Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible

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Tema 3 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA-VISIBLE

La espectrofotometría de absorción en las regiones ultravioleta y visible del espectro electromagnético es, posiblemente, la más utilizada en la práctica del análisis cuantitativo de todas las técnicas espectroscópicas. Asimismo, puede resultar de utilidad como técnica auxiliar para la determinación de estructuras de especies químicas. Se basa en la absorción de radiación ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energía en forma de calor, en un proceso que esquemáticamente puede representarse así: X + hυ —> X* —> X + calor La cantidad de calor disipado es muy pequeño, por lo que el método tiene la ventaja de originar un trastorno mínimo en el sistema que se estudia. El término generalmente empleado en la medida de la radiación absorbida es el de absorciometría, si bien, normalmente se utiliza la denominación de colorimetría cuando se trabaja en la region visible del espectro electromagnético y se emplean aparatos que utilizan filtros (ver más adelante) para seleccionar la radiación utilizada*. Por otra parte, el término espectrofotometría suele aplicarse cuando la radiación utilizada se extiende a las regiones ultravioleta e infrarroja, y además, se utilizan monocromadores en lugar de filtros, así como sistemas de detección más sensibles, como tubos fotomultiplicadores.

* En sentido estricto, un colorímetro es un instrumento que compara el color de una sustancia con el de

una disolución de referencia usando el ojo humano como detector, si bien, en la práctica, esta denominación suele aplicarse a muchos fotómetros de filtro con sistemas de detección eléctricos.

Claudio González Pérez

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En cuanto a la región ultravioleta, hay que indicar que la zona de mayor interés en la práctica analítica ordinaria es la denominada como ultravioleta próximo (longitud de onda entre 200 y 400 nm), pues el ultravioleta lejano o ultravioleta de vacío (de 10 a 200 nm) presenta el inconveniente de que oxígeno atmosférico absorbe en esa región, siendo necesario eliminarlo del instrumento de medida. Debido a ello, la espectrofotometría en esa región espectral no se ha desarrollado suficientemente.

LEYES DE LA ABSORCION DE RADIACION
Cuando un haz de radiación monocromática de una determinada longitud de onda atraviesa una capa de disolución conteniendo una especie absorbente, la potencia (energía por unidad de tiempo y unidad de área) del haz incidente Po se atenúa, disminuyendo hasta P (figura 3.1.) Se define la transmitancia, T, como la fracción de radiación incidente que consigue atravesar la muestra. Varía de 0 a 1 y puede expresarse también como porcentaje: P P x T= ; %T= 100 Po Po
Un parámetro de mayor utilidad práctica es la absorbancia, A, definida como
A = – log T = log Po P

b

Po

P

P–dP

P

db
Figura 3.1. Absorción de radiación

Obsérvese que cuando no hay absorción de radiación, P=Po y entonces, A=0, mientras que si se absorbe el 99 %, solo se transmite el 1%, con lo que A=2.

Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible

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Para una capa de disolución absorbente de espesor infinitamente pequeño, db, (Figura 3.1.) la disminución de la potencia radiante, dP, es proporcional a la propia potencia incidente, P, a la concentración de la especie absorbente, C, y al espesor db: dP = – k P C db donde k es una constante de proporcionalidad. Reagrupando la ecuación anterior e integrando, se obtiene:

dP = – k C db P
P

dP =– P
Po

b

k C db
0

ln

P P = – k C b = 2.3 log Po Po

log

P = – log T = A = ε b C Po

donde, ε = k/2.3. La expresión,

A = ε b C

se denomina ley de Beer. Es fundamental en análisis cuantitativo al relacionar la absorbancia con la concentración. La constante ε recibe el nombre de absortividad molar, cuando la concentración se expresa en moles/litro y el camino óptico, b, en centímetros. La absortividad es una propiedad característica de la sustancia absorbente y depende de la longitud de onda. Por ello, para aplicar la ley de Beer debe seleccionarse una determinada longitud de onda, y para este propósito se utiliza el espectro de absorción, siendo éste una gráfica que indica la variación de la absorbancia, o de la absortividad, con la longitud de onda.

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER
La proporcionalidad entre la absorbancia y la concentración únicamente se cumple para disoluciones muy diluidas, observándose desviaciones más o menos acusadas al aumentar la concentración (figura 3.2.).

Claudio González Pérez

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A

Desviaciones positivas

Desviaciones negativas

C
Figura 3.2. Desviaciones de la ley de Beer

Las desviaciones de la ley de Beer pueden clasificarse de la forma siguiente:

Reales Instrumentales Radiación no monocromática Radiación parásita Errores de lectura

Químicas

Dimerizaciones Influencia del equilibrio Acido-base Complejos Influencia del disolvente Influencia de la temperatura Impurezas en los reactivos Interacción entre especies absorbentes

Personales

DESVIACIONES REALES. En la deducción de la ley de Beer que se hizo anteriormente, no se ha considerado que la absortividad depende del índice de refracción, n, según la expresión: ε = ε verdadero
2

n
2

n +2
Como, a su vez, el índice de refracción varía con la concentración, la absortividad no es rigurosamente constante para cualquier concentración, provocando desviaciones

se tiene: A1 = log A2 = log P 01 –ε b C = ε 1 b C .3. Las fluctuaciones producidas en la corriente eléctrica. Aplicando la ley de Beer a cada una de ellas. Influencia de la radiación policromática sobre la ley de Beer. N A M A N M λ1 λ2 a) λ b) C Figura 3. pues en la práctica. Además de éstos. P 2 = P 02 10 2 P2 . lo cual.a. DESVIACIONES INSTRUMENTALES. todos los dispositivos seleccionan una banda más o menos ancha en torno a una determinada longitud de onda. en sentido estricto. La influencia de la radiación policromática sobre la ley de Beer puede mostrarse del siguiente modo: Supóngase un haz formado por las longitudes de onda λ1 y λ2 (banda M en la figura 3.).Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 6 negativas. en la práctica. De todas formas.3. nunca se cumple. pueden considerarse los siguientes factores de tipo instrumental como causas de desviaciones de la ley de Beer: a) Uso de radiación no monocromática. al ser el índice de refracción esencialmente constante. La deducción de la ley de Beer se hizo sobre la base de utilizar radiación monocromática. para concentraciones inferiores a 10–3 M puede prescindirse de la influencia de este factor. P 1 = P 01 10 1 P1 P 02 –ε b C = ε 2 b C . la inestabilidad de algunas fuentes de radiación o la respuesta no lineal del detector pueden originar el funcionamiento incorrecto de un determinado aparato.

Sin embargo. la potencia del haz emergente es P1+P2. El haz de radiación que sale de un monocromador suele estar contaminado con pequeñas cantidades de radiación parásita o dispersada originada por reflexión de los distintos componentes ópticos. aún cuando la anchura de banda sea relativamente grande. Según esto.3. cuanto mayor sea la diferencia entre ε1 y ε2. 3. Evidentemente. Por eso mismo.a. Al aumentar la concentración de sustancias absorbentes. Por todo ello. pudiendo además. llegar al detector sin haber atravesado la muestra. en ocasiones. Con frecuencia. reduciéndose que es la ley de Beer.. banda N). dispersión por partículas de polvo atmosférico. la absorbancia medida será: A M = log P 01 + P 02 = log P1 + P2 P 01 + P 02 P 01 10 –ε 1 b C + P 02 10 –ε 2 b C AM = log (P01 + P02) – log (P01 10–ε1 a AM = ε1 b C bC + P02 10– ε2b C ) En el caso particular de que ε1 = ε2 la ecuación anterior se simplifica. la radiación dispersada tiene una longitud de onda diferente respecto a la radiación principal. disminuye P. cuando ε1 es distinto de ε2. mientras que la del haz incidente sobre la muestra es P01 + P02. si las diferencias en los valores de la absortividad son pequeños. la utilización de un haz policromático no implica diferencias significativas respecto a uno monocromático (ver Fig. Por otra parte.Claudio González Pérez 7 Cuando este haz constituido por las dos radiaciones atraviesa una disolución conteniendo especies absorbentes. la relación entre AM y la concentración deja de ser lineal. la absorbancia medida en presencia de radiación parásita es: AM = log P0 + Ps P + Ps donde Ps es la potencia del haz dispersado. la propia muestra puede originar dispersiones. etc. con lo que este término puede ser lo suficientemente pequeño respecto a Ps como para que la expresión anterior se transforme en: AM = log P0 + Ps P + Ps . mayores serán las desviaciones de la linealidad.log 0 P + Ps Ps . b) Presencia de radiación parásita.

8 %. La primera derivada de la ley de Beer es: A = ε b C = – log T .434.4. dC 0. %T 1 2 Figura 3. se obtiene que la transmitancia óptima corresponde a 36. pequeños errores en la lectura de la transmitancia o de la absorbancia pueden ocasionar errores grandes en la concentración cuando se opera en los extremos de la escala. se obtiene. que equivale a una absorbancia de 0. ε b dC = – log e dT T donde dT representa el error indeterminado en la lectura de la escala de transmitancia y dC indica la incertidumbre en la concentración. Como log e = 0. Errores de lectura. Puede demostrarse. para un cierto error de lectura de transmitancia.434 y ε b = – log T/C.434. Los errores indeterminados en la lectura de la transmitancia o absorbancia son errores que potencialmente siempre están presentes y es necesario tenerlos en cuenta. la incertidumbre en la determinación de la concentración es alta. y en 2. En ocasiones. el error absoluto cometido en la determinación de la concentración. parece que se trata de la situación más favorable. es pequeño.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 8 lo cual indica la presencia de desviaciones negativas en la ley de Beer debido a este factor.4.4. Esto se ilustra en la figura 3.. hacia la mitad de la escala. 3 C En 1. c) Errores de lectura. pero al ser pequeña la concentración. el error relativo puede ser grande. que el mínimo error relativo se obtiene para una absorbancia de 0. figura 3. En 3. .434 = dT C T(log T) Derivando esta ecuación de nuevo e igualando a cero. como se indica a continuación.

