I.

INTRODUCCION

La caa de azcar (Saccharum officinarum L) es exprimida para obtener su jugo que despus de ser purificado y neutralizado, deja cristalizar el azcar. Considerando la importancia que representa la caa de azcar para la industria azucarera, se hace necesario incrementar el contenido de sacarosa libre de dextrana (destruccin de sacarosa causada por la accin de microorganismos acompaantes de la caa, siendo uno de los ms importantes Leuconostoc mesenteroides). En este trabajo de investigacin se determin la inhibicin de la bacteria cido-lctica L mesenteroides aislada en un ingenio azucarero del Valle del Cauca mediante la utilizacin de microorganismos antagonistas. La prdida de sacarosa y la formacin de dextrana estn asociadas con el deterioro de la caa de azcar. El azcar producido con caa deteriorada contiene un alto contenido de dextranas y no rene las condiciones de aceptabilidad para su empleo como materia prima en la elaboracin de algunos alimentos. Durante aos este ha sido un problema que la industria azucarera ha enfrentado, convirtindose en un reto para el mejoramiento de la calidad y produccin del azcar. Las caractersticas fsicas y qumicas del jugo de caa de azcar hacen de ste un excelente sustrato para el desarrollo de microorganismos. Uno de estos microorganismos es Leuconostoc mesenteroides el cual degrada la sacarosa presente en el jugo y forma de incorporar al mismo tiempo, metabolitos como el cido lctico, actico, etanol, manitol y polisacridos como dextranas y lvanos. Ciertas especies del gnero Leuconostoc pueden ser particularmente perjudiciales en un Ingenio azucarero, desarrollndose en ciertas etapas del proceso tecnolgico propio de este tipo de empresa, provocando grandes prdidas de sacarosa y por lo tanto reduciendo la productividad con el perjuicio econmico que esto conlleva. En la caa de azcar es posible encontrar una amplia diversidad microbiana, siendo comunes las bacterias productoras de acido lctico a partir de la fermentacin de la sacarosa, tambin llamadas bacterias acido-lcticas. Dentro de este grupo, los gneros mas comnmente encontrados son: Leuconostoc, Lactobacillus y Peiococcus, los cuales pueden encontrarse en la superficie de las tinas (clarificador) donde cae la melaza o costra de sacarosa o por el contrario venir inmersas en el jugo de caa despus de la molienda, suministrando un medio de crecimiento ideal para algunas de estas bacterias presentes en el material. Leuconostoc sp, es responsable de una disminucin significativa en la produccin de azcar y etanol debido a los procesos de fermentacin de la sacarosa, presentndose perdidas cercanas al 20% del total producido (Incauca S.A., com.pers.).

El mtodo de control empleado habitualmente en la industria contra los microorganismos, y en especial de bacterias cido-lcticas como Leuconostoc sp es el uso de qumicos, sin embargo, la industria alimenticia o aquella industria que elabora productos de consumo humano se ve en dificultad para el control de microorganismos por qumicos, dado que estos generalmente pueden ser txicos al humano o acarrear graves consecuencias al medio ambiente, trayendo consigo sanciones punitivas a la empresa por parte de la entidad ambiental encargada [2]. Por lo anterior, los ingenios azucareros abocados a la prdida constante de divisas debido al crecimiento indeseable de Leuconostoc sp en el proceso de produccin, y teniendo en cuenta que los qumicos no representan una estrategia eficiente y rentable para el control de este microorganismo, hacen con mayor frecuencia uso del control biolgico utilizando microorganismos antagonistas, inocuos para la salud humana que no tengan repercusin en el proceso de produccin y que a la vez sea de fcil recuperacin si ese fuera el caso. Leuconostoc mesenteroides es un estreptococo lctico heterofermentativo osmoflico, esto significa que es capaz de crecer en concentraciones de sacarosa iguales o mayores al 10%. Tiene gran tolerancia para desarrollarse en concentraciones azucaradas de hasta 55 a 60%, lo que permite su desarrollo en jarabes, caramelo lquido, crema de helado, etc. Produce gran cantidad de muclago en medios que contienen sacarosa, esto es deseable cuando es necesaria la produccin de dextrano (polisacrido gomoso), sin embargo, en otros casos representa un contratiempo, sobre todo en la elaboracin u obtencin de alimentos ricos en este disacrido, como por ejemplo en la extraccin de azcar a partir de caa o remolacha azucarera. Para efectuar la deteccin de este microorganismo se efecta un enriquecimiento utilizando un medio de crecimiento que contenga altas concentraciones de sacarosa (10%). Posteriormente se asla en un medio slido selectivo con concentraciones similares del carbohidrato. L. mesenteroides forma colonias caractersticas convexas, translcidas, mucosas por la produccin de dextranas que se asemejan a gotas de agua y se le identifica posteriormente con una observacin microscpica, ya sea por tincin de Gram (diplococo capsulado Gram +) o bien de cpsula. El hbitat de esta especie bacteriana lo constituyen las superficies de vegetales, frutas, soluciones azucaradas, la leche y productos lcteos. El Leuconostoc mesenteroides participa en la primer etapa de las fermentaciones lcticas, contribuyendo en la produccin de cido lctico hasta una concentracin que va de 0.7 al 1%, adems de otras sustancias tales como, cido actico, etanol, manitol y dixido de carbono, que en conjunto le proporcionan un sabor y aroma caracterstico al producto fermentado. Adems existen ciertos biotipos que presentan metabolismo aerobio oxidativo y que producen dixido de carbono y steres del cido lctico y actico. Los objetivos de est prctica son: identificar las fuentes naturales a partir de las cuales es factible aislar con xito bacterias productoras de dextrano, ejecutar estrategias que garanticen el aislamiento de bacterias productoras de dextrano y aislar bacterias productoras de dextrano a partir de fuentes naturales.

