1. Produccin de Etanol en Colombia Jorge Alberto Vsquez El etanol ha sido evaluado como combustible desde la invencin de los automviles.

En 1894, mientras Louis Renault, Armand Peugeot, Herbert Austin, Henry Ford, Karl Benz y otros intentaban adaptar el motor de combustin interna recientemente inventado en vehculos, simultneamente en Francia y Alemania se investigaba cmo llevar a cabo la utilizacin del etanol en estos motores. Desde entonces y hasta nuestros das, el uso del etanol en vehculos automotores ha tenido un considerable avance, principalmente porque tiene un alto potencial calrico, su uso reduce la dependencia del petrleo, se amplan las fuentes de energa alternativas para uso automotor y su combustin disminuye las emisiones de NO2 y CO (1). En la actualidad hay ms de cinco millones de vehculos entre automviles, camionetas y camiones en Brasil que usan alcohol carburante como combustible en diferentes concentraciones que van desde el 23% hasta el 100%. Este alcohol es producido a partir de la fermentacin y destilacin de las mieles de la caa de azcar (2).

El programa de alcohol brasilero ha creado ms de un milln de empleos; el uso del biocombustible ha reducido en un 75% el contenido de CO2 en la atmsfera de Sao Pablo los automotores que funcionan con etanol reducen sus emisiones de CO en un 57%, 64% menos de hidrocarburos y 13% menos de oxido nitroso (NO) que los automviles que funcionan con gasolina. Adems se calcula que el uso del gasohol ha producido una disminucin del ozono contaminante de la troposfera en 25% (3).

De acuerdo con varios estudios realizados por el Consejo de Recursos Areos de California, de las emisiones contaminantes presentes en la atmsfera, la combustin de la gasolina produce 63.6% del total de monxido de carbono; 34.9% de los xidos de nitrgeno y 26.7% de los componentes orgnicos voltiles (VOCs) los cuales son los principales contribuyentes a la disminucin de la calidad del aire (4). En el ao 2001, esta misma entidad estim que el orden de reduccin de las emisiones al

introducir la gasolina reformulada con 10% v/v de etanol es equivalente a quitar de las carreteras 3.5 millones de automotores. El uso de la gasolina limpia da cuenta de aproximadamente el 25% del total de las reducciones de ozono contaminantes de la atmsfera (5,6).

En Colombia se estableci un marco legal regulatorio para alcoholes carburantes con la Ley 693 de 2001. As mismo se cre la Federacin Nacional de Biocombustibles, entidad que brinda asesora y abre oportunidades de mercado para el etanol (Ley 693 de 2001). El alcohol industrial que se produce despus de la fermentacin del jugo de la caa de azcar, o de otros cultivos, se adiciona a la gasolina para generar una mezcla ms limpia y ecolgica. La reglamentacin del Ministerio de Minas contempla que dicha mezcla sea del 10% v/v.

1.1 Descripcin general del proceso de produccin de etanol en Colombia

La produccin de etanol para su uso como combustible comenz en Colombia en octubre del 2005, y a la fecha existen cinco destileras que trabajan acopladas a los ingenios azucareros: Incauca, Providencia, Mayagez, Manuelita y Risaralda, los cuales estn produciendo un milln de litros diarios de alcohol a partir de la miel B o miel segunda un subproducto de la cristalizacin del azcar de caa. Estos ingenios adems usan como materias primas la meladura y el jugo clarificado. La fermentacin es llevada a cabo en tres fermentadores en paralelo de 100mil litros cada uno y de forma continua, con recirculacin de vinaza. Este proceso es realizado con levaduras de Saccharomyces comerciales propias del ambiente natural de la India, suministradas por la empresa India, PRAJ Industries Limited proveedora de la tecnologa. (7).

El proceso de produccin de etanol en las destileras del valle, opera en forma continua y consiste de cinco etapas principalmente: Preparacin de sustrato, Fermentacin, Destilacin, Evaporacin de Vinaza y Deshidratacin (Ilustracin No.1).

Mieles/Jugo de caa

Agua

Nutrientes

Levadura

Aire

Preparacin del sustrato

Miel diluida Sustrato

diluido

Reproduccin delinculo inoculo Reproduccin del

Inoculo

Fermentacin
Vino

CO2

Etanol Anhidro

Destilacin
Vinaza diluida

Deshidratacin
Agua

Vinaza 10

Evaporacin
Vinaza 55
Vinaza concentrada

Ilustracin 1. Esquema de la produccin de etanol carburante en una destilera colombiana, que recircula vinaza (8).

