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TÉCNICAS DE COLORACIÓN DE MICROORGANISMOS

M.C Gabriela Quintero

Objetivo:

Realizar las diferentes técnicas de coloración e identificar las estructuras y morfologías bacterianas y diferenciar microscópicamente las bacterias Gram positivas de las Gram negativas.

1. •Tinción diferencial: más de un colorante . Observación con tinciones •Tinción simple: un solo colorante. Observación en fresco •Preparación en fresco simple 2.

Colocar una gota de agua en un porta 2.Procedimiento para un preparado en fresco 1.Tomar la muestra con el asa de siembra o un gotero Muestra Porta objeto ..

 Los colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste .Colorantes  Son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por algún componente.

pueden usarse como color de contraste.básicos: Consisten en un catión coloreado unido a un anión incoloro. Tiñen estructuras citoplasmáticas de las células eucariotas  Ej: eosinato (-) de sodio (+).la fucsina ácida y el rojo Congo. la fucsina básica.  Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina. . el cristal violeta ácidos: Tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado. Tiñen la célula bacteriana uniformemente (ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos )  (cromatina nuclear de pro y eucariotas)  (más usados en citología bacteriana). No tiñen la célula bacteriana.

.TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA a) Frotis o (extensión) b) Secado c) La fijación d) Coloración.

Extensión de una fina capa de células sobre el porta Adición del colorante lavado y secado Secado al aire Fijación por flameado del porta Se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el porta y se observa con el objetivo de 100X .

formalina al 5 % (v/v).La fijación: Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto ( coagula las sustancias proteicas) TIPOS  CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH)  FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico. licor de Hoffman (partes iguales de etanol absoluto y éter) Metanol .

Simple .Coloración.

dejar secar y observar al microscopio Micrococcus luteus . Frotis y fijación 1.Cubrir la preparación con Azul de Metileno 5’ 2...Lunes Tinción simple de azul de metileno.Tomar la muestra con el asa de siembra 3..-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero Tinción 1.Poner una gota de agua en un porta 2..Lavar con agua.

Diferencial o compuesta Ejemplo. COLORACION DE ZIEHL. ESPORAS. .: COLORACION GRAM.NEELSEN.Coloración.

 Participa en la generación de energía y en la división celular. .La membrana celular Funciones:  Transporte selectivo de sustratos.éteres de alcohol isoprenoide. Estructura:  Bicapa fosfolipídica con proteínas  *en Archaea. algunas monocapas. membranas adaptadas a condiciones extremas .

Diferencias en la pared celular .

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Tinción de contraste Con safranina 2 minutos. Las Gram negativas se decoloran. Gram - .rosas o rojas. dejar actuar 2 minutos Todas las células siguen de color azul-violeta. Paso 4 Las G. Gram + Decolorar con alcohol Paso 3 Las células Gram + siguen de color azul-violeta. Las células G+ se ven azul-violeta. Paso 2 Añadir Lugol. con cristal violeta Durante 1 minuto.Tinción de Gram Tinción del frotis Paso 1 Previamente fijado al calor. Todas las células se tiñen de color azul-violeta.

Lunes Tinción de Gram Cocos Gram Bacilos Gram - .

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FORMA DE LAS BACTERIAS cocos bacilos espirilos .

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NEELSEN Fundamento de esta técnica diferencial se basa en la propiedad de la pared celular (acidos micólicos)  Resiste la decoloración con alcohol y ácido fuerte  Mycobacterium .COLORACIÓN DE ZIEHL.

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Neelsen .Coloración de Ziehl.

-Poner una gota de agua en un porta 2. con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero.-Tomar la muestra de un cultivo de Bacillus 3.-Lavar con agua. Mantener caliente durante 5 minutos.-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero 1. Tinción Frotis y fijación 1. dejar secar y observar al microscopio Esporas Bacterias .-Teñir con Safranina 1’ 5.-Cubrir la preparación con Verde Malaquita 2. hasta la emisión de vapores.Tinción de esporas.-Lavar con agua 4.-Calentar. 3.

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Clostridium botulinum .