Espectros de absorción de un indicador ácido-base. se muestran los espectros de absorción de un indicador ácido-base. para que se cumpla la ley de Beer hay que mantener constante la concentración de ligando libre. y. como consecuencia del equilibrio dímero-monómero: (λmax = 350. En este sentido hay que mencionar que los puntos isosbésticos se toman frecuentemente como criterio para la existencia de dos especies absorbentes interconvertibles de un compuesto determinado. la ley de Beer no se cumple. 4 1 2 A 3 punto isosbéstico 3 2 1 4 HIn <——> In– + H+ rojo amarillo Figura 3. Cuando se mide la absorbancia de un complejo.5. Cuando la sustancia problema interviene o forma parte de un sistema en equilibrio con otras especies. en la absorbancia.5. en consecuencia. por ejemplo Fe(SCN)63–. λ Complejos. ocurre una transformación parcial en cromato. el desplazamiento del equilibrio implica una modificación en la concentración. la longitud de onda a la cual las dos especies absorbentes en equilibrio presenten la misma absortividad. Cuando una disolución de dicromato potásico no tamponada se diluye. Es evidente que cuando las especies absorbentes están implicadas en un equilibrio ácido-base. Algunas situaciones que pueden producirse son las siguientes: Dimerizaciones. lo cual se consigue frecuentemente operando en gran exceso de ligando respecto al metal. 450 nm) Cr2O72– + H2O <——> 2 CrO42– + 2 H+ (λmax = 372 nm) Acido–base. a) Influencia del equilibrio. o se opere a la longitud de onda del punto isobéstico.Claudio González Pérez DESVIACIONES QUIMICAS 9 Se incluyen en este apartado toda una serie de desviaciones aparentes de la ley de Beer producidas como consecuencia de procesos químicos en los que participan las especies absorbentes. En la figura 3. . esto es. al menos que el pH o la fuerza iónica sean constantes.

en ocasiones. Unicamente mencionar algunos términos relacionados con los desplazamientos espectrales: desplazamiento batocrómico o desplazamiento hacia el rojo. con el consiguiente aumento de la fuerza iónica de la disolución. . el disolvente y los reactivos. la temperatura no suele ser un factor a considerar en la mayor parte de los sistemas absorbentes sencillos. Cuando en una disolución existen varias especies absorbentes. la interacción entre ellas puede producir alteraciones en la distribución de cargas. En este sentido interesa que la absorbancia del blanco sea pequeña. variaciones en la posición. forma y altura de las bandas de absorción. d) Presencia de impurezas en los reactivos. La temperatura puede influir modificando el equilibrio químico de algunos sistemas. Muchos métodos espectrofotométricos son lo suficientemente sensibles como para detectar cantidades a nivel de trazas. Como consecuencia de las interacciones soluto– disolvente se originan con frecuencia desplazamientos espectrales. dar lugar a desplazamientos batocrómicos. En este sentido. De todas formas. Desplazamiento hipsocrómico o desplazamiento hacia el azul. las medidas espectrofotométricas se llevan a cabo frente a un blanco constituido por la propia célula. en la práctica analítica ordinaria. Debido a ello. por lo que la presencia de impurezas absorbentes en los mismos reactivos pueden originar errores considerables. así como. no es posible hacer predicciones de forma general. como consecuencia de lo cual puede modificarse la energía requerida para la absorción y. si todas actúan independientemente. e) Interacciones entre especies absorbentes. consiste en un desplazamiento del máximo de absorción hacia longitudes de onda mayores (este efecto suele producirse en disolventes de alta constante dieléctrica). ensanchamientos de bandas y otros fenómenos que pueden provocar desviaciones en la ley de Beer. Sin embargo. es el desplazamiento hacia longitudes de onda más cortas. en consecuencia. c) Influencia de la temperatura. un pequeño error en su medida puede implicar un gran error relativo en el resultado final.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 10 b) Influencia del disolvente. Por otra parte. la ley de Beer se cumple para cada una de ellas. estas alteraciones en la distribución de cargas también pueden ser originadas por la presencia de sales inertes. pues si es grande.

Claudio González Pérez 11 f) Interacciones soluto–radiación electromagnética. la posible emisión de resonancia y la presencia de fenómenos fluorescentes y fosforescentes pueden originar desviaciones aparentes en la ley de Beer. mientras que el exterior debe secarse con papel suave. distintos de los que intervienen en el proceso de absorción. ERRORES PERSONALES En este sentido. es buena práctica utilizar siempre la misma disolución en cada una de ellas. una vez llena con la disolución problema. las cubetas deben enjuagarse con agua destilada y con varias porciones de la disolución a medir. se incrementa su energía. además. * Una vez limpias. Así. Resultan de utilidad las recomendaciones siguientes: * Es necesario asegurarse de que las cubetas están perfectamente limpias. En relación con esto. * Las cubetas de vidrio y cuarzo pueden limpiarse con ácido nítrico o con agua regia en frío. * No deben secarse interiormente. * Aunque se debe trabajar con cubetas idénticas para la muestra y la referencia (blanco). así como simultáneamente transiciones . etc. Seguidamente se intentará dar respuesta a ellas. cuando una molécula absorbe un fotón. que. pueden hacerse las siguientes preguntas: ¿qué pasa con la energía absorbida? ¿en qué se invierte?. ABSORCION DE RADIACION Como se indicó en el capítulo anterior. no rayadas y exentas de huellas o adherencias en las paredes por las que ha de pasar la radiación. pasando a un estado excitado. La absorción de radiación ultravioleta y visible origina transiciones entre distintos niveles de energía electrónicos. también deben considerarse otros tipos de interacción entre la radiación y la materia. los mayores errores suelen cometerse por el uso inadecuado de las cubetas de absorción. Aunque en sentido estricto no son factores de tipo químico. no contiene burbujas de aire. comprobando. pero no con mezcla crómica.

el último término es tan pequeño que prácticamente puede prescindirse de su influencia.. a su vez. . entre 10 y 100 veces menor que ∆Evibracional. suele ser de utilidad clasificar las especies absorbentes en base al tipo de transiciones electrónicas que pueden tener lugar. así como en orbitales no enlazantes. lo cual es importante en orden a determinar estructuras moleculares y para la identificación de ciertos grupos funcionales. esto permite correlacionar el comportamiento espectral de una determinada especie con sus características químicas. y una gran cantidad de aniones inorgánicos.6. de forma que el cambio en la energía molecular de una determinada especie como consecuencia de la absorción de energía radiante puede representarse así: ∆E = ∆Eelectrónica + ∆Evibracional + ∆Erotacional + ∆Etraslacional De todos los términos que figuran en la expresión anterior.6. el más importante es ∆Eelectrónica. Asimismo. por lo que cuando estas especies absorben fotones de contenido energético adecuado se pueden producir transiciones a los correspondientes orbitales moleculares antienlazantes. σ* y π*. pues la diferencia de energía entre dos estados vibracionales es unas 10 veces menos. Transiciones electrónicas entre niveles de energía moleculares. tal como se indica en la figura 3. Tipos de transiciones electrónicas Las moléculas orgánicas. σ* π* H C H ++ O+ + σ π +n n π σ Figura 3. n. Por otro lado. contienen electrones en orbitales moleculares σ y π. Debido a lo anteriormente expuesto.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 12 vibracionales y rotacionales. donde se muestra la estructura de Lewis para una molécula orgánica sencilla y las transiciones electrónicas correspondientes. y ∆Erotacional es.

Estas transiciones entre orbitales moleculares sigma enlazantes y antienlazantes implican energías relativamente grandes (ver fig. absorben fuertemente a 160 y 200 nm respectivamente.6. Desde el punto de vista analítico. de forma que las bandas de absorción se observan en el ultravioleta lejano.). Esta región del espectro se denomina frecuentemente ultravioleta de vacío. 3. nitrógeno y oxígeno. Esto sucede. π—>π*. Transiciones n—>σ*. por ejemplo. En los hidrocarburos saturados.6.). a longitudes de onda inferiores a 200 nm (Figura 3. n—>σ* y n—>π*. Las especies químicas saturadas que contengan átomos con pares electrónicos en orbitales no enlazantes pueden dar lugar a que se produzcan transiciones n—>σ*. . Asimismo.Claudio González Pérez 13 Como se representa en la figura 3. nm 750 Figura 3. debido a que los constituyentes normales del aire. estas bandas tienen poco interés. UV lejano UV próximo Visible π —> π * Intensidad transferencia de carga σ —> σ* n —> σ* n —> π* . así el metano presenta máximos de absorción a 125 nm y el etano a 135 nm. debido a dificultades de tipo instrumental. en compuestos saturados conteniendo heteroátomos de oxígeno. por lo que los espectros en esta zona deben obtenerse operando en el "vacío". también pueden producirse transiciones denominadas de transferencia de carga y de campo ligando. Seguidamente se comentarán algunas peculiaridades de cada una de las transiciones mencionadas. Transiciones σ—>σ*. en los que solamente hay enlaces sencillos C–H se producen estas transiciones.7.. pueden tener lugar cuatro tipos de transiciones: σ—>σ*.7. azufre y halógenos. campo ligando 200 400 λ . Bandas de absorción originadas por diferentes transiciones electrónicas.

. En la tabla 3. En lo que respecta a la intensidad de la absorción. existen determinadas agrupaciones atómicas que por sí mismas no comunican color a la molécula que pertenecen. por lo que las bandas correspondientes se presentan fundamentalmente en el ultravioleta lejano. Transiciones n—>π* y π—>π*. mientras que los correspondientes a los π—>π* son considerablemente mayores. Por otra parte. se considera que los sistemas con electrones s son cromóforos en el ultravioleta lejano). De cualquier forma. como consecuencia de lo cual se originan bandas en las zonas ultravioleta próximo y visible. Los máximos de absorción correspondientes a esta transiciones n—>σ* tienden a desplazarse hacia longitudes de onda menores al aumentar la electronegatividad del heteroátomo. las transiciones π—>π* requieren la absorción de una cantidad de energía relativamente grande. o por el tipo de disolvente. el comportamiento mencionado puede alterarse. la mayor parte de los compuestos saturados que contienen oxígeno absorben a longitudes de onda inferiores a 200 nm. si bien en menor grado que las σ— >σ*. lo cual hace posible que compuestos tales como el agua. mientras que las n—>π* necesitan menor cantidad de energía. se muestran algunos grupos cromóforos y las transiciones implicadas en espectrofotometría ultravioleta-visible.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 14 Estas transiciones requieren bastante energía. puedan utilizarse como disolventes en el ultravioleta próximo. Estos grupos se denominan auxocromos. Estas transiciones se consideran juntas debido a que muchos grupos químicos contienen electrones en orbitales π y no enlazantes. pero son capaces de reforzar la acción de un cromóforo. la intensidad de las absorciones asociadas con estas bandas suelen ser de pequeña magnitud. Por otra parte. la estructura molecular deberá presentar centros absorbentes no saturados. De hecho. . las absortividades molares de los picos asociados a las transiciones n—>π* son generalmente bajos. es evidente que la especie química tendrá que contener algún grupo funcional con enlaces π. esto es. Para que tengan lugar las transiciones consideradas en este apartado. por lo que suelen aparecer en el ultravioleta lejano.1. por la presencia de determinadas agrupaciones atómicas.6. A estos grupos de átomos responsables de la absorción en las regiones ultravioleta y visible se les denomina grupos cromóforos (por extensión. Como se aprecia en la Figura 3. como se verá posteriormente. o los alcoholes.

