembangan berikutnya sinar IR dilewatkan langsung pada kolom kapiler tembus sinar. a. Keuntungan dari metode ini adalah sangat sedikit atau tanpa pra perlakuan seperti penyerapan sampel pelarutan. b. 5. kemuidan kloroform diuapkan sehingga hampir semua sampel teradsorpsi pada permukaan bubuk KBr. Berbagai Teknik Yang Dikombinasikan Dengan Spektroskopi IR Dalam beberapa tahun terakhir ini banyak instrumen lain digabungkan dengan spektroskopi IR seperi GC. HPLC. Sinar IR dapat langsung menganalisa puncak-puncak analit yang terpisahkan oleh GC. Teknik ini sangat sukar untuk memilih puncak-puncak analit yang telah dipisahkan oleh GC. Difusi reflektan Difusi reflektan dan spektrometri FTIR difusi reflektan hampir mirif dengan spekular reflektan tetapi difusi reflektan memantulkan radiasi yang berpenetrasi ke dalam sampel. c. Secara komersial terdapat aksesoris dengan sudut pantul yang tetap atau ebrubah-ubah. Teknik ini biasa digunakan untuk merekam spektrum IR dengan bahan yang tidak transparan. Spektroskopi fotoacoustik Dasar kerja dari spektrokopi fotoacoustik adalah penyearpan cahaya IR yang termodulasi dalam sampel. 11. Teknik ini diterapkan untuk merekam spektrum IR dari suatu senyawa terdeposisi pada cermin. Sampel dianalisis secara langsung atau dengan mendispersikan pada bahan tan-erap (nonabsorbing).1 dan 11.

Teknik penguapan eluen sebelum dianalisis adalah paling baik. spektrum IR dari suatu senyawa diukur pada pelat KLT yang telah terpisah atau secara manual dikerok kemudian diukur transmitan atau difusi reflektornya. Analisis gugus fungsi didasarkan atas pita-pita serapan yang muncul pada daerah gugus fungsi dan sidik jari. Spektroskopi mikrospektroskopi FTIR Teknik mikrospektroskopi FTIR dapat digunakan untuk identifikasi obat. namun akan memerlukan lebih banyak waktu dan susah untuk diautomisasi. Lebih banyak sampel dapat dianalisis oelh HPLC. Secara umum kapasitas kolom HPLC lebih besar dari GC. Serbuk IR transparan berasal dari gelas . Dari pita-pita tersebut dapat diperoleh informasi gugus fungsi yang mungkin terdapat pada spektrum tersebut. Analit pada alat KLT dipisahkan dari plat melalui aliran pengembang pada sumbu stenless sampai analit terkonsentrasi pada serbuk IR transparan dalam cawan difusi reflektan. tekstur dan morfologinya. Metode pemindahan ini dapat meminimalkan kehilangan. c. Metode absorpsi lainnya adalah deteksi “flow-cell” aliran terjadi yaitu aliran ditentukan pada saat scaning IR. Setelah analit terkonsentrasi pada cawan difusi reflektan. d. serat. sampel dipindahkan ke serbuk IR-transparan kemudian diukur spektrum IRnya. Melalui mikroskop ini pemisahan / pemilihan kristal dapat dilakukan. Pada prosedur ini pelarut dihilangkan dengan memanaskan cawan sehingga pelarut menyerap sempurna.germanium . diukur spektrum IRnya. dekomposis sampel atau terjadi kontaminasi oelh senyawa pengotor selama proses pemisahan. sehingga lebih banyak sampel dapat dianalisis oleh IR spektroskopi. Deteksi IR dari eluen kromatografi cair dilengkapi dengan alat yang dapat menguapkan pelarut sebelum deteksi IR atau deteksi langsung pada lairan kolom. Alat ini dilengkapi pemutar plat 90o dan menggunakan sumbu stenslesstill.6. Kromatografi lapis tipis-FTIR Teknik ini adalah “chromalect TLC-FTIR” sistem ini dikembangkan oleh Anabect. Sistem “chromalect” adalah sampel yang telah terpisahkan oelh KLT. Sinar IR kemudian difokuskan pada satu kristal tersebut. Permasalahan timbul banyak kristal obat mengalami polimorfisme seperti senyawa-senyawa barbiturat dan amfetamin. Awal dari instrumen ini. Serbuk obat dapat diukur dengan mudah di bawah mikroskop. Beberapa perbedaan / geseran pita-pita pada spektrum dari suatu 78 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi . Di bawah sinar-sinar mikroskop berbagai komponen kristal di dalam sampel dapat dapat dipisahkan melalui bentuk kristal.tracer dari bijilab dapat mengkombinasikan GCFTIR dengan MS akhirnya. Kromatografi cair -FTIR Salah satu keuntungan HPLC dan GC adalah sistem tidak terjadi