1.1.1 Preparacin de Sustrato Las materias primas utilizadas son la Miel B, la meladura y el Jugo Clarificado, las cuales se mezclan para formar un sustrato que posee propiedades especficas para promover la fermentacin como son la cantidad de azcares fermentables, que no debe ser mayor a 36% p/p, porcentaje de slidos alrededor de 47% y acidez voltil, menor a 3500ppm. Estas materias primas son suministradas por la fbrica de azcar (7).

1.1.2 Propagacin de levadura en el laboratorio La propagacin de levadura en el laboratorio es la etapa inicial del proceso y su finalidad es aumentar el nmero de clulas viables a escala Erlenmeyer. En la mayora de los ingenios la propagacin de la levadura se realiza con miel B como sustrato, la cual es diluida a concentraciones de azucares fermentables inferiores al 6%p/v. Todo el proceso de propagacin en laboratorio se realiza en condiciones aspticas para prevenir el desarrollo de poblaciones de bacterias, levaduras salvajes y esporas contaminantes (9).

1.1.3 Propagacin en planta La propagacin en planta, inicia cuando se agrega el inculo producido en el laboratorio a los reactores CV 301, CV 302, CV 303, CV 304. La propagacin en cada reactor tarda aproximadamente 16 horas a una temperatura de 30-31 2 C y aireacin continua, utilizando como materia prima miel B.

La produccin de levadura requiere adems de una variedad de vitaminas y nutrientes esenciales como el nitrgeno, potasio, fosfato, magnesio, calcio; adems de trazas de hierro, zinc, cobre, manganeso, y molibdeno que tambin son aportadas por la materia prima. Normalmente, el nitrgeno es suministrado mediante sales de amonio, el fosfato y el magnesio en las formas de cido fosfrico y sales de magnesio. La aireacin y la adicin de nutrientes permiten que las levaduras se reproduzcan hasta agotar el sustrato; es importante anotar que la fase aerbica durar mientras la levadura tenga oxgeno disponible y otros nutrientes antes mencionados que provienen del mosto (9).

1.1.4 Activacin de la levadura La activacin se realiza en el reactor R-305 tanque de activacin, el cual es alimentado con nutrientes (vitaminas, nitrgeno, fsforo, etc.), aire, agua, antibiticos y alimento que es la mezcla proveniente del tanque de alimentacin T-124. Esta mezcla contiene una carga microbiana contaminante compuesta en su mayor parte por

bacterias acido lcticas, hongos y levaduras nativas, que provienen de la flora exoftica de la caa de azcar y sobreviven al proceso de produccin de azcar. En esta etapa del proceso, el cultivo de levadura que se ha venido propagando en condiciones controladas, interacta con la carga de microorganismos provenientes en la materia prima, las cuales generan problemas de contaminacin tan graves, que obligan a liquidar el tanque de activacin o R-305, generando retardos en el suministro de levaduras a los fermentadores y por ende causando prdidas significativas que se ven reflejadas en el rendimiento de produccin de etanol en la fbrica. (9)

1.1.5 Fermentacin El proceso de fermentacin consiste en convertir los azcares fermentables presentes en el sustrato a etanol y gas carbnico, proceso en el que se usa como catalizador las levaduras comerciales de la especie Saccharomyces cerevisiae.

Estos microorganismos, poseen en su membrana la enzima Invertasa que hidroliza la molcula de sacarosa (Ilustracin No.2) presente en el sustrato transformndola en glucosa y fructosa. Estos monosacridos son asimilables para la levadura y se utilizan como fuente de carbono (energa) necesarios para su metabolismo. Al consumir la glucosa y fructosa en un ambiente anaerobio o con concentraciones de azcares fermentables mayores a 5%, las levaduras producen etanol, gas carbnico y energa en forma de calor, fenmeno denominado efecto Crabtree (10).

Las reacciones qumicas involucradas son el desdoblamiento de la molcula de sacarosa en glucosa y fructosa por hidrlisis (Ilustracin 2).

Ilustracin 2. Esquema de inversin de la sacarosa y pesos moleculares (MW) (10)

y la conversin de la glucosa y fructosa en etanol y gas carbnico.

C 6 H 12 O6 Levadura 2C 2 H 5 OH 2CO2 Calor

Glucosa ----------- Etanol + Gas Carbnico + Calor.