pueden absorber únicamente en el ultravioleta lejano. la absorción es la suma de todos los grupos cromóforos presentes. a la vez que se produce un incremento en la intensidad de la absorción. si un auxocromo y un cromóforo se encuentran en la misma molécula. en consecuencia. Sin embargo. En relación con las modificaciones de las intensidades de absorción se definen los siguientes términos: efecto hipercrómico (aumento de la intensidad de la absorción) y efecto hipocrómico (disminución de la intensidad de la absorción). Ejemplo: λmax (nm) 184 185 εmax 10000 20000 CH3–CH2–CH2–CH=CH2 CH2=CH–CH2–CH2–CH=CH2 .Claudio González Pérez Tabla 3. Este efecto se atribuye normalmente a la posibilidad de que se den transiciones n—>π*. y. como consecuencia de transiciones n—>σ*.1. en estos casos. la absorción del cromóforo se desplaza hacia longitudes de onda más largas. 15 Grupos cromóforos y transiciones electrónicas Grupo cromóforo Etilénico Acetilénico Carbonilo Carboxilato Ester Amida Estructura C C Transición C C C O π−> π∗ π −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ π −> π∗ n −> π∗ O O O C OR O C NH2 C — NO2 Nitro Oxima C N Los grupos auxocromos suelen contener grupos funcionales con electrones en orbitales no enlazantes y que. Cuando una molécula contiene dos o más grupos cromóforos pueden darse las siguientes posibilidades: a) Si los cromóforos están separados por dos o más enlaces sencillos se dice que están aislados.

puede decirse que al aumentar la polaridad del disolvente se produce un desplazamiento hipsocrómico (hacia menor longitud de onda) de las bandas n—>π* y un desplazamiento batocrómico (hacia longitudes de onda mayores) de las bandas π—>π*. separados por un enlace sencillo. Esto puede explicarse teniendo en cuenta que el estado excitado es más polar que el estado fundamental. rebajando su nivel energético.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 16 b) Cuando los cromóforos están conjugados. en ambas transiciones ocurrirían desplazamientos batocrómicos. λmax (nm) 170 220 260 εmax 16000 21000 35000 –C=C– –C=C–C=C– –C=C–C=C–C=C– La razón de estos desplazamientos se considera que es debida a que la conjugación hace que se produzca una deslocalización de los electrones π sobre. el espectro resultante normalmente es distinto del que presentan ambos cromóforos cuando están aislados. lo que origina un aumento simultáneo en la intensidad de la absorción. Sin embargo. Sin embargo. aumentando además las probabilidades de que tengan lugar las mencionadas transiciones. con lo que al ser menor la energía requerida para las transiciones. se produce un . los máximos de absorción se desplazan hacia mayores longitudes de onda. se produce un desplazamiento batocrómico acompañado de un efecto hipercrómico. si únicamente tuviera lugar este efecto. λmax 170 225 εmax 10000 500 CH2=CH2 CH2=C=CH2 En cuanto a la influencia del disolvente. se observa una disminución de la intensidad de absorción (efecto hipocrómico) λmax CH2 = CH – CH = CH 2 CH2 = CH – C CH 219 219 ε max 21000 6500 c) Cuando los cromóforos están unidos directamente. por lo cual. ya que en realidad se forma un nuevo cromóforo. esto es. cuando existe algún enlace triple. en el caso de las transiciones n—>π* se produce un aumento de solvatación del par de electrones no enlazados. De todas formas. como consecuencia de lo cual se rebaja el nivel de energía del orbital π*. la presencia de un disolvente polar tiende a estabilizar los estados excitados. En consecuencia. lo cual rebaja la energía del orbital no enlazante en mayor medida que lo que disminuye la energía del orbital π*. cuatro átomos. al menos.

Para ello es necesario que uno de sus componentes tenga características de dador de electrones y otro de aceptor. suelen presentarse las intensas bandas de transferencia de carga anteriormente mencionadas). la absorción de un fotón por el complejo Fe(III)–SCN– da lugar a la transferencia de un electrón desde el tiocianato hasta uno de los orbitales del hierro. ocasionalmente puede tener lugar la disociación del estado excitado.Claudio González Pérez 17 aumento de la energía requerida para la transición n—>π* y el consiguiente desplazamiento hipsocrómico. Bandas de campo ligando. Así. si bien. el electrón que ha experimentado la transferencia vuelve a su estado original. teniendo lugar. una reacción fotoquímica. en este caso. por lo cual se obtienen límites de detección muy bajos para estas especies. ya que muchos compuestos orgánicos e inorgánicos las presentan en el ultravioleta (a veces también en el visible) y las absortividades molares suelen ser muy altas (superiores a 10000). Estas absorciones suelen ser de baja intensidad y . El color que presentan muchos iones y compuestos de metales de transición normalmente se deben a absorciones denominadas de campo ligando (junto a éstas. Estas bandas se originan cuando se produce transferencia de electrones de una parte a otra de un sistema. por ejemplo. originándose una especie excitada consistente en Fe(II) y SCN neutro: Fe(III)–SCN– + hν —> Fe(II)–SCN Lo mismo que sucede con otros tipos de excitación electrónica. Como consecuencia de esta transferencia de electrones se origina un estado excitado que es el resultado de un proceso de oxidación-reducción interna. Algunas moléculas orgánicas pueden transferencia de carga intramolecular: originar bandas de absorción por R C = O + hν R + – =C—O Las bandas de absorción originadas por estos procesos de transferencia de carga son particularmente importantes en análisis químico. Bandas de transferencia de carga.

Como puede verse en la figura 3. según los ejes de coordenadas x. El origen de las bandas de campo ligando puede explicarse del siguiente modo: los cinco orbitales d de un átomo o un ión de un elemento de transición. no siendo necesaria la absorción de radiación para promover un electrón de un orbital a otro. por lo que habrá una mayor repulsión entre los electrones de los ligandos y los electrones de los orbitales eg del ion central.8. los orbitales dx2–y2 y dz2 están orientados Al formarse un complejo octaédrico entre el ión metálico y el agua.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 18 aparecen en la región visible. dyz y dxz.. se orientan según las bisectrices a dichos ejes. z z z y x y x x dxy z y d yz y x z dxz y x d x2–y 2 Figura 3.8. y y z. cuya representación se muestra en la figura 3. Representación esquemática de los cinco orbitales atómicos d.8. Estos orbitales forman el grupo eg. llamados orbitales t2g. o algún otro ligando. en ausencia de un campo magnético o eléctrico externo están degenerados. que entre los de los ligandos y los de los orbitales t2g.. los átomos dadores de los ligandos se aproximan al ión metálico central a lo largo de los ejes. Por su parte. dz 2 . llegando en ocasiones hasta el ultravioleta próximo y el infrarrojo próximo. los orbitales dxy.

Jaffe y M. representada por ∆oct depende de las características del ión metálico (carga y número cuántico principal del orbital d) y del ligando (distribución de su densidad de carga y polarizabilidad). se han propuesto toda una serie de reglas empíricas obtenidas de la observación de los espectros de absorción de una gran variedad de sustancias orgánicas. . H.9. Orchin. Willey. Cada uno de esos grupos funcionales absorbe a una cierta longitud de onda. la aproximación de los seis átomos dadores (cargas puntuales) a lo largo de los ejes produce un campo eléctrico que elimina la degeneración existente en el grupo de orbitales d y los divide en dos grupos.) * dx 2–y 2 d z2 E d xy dxz dyz dx2 –y 2 d z2 ∆oct. Pergamon. En este sentido. Esto es debido al aumento que experimenta el campo ligando cuando se sustituye el H2O por NH3. esteres. Cu(NH3)42+. Las reglas que seguidamente se presentan de forma resumida** se han desarrollado para los siguientes tipos de compuestos: dienos conjugados. se originan desdoblamientos que pueden deducirse con razonamientos similares a los utilizados para la estructura octaédrica. d xy dxz dyz Figura 3. Desde el punto de vista práctico es interesante poder predecir la longitud de onda aproximada a la que se producirá la absorción máxima.Claudio González Pérez 19 Como consecuencia de las repulsiones mencionadas. Ejemplo: Las disoluciones acuosas de Cu2+. Desdoblamiento de los orbitales d por efecto del campo ligando. el color es azul violeta muy intenso. los t2g con energía inferior y los eg con energía superior (figura 3. Nuw York (1962). La energía de separación entre los dos grupos. nitrilos y amidas no saturados. "Theory and Applications of Ultraviolet Spectroscopy". ** Para profundizar en el tema pueden consultarse las siguientes publicaciones: Scott.9. "Interpretation of the ultraviolet Spectra of Natural Products". anillos bencénicos sustituidos.H. mientras que en Las consideraciones teóricas anteriormente expuestas permiten deducir si una determinada especie química absorberá radiación electromagnética en las regiones ultravioleta y visible. Para esto. Cu(H2O)42+ son de color azul pálido. compuestos carbonílicos no saturados y ácidos. Oxford (1964. es posible ordenar los ligandos más comunes en orden creciente de ∆ (serie espectroquímica): I–<Br–<Cl–<F–<OH–<C2O42– H2O<SCN–<NH3<etilendiamina<NO2–<CN– medio amoniacal. * Cuando se forman complejos tetraédricos o con simetría cuadrada plana.

. emiten radiaciones en un amplio espectro que comprende muchas longitudes de onda. carbonílicos –C=C–CO C=C–CHO Ac. y éste.2. fisiológicos y físicos. Las personas que tienen una visión normal del color son capaces de correlacionar aproximadamente la longitud de onda de la radiación visible que llega al ojo con la subjetiva sensación del color. En la tabla 3. Se hace mención de impresiones subjetivas. Aquellas longitudes de onda que están comprendidas entre unos 400 y 700 nm son capaces de afectar la retina del ojo humano y con ello dar origen a las impresiones subjetivas de la visión.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 20 y a este valor hay que adicionarle determinadas cantidades en función de la presencia de otras agrupaciones atómicas presentes en la molécula. Longitudes de onda de máxima absorción Dienos conjugados Bencenos monosutituidos 203 +45 +20 +7 +7 +27 +27 +17 +8 +16 +19 +26 254 Comp.2 se muestran dichas cantidades. de hecho. la respuesta humana al color varía de una persona a otra. y esteres insaturados λ base. correspondientes a algunos casos concretos. a veces se utiliza para designar ciertas porciones del espectro. debido a que en la percepción del color influyen factores químicos. Tabla 3. como el Sol o una lámpara. Br — OH —COOH —NH2 217 + 30 +5 +5 215 +30 α +10 β +12 γ +18 210 +30 α +10 β +12 γ +18 197 +30 +10 α +35 β +30 γ +50 α +35 β +30 γ +50 Algunas consideraciones respecto al color Los cuerpos luminosos. nm Doble enlace adicional Grupo alquilo Cl.