perusakan / destruksi analit dalam efluen. Masalah ini dapat diatasi dengan memindahkan fokus sinar IR pada ujung atau bagian tertipis dari kristal tersebut. Penerjemahan Spektrum IR Terdapat dua prinsip dasar untuk menentukan identitas suatu senyawa dengan spektroskopi IR adalah melakukan analisis gugus fungsi dan secara langsung membandingkan dengan spektrum senyawa yang sudah diketahui.selenium. Plat KLT kemudian dikeringkan atau diikatkan dengan alat untuk memindahkan sampel ke dalam suatu cawan difusi reflektan yang mengandung bubuk khusus untuk pengukuran IR. 11. Dengan sistem ini memungkin-kan mendapat informasi yang akurat dalam uji skrining dan konfirmasi karena dari IR dan MS dapat melakukan elusidasi struktur suatu senyawa atau dengan perbandingan dengan data “Library”. Jika kristal tersebut terlalu tebal maka spektrum IR yang diperoleh sangat kasar/ ditutupi oleh pitapita yang lebar. Alat ini bekerja secara otomatis. seperti kromatogram dua dimensi.antimony . Sinar IR difokuskan pada sampel untuk memperoleh spektrum IRnya. Pemisahan pada KLT dilakukan secara konvensional. Deteksi langsung pada aliran menggunkan “flow-cell detection” HPLC-FTIR sering menimbulkan 2 masalah adalah gangguan absorpsi oelh pelarut dan terjadi interaksi antara analit (solut) dengan pelarut sehingga mengakibatkan geseran pita absorpsi. Penafsiran gugus fungsi secara umum telah dijelaskan sebelumnya. b. Setelah gugus fungsi suatu spektrum / analit dapat dikenali langkah berikutnya membandingkan dengan spektrum senyawa yang sudah diketahui. dan cat.

ITB. 963. The Pharmaceutical Press. S. 752. Willard. 1986.Metilendioksiamfetamin.J.C. 561. 1365. 709 Alprazolam 1611. 7. Spektrum IR obat-obatan yang sering disalahgunakan Pada tabel 11.J. Second Ed. 822. Ringkasan spektra utama beberapa obat yang umum Bilangan gelombang (cm-1) Kokain 1728. 226-281. 752. Sriewoelan. Goush. 702 Metamfetamin 1491. California Senyawa Narkotika : Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi 79 . and PostMortem Material. gain. 1484. 1985. 1991. CRC Press Inc. 842. Seperti pada MS kebanyakan instrumen FTIR dilengkapi dengan program manipulasi database yang dapat membantu dalam analisis atau penerjemahan spektrum suatu analit. 1992. 964 Hlusinogen: MDA 1485. “The Analysis of Drug of Abuse. 1443. Liberty. 1988. noise.. Perbedaan atau geseran pita-pita oleh suatu alat diakibatkan oleh resolusi. D. Leary. 4 th Ed.. Database spektra IR juga dilengkapi data kepustakaan yang memuat semua informasi spektrum IR. Instrumental Methods of Analysis.A.H. H. et all. 504 (beberapa barbiturat yang serupa) Diazepan 1681. 1069 Diamorfin-HCl 1753. Mills. Yogyakarta. Chiehester.2. 1435.4. 1484.4. 1230 Hidromorfon 1717. T. 759. Bandung. 702 Fendimetrazin 1449. 1443. 7. 885. 759... 11. London. A.. J. respon. Chamberlain. Body Fluids.A. MDMA = 3. “Aplications of infrared spectroscopy in drug analysis”.2. 1111. III. 1989. Wadsbuorth Publishing Company. Spektroskopi Inframerah. 729 Kodein 1499.senyawa dapat diakibatkan oleh alat yang berbeda atau metode penyiapan sampel yang berbeda. 1034 MDMA sama dengan MDA Fensiklidin 1442. 498. John Wileys sons Ltd. 1456. Skoog. Hardjono Sastrohamidjojo. 702 Keterangan: MDA = 3.. 702 Fenmetrazin 1491. 3. et all. 5. 1264..Metilendioksimetilamfetamin Kepustakaan 1. 406 fenobarbiton 1350. Harcourt Brace Publisher. 1253. 695 Stimulan: Amfetamin 1512. 1104. 6. And G. Fontis. Principles of Instrumental Analysis. terdapat ringkasan puncak pita-pita dari senyawa obat yang sering disalahgunakan dan sering dianalisis oleh Laboratorium Kimia forensik. 1393. 1027. Untuk mengatasi dapat dilakukan pengukuran pembanding dengan alat resolusi yang sama. 1267. 1992. New York. Boca Raton 2. Clark’s Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals. 1732. 737. Tabel 11. Analisis Obat Dalam Cairan Biologi.. 702 (beberapa amfetamin yang karakteristik) Depresan: Amilobarbiton 1428. 1308. 1449. 4. dan berbagai faktor yang lain... Analysis of Drugs in Biological Fluid. J. (Ed). Moffat.