II.

MATERIALES - Jugo de caa de azcar - Agar hipesacarosadp - Frascos vacios de penicilina - Matraces de 250ml - 2 mecheros - Pipetas de 5 y 10ml - Vaso de precipitacin de 200ml - Autoclave - Microscopio PROCEDIMIENTO 1. Extraer el jugo d azcar

III.

2. 3.

Esterilizar el medio de trabajo Abrir los dos matraces con caldo hipersacarosado, poner 2 mecheros a los costados para empezar con la prctica.

4.

Colocar 7.5ml del jugo a cada matraz.

5.

Rotular los matraces (fecha, grupo y curso).

6. 7.

Incubar a 30C por 24 horas. Sembrar por estras en 2 placas y hacer diluciones

8. 9.

Observar si se forman colonias (observar detalles morfolgicos: bordes, color) Aislar las colonias en frascos pequeos con agar.

10.

Guardar en frascos de penicilina y de esa misma placa se hace coloracin maneval.

11.

Por ltimo sembrar en frascos pequeos de agar hipersacarosado.

IV.

RESULTADOS

PLACA DE COLONIAS DE LEUCONOSTOC EXTRAIDAS DE JUGO MIXTO

Numero total de colonias desarrolladas: 45 colonias de Leuconostoc Numero total de colonias productoras de dextrano: 15 colonias productoras Porcentaje de colonias productoras de dextrano: 33 % del total

PLACA DE COLONIAS DE LEUCONOSTOC AISLADAS DE LA CAA DE AZUCAR

Numero total de colonias desarrolladas: 42 colonias de Leuconostoc. Numero total de colonias productoras de dextrano: 8 colonias productoras Porcentaje de colonias productoras de dextrano: 19 % del total

CUADRO DE OBSERVACION MORFOLOGICA:

COLONIAS DE LEUCONOSTOC EXTRAIDAS DEL JUGO MIXTO EXTRAIDAS DE CAA DE AZUCAR

COLOR

TAMAO

BORDE

BEIGE

0,5 mm aprox.

Bajo relieve

BEIGE

0,8 mm aprox.

Bajo relieve

COLORACION MANEVAL LEUCONOSTOC AISLADO 40X

V.

DISCUSION:

Miller, G. menciona que el dextrano es un polisacrido de alto peso molecular, compuesto de unidades de D-glucosa unidos mediante enlaces glucosdicos (1-6); son estructuralmente diversos y se caracterizan de acuerdo con el porcentaje, naturaleza y distribucin de sus enlaces. El dextrano se produce generalmente en cultivos de bacterias lcticas como Streptococcus, Acetobacter o Leuconostoc, en medios que contienen sacarosa; las clulas en crecimiento secretan una enzima inducible llamada dextransucrasa que convierte el exceso de sacarosa hidrolizndola en dextrano y liberando fructosa al medio.

VI.

CONCLUSION: Se indentifico las fuentes naturales, tales como jugo mixto y caa de azucar donde es factible aislar con xito bacterias productoras de dextrano.

Se logro aislar bacterias productoras de dextrano a partir de fuentes naturales.

VII. -

BIBLIOGRAFIA:

Miller, G. L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar. Anal. Chem. 31: 426-428, 1959. Rodrguez Charry, Jacqueline. Estudio del comportamiento de la enzima glucosa isomerasa inmovilizada en un reactor enzimtico. Universidad de Amrica, Facultad de Ingeniera, Departamento de Ingeniera Qumica, Bogot, 2004. 20. Roe, J. H.; Epstein, J. H.