1. el objeto aparece de color negro. En la tabla 3. es conveniente indicar algunos términos relacionados con la nomenclatura utilizada a propósito de la instrumentación en los métodos ópticos de análisis. Tabla 3. Antes de pasar a describir sus componentes básicos. y si se reflejan todas las radiaciones. Se dice que este color es complementario al color que se percibiría si la luz absorbida se pudiera detectar. sus longitudes de onda indican el color del medio. pero que absorbe otras.1. Nosotros percibimos los objetos por medio de la luz emitida o reflejada. los objetos de color que son opacos absorben algunas longitudes de onda y reflejan otras cuando son iluminadas por luz blanca. si la absorción es total. de color blanco. para el observador ese medio aparece coloreado. de forma que cuando la luz blanca (conteniendo todas las longitudes de onda) pasa a través de un medio que es transparente a ciertas longitudes de onda. debido a que la luz emitida y absorbida juntas forman la luz blanca original. Debido a que solo las radiaciones no absorbidas llegan al ojo.Claudio González Pérez 21 Cuando incide radiación electromagnética visible sobre la materia puede ser absorbida total o parcialmente. se indican los valores que corresponden a determinadas zonas del espectro visible. Colores del espectro visible λ absorbida (nm) 380–420 420–440 440–470 470–500 500–520 520–550 550–580 580–620 620–680 680–780 Color absorbido violeta azul–violeta azul verde–azulado verde amarillo–verdoso amarillo anaranjado rojo púrpura Color observado (complementario) amarillo-verdoso amarillo anaranjado rojo púrpura violeta azul–violeta azul verde–azulado verde INSTRUMENTACION El instrumento que normalmente se utiliza para medir la transmitancia o la absorbancia de una muestra en función de la longitud de onda es el espectrofotómetro. Análogamente. Las definiciones .

* Eugene D. pero sí están en razonable acuerdo con el uso popular y son las que se utilizan en las principales obras dedicadas al tema*. Ed. Olsen. COLORIMETRO: Instrumento muy simple que compara. Según las definiciones anteriores. el sistema de detección normalmente es un fotomultiplicador. ESPECTROSCOPIO: Aparato diseñado para detectar detectar líneas espectrales a simple vista. Reverté. . así se conocen muchos fotómetros de filtro comerciales). más sensible que una fotocélula. Además. ESPECTROFOTOMETRO: Instrumento más sofisticado que posee un monocromador en lugar de filtros. ESPECTROGRAFO: Instrumento que registra líneas espectrales sobre una placa fotográfica. Su aplicación está restringida al análisis cualitativo y para elementos con líneas de emisión en la zona visible del espectro. (El nombre de colorímetro suele aplicarse en la práctica a cualquier instrumento apropiado para medir en la region visible. el color de la sustancia problema con el de una disolución patrón. "Métodos Opticos de Análisis". Normalmente se utiliza para designar un instrumento sencillo provisto de filtros para seleccionar una banda de longitudes de onda y de una fotocélula o un fototubo para medir la intensidad de radiación. Su utilización suele limitarse. ESPECTROMETRO: Denominación general que se aplica a instrumentos que poseen sistemas de detección eléctricos. FOTOMETRO: Cualquier dispositivo utilizado para medir la intensidad de radiación. en la práctica. usando el ojo humano como detector. y. en realidad.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 22 que se indican no pueden considerarse universales. visible e infrarroja. a la región untravioleta. un espectrofotómetro es un espectrómetro que mide fotones. Barcelona.

Fuentes de radiación Las fuentes de radiación utilizadas en espectrofotometría ultravioleta y visible deben ser continuas en una amplia zona del espectro. esta lámpara resulta útil entre unos 350 nm y unos 3000 nm. En la zona ultravioleta y visible. una cubeta.10. En condiciones ordinarias de operación. o recipiente que contenga la muestra.10. (figura 3. Espectrofotómetro de doble haz. de intensidad elevada y ser esencialmente constante con la longitud de onda. Referencia Figura 3. y fuentes cuya radiación se debe a descargas eléctricas producidas en el seno de gases. la fuentes más utilizadas son de dos tipos: fuentes térmicas. que seleccione una banda estrecha de longitudes de onda. la más común es la lámpara de filamento de volframio. Energia 200 λ . Curvas de distribución espectral de las lámparas de deuterio y volframio.11. un monocromador.3000ºK) visible . Fuente de radiación monocromador Filtro o Detector Muestra Medidor o registro . un detector de radiación y un sistema de tratamiento y lectura de la señal detectada (figura 3. nm Figura 3. Entre las primeras.Claudio González Pérez 23 Los componentes básicos de un espectrofotómetro son: una fuente de radiación.) deuterio volframio (.11.) espejo . 400 700 . basadas en la emisión de radiación por efecto de la temperatura.

esto no se utiliza para obtener mayor cantidad de radiación ultravioleta. éste tiene que ser muy estable. a presiones relativamente altas (0. hasta que. la mayor parte de la energía emitida corresponde a la zona infrarroja. en el lugar donde se coloca la lámpara se instala un ventilador con objeto de evitar el calentamiento de la muestra y de los demás componentes del instrumento.2–5 mm) se produce un espectro continuo. por lo cual los instrumentos llevan incorporado un sistema para la estabilización de la corriente. un incremento en la temperatura de operación aumenta la energía total emitida y desplaza el máximo de intensidad hacia longitudes de onda más cortas. por lo que. Debido a que la radiación emitida depende únicamente del voltaje suministrado. con frecuencia.. La más común es una lámpara de descarga de hidrógeno. Cuando se produce una descarga eléctrica entre dos electrodos en el seno de un gas. del voltaje.11. las lámparas de ultravioleta deben utilizar ventanas de cuarzo. con lo que se obtiene un espectro de líneas que es característico del gas. el calor producido por la lámpara puede constituir un problema. Tanto la lámpara de hidrógeno como la de deuterio tienen un intervalo de utilización comprendido entre 175 y 350 nm (figura 3. a su vez. La distribución de la energía depende de la temperatura del filamento. vibracional y rotacional de dichas moléculas. Sin embargo. Al aumentar la presión. llegando a superponerse.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 24 Como puede observarse en la figura 3. la cual depende. ya que se acorta considerablemente el tiempo de vida de la lámpara. Por otra parte. puesto que el vidrio absorbe fuertemente a longitudes de onda inferiores a unos 350 nm. las colisiones entre los electrones de la descarga y las moléculas gaseosas provocan la excitación electrónica. como hidrógeno. Finalmente. Por debajo de 350 nm. siempre que la presión sea baja. También se utilizan con la misma finalidad la lámpara de descarga de xenon y la de vapor de mercurio. las líneas se ensanchan. . debiéndose emplear una fuente diferente. en la práctica.11. la potencia de una lámpara de volframio es inadecuada.). indicar que. o de deuterio.

Sin embargo. Con este fin se utilizan los siguientes dispositivos: De corte Absorción De banda Filtros Interferencia Selección de la longitud de onda Prismas Monocromadores Redes De transmisión De reflexión Los filtros de absorción se utilizan en la región visible y se basan en la absorción selectiva de ciertas longitudes de onda. 100 B (filtro naranja) A (filtro verde) %T 50 anchura de banda combinación de los dos filtros 400 500 600 700 λ . Transmitancia de algunos filtros. A) se caracterizan por su anchura de banda (anchura a la mitad de la altura) que puede oscilar entre 30 y 250 nm. Los filtros de banda (figura 3. Por combinación de diferentes filtros pueden seleccionarse bandas espectrales relativamente estrechas (figura 3. en sentido estricto. tanto más estrecho será el intervalo de longitudes de onda. Los filtros de corte tienen transmitancias de casi el 100 % en una zona del espectro visible. Normalmente consisten en un vidrio coloreado o una suspensión de un colorante en gelatina que se coloca entre dos placas de vidrio.Claudio González Pérez 25 Filtros y monocromadores La misión de los filtros y de los monocromadores es seleccionar un haz de radiación "monocromática"*.12. pero luego disminuye rápidamente hasta un valor de transmitancia cero (figura 3. .12. * La radiación monocromática es la radiación de una sola longitud de onda.).12. es imposible producir radiación monocromática verdadera. Por supuesto.12. nm 800 Figura 3.B). cuanto mejor sea el monocromador.

que aísla la banda espectral deseada (figura 3. Cuando un haz de radiación incide sobre este dispositivo.) La dispersión de radiación por un prisma se basa en el fenómeno de la refracción. La parte que ha pasado sufre una escisión similar al llegar a la segunda capa metálica. El resultado es que se refuerza esa determinada longitud de onda.) Figura 3. una fracción atraviesa la primera capa metálica. . El grado de desviación depende de la longitud de onda. esto es. Si la parte reflejada en la segunda interacción es de longitud de onda adecuada. Estos filtros proporcionan anchuras de banda menores y transmitancias de pico mayores que los filtros de absorción. desde la cara interior de la primera capa en fase con la radiación incidente de la misma longitud de onda. la longitud de onda de la radiación. así como parte del infrarrojo. y una rendija de salida. se refleja.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 26 Los filtros de interferencia consisten en un dieléctrico transparente (frecuentemente. en parte. prisma o red. de forma continua y en un amplio intervalo. así. Filtro de interferencia.14. (figura 3. fuera de fase.13. que dispersa la radiación en sus longitudes de onda individuales. mientras que la mayoría de las otras. sufren una interferencia destructiva.13. Un monocromador se caracteriza por producir un haz de radiación de gran pureza espectral y permitir variar. Los componentes básicos de un monocromador son una rendija de entrada. los azules se desvían más que los rojos. un elemento dispersante. mientras que la restante se refleja. que selecciona un haz de radiación policromática entrante. el cambio de dirección que experimenta un haz de radiación al pasar de un medio a otro con distinto índice de refracción. fluoruro cálcico o magnésico) recubierto en ambos lados con dos finas capas de plata semirreflectante. Se dispone de filtros de interferencia para todas las zonas de las regiones ultravioleta y visible.