pada Bidang Ilmu Kimia Forensik 1997 .. Pasraman Udayana.1997 : Magister Program di Jurusan Farmasi Institut Teknologi Bandung 2000 . 2001 2. Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi Nama 73 .Institute of Forensic Sciences and Criminology – Udayana University – Denpasar – Bali. “Rechnerische Simulation der Pharmakokinetik der Opiate im menschlichen Körper zur Unterscheidung einer Codeinaufnahme von einem Straßenheroinkonsum” Oral Presentation in 82th International Conference of German Legal Medicine Society in Münster. Oral Presentation in 81th International Conference of German Legal Medicine Society in Rostock.Institut Kedokteran Forensik -Universitas Georg-August.1999 : Kepala Laboratorium Kimia Forensik-Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana 2000 – 2004 : Staf Peneliti di Laboratorium Toksikologi – Forensik . Die Entwicklung der Drogenproblematik in Indonesien und Deutschland am Beispiel der BTM-Befunde der forensischen Institute in Denpasar und Göttingen.1993 : Apoteker di Jurusan Farmasi Institut Teknologi Bandung 1995 .2004 : Doktor Program di Institute Farmasi-Universitas Hamburg -German dan di Institute Kedokteran Forensik – Universitas Georg-August Goettingen . Apoteker Kantor : . I Made Agus Gelgel Wirasita. 2003 4. M.Department of Pharmacy – Faculty Mathematic and Basic Sciences Udayana University Email : mgelgel1@yahoo. Jimbaran – Bali Riwayat Pendidikan: 1987 .Bibliografi Penulis : Dr. 2002 3.Si.rer. Indonesian . Poster presentation 80th International Conference of German Legal Medicine Society in Interlaken. “Möglichkeiten und Grenzen der Befundinterpretation“. German 2005 – sekarang : Staf Dosen Jurusan Farmasi-FMIPA-Universitas Udayana 2005 – sekarang : Ketua Pelakasana Harian Lembaga Forensik Sains dan Kriminologi Universitas Udayana 2005 – sekarang : Staf peneliti Bidang Toksikologi Forensik. Bidang-Kajian Ilmu Toksikologi Forensik – Lembaga Forensik Sains dan Kriminologi Universitas Udayana 2008 – sekarang : Ketua Jurusan Farmasi – FMIPA-Universitas Udayana Presentasion: 1.1992 : Sarjana Farmasi di Jurusan Farmasi Institut Teknologi Bandung 1992 .German Pengalaman Kerja: 1994 . Möglichkeiten und Grenzen der rechnerischen Simulation der Pharmakokinetik des Heroins im menschlichen Körper“. Germany. Switzerland.nat.2005 : Staf Dosen Jurusan Kimia-FMIPA Universitas Udayana.de Telp : 0361-7952455 081337742733 Residence : Jl Udayana Lodge. Germany. Blok E-52. Gettingen.