Otras reacciones qumicas colaterales se pueden llevar a cabo, en las cuales se producen compuestos como glicerol, y otros en menor concentracin como: cido actico, cido lctico, cido succnico, propinico y cido butrico entre otros, que contribuyen a la acidez voltil de los mostos fermentados. Tambin se generan alcoholes de mayor peso molecular como el alcohol amlico, iso-amlico, isopropanol y butanediol que forman el aceite de Fusel el cual es un inhibidor de la levadura. Ilustracin No.3 (11).

Las destileras del Valle del Cauca cuentan con tres fermentadores en serie de 1000 m3 cada uno, construidos en acero inoxidable (Tanque 304), donde se llevan a cabo las reacciones bioqumicas. A los dos primeros se alimenta sustrato, agua y vinaza, esta ltima proviene de la seccin de destilacin y se utiliza para diluir y disminuir el consumo de agua. El tercer reactor trabaja como un post-fermentador donde los azcares fermentables residuales que no reacciona en los dos anteriores se consumen por las levaduras.

Ilustracin 3. Flujo fermentativo y oxidativo en Saccharomyces cerevisiae y valores de Km para el equivalente de reduccin NADH en las diferentes enzimas: GPDH (Glicerol fosfato deshidrogenasa), PDC (Piruvato descarboxilasa), ADHI (Alcohol Deshidrogenasa), Butanediol Deshidrogenasa (BDH).

Para mantener la produccin de alcohol en dichos bioreactores es necesario garantizar ciertos parmetros que permitan el desempeo de la levadura. Los ms importantes son el porcentaje de azcares fermentables en los tanques (16% p/v) y el tiempo de residencia para la levadura que se encuentra entre 18 y 20 horas, si se tiene en cuenta solo los tres fermentadores y se excluye el tanque de propagacin. Con este tiempo se estima que la levadura puede consumir todo los azcares fermentables que se alimenta a los fermentadores. Igualmente el porcentaje de slidos (12%), el pH, el cual debe permanecer alrededor de 4.0 para prevenir la aparicin de microorganismos contaminantes que afecten la levadura y compitan por los sustratos presentes en el medio y la temperatura, que debe mantenerse en 32C. Como la reaccin es exotrmica (liberacin de calor) la temperatura tiende a aumentar en los reactores. Por tal motivo cada fermentador cuenta con un sistema de enfriamiento independiente. Se

recircula constantemente el mosto de cada fermentador y pasa a travs de un intercambiador de calor de placas por donde tambin circula agua, para asegurar la temperatura del reactor (8). Al salir del ltimo fermentador, el efluente conocido como mosto fermentado o vino, contiene una concentracin de 8 a 9% (v/v) de alcohol, y se enva al tanque sedimentador de levadura. Gracias a la capacidad de floculacin de la levadura comercial (GR-X), tiende a agruparse formando una masa que por su densidad sedimenta y facilita su separacin del mosto. Por la parte inferior de este tanque se recupera levadura y por la superior, el mosto fermentado con 8.0% de alcohol que se enva posteriormente a la seccin de destilacin. La eficiencia de separacin en el sedimentador se encuentra alrededor del 60-70% de la levadura que ingresa al equipo.

La levadura que se recupera se enva al tanque de activacin de Levadura, cuya finalidad es revitalizar los microorganismos y promover su reproduccin. A diferencia del proceso de fermentacin, para la reproduccin de levadura es necesario la presencia de oxgeno, ya que es un proceso aerbico. Adems de aire, se suministran nutrientes, fuentes de carbono (sustrato), nitrgeno, fsforo, compuestos

organometlicos como magnesio, calcio, manganeso y zinc entre otros, indispensables para las reacciones metablicas de las levaduras. Luego de ser activadas, las levaduras entran de nuevo al proceso al enviarse al primer fermentador manteniendo una operacin continua de la planta (8).

La eficiencia de la etapa de fermentacin adicionando vinaza, se encuentra alrededor del 88%, algo menor que algunas destileras brasileras que no usan vinaza y cuyas eficiencias se puede encontrar alrededor del 90% (160, 161). Esto es debido probablemente a la mezcla con vinaza la cual contiene factores de estrs que disminuyen la velocidad de crecimiento, no obstante la disminucin de la eficiencia se ha justificado por el desarrollo de un proceso ms limpio en el cual se obtienen 2 a 3 litros de vinaza por litro de etanol, mientras que en las plantas brasileras se producen 12 a 14 litros de vinaza por litro de etanol (8).