Figura 3. diferente del incidente. las longitudes de onda no se dispersan de manera uniforme: es mayor para las longitudes de onda más cortas. Cuando un haz de radiación incide sobre una red de reflexión con un ángulo i (figura 3. mientras que el principal inconveniente reside en que la dispersión no es lineal. * Tambien existen las redes de transmisión. Figura 3. que normalmente se construyen trazando una serie de surcos paralelos sobre una placa de vidrio. En la Figura 3. Los segmentos AB y CD pueden expresarse en función de d y de los ángulos i y . mientras que en el ultravioleta es necesario usarlos de cuarzo. como en las redes). pulida. en la región visible se usan prismas de vidrio.14.15. Los prismas presentan las ventajas de su gran pureza espectral (no hay órdenes de dispersión superiores.15. y esta diferencia es AB – CD. Difracción de radiación por una red de reflexión. esto es. La máxima interferencia constructiva entre ambos se produce cuando la diferencia de caminos recorridos por ellos sea un múltiplo entero de la longitud de onda. consisten en una superficie dura. se muestran los haces paralelos 1 y 2.) se refleja según un ángulo φ. con una punta de diamante. Las redes de reflexión*.15. sobre la que se ha grabado un gran número de surcos paralelos y muy próximos entre sí (entre 300 y 2000 surcos por milímetro para las regiones ultravioleta y visible). Dispersión de radiación por un prisma. que son las más utilizadas.Claudio González Pérez 27 El material de que está construido el prisma depende del tipo de radiación a dispersar. . rendija de salida rendija de entrada λ1+λ2 λ1 λ 2 .

16. por lo que hay que tener en cuenta la sensibilidad del detector. la cual puede limitar el estrechamiento de la rendija. ** El signo menos indica que el ángulo de reflexión. la línea de primer orden es la más intensa.16. φ. siendo posible aumentar la resolución. nλ = d (sen i + sen φ) donde n. existen distintos valores de λ para unos determinados ángulos i y φ. la difracción por la propia rendija comienza a ser apreciable. por lo que junto con la línea de primer orden (n=1) aparecen líneas de órdenes superiores. a partir de un determinado valor. ya que. El fenómeno de la difracción de una radiación policromática por una red se representa esquemáticamente en la figura 3. pero solo hasta un cierto límite. se hace girar la red hasta hacer que la radiación que interesa coincida con la rendija de salida. Además. se denomina orden de difracción. Difracción de una radiación policromática por una red. disminuye también la intensidad del haz de radiación. cae en el lado opuesto al ángulo de incidencia. número entero. 3er orden 267 2º orden 400 1er orden 800 600 400 200 300 200 200 radiación incidente (200–800 nm) Figura 3. CD = – d sen φ** 28 Según la ecuación anterior. .Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible AB = d sen i por lo cual. Para seleccionar la radiación de una determinada longitud de onda. i. eliminando los órdenes superiores mediante filtros. En cuanto a la anchura de rendija de salida debe tenerse en cuenta lo siguiente: a medida que disminuye la anchura de rendija se reduce la anchura de banda. Ordinariamente. es necesario considerar que al disminuir la anchura de rendija. Las líneas de órdenes superiores pueden eliminarse mediante filtros.

. . de flujo térmica 2 cm Figura 3. Celdas para espectrofotometría. mientras que en la región ultravioleta se necesita cuarzo o sílice fundida (ambas sustancias también son transparentes en la región visible). Posiblemente.17. y la marca siempre se pone en la misma dirección cuando se coloca el tubo en el compartimento de cubetas del instrumento. el mayor inconveniente esté relacionado con la presencia de órdenes de difracción superiores. dispersión lineal y pocas pérdidas de radiación por absorción. si bien existe una gran variedad en cuanto a tamaño. Las celdas se deben llenar de tal forma que el haz de radiación pase a través de la disolución. las redes de difracción presentan las ventajas de su elevada resolución. Las celdas típicas para las regiones ultravioleta y visible tienen 1 cm de paso óptico.Claudio González Pérez 29 En resumen. el vidrio puede emplearse entre 350 y 2000 nm. En algunos instrumentos baratos se utilizan a veces tubos de ensayo cilíndricos como recipientes para las muestras. estándar (1 cm) . para lo que se marcan en un lado.17. por lo cual la mayoría de los recipientes para las muestras son celdas o cubetas para colocar líquidos en el haz del espectrómetro. Recipientes para las muestras En espectrofotometría analítica. Estos recipientes deben estar fabricados con un material que permita el paso de radiación de la región espectral de interés. casi siempre se trabaja con disoluciones. con el menisco por encima del haz. y comparando con los prismas. Es importante que estos tubos siempre se coloquen igual. Así. cilíndrica microcelda . forma y otras peculiaridades. como se muestra en la figura 3.

se promocionan electrones a las bandas de conducción. por lo que en la práctica. Buena disponibilidad para la amplificación. relativamente baratas y no requieren una fuente de energía externa. Utilizable en un amplio intervalo de longitudes de onda. Células fotovoltaicas. fototubos y tubos fotomultiplicadores. Respuesta lineal para la energía radiante. su uso limitado a la región visible (su máxima sensibilidad * En espectrofotometría infrarroja suelen utilizarse detectores térmicos. sobre la que se deposita una fina capa de un material semiconductor. y éste se recubre de una capa muy fina de oro o plata.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 30 Detectores Los detectores usados en espectrofotometría ultravioleta y visible son transductores que convierten la energía radiante en una señal eléctrica*. Un detector ideal deberá presentar las características siguientes: * * * * * * * Sensibilidad elevada en la región espectral de interés. se evalúan todos los factores anteriores y se selecciona algún detector que resulte adecuado al caso. que actúa como segundo electrodo o electrodo colector (figura 3. Consisten en una placa de hierro.18. Sin embargo. Tiempo de respuesta pequeño. En cuanto a los inconvenientes. Las células fotovoltaicas presentan las siguientes características: son sencillas de construir. que actúa de electrodo positivo. Los más utilizados son: células fotovoltaicas. haciendo que pasen electrones desde la superficie del selenio hasta el electrodo colector de plata. como selenio.18. Elevada relación señal/ruido. Mínima señal de salida en ausencia de radiación. produciéndose un aumento de la conductividad proporcional al número de fotones que inciden sobre la superficie del semiconductor. que responden al calor. Célula fotovoltaica. . por lo que pueden conectarse directamente a un galvanómetro o un amperímetro.) Plata ( ) Selenio Hierro Figura 3. no existe el detector ideal. ( ) Cuando la radiación electromagnética incide sobre el selenio.

hν (+) (–) e– Figura 3. y fenómenos de fatiga.) . se produce una emisión de fotoelectrones que se dirigen al ánodo. por tanto. La emisión de electrones depende de la naturaleza de la superficie del cátodo y de la frecuencia de la radiación.19. presentan dificultades para la amplificación. Este tipo de detector consiste en un cátodo fotosensible y una serie de electrodos (dínodos). de forma que la corriente de salida disminuye gradualmente con el tiempo. Consisten en un cátodo semicilíndrico recubierto interiormente de un material fotosensible. en el interior de un recipiente en el que se ha hecho el vacío (figura 3.20. Cuando la radiación incide sobre el cátodo. por la posibilidad de poder amplificar la corriente inicialmente generada. Fototubo.19. mientras que la respuesta a 350 y a 750 nm disminuye hasta un 10 % de la máxima). siendo. y un ánodo. Tubos fotomultiplicadores.). . En general. . Muchos espectrofotómetros están provistos de detectores intercambiables que permiten mantener una buena respuesta en un amplio margen de longitudes de onda. originándose una corriente que posteriormente se amplifica.Claudio González Pérez 31 se presenta hacia los 550 mn. cada uno a un potencial menos negativo que el que le precede (figura 3. En el comercio existen fototubos que difieren en el material con el que está construida la superficie del cátodo. diferente su respuesta a la radiación de diversas frecuencias. puede concluirse que los fototubos son más sensibles que las células fotovoltaicas. Fototubos.

El límite de detección viene condicionado por el ruido de fondo que se origina como consecuencia de la emisión termoiónica. continuamente. éstos. Alternativamente. la absorción de la muestra. Este sistema de detección se caracteriza por su respuesta rápida y elevada sensibilidad. De hecho. debe de compararse. a su vez. con la de una referencia o blanco conteniendo las mismas especies que la muestra. estas corrientes pueden eliminarse virtualmente enfriando el detector a –30 ºC. conteniendo el analito. la cual puede reducirse enfriando. Normalmente. Al incidir en él. de carácter relativo. A: ánodo La radiación que llega al fotocátodo provoca la emisión de electrones primarios. excepto el analito. los tubos fotomultiplicadores contienen 9 ó 10 dínodos.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 32 dínodos C –550 V. En los instrumentos de haz sencillo hay solamente un haz de radiación que.10. por su propia naturaleza. hν C: càtodo Figura 3. debe sustituir éste a la muestra en cada lectura. –500 V. INSTRUMENTOS DE HAZ SENCILLO Y DE HAZ DOBLE Las medidas de absorción de radiación ultravioleta y visible son. Tubo fotomultiplicador.) la radiación pasa . que son acelerados hasta el primer dínodo. si bien esto no se lleva a cabo en el trabajo espectrofotométrico ordinario. A –600 V. cada fotoelectrón origina la emisión de varios electrones adicionales. En él. hasta que al final. se amplifica electrónicamente y se mide. De esta forma. lo cual implica varios segundos entre cada medida. la muestra y la referencia pueden compararse varias veces por segundo usando un instrumento de doble haz.20. para comparar la absorción del blanco. son acelerados hasta el dínodo 2. y así sucesivamente. después de pasar a través de la muestra llega al detector. la corriente así producida se recoge en el ánodo. los cuales originan de 106 a 107 electrones por cada fotón. (figura 3.