2004 6. administration of heroin. 25-29th.A. Analisis Toksikologi Klinik: Tantangan Baru Bagi Farmasis Indonesia Acta Pharmaceutica Indonesia. Indonesian Journal of Legal and Forensic Sciences 2008. “Study of the morphine’s and codeine’s pharmacokinetics after illicit heroin consumption”. Clinical toxicological analysis: New Challenge for Indonesian pharmacist. by the 14th Congers of Indonesian Pharmacists Association. 2005 8. Juni 16-19th. Denpasar. 24-25 Mei 2008 15. on Second National Workshop on forensic Toxicology. (Ed.G. Codeins. oral presentation. Kuta. Dasar-dasar kromatografi lapis tipis dan pemilihan eluen dalam uji skrining dan Konfirmasi. Pemaknaan Hasil Analisis Laboratorium Pemeriksaan Narkoba Dalam Rangka Proses Penegakan Hukum. Aspek-aspek teknis yang perlu diperhatikan dalam pemeriksaan skringing dan konfirmasi NAPZA dalam rangka peningkatan mutu pemeriksaan NAPZA. 17-18th. “Rekonstruktion der individuellen Pharmakokinetik des Morphins..A. Wirasuta. Oral Presenter.A. Oral Presenter. by Kongres ilmiah XIV Ikatan Sarjana Farmasi Indonesia. (2005) “Peran Toksikologi forensik dalam penegakan hukum kesehatan di Indonesia” dalam Wirasuta. Analitical Forensic toxicology and Interpretation of analytical Result. 2007 13. Einbeitrag zur Verbesserung der Opiatbefundinterpretation“. 2008 Publication 1.G. 2007 12. Pharmacokinetic simulation of the time course of the ratio morphine glucuronides to morphine after i. I M. Pelatihan Peningkatan Kemampuan Teknis Pemeriksaan NAPZA di Surabaya. Cuvillier Verlag. Pemanfaatan TLC dalam Drugs Screening Tinjauan keungguan dan kelemahan dibandingkan dengan teknik immonoassay. at National Workshop on Forensic Toxicology. (2004) “Untersuchung zur Metabolisierung und Ausscheidung von Heroin im menschlichen Körper. 2nd. 2005 9. I M.A.v. Göttingen 2. 5962 Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi 74 . Jakarta December. Drugs profiling as tool for identify the origin of drugs. Kuta.16 Sep. Lokakarya Peran Laboratorium Pemeriksaan Narkoba dalam Proses Penegakan Hukum. dan K Suardemana (2007). “Peran kedokteran forensik dalam penegakan hukum di Indonesia. “Hambatan-hambatan dalam penegakan hukum (undang-undang no 22 th 1997 tentang narkotika ) bagi penyalahgunaan golongan opiat berdasarkan sifat-sifat farmakokinetiknya” . oleh oleh Direktorat Jendral Bina Pelayanan Penunjang Medik. Poster presentation in 3rd Indonesian Biotechnology Conference. oral presenter by Regional Conference of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. (2008). Penerbit Udayana. oral presenter. Oral Presentation in 83th International Conference of German Legal Medicine Society in Göttingen.) (2005). I M. BPOM. Germany. Indonesia. Oral Presenter. dalam Rapat Konsultasi Pemantapan Mutu Eksternal Laboratorium Kesehatan 2008 di Denpasar oleh Direktorat Jendral Bina Pelayanan Penunjang Medik. Jakarta. No: 2. Jakarta. I M. May. 31st – August. on Second National Workshop on forensic Toxicology. Bandung. 16-19 Juni 2005 2004 10. 1(1):47-55 4.G. 2004 7. Wirasuta. Denpasar 3. Wirasuta.. BNN.G. 22-24th. Denpasar. 15 . Vol 32.G. May. 2007. et al. 2005 11. Indonesia.5. BPOM. August. July. 22-24th. Analisis Toksikologi Forensik Dan Interpretasi Temuan Analisis.. I M. Jakarta.A. 2008 14. Tantangan dan tuntuan di masa depan”. Wirasuta. BPOM. und deren Glucuronide nach Strassenheroinkonsum”.

rer. didanai oleh HIBAH UDAYANA 2008 2. I Made Agus Gelgel Wirasuta.Research on going 1. M.nat. Analisis Kharakteristik Kandungan Kannabinoida Daun Ganja Yang Tumbuh Di Indonesia. Analisis Opiat dalam Urin dan Darah dengan TLC/HPTLC-Densitometrik Jimbaran. Juli 2008 Hormat Penelitia Dr.Si. DANA DIPA UDAYANA 3. Apotheker Aplikasi spektrosfotometri IR dalam analisis Toksikologi 75 . Pemanfaatan Teknik High Performace Thin Layer Chromatography (HPTLC)Spektrofotodensitometri Untuk Analisis Kharakteristik Kimia „Drugs Profiling“ Narkoba..