1.1.6 Destilacin El proceso de destilacin aprovecha que cada material tiene su volatilidad o punto de ebullicin a una determinada temperatura, por lo cual los alcoholes que tienen menor volatilidad que los slidos formados en la fermentacin, salen por la parte superior de la columna con una concentracin de 40 - 45% de etanol; mientras que la mayor cantidad de impurezas sale por la parte inferior de la misma en forma de vinaza Los vapores procedentes de la columna despojadora, con un contenido del 40 - 45% de etanol se envan a la columna rectificadora, donde se aumenta su concentracin hasta aproximadamente el 95% de etanol. Por el fondo de la columna salen otras impurezas denominadas flemazas, que se enva a la planta de tratamiento de aguas residuales, junto con los condensados de los evaporadores.

1.1.7 Deshidratacin. El alcohol rectificado puede ser comercializado como tal, pero para poder usarlo en la oxigenacin de la gasolina es necesario todava retirarle el porcentaje de agua. Esto se hace mediante los tamices moleculares, donde resinas de intercambio retienen el agua presente en los vapores del alcohol rectificado, obtenindose finalmente un etanol con una concentracin del 99.5% que es conocido como etanol anhidro o alcohol carburante. Para lograr disminuir la cantidad de vinaza producida, es necesario recircularla en aproximadamente un 65 a 70%, como agua de dilucin en el proceso de fermentacin y el restante se enva hacia unos concentradores de vinaza denominados flubex, los cuales la llevan desde 9 - 11% de slidos hasta 29 - 31%; este material se enva hacia el proceso de produccin de compostaje. Hay otros ingenios que usan un flubex adicional y concentran la vinaza hasta 55%, no tienen planta de compostaje y usan la vinaza al 55% como fertilizante.

1.2 Caractersticas de la vinaza y el efecto inhibitorio de algunas de sus molculas

La vinaza es un subproducto de la destilacin del mosto, el cual representa el mayor problema ambiental para la industria del etanol. Sus caractersticas acidas, su alta demanda bioqumica de oxgeno (DBO), y su alto volumen por litro de etanol (13 litros aproximadamente), aumentan la complejidad de su tratamiento en las plantas brasileras (12).

En Colombia, se ha implementado la recirculacin de la vinaza a los tanques de fermentacin para minimizar el impacto ambiental, la relacin vinaza/etanol es de 2 a 3 litros/litro etanol. No obstante la alta carga de cidos orgnicos voltiles y de sales ha motivado a la bsqueda de microorganismos tolerantes a este subproducto.

Las caractersticas fisicoqumicas de la vinaza, han sido descritas ampliamente: esta contiene principalmente materia orgnica, potasio (K), azufre (S), magnesio (Mg), nitrgeno (N) y calcio (Ca); sin embargo, esta composicin es variable segn provenga de melaza, jugo o la mezcla de ambos. De acuerdo con anlisis realizados en Brasil, la vinaza proveniente de melaza presenta los mayores contenidos de materia orgnica y elementos minerales, ver tabla No. 1. (13, 14).

Las caractersticas de la vinaza obtenida a partir de los ingenios colombianos no dista mucho de lo observado con el subproducto obtenido en las plantas brasileras (Tabla No. 2) (15).

Aunque las clulas de levadura requieren de pequeas dosis de estas sales inorgnicas para usarlas en sus procesos metablicos y estructurales, las altas concentraciones presentes en la vinaza pueden ser contraproducentes para el crecimiento celular. Varios estudios se ha demostrado que el calcio es una de las ms inhibitorias, causando lavado o washout en los cultivos continuos (16). En trminos

generales el alto contenido de sales, es una de las causa de la respuesta a estrs osmtico por parte de la levadura, en la cual se observa una disminucin de la velocidad de crecimiento y un exceso de glicerol (17,18).
Tabla 1 Caractersticas de las vinazas, dependiendo del medio de fermentacin (16). Parmetro pH temperatura (o C ) BOD (mg O2/l) COD (mg O2/l) Slidos Totales (mg/l) Slidos libres (mg/l) Slidos fijos (mg/l) Nitrgeno (mg N/l) Fsforo (mg P2O5/l) Potasio (mg (K2O/l) Calcio (mg CaO/l) Magnesio (mg MgO/L) Sulfato (mg SO4/l) Carbon (mg C/l) Tasa C/N Materia orgnica (mg/l) Sustancias reductoras (mg/l) Melaza 4.1 - 5.0 80 - 100 25000 65000 81500 60000 21500 450 -1610 100 - 290 3740 - 7830 450 - 5180 420 - 1520 6400 11200 - 22900 16 - 16.27 63400 9500 Mezcla 4.4 - 4.6 80 - 100 19800 45000 52700 40000 12700 480 - 710 9 - 200 3340 - 4600 1330 - 4570 580 - 700 3700 - 3730 8700 - 12100 16.4 - 16.43 3800 8300 Jugo de caa 3.7 - 4.6 80 - 100 6000 - 16500 15000 - 33000 23700 20000 3700 150 - 700 10 - 210 1200- 2100 130 - 1450 200 - 490 600 - 760 5700 - 13400 19.7 - 21.07 19500 7900