La operación con el sistema de doble haz presenta. sobre todo si ε tiene un valor elevado a determinadas longitudes de onda. la intensidad de la absorción. por consiguiente. expresada en términos de la absortividad molar. Cuando se trata de identificar sustancias orgánicas. mínimos y puntos de inflexión) de la sustancia problema con los del compuesto puro. y el circuito compara automáticamente P y Po para obtener la absorbancia. las dos ventajas siguientes: la comparación muy rápida de muestra y referencia ayuda a eliminar errores debidos a fluctuaciones en la intensidad de la fuente y del detector. en general. De esta forma la radiación es desviada varias veces por segundo. La identificación de un compuesto puro requiere la comparación empírica de los detalles del espectro (máximos. APLICACIONES En principio. se usa con frecuencia como criterio adicional para la identificación. cualquier especie química que absorba radiación electromagnética en las regiones ultravioleta o visible es susceptible de poder ser determinada por técnicas espectrofotométricas. menos útiles con fines cualitativos que los espectros en la región infrarroja. Por otra parte. se facilita la posible automatización.Claudio González Pérez 33 alternativamente a través de la muestra y de la referencia. Análisis cualitativo Los espectros de absorción ultravioleta y visible son. inestabilidad electrónica y cambios en el sistema óptico. el detector mide Po. Cuando el espejo obturador intermitente no desvía el haz. menos características. Además. Cuando dicho espejo desvía el haz a través de la celda de referencia. lo cual se lleva a cabo mediante un motor que hace girar un espejo ("chopper") dentro y fuera de la trayectoria de la radiación. es conveniente operar en fase de vapor y a presión baja. fundamentalmente. ya que en estas condiciones. éste pasa a través de la muestra y el detector mide la potencia radiante P. ε. debido a que en aquellos las bandas son más anchas y. siendo la espectrofotometría una de las herramientas más usadas. el espectro observado es . El mayor campo de aplicación se encuentra en el análisis cuantitativo.

Su espectro se usa frecuentemente en test de especificaciones de pureza. los campos del disolvente pueden modificar de forma irregular los niveles de energía vibracionales y. generalmente es posible resolver la estructura fina vibracional y rotacional. Una de las pocas sustancias orgánicas con espectro de absorción característico en disolución es el benceno. sobre todo. En resumen. ésteres y cetonas. Además. "Análisis Instrumental".Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 34 debido a moléculas aisladas y. estos datos deben usarse siempre en combinación con los obtenidos a partir de espectros infrarrojos. Así. Skoog y James J. Madrid (1993) . * Douglas A. obteniendose como resultado la aparición de una banda. la presencia de una banda débil entre 280 y 290 nm. cuando el número de moléculas es grande. alcoholes. no es posible normalmente. pero sí representa otra herramienta disponible para aplicarla de forma inteligente. el espectro de absorción en las regiones ultravioleta y visible puede ser de utilidad para la detección de ciertos grupos funcionales. como consecuencia de lo cual se limita la rotación. En disolución y. que se desplaza hacia menores longitudes de onda al aumentar la polaridad del disolvente. y para mayor seguridad. donde el contenido en benceno debe ser cuidadosamente controlado. Análisis cuantitativo Ya se ha comentado que la espectrofotometría de absorción ultravioleta y visible es una de las técnicas más usadas en análisis cuantitativo. de resonancia magnética nuclear o cualquier otra información analítica de que se disponga. Aun cuando la identificación de un compuesto orgánico de forma inequívoca con este técnica. indica la presencia de un grupo carbonilo. en alcohol absoluto o en ciclohexano. el Ho2O3 se utiliza en ocasiones para comprobar el calibrado de la longitud de onda de algunos instrumentos. por ejemplo. casi las únicas que tienen espectro de absorción ultravioleta y visible característico son los iones trivalentes de las tierras raras. sino solvatadas. En cuanto a sustancias inorgánicas. De cualquier forma. Leary. lo que proporciona detalles característicos para la identificación. Mc Graw–Hill. Se ha estimado que solo en el campo biosanitario. el espectro de absorción ultravioleta y visible no es una prueba infalible de la identidad de una especie química. por ejemplo. Ed. las moléculas no se encuentran aisladas. en presencia de disolventes polares como el agua. un 95 % de las determinaciones cuantitativas se llevan a cabo por espectrofotometría*. De hecho. los niveles de energía son poco definidos.

La precisión puede considerarse aceptable. pero solo en ciertos estados de oxidación. si bien su mayor sensibilidad (10–4–10–6 M) y rapidez los hace competir ventajosamente con aquellos en muchas ocasiones. previa oxidación con persulfato: 2 Mn2+ + 5 S2O82– + 8 H2O —> 2 MnO4– + 10 SO42– + 16 H+ La disolución violeta de permanganato presenta un máximo de absorbancia a 525 nm. algunos elementos inorgánicos absorben intensamente en la región visible. ya que. aunque con determinadas precauciones pueden reducirse considerablemente. el propio reactivo. Así. normalmente se obtienen incertidumbres relativas entre 1 y 2 %. el manganeso se determina frecuentemente en forma de permanganato. por ejemplo. a) Selección de la longitud de onda. una etapa previa (además de la disolución si se trata de muestras sólidas) debe incluir un proceso redox para llevar el elemento al estado de oxidación adecuado. ya que de esta forma se obtienen máximas sensibilidades. por lo que el cumplimiento de la ley de Beer es normalmente satisfactorio (ver anteriormente: "Uso de radiación no monocromática" en las "Desviaciones de la ley de Beer"). incluso. El procedimiento a seguir para llevar a cabo una determinación analítica consta de una serie de etapas encaminadas a establecer las condiciones de trabajo y la preparación de la curva de calibrado. Por otra parte. el Fe3+ puede determinarse mediante el . La base de la aplicación de los métodos espectrofotométricos al análisis cuantitativo es la ley de Beer. Por otra parte. por ejemplo. en esa zona. A veces no es posible operar a la longitud de onda del máximo de absorbancia cuando a esa longitud de onda absorbe apreciablemente alguna especie (distinta del analito) presente. b) Preparación de las muestras para el análisis. En estos casos. En otras ocasiones es posible desarrollar un color por medio de reactivos orgánicos o inorgánicos. los métodos espectrofotométricos son menos exactos. la curva espectral suele ser bastante plana. Así. Muchos compuestos orgánicos absorben en la región ultravioleta y el tratamiento de la muestra solo implica la separación de las posibles interferencias.Claudio González Pérez 35 En relación con los métodos clásicos de análisis (gravimétricos y volumétricos). en ocasiones. Las medidas de absorbancia se llevan a cabo normalmente a la longitud de onda correspondiente al máximo de absorción.

Orden de adición de los reactivos. 50 y 0. ya que cantidades demasiado grandes o demasiado pequeñas pueden originar desviaciones de la ley de Beer. el nitrato se reduce previamente a nitrito y se determina éste por el procedimiento indicado anteriormente. En estas ocasiones la temperatura de trabajo deberá especificarse en el procedimiento. En relación con estudios medioambientales. Por ejemplo. la determinación de cobalto mediante la formación del complejo entre Co(III) y nitrilotriacetato implica la formación previa del correspondiente . A veces.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 36 color rojo de los complejos formados con SCN–. Estas especias. Asimismo. La formación de especies absorbentes mediante el uso de reactivos adecuados hace necesario considerar toda una serie de factores. Para el amoniaco se utiliza el reactivo de Nessler. Previamente a cualquier nueva determinación espectrofotométrica es necesario establecer los márgenes de concentraciones adecuados de los reactivos. esta variable será necesario tomarla en consideración. Mg y Al. mientras que si se incumple alguna de las premisas anteriores. La importancia del pH y su influencia sobre los iones metálicos y los ligandos se discute detalladamente en las obras que tratan el tema correspondiente a equilibrios en disolución. para lo cual suele utilizarse pararosanilina como reactivo. midiendo la absorbancia a 520 nm.1 g/mL respectivamente. Esta variable suele jugar un papel muy importante en las reacciones de formación de complejos. midiendo a 560 nm la absorbancia del compuesto rojo obtenido. Cuando la especie absorbente es estable y su formación es rápida. operando en presencia de AEDT para evitar las interferencias de Ca. mientras que para el nitrito suele utilizarse la clásica reacción de diazotación con aminas aromáticas y posterior reacción con ácido naftilamino-7-sulfónico. el Ni2+ por el color rosa de su quelato con dimetilglioxima. no es necesario controlar el tiempo al que realizar las medidas. Concentración de los reactivos. Por su parte. NH3. Determinadas reacciones requieren operar a temperatura elevada para aumentar la cinética de formación de un determinado complejo. NO3– y NO2– pueden representar peligro para la salud cuando están presentes en aguas de consumo a niveles superiores a 500. etc. Tiempo adecuado para la medida. Temperatura. es importante la determinación de SO2 en el aire. nitritos y nitratos en aguas para consumo público suele hacerse espectrofotométricamente. entre los que cabe mencionar: pH. la determinación rutinaria de amoniaco. es importante añadir los reactivos según una determinada secuencia.

Cuando se trata de analizar materiales complejos. Este método. como se comentó. si no imposible. Asimismo. Concentración de sales. se suele aplicar de la siguiente manera: a varias alícuotas idénticas de la muestra se adicionan volúmenes variables de una disolución estándar del analito. Los efectos de las variables mencionadas deben conocerse y. en consecuencia. lo cual muy frecuentemente se consigue por enmascaramiento. Por ello. con objeto de contrarrestar los efectos de la matriz. Existen muy pocas reacciones que sean totalmente específicas. de concentración conocida. por lo cual el peróxido de hidrógeno (oxidante) debe añadirse en último lugar. el método normal de trabajo consiste en la preparación de un calibrado a partir de una serie de disoluciones patrón. aunque tambien puede recurrirse a esta técnica cuando la especie absorbente es poco soluble en agua. En estas ocasiones suele ser de utilidad el método de adición estándar. en principio. Altas concentraciones de electrólitos influyen frecuentemente sobre la absorción de determinados compuestos. Se añaden entonces los reactivos correspondientes al método empleado y cada disolución se enrasa a un . en análisis espectrofotométrico. c) Determinación de la relación absorbancia–concentración. por lo que en muchas ocasiones es necesario eliminar las interferencias de determinadas especies. es muy difícil. Sin embargo. reproducir en los patrones las condiciones de las muestras. debido a la formación de asociaciones iónicas que originan desplazamientos del máximo de absorbancia. escogerse un conjunto de condiciones de trabajo de forma que la absorbancia no sea afectada apreciablemente por pequeñas variaciones incontroladas en sus magnitudes. La eliminación de sustancias interferentes puede llevarse a cabo en ocasiones mediante extracción con algún disolvente orgánico inmiscible con el agua. Una vez conocida la absorbancia de una determinada especie. preparadas en las mismas condiciones que la muestra y obtener los resultados por interpolación. ε. se podría obtener la concentración a partir de la ley de Beer: A = ε b C. Extracción con disolventes orgánicos. Eliminación de interferencias.Claudio González Pérez 37 complejo con Co(II). tampoco es conveniente basar los resultados de un análisis en un valor de la bibliografía para obtener ε. no es prudente asumir el cumplimiento de dicha ley y utilizar un solo patrón para determinar la absortividad molar.

