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D DI IA AG GN N S ST TI IC CO O L LA AB BO OR RA AT TO OR RI IA AL L


O diagnstico laboratorial em Virologia baseia-se nas seguintes tcnicas:

Citologia e Histologia;
Cultura de clulas;
Microscopia electrnica;
Deteco de protenas vricas (nomeadamente pesquisa de enzimas e antignios vricos);
Deteco de genomas vricos;
Serologia (pesquisa de uma resposta imunolgica do hospedeiro perante as partculas vricas).

Vamos agora conhecer cada uma destas tcnicas e saber em que situao (em que viroses) so
usadas para o diagnstico laboratorial de uma infeco vrica.



Citologia e Histologia

A citologia e a histologia tm uma utilidade muito importante em muitas infeces vricas. O efeito
citoptico d-nos de imediato a ideia de uma infeco vrica.

Efeito citoptico: nome atribudo a todas as alteraes celulares que o vrus provoca ao
entrar na clula.

O efeito citoptico demonstrado nesta imagem, com a presena de uma clula gigante
multinucleada, resultante da fuso de vrias clulas infectadas por um vrus, aquilo a que chamamos
sinccio.
Esta imagem indica-nos a presena de uma
infeco vrica; porm, no discrimina que vrus
especificamente. Diz-nos que uma infeco vrica, no
outro tipo de infeco, mas vrios vrus tm capacidade
de provocar este efeito citoptico, por exemplo vrus
representados pelo Herpes simplex, Varicella-zoster,
Paramixovrus, VIH. Este efeito citoptico para estes
vrus mais evidente.










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A presena histolgica de alguns corpos de
incluso tambm um efeito citoptico (ver na
imagem). A imagem apresenta tecido cerebral com
presena de corpos de incluso corados pelo Gram e
chamados corpos negri, tpicos do vrus da raiva. A
presena destes corpos na sequncia de uma infeco por
este vrus d-nos o diagnstico etiolgico.





Cultura de Clulas

A cultura de clula , para a maioria dos vrus, o mtodo standard/ padro para a qual fazemos um
diagnstico de infeco vrica. Consegue indicar, na maioria dos casos, no em todos, qual o tipo de vrus
que est implicado na infeco.

A cultura celular divide-se, de uma forma simplista, em cultura de clulas convencional e shell
vial, tambm chamado glass tube, um tubo cilndrico de vidro (que, segundo a professora, teremos a
oportunidade de ver nas aulas prticas).

Cultura de clulas convencional

A cultura de clulas convencional requer:
linha celular (clulas) + meio de cultura + antimicrobianos

Pesquisa do efeito citoptico em 1 a vrias semanas.

H vrias linhas celulares que j esto estudadas para determinados vrus (clulas renais de
macaco, clulas epiteliais de neoplasias cutneas, clulas fetais humanas). Cultivam-se estas clulas num
meio de cultura adequado, no qual vamos injectar as secrees, o sangue a amostra clnica do doente
que suspeitamos ter uma infeco vrica.
Ao fim de uma a duas semanas, vamos estudar estas clulas e procurar os efeitos vricos, lticos e
outros, que teve a entrada desse material infectado pelo vrus na linha celular. A pesquisa feita pelo efeito
citoptico em uma a vrias semanas. Isto implica que, para um diagnstico definitivo de uma infeco vrica
usando cultura de clulas convencional, seja necessrio esperar no mnimo uma semana para ter um
resultado. Isto , perante um doente com uma suspeita de uma infeco vrica s possvel ter certeza
usando este teste uma semana depois, no mnimo (muitas vezes preciso mais tempo). Deste modo, mais
recentemente, foi criado o shell-vial.






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Os efeitos citopticos procurados numa cultura de clula convencional esto aqui resumidos:

MORTE CELULAR
o Clulas arredondadas;
o Degenerao;
o Agregao;
o Perda de adeso lmina de cultura (os vrus so agentes intracelulares obrigatrios, que
levam a alteraes das clulas. Estas ficam arredondadas, agregam-se e perdem a adeso lmina de
cultura).