Adicionalmente, la mayora de los cidos orgnicos voltiles que se producen en la fermentacin son concentrados en la vinaza en la medida que est es reciclada y reutilizada en sucesivas fermentaciones. Maiorella (1983) encontr las

concentraciones txicas (en las cuales la poblacin celular se reduce ms del 80% de algunos de estos subproductos en ensayos realizados en fermentadores de 5 Lts, usando 2,4Lts como volumen de trabajo y operando en continuo (Tabla No.3) (19).

La inhibicin por la interferencia qumica en las funciones de mantenimiento celular est bien ilustrada en el caso del cido actico (que inhibe en el rango de 0,5 a 9 g/L). El acetato es liposoluble y puede atravesar los lpidos de la membrana celular. Se ha demostrado que el cido actico (o acetato de sodio) inhibe a la levadura por la

interferencia qumica con el transporte de fosfato a travs de membrana. Este mecanismo de transporte es de forma activa, el cual requiere el gasto de ATP.
Tabla 2. Caractersticas de las vinazas de 55% y de 10% de slidos totales Anlisis Materia orgnica N P2O5 K2O CaO MgO SO42pH Densidad Unidad (%) (kg/m3) (kg/m3) (kg/m3) (kg/m3) (kg/m3) (kg/m3) (kg/m3) Vinaza 55% s.t. 47,77 4,30 0,50 41,00 7,00 9,00 35,00 4,3-4,5 1,35 Vinaza 10% s.t. 4,20-6,70 0,63-1,14 0,07-0,25 6,00-10,86 1,05-3,14 1,34-2,26 3,88 3,5-4,3 1,03

Por lo tanto la interferencia del acetato en este mecanismo ocasiona un aumento en los requisitos de ATP de la levadura para sus funciones de mantenimiento. Como consecuencia de este tipo de inhibicin: la produccin de clulas disminuye, a medida que aumentan las concentraciones del inhibidor. (19).

Recientemente

se

ha

demostrado

que

la

combinacin

de

dos

molculas,

especficamente cido actico y lctico ejercen un efecto sinrgico en la inhibicin de la velocidad de crecimiento celular (18). Ingledew (2009) muestra un nmero de agentes de posible estrs que pueden interactuar en fermentadores de alcohol carburante y a su vez inhibir el crecimiento de la levadura usando el reciclaje de vinaza (Ilustracin No. 4) (Ref. 9).

Cuando las concentraciones aumentan a niveles cerca o por encima de los niveles indicados, la levadura no crecer o metabolizar a la misma tasa a la cual lo hace bajo condiciones ideales de fermentacin (20).

Tabla 3. Concentraciones txicas de algunos subproductos de la fermentacin presentes en la vinaza (19)

Subproducto Acido actico Acido Lctico Acido frmico 1-Propanol 2-Methyl-1 -butanol 2,3-Butanediol Acetaldehido Glicerol Glucosa

Concentracin inhbitoria (g/L) 7.5 38 2.7 12 90 3.5 5.0 450 380

Mecanismo de inhibicin Interferencia qumica con las funciones de mantenimiento celular Interferencia qumica Interferencia qumica Interferencia qumica Interferencia qumica Interferencia qumica Interferencia qumica Efecto de la presin osmtica Efecto de la presin osmtica

Ilustracin 4. Factores de estrs que influencian el crecimiento de la levadura

1.3 Aislamiento de levaduras nativas a partir de diversas fuentes: Las levaduras del gnero Saccharomyces cerevisiae son microorganismos ubicuos, los cuales se han aislado a partir de fuentes tan diversas como: intestino de trucha arcoiris, alcantarillados, aguas residuales, miel de abejas entre otros. (21, 22). Sin embargo la mayora de los trabajos reportados, en los cuales se ha tratado de aislar levaduras

nativas (pertenecientes a este gnero) con potencial uso en la industria, se han centrado en fuentes de tipo vegetal, donde hay una mayor probabilidad de encontrarlas, entre esta se pueden mencionar: alcachofas, patatas podridas, banano, flores, yogurt, pia, corteza de uva.

