Spektrofotometer UV-Vis

A. Tujuan 1. Memperoleh kurva kalibrasi larutan baku kloramfenikol 2. Memperoleh kadar sampel kloramfenikol dalam sediaan kapsul

B. Teori Spektrum UV-Vis merupakan hasil interaksi antara radiasi elektromegnetik (REM) dengan molekul. REM merupakan bentuk energy radiasi yang mempunyai sifat gelombang dan partikel (foton). Karena bersifat sebagai gelombang maka beberapa parameter perlu diketahui, misalnya panjang gelombang (λ), frekuensi gelombang (υ), bilangan gelombang (ῡ), dan serapan (A).

Spektrum Absorbsi Spektrofotometer dapat digunakan untuk mengukur besarnya energi yang diabsorbsi/diteruskan. Jika radiasi yang monokromatik melewati larutan yang mengandung zat yang dapat menyerap, maka radiasi ini akan dipantulkan, diabsorbsi oleh zatnya dan sisanya akan ditransimisikan
o

Pengaruh Ir dapat dihilangkan dengan menggunakan blanko kontrol, sehingga :

o

Lambert dan Beer telah menurunkan secara empirik hubungan antara intensitas cahaya yang ditransimisikan dengan tebalnya larutan dan hubungan antara intensitas tadi dengan konsentrasi zat. Hukum Lambert-Beer :
o

Di mana : A = serapan, Io = intensitas sinar datang, It= in ensi s sin (g.mg/It ml) Faktor-faktor yang mempengaruhi spektrum serapan : 1. Jenis pelarut (polar, nonpolar)

y ng di e usk n, γ =

absortivitas molekuler (mol.cm./It), a= daya serap (g.cm/It), b = tebal larutan, c = konsentrasi

2. pH larutan 3. Kadar larutan jika konsentrasi tinggi akan terjadi polimerisasi yang menyebabkan, γ maksimum berubah sama sekali atau Io < Ia 4. Tebal larutan, jika kuvet dengan tebal berbeda akan memberikan spektrum serapan yang berbeda 5. Lebar celah, makin lebar celah, makin lebar pula serapan (bandwidth), cahaya makin polikromatis, resolusi dan puncak kurva tidak sempurna.

C. Rumus Struktur

C11H12Cl2N2O5

323.1

Persyaratan kadar zat aktif dalam kapsul 95.0 hingga 105.0% dari jumlah yang disebutkan. C11H12Cl2N2O5, nilai A(1%, 1 cm) = 297 pada γ m ksimum 278 nm D. Alat dan bahan a. Alat i. ii. iii. iv. v. vi. vii. viii. ix. Spektrofotometer UV-Vis Shimadzu model UV-1601 pipet volume 8 ml, 12 ml, 16 ml, 20 ml, 24 ml, 10 ml labu ukur 50 ml, 100 ml pipet tetes beaker glass gelas erlemeyer balon karet spatel logam botol semprot

x. b. Bahan i. ii. iii. iv. v. vi. E. Perhitungan

timbangan analitik

kapsul kloramfenikol standar kloramfenikol aquadest kertas saring tisu lap

a. Larutan standar kloramfenikol C11H12Cl2N2O5, nilai A(1%, 1 cm) = 297 pada γ m ksimum 278 nm, A(1%, 1 cm) = 10 a, 297 = 10 a a = 29,7 A diharapka ada di sekitar 0,2 – 0,8 Jika A = 0,2-0,8 dan b = 1 cm, perhitungan konsentrasinya : c1  0,2 = 29,7 x 1 x c1 c1 = 0,2/29,7 = 6,734 ppm c2  0,8 = 29,7 x 1 c2 c2 = 0,8/29,7 = 26,936 ppm berarti konsentrasi larutan kurva kalibrasi sekitar 6,734 – 26,936 ppm