Análisis de mezclas.0 V. Las medidas de la absorbancia se hacen en el original y despues de cada adición. Si se cumple la ley de Beer. Análisis de mezclas de sustancias absorbentes Cuando en una disolución hay varias sustancias que absorben radiación.. llevar a cabo su determinación sin necesidad de separar previamente los distintos componentes. si es necesario.4 o o o 0. ml 15. antes de medir la absorbancia*. a partir de ahí la concentración de la muestra original. por ajuste por mínimos cuadrados) con el eje horizontal y. y pueden presentarse los siguientes casos: Espectros no superpuestos. las adiciones estándar pueden llevarse a cabo por sucesivas adiciones de incrementos de una disolución patrón de concentración conocida a una única alícuota del problema. λ1 para determinar M y λ2 para determinar N. * Cuando la cantidad de muestra es limitada.6 A 0. Método de adición estándar para análisis espectrofotométrico. En estas ocasiones.21. 0. como se muestra en la figura 3.22. La forma de proceder depende de los espectros de absorción de ambas especies. Espectros no superpuestos. A M N λ1 λ2 Figura 3. es posible.2o 0 5.0 10.22. es posible encontrar algunas longitudes de onda a las que absorba solo una de las especies. . en muchos casos. a partir de la cual se obtiene el punto de corte de la recta (obtenida.0 Figura 3.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 38 volumen fijo. los datos se representan como en la figura 3. Se va a considerar el caso de que la muestra esté constituida por los componentes M y N.21.

23. Superposición completa de espectros. se resta esta contribución de la absorbancia medida a λ2.24. Análisis de mezclas. Como se indica en la figura 3. Con ello se obtiene la absorbancia del componente N. A continuación se determina la absorbancia de M a la longitud de onda λ2 a partir de la absortividad molar (en una experiencia previa) y finalmente. A M+N N M λ 1 λ 2 Figura 3. M+N A M N λ 1 λ 2 Figura 3. Análisis de mezclas. cuya concentración se calcula posteriormente de la forma acostumbrada.. no es posible encontrar una longitud de onda en la que M y N absorban de forma exclusiva.23. la especie N no interfiere en la medida de M a la longitud de onda λ1. Superposición parcial de espectros. Espectros completamente superpuestos.24. por lo que la determinación de esta especie puede hacerse directamente a λ1.Claudio González Pérez 39 Espectros superpuestos parcialmente. Cuando la situación es como se muestra en la figura 3. .

La principal ventaja del método es que el uso de múltiples puntos a lo largo de todo el espectro. La pendiente de la recta permite obtener CN y la ordenada en el origen. que deben ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrón. Puede ocurrir que exista solapamiento a todas las longitudes de onda y que. . obteniéndose una línea recta. εM y εN solamente a dos longitudes de onda. no todos los sistemas se comportan de este modo. εM grande y εN pequeña. El método puede extenderse con facilidad a sistemas de tres componentes. a partir de las pendientes de sus representaciones de la ley de Beer. el problema se resuelve midiendo las absorbancias A1 y A2 a las longitudes de onda λ1 y λ2 respectivamente. Esta forma de proceder es válida solo si se cumple la ley de Beer y si los dos componentes se comportan independientemente uno del otro. o mejor. La mayor precisión se alcanza cuando se eligen longitudes de onda en las que las diferencias entre las absortividades molares sean grandes: a λ1. para cada λ. cuyo fundamento es el siguiente: la primera de las ecuaciones anteriores puede escribirse así: A1 ε M1 b = CM + ε N1 ε M1 CN En lugar de medir A. Para un cierto número de medidas. Sin embargo.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 40 En este caso. en lugar de utilizar solamente dos. εN1 y εN2 las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda λ1 y λ2. Un procedimiento alternativo para analizar estas muestras consiste en un método gráfico. En las ecuaciones anteriores. de forma que la absorbancia total de una disolución a una longitud de onda dada es igual a la suma de las absorbancias de los componentes individuales presentes. para lo cual es necesario disponer de los espectros correspondientes a los componentes puros y a la mezcla desconocida. permite alcanzar un grado superior de precisión y exactitud. εM>εN. se representan gráficamente los valores de A/εM b frente a εN/εM. b representa el camino óptico y εM1. CM. εM2. y a λ2. y planteando las ecuaciones siguientes: A1 = εM1 b CM + εN1 b CN (a λ1) A2 = εM2 b CM + εN2 b CN (a λ2) Esto es posible porque la ley de Beer establece que la absorbancia es una propiedad aditiva. se miden estas magnitudes a varias. εM pequeña y εN grande.

el permanganato) o producido por un indicador. se muestra la forma de algunas curvas de valoración fotométrica. como en la valoración de As(III) con BrO3–—Br– leyendo la absorbancia a la longitud de onda del bromo. . Las curvas de valoración consisten. Para las que son apreciablemente incompletas se produce una curvatura en las proximidades del punto de equivalencia. La curva b) es característica de sistemas donde absorbe el producto de la reacción. En estos casos puede detectarse el punto final fotométricamente. las curvas e) y f) pueden representar la adición de ligandos para formar dos complejos sucesivos de diferente absortividad. Por ello.Claudio González Pérez 41 Valoraciones fotométricas En las valoraciones convencionales. Para llevar a cabo esta técnica. La absorbancia medida. o donde los colores de las dos formas no contrastan claramente. En la figura 3. cuando el analito se convierte en una especie no absorbente. midiendo a 290 nm. En las valoraciones fotométricas se miden las cambios de absorbancia de una disolución durante la valoración. el recipiente de valoración puede colocarse directamente en el camino óptico del instrumento. por ejemplo. La curva a) es típica de la valoración donde solo absorbe el reactivo valorante. en la valoración de Cu(II) con AEDT. En estos casos. en condiciones favorables. esto requiere normalmente alguna modificación del compartimento de la muestra. obtienen fácilmente una precisión de unas cuantas décimas por ciento. el punto de equivalencia se detecta por medio de la observación visual del cambio de color. de la valoración de p-toluidina en butanol con ácido perclórico. lo más corriente es la utilización de células de flujo. después de cada adición de valorante. se representa frente al volumen de reactivo. Los operadores con vista normal. Este es el caso. Estos cambios de absorbancia indican cambios en la concentración de alguna especie absorbente de radiación. se obtiene la curva c). en dos líneas rectas que se cortan en el punto final. a la longitud de onda óptima. se obtienen curvas como la d). si bien.25. Por otra parte. es difícil o imposible obtener buenos resultados en casos donde el cambio de color es gradual. Sin embargo. Finalmente. ya sea inherente a uno de los reactivos (por ejemplo. Cuando un analito coloreado se transforma en un producto incoloro al tratar con un reactivo valorante que también absorbe. si la reacción es completa. el punto final se obtiene por prolongación de los dos tramos rectos. por ejemplo.

de AEDT Figura 3. Valoración de una mezcla de Bi(III) y Cu(II) con AEDT.26. Cuando se ha terminado de formar el complejo Bi(III)—AEDT. En la figura 3. .25. Se obtienen dos puntos finales bien definidos. aumentando la absorbancia hasta que éste se forma completamente. A Punto final del Cu Punto final del Bi vol. así como tampoco el complejo Bi(III)—AEDT. se muestra la curva de valoración fotométrica de una mezcla de Bi(III) y Cu(II) con AEDT. comienza la formación del complejo de Cu(II). ninguno de los cationes ni el reactivo absorben. A la longitud de onda de medida (745 nm). Curvas de valoraciones fotométricas. Este complejo es más estable que el de Cu(II)—AEDT y se forma en la primera parte de la valoración.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 42 Figura 3.26.

La relación [HA]/[A–] puede obtenerse espectrofotométricamente si se conocen las correspondientes absortividades molares. Por la misma razón pueden utilizarse disoluciones más diluidas. puesto que solo es necesario que absorba alguna de estas tres especies: reactivo valorante. cuando [HA] = [A–]. que depende de observaciones cerca del punto de equivalencia. HA <—> A + H – + Ka = A – H HA + pK a = pH + log HA A – Para determinar el valor de pKa es necesario conocer el pH y las concentraciones (en sentido estricto. * La presencia de otras sustancias que absorban a la longitud de onda a la que se mide no origina necesariamente interferencia. * Los datos experimentales que realmente interesan se toman muy alejados del punto de equivalencia. a su vez. εHA y εA–. La determinación espectrofotométrica de constantes de disociación de ácidos y bases se basa en que el espectro de absorción de moléculas orgánicas con grupos funcionales ácidos o básicos depende del pH del medio. las cuales. ya que solo importa el cambio que se observa en los valores de la absorbancia. pKa = pH y este valor de pH corresponde a la mitad de la curva de valoración fotométrica. Según la ecuación anterior. Determinación de constantes de disociación de ácidos y bases. De esta forma.Claudio González Pérez 43 Las valoraciones fotométricas presentan las siguientes ventajas sobre las convencionales: * Con ellas es posible la determinación de sustancias no absorbentes. al 50 % de la . las actividades) de las formas ácida (HA) y básica (A–). esto es. las reacciones empleadas no necesitan tener constantes de equilibrio tan favorables como las requeridas para una valoración convencional. pueden obtenerse desplazando el equilibrio de forma virtualmente completa hacia la derecha y hacia la izquierda mediante la adición de un exceso de base y de ácido respectivamente. sustancia a valorar o producto de la reacción. Para un ácido débil.

dicho pKa se determina por el punto de inflexión. La parte izquierda corresponde a la forma ácida del indicador. La presencia de un punto isobéstico evidencia que el equilibrio en cuestión implica solo dos especies absorbentes. . 615 nm A 9 8 7. En la figura 3.27. Este punto puede obtenerse representando gráficamente la absorbancia a una determinada longitud de onda frente al pH. se han representado los espectros de absorción de un indicador ácido-base a distintos valores de pH.5 7 6.27. Espectros a varios pH y variación de la absorbancia con el pH a =625 nm El punto donde se cruzan los espectros se denomina punto isosbéstico.27. mientras que la parte superior derecha corresponde a la conversión casi total en la forma básica. Debido a que el pKa se define como el valor de pH en el cual una mitad del indicador está en la forma ácida y la otra mitad en la forma básica. Con esta finalidad se utilizan fundamentalmente los siguientes métodos: Método de las variaciones continuas. Considérese que pueden formarse varios complejos.5 6 400 500 600 λ 700 6 7 8 9 pH Figura 3.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 44 valoración del ácido HA. Determinación de la estequiometría de complejos El principal interés de la técnica espectrofotométrica para determinar la composición de complejos en disolución reside en el hecho de que pueden efectuarse medidas sin perturbar los equilibrios que se consideran.) se obtiene una curva en forma de S. Cuando se representa la absorbancia a 615 nm frente al pH (curva de la derecha en la figura 2.