1.4 Aspectos de la contaminacin Algunas modificaciones en la dinmica poblacional de las levaduras pueden ocurrir como consecuencia de las condiciones ambientales y por la entrada al sistema de microorganismos contaminantes que son transportados por las lneas de alimentacin del sustrato, en algunos casos esta contaminacin puede generar un incremento en los cidos orgnicos voltiles, una disminucin en la viabilidad celular y en la eficiencia de la fermentacin los cuales pueden incluso conducir a liquidaciones de fbrica. Los microorganismos ms frecuentemente implicados en estos sucesos son las bacterias cido lcticas (BAL) y las levaduras nativas (23, 7, 24).

1.4.1 Levaduras nativas Las levaduras nativas aparecen naturalmente en materiales primas, y pueden producir pequeas cantidades de alcohol (24). Se ha reportado que las levaduras nativas son ms difciles de detectar y controlar que las bacterias, pues cada biocida evaluado tiene efectos adversos sobre la levadura comercial. Se han encontrado con mucha frecuencia genotipos denominados "levaduras asesinas" que generan metabolitos que producen muerte a la cepa productora o alcoholera (25).

Las levaduras nativas son encontradas en el aire y superficies. Muchos de estos procesos fermentativos usan medios no pasteurizados, lo cual favorece la predominancia de estos microorganismos. Las levaduras principalmente entran al proceso de fermentacin a travs de las materias primas debido a la presencia de

azcares fermentables. La disponibilidad de mieles de alta calidad, con menos contaminacin, depende de la eficiencia de las refineras, condiciones del clima, y tcnicas de cosecha de la caa de azcar. Levaduras nativas como Dekkera y Brettanomyces han sido observadas habitando los tanques de mieles en Brasil (50).

Otro de los problemas causados por las levaduras nativas es la formacin excesiva e incontrolable de espuma en los reactores de fermentacin. Para microbilogos e ingenieros el tema de la formacin de espuma, en los reactores, genera un debate relacionado con cambios morfolgicos en la levadura nativa, en los que se observan mltiples levaduras en forma de filamentos, sugiriendo que sta puede inducirlos bajo condiciones poco favorables del medio de crecimiento (25).

Cuando el aire es moderado, favorece el desarrollo de esta morfologa, y le facilita a este microorganismo el ascenso a la parte superior de los reactores y la formacin de espuma, siendo ste el mayor problema causado por levaduras nativas, debido a las implicaciones en la cepa productora de etanol. Se ha reportado que la formacin de estos filamentos y elongaciones estn genticamente reguladas en respuesta de la presencia de compuestos como el isoamil alcohol (25).

Como esta espuma no puede ser controlada con agentes antiespumantes, esta situacin obliga a liquidar la fermentacin, debido a la baja eficiencia y excesivo desborde de masa en el fermentador, generando un agotamiento del cultivo de levadura y una cada gradual en la concentracin de alcohol en el proceso fermentativo (26).

1.4.2 Bacterias acido lcticas Son bacterias Gram positivas, en forma de bacilos, anaerobias facultativas, con un metabolismo fermentativo, el cual produce grandes cantidades de cidos y productos finales. Dependiendo de su metabolismo, las bacterias son agrupadas como

homofermentativas y heterofermentativas. Cuando son homofermentativas convierten una mol de hexosa en 2 moles de cido lctico por la via de Embden-Meyerhof, y cuando son heterofermentativas convierten una mol de hexosa en 1 mol de CO2, 1 mol de ethanol, 1 mol de cido lctico y en menores cantidades cido actico y cido pirvico por la via metablica 6-fosfogluconato (27).

La contaminacin bacteriana es una de las mayores causas de reduccin en el rendimiento de etanol durante la fermentacin con Saccharomyces cerevisiae. Gran cantidad de contaminantes microbianos interfieren con el metabolismo de la levadura, debido a la competencia de nutrientes, generacin de productos finales, como cido lctico y cido actico, los cuales inhiben el crecimiento y el metabolismo, y debido a la disminucin de la actividad enzimtica como en el caso de la glucoamilasa. Las bacterias acido lcticas son los contaminantes bacterianos ms problemticos que hayan sido encontrados, debido a su habilidad de sobrevivir a pH bajos, alcoholes superiores y altas temperaturas. Las condiciones de la fermentacin alcohlica, son las ms adecuadas para su rpido crecimiento. El gnero lactobacilo es el ms encontrado en destileras y plantas de alcohol (27).