ALTERAES HISTOLGICAS CARACTERSTICAS
o Corpos de incluso (ex: vrus da raiva);
o Cromatina perifrica;
o Sinccios (clulas multinucleadas resultantes da fuso das clulas induzida pelo vrus, isto ,
uma vez sendo infectadas pelo vrus, as clulas perdem a identidade prpria, juntam-se umas s outras,
tornando-se grandes e vacuolizadas).

ALTERAES NA SUPERFCIE CELULAR
o Expresso de antignios;
por alteraes na superfcie celular da expresso de antignios que se usam tcnicas de
imunofluorescncia directa e a tcnica imunoenzimtica para se ver a presena ou no desses antignios
que so especficos para cada vrus.

o Hemadsoro (expresso das hemoaglutininas).
Muitos vrus possuem, no seu invlucro, glicoprotenas especficas, sendo algumas delas
hemoaglutininas, que constituem local de adeso dos eritrcitos, promovendo a sua agregao. Logo, a
agregao dos eritrcitos diz-nos que aquele vrus possui hemoaglutininas. Como as hemoaglutininas s
existem em alguns vrus, podem-se ir eliminando hipteses.

Atentem nas seguintes imagens.

Aqui representado o efeito citoptico nestas clulas promovido por
um enterovrus, numa cultura celular de clulas renais de macaco.




Nesta imagem observam-se, em
grande ampliao, os sinccios, isto ,
clulas gigantes multinucleadas.










Hemoadsoro:
Adio de meios de cultura de eritrcitos na pesquisa de
glicoprotenas do tipo hemaglutininas. As hemaglutininas esto
presentes nos seguintes vrus: vrus influenza, parainfluenza,
sarampo, togavrus. Ocorre, portanto, agregao de glbulos rubros,
observvel na imagem.




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Shell-vial

O shell-vial combina cultura celular com tcnicas imunolgicas.
Alm de promover a entrada do vrus na clula, procede-se posteriormente pesquisa das clulas
infectadas, utilizando a imunofluorescncia directa, determinado tipo de anticorpos para antignios de
determinados vrus e, se positivo, existe esse vrus.

Quando se faz um diagnstico laboratorial de vrus, tem
que se partir de um pressuposto de uma determinada infeco vrica
mais provvel.
Ao contrrio das bactrias, para as quais se pode usar um
meio onde todas podem crescer e depois diferencia-se para
identificar a bactria, para os vrus necessrio usar os antignios
especficos para um vrus, se negativo tem que se fazer para outro,
se negativo faz-se para outro Logo, para se fazer tantos quanto
necessrio, o clnico tem que ter a ideia de quais so os mais
provveis. S se chega a um diagnstico clnico e laboratorial de
uma virose se o clnico, quando v o doente, levanta a hiptese de
um determinado nmero de famlias de vrus possveis e so essas
as testadas e no a enormidade de todos os vrus. a juno da
clnica com o laboratrio que permite chegar a um diagnstico.


clulas coradas com Atc anti-vrus;
deteco mais precoce que o efeito citoptico;
maioria detectvel em 24h.

O shell-vial usa apenas uma camada muito fina de clulas na parte final do tubo, qual se inocula a
amostra clnica suspeita de infeco. Simultaneamente tcnica de cultura de clulas, junta-se a tcnica
imunolgica, em que se marcam as clulas infectadas pelo vrus, sendo a deteco mais precoce do que
esperar pelo efeito citoptico. Resultados podem ser obtidos ao fim de um dia. Trata-se de um mtodo mais
precoce, de sensibilidade e especificidade elevadas e utilizado hoje em dia com maior interesse clnico que
a cultura convencional.

A cultura de clulas aqui representada de clulas diferentes. Est estudado que determinados
tipos de clulas so usadas para o estudo de determinados vrus. Por exemplo, as clulas epiteliais so
usadas para o estudo do vrus Herpes, as clulas