se muestra la variación de la absorbancia para dos complejos de estequiometría ML2. Cuando se forma un complejo muy estable se obtiene una curva como la B.28. basado en la medida de las desviaciones con relación a las líneas rectas teóricas indicadas en la figura).Claudio González Pérez M + L <—> ML M + 2 L <—> ML2 ……etc 45 pero que en ciertas condiciones predomina uno. Figura 3. la representación dará un mínimo si el complejo absorbe menos que los reactivos. * En muchas ocasiones.La curvatura de las líneas experimentales es el resultado de no haberse completado la reacción de formación del complejo (de hecho. necesaria la corrección. se ha desarrollado algún método para la determinación de constantes de formación de complejos. el procedimiento a seguir consiste en preparar mezclas de diferentes concentraciones de M y L. En la figura 3. se preparan disoluciones del catión y del ligando de concentraciones idénticas y se mezclan en distintas relaciones de volumen.28. de manera que no es . como la curva C. Se obtiene una gráfica donde la absorbancia máxima se corresponde con la estequiometría del complejo predominante. y cuando es poco estable. pero manteniendo constante la concentración final (en la práctica. Para determinar la estequiometría del complejo predominante por el método de las variaciones continuas. La absorbancia de cada disolución se mide a una longitud de onda apropiada y se representa gráficamente la absorbancia corregida (absorbancia medida menos las absorbancias de M y L libres*) frente a la fracción molar de L. pero de modo que el volumen total sea constante). M ó L (o ambos) no absorben a la longitud de onda de interés. Por otra parte. Variaciones continuas para dos complejos ML2.

29.87). El método de la relación molar presenta sobre el de las variaciones continuas las siguientes ventajas: en primer lugar distingue mejor entre complejos de números de coordinación altos. Al representar la absorbancia del complejo frente a la relación en moles de los reactivos. se obtienen líneas rectas de diferente pendiente.2 ML A 1. el gran exceso de reactivo puede conducir a formar complejos de orden superior. Este método es similar al anterior. excepto que aquí se mantiene constante la concentración de uno de los componentes (a menudo.0 0.83 y xL=0. Método de la relación molar. puesto que el punto inicial tiene una absorbancia mayor que cero. en el complejo ML2 el ligando absorbe a la longitud de onda a la que se midió.4 0. el ión metálico) mientras que el otro se hace variar. por lo que la pendiente del segundo tramo es mayor que cero. Por otra parte. . Además.6 0. los datos experimentales indican claramente el exceso de reactivo necesario para que el complejamiento sea total. Por su parte.8 0.) En el complejo ML representado en la figura 3. entre ML5 y ML6 (xL=0. produciéndose la intersección en una relación que corresponde a la estequiometría del complejo (figura 3. el catión metálico absorbe a la longitud de onda de medida.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 46 Método de la relación molar. 1. lo cual es muy útil en procedimientos analíticos. por ejemplo.29.29. 0 1 2 3 [L] /[M] Figura 3.2 ML2 . . y esto puede considerarse una desventaja. y en otro orden de cosas.

Pico de absorbancia simétrico y su primera y segunda derivada. Actualmente. segundo e incluso órdenes superiores de la absorbancia frente a la longitud de onda: dA para la primera derivada dλ d A dλ 2 2 para la segunda derivada siendo A la absorbancia y λ la longitud de onda. En la figura 3. .30. Por ello. la señal de ordenadas no es proporcional al valor de absorción. se muestran las características del espectro de la primera y de la segunda derivada para el caso de un pico de absorción simétrico. sino a la pendiente del espectro normal. pero que se ha desarrollado en época relativamente reciente. la utilización de sistemas electrónicos de diferenciación mediante el empleo de un micro ordenador acoplado en serie con el espectrofotómetro permite la representación de derivadas de primero. como la pendiente en el espectro normal puede tener valores positivos y negativos. sobre todo por la falta de instrumentación a un precio razonable. el Figura 3. A A 1ª derivada 2ª derivada En el espectro de la primera o de la segunda derivada.Claudio González Pérez 47 ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS La espectrofotometría de derivadas es una técnica que se conoce desde hace mucho tiempo.30. La primera derivada de un espectro original también puede definirse como la representación gráfica de la pendiente de la curva de absorción a cada longitud de onda.

la posición correspondiente a la longitud de onda del máximo solo puede ser fijada de manera aproximada.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 48 espectro de derivadas presenta valores positivos y negativos en la escala de ordenadas. o bien. La determinación cuantitativa de componentes con bandas de absorción relativamente estrechas y que estén solapadas con una banda ancha de un segundo componente es uno de los campos de aplicación más extensos de esta técnica. Las disoluciones turbias presentan en general un aumento continuo de la absorbancia hacia longitudes de onda más cortas y no ocasionan. como criterio de pureza o para control de calidad. la estructura fina puede ser difícil de ver. mientras que en la primera derivada del espectro. al menos para un nivel de turbidez no demasiado elevado. Sin embargo. Mientras que en el espectro normal. según el carácter de la pendiente. * Determinaciones cuantitativas en presencia de dos o más componentes.31. Cuando el componente que se desea determinar solo es visible en el espectro total por un pequeño pico o por un hombro. la primera o segunda derivadas de un espectro de dos componentes permite. es más conveniente emplear la segunda derivada. Para una sustancia absorbente.) . ver claramente los diferentes compuestos y hacer determinaciones cuantitativas con errores sistemáticos muy pequeños o incluso despreciables (figura 3. la posición del máximo viene definida exactamente por el paso de la curva por el valor cero. En la práctica analítica normal esto tiene gran importancia. la posición de la longitud de onda y la relación entre los valores de los extremos (máximos y mínimos) representa una magnitud característica. especialmente en el caso de bandas de absorción anchas. bajo ciertas condiciones. En estos casos. máximos y mínimos. la utilización de métodos convencionales puede implicar grandes errores. ninguna variación espectral importante en la primera y segunda derivada. * Mejor resolución de los espectros. ya sea con fines de identificación. ya que los máximos y mínimos del espectro normal y de la segunda derivada aparecen prácticamente a las mismas longitudes de onda y la estructura fina del espectro normal se pone de manifiesto mejor que en la primera derivada. * Determinaciones en presencia de turbidez. por consiguiente. En el espectro normal. La utilización de la espectrofotometría de derivadas presenta las siguientes ventajas: * Medida exacta de λmax.

2 a 0. b) dos componentes. amoniaco. ¿Cuáles absorberán radiación ultravioleta?. butadieno.31. 10. el fenol tiene una absortividad molar de 1. butilamina. ¿Qué intervalo de concentraciones de fenol pueden determinarse si los valores de las absorbancias en cubetas de 10 cm deben limitarse a valores de 0.mol–1.31. Justifíquelo. Se determinó la absortividad molar de un compuesto químico midiendo la absorbancia de una disolución de concentración conocida utilizando una cubeta de 1 cm. 2. Se obtuvo el valor de 2. En la figura 3.cm–1. a) un componente. Para ello. En disoluciones acuosas neutras.8x104. Se adicionan a cada uno exactamente 0.Claudio González Pérez 49 Espectro normal 1ª derivada a) b) Figura 3. ¿Absorberán radiación visible?. fenol.9 unidades de absorbancia?. ¿Qué valor se obtendría si se utilizase una cubeta de 10 cm?. se han representado los espectros normales y la primera derivada de un componente caracterizado por una pequeña banda a) y el mismo componente "oscurecido" por la presencia de otra especie con una banda de absorción más ancha. pentanol. 5. Espectro normal y primera derivada.2x104 L mol–1 cm–1. 4. EJERCICIOS 1. se pipetean alícuotas de 10 mL de la muestra en matraces aforados de 50 mL. benzopireno.42 %? 3. Se trata de determinar la concentración de Fe(III) en un agua mineral. benceno. 15 y 20 mL de una disolución patrón que . clorohexano. ¿Qué espesor (camino óptico) debería tener la cubeta para que la misma disolución presente una transmitancia del 8. ácido acético. ozono. Dadas las siguientes sustancias: pentano.

de Fe(III).500 0.00 8. se midieron las absorbancias a 440 y a 545 nm.00 2. en medio ácido sulfúrico 1 M y utilizando cubetas de 1 cm.900 Obtener la estequiometría del complejo MLn.269 0. Después de enrasar a 50 mL.0 mL de la disolución de M.00 0.p.437.399 0.0 14. Se determinó la estequiometría de un complejo MLn por el método de las variaciones continuas y el de la relación molar.00 8.00 mL de L 0.0 A 0.00 2.530 0.261 0. Variaciones continuas mL de M 10.809 y 1.00 7.540 0.00 5.1 p.009 a 545 nm.252 0. Obtener la concentración de Fe(III) en la muestra de agua.750 0.000 Relación molar mL de L 0.00 4. obteniendo los correspondientes valores de absorbancia.653 respectivamente. Análogamente.447 0.00 10.00 5.00 7.77x10–4 M presentó una absorbancia de 0.00 9.00 5.720 0.0 9.00 1. Calcular las concentraciones de permanganato y de dicromato en la mezcla analizada. partiendo de disoluciones de M y de L 0.886 a 545 nm. se añadieron los volúmenes de L indicados en la tabla a 5.360 0.00 1.33x10–4 M era de 0.00 3.000 0.621. Para el método de la relación molar.035 a 440 nm y de 0.00 8.000 0. Para ello. Para aplicar el primer método se mezclaron los volúmenes de cada una de ellas que se indican en la tabla. 5.308 a 440 nm y de 0. Previamente.00 2.0100 molar. enrasando al mismo volumen en todos los casos.009 respectivamente (cubetas de 1 cm). .m.628 0.00 1. las absorbancias de las cinco disoluciones medidas a 580 nm (longitud de onda de máxima absorción) fueron 0. una disolución de permanganato 3.00 6.130 0.240.900 0. obteniendo los valores de 0. 6.00 4.0 A 0. 0.Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 50 contiene 11.00 6.799 0. se encontró que la absorbancia de una disolución de dicromato 8.00 3.181 0.00 6. seguido de un exceso de ion tiocianato. 0.00 12. Se analizó espectrofotométricamente una mezcla de dicromato y permanganato.660 0. para formar complejo rojo Fe(SCN)2+.00 3. 0.00 7.385 y 0.00 4.080 0.

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