El establecimiento de la correlacin entre las prdidas de rendimiento de etanol, y la formacin de cido lctico y/o cido actico, es complicado debido a que las bacterias acido lcticas homofermentativas, forman dos molculas de cido lctico a partir de una de glucosa. Mientras que las bacterias acidolcticas heterofermentativas producen cido lctico, CO2, y etanol, y en menor cantidad cido actico y glicerol. (27).

Los efectos txicos de los cidos son relacionados con un incremento de la presin osmtica en la membrana de la levadura. Estos cidos dbiles lipoflicos a temperaturas intermedias y bajas inducen un segundo tipo de muerte celular lo cual parece ser consecuencia de la acidificacin intracelular generando un bajo nivel de levadura y una reduccin de la utilizacin de carbohidratos. El impacto de estos cidos en las levaduras depende de cada especie (28).

1.4.3 Biofilms: Las biopelculas son estructuras heterogneas que crecen en ambientes acuosos y que se encuentran formadas por agrupaciones de clulas bacterianas, las cuales se mantienen unidas dentro de una matriz extracelular de polmeros y separadas mediante espacios y canales intersticiales (29). La composicin del exopolmero es poco conocida, pero consta de polisacridos o glicoprotenas de diversos azcares, como glucosa, fructosa, manosa, N-

acetilglucosamina y otros. Tambin puede contener protenas libres, fosfolpidos y cidos nucleicos y teicicos. Las bacterias, se sirven de ellos para retener los nutrientes y para protegerse de los biocidas usados en la industria (30).

Estas comunidades microbianas pueden desarrollarse sobre casi cualquier tipo de superficie y por esto constituyen un problema en la industria alcoholera, ya que, en la infraestructura de las tuberas que transportan la materia prima desde la fbrica de azcar hasta la planta de alcohol, existen puntos muertos donde se presume la presencia de stos, teniendo en cuenta que el material transportado tiene fuentes nutricionales ideales para la formacin de diversas especies microbianas (29).

Referencias Bibliogrficas. 1. Ficha Tcnica: Vehculos con Etanol, Comisin Nacional Para el Ahorro de

Energa, Mexico. 2000. www.conae.gob.mex. (Nov/29/2010) 2. Boddey, R. M. "Green energy from sugar cane. Chemistry and industry. 1993. 17:

355-358. 3. Bohm, G.M. "Impacto da poluiciao de veculos automotores na sade e meio

ambiente". FIESP/CIESP, Sao Paulo. Brasil. 1986. 4. 5. High Plains Corporation, http//www.highplainscorp.com/ 15 de abril de 2004. Winbrake, James and Deaton, Michael United States Environmental Protection

Agency from Hazardous Air Pollution from Mobile Sources: A Comparison of Alternative Fuel and Reformulated gasoline Vehicles. Journal of the Air Waste Management. May 19, 1999. 49: p576.

6.

Hall, David O and Rosillo-Calle Frank, "Evaluating environmental effects and

carbon sources and sinks resulting from biomass production and use in developing countries". Kings College, London, UK. Environmental Implications and Policy Scenarios. 1998 : 293-314. 7. E.F. Castillo, J.E. Larrahondo, A.L. Gmez y J.I. Socarrs. The Colombian

Experience In The Production Of Bioethanol For Transport Use. Proc. Int. Soc. Sugar Cane Technol., Vol. 27, 2010. 8. Briceo, C.O. (2006). El Programa Nacional de oxigenacin de las gasolinas en

Colombia. Talleres combustibles, energa y el medio ambiente a partir de la caa de azcar y otras biomasas. Guatemala.

http://www.cengicana.org/Portal/SubOtrasAreasEtanol/Presentaciones/ProgramaNacio nalOxigenacionGasolinasColombia.pdf. (29-11-2010). 9. Ingledew W. M.. The Alcohol Textbook. Fifth edition. Ed Nottingham University

Press. 2009. pp101 a 124. 10. K.A. Jacques, The Alcohol Textbook 4th Edition A reference for the beverage, fuel and industrial alcohol industries. Published by Nottingham University Press (2003). pp343 a 354. 11. Vsquez C. Jorge A. Ingeniera Gentica en Rutas Metablicas de

Saccharomyces cerevisiae para incrementar La productividad de etanol. Tesis de Maestra en Biotecnologa Universidad de Antioquia, Mayo de 2007. 12. Centurion, R. and J. Desirio, 1992. CETESB, Evoluao do controle da poluiao das industria sucroalcooleiras no estado de Sao Paulo, Sao Paulo, 1992. 13. Elia Neto, A., 1995. Tratamento de efluentes na agroindustria sucroalcooleira, presented at FEBRAL/95 Brazil Germany Fair, So Paulo, SP, 1995 14. Gloria, N.A. DA; Orlando Filho, J. 1983. Aplicacao da vinhaa como fertilizante.

Boletn Tcnico PLANALSUCAR (Brasil) v.5 no.1, p.5-38. 15. Rafael Quintero D.; I. A., M. Sc. Edaflogo CENICAA Investigaciones sobre el manejo de las vinazas aplicadas al suelo. (2007).

16.

B. L. Maiorella, H. W. Blanch, and C. R. Wilke. Feed Component Inhibition in Fermentation by Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology and

Ethanol

Bioengineering, Vol. XXVI, Pp. 1155-1 166 (1984). 17. Jorge Luis Folch-Mallol, Adriana Garay-Arroyo, FeARNndo Lledas, Alejandra A. Covarrubias Robles. La respuesta a estrs en la levadura Saccharomyces cerevisiae. Revista latinoamericana de Microbiologa Vol. 46, No. 1-2, April - June. (2004). pp. 24 46. 18. Narendranath, N.V., K.C. Thomas and W.M. Ingledew. 2001a. Effects of acetic acid and lactic acid on the growth of Saccharomyces cerevisiae in a minimal medium. J. Indust. Microbiol. Biotechnol. 26:171-177. 19. Brian Maiorella, Harvey W. Blanch and Charles R. Wilke. By-Product Inhibition Effects on Ethanolic Fermentation by Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology and Bioengineering, Vol. XXV, 103-121 (1983). 20. Thomas, K.C., S.H. Hynes and W.M. Ingledew. 2002. Influence of medium buffering capacity on inhibition of Saccharomyces cerevisiae growth by acetic and lactic acids. Applied and Environmental Microbiology 68:1616-1623. 21. T. Andlid, R. V. Juarez, L. Gustafsson. Yeast Colonizing the intestine of raibow trout (Salamo gairdneri) ans turbot (Scophtalmus maximus). Microbial ecology (1995) 30:321-334. 22. E. Bogusawska-Ws*, U. Czekajo-Koodziej, D. Mdrala, W. Dbrowski. Intraspecific or Intraspecies Differentiation of Saccharomyces cerevisiae Strains Isolated from Fish, Sewage and Odra Waters Based on Randomly Amplified Polymorphic ADN-PCR (RAPD-PCR) Technique. Polish J. of Environ. Stud. Vol. 16, No. 1 (2007),17-22. 23. Jorge Alberto Vsquez, Zunny Tatiana Daza, Jorge Ivan Socarrs, Jorge Igncio Victoria, Edgar Fernando Castillo. Evaluacin a escala laboratorio de la produccin de etanol por levaduras nativas Tecnicaa p.538 - 547 , V.8, fasc.1. (2009). ISSN: 01230409.

24. Ingledew, W. M. Alcohol production by Saccharomyces cerevisiae: a yeast primer. Nottingham university press. Nottingham, UK. 2001. 3:49-87. 25. Dusane Devendra. 2004. Managing Wild Yeast Contamination In Fermentation For Alcohol Production. http://www.cheresources.com/wild_yeast_contamination.shtml.

[Consulta 20/11/2010]. 26. Sukharev, S. I., Klenchin, V. A., Serov, S. M., Chernomordik, l V., & Chizmadzhev, Y. Electroporation and electrophoretic ADN transfer into cells. The effect of ADN interaction with electropores. Biophys.J., 1992. 63, 1320-1327. 27. Narendranath, N. 2000. Effects and management of Lactobacilli in yeast catalyzed ethanol fermentations. Department of applied microbiology and food science. University of Saskatchewan. Canad. 28. Marcos, J. Alcarde, A. Horii, J. 2003. Fermentation of Irradiated Sugar Cane Must. Scientia Agricola. V. 60 N.4. Pg.677-681. Octubre-Diciembre. 29. Reyes, P. Saldarriaga, J. 2005 . Comportamiento de biopelculas luego de lavados sucesivos en tuberas de agua a presin. Revista de ingeniera. N22. Universidad de los Andes. Bogot. 30. Piera, G. 2003. Estudio Del Biofilm: Formacin Y Consecuencias. Escola de prevenci i seguretat integral. Barcelona, Espaa. Curso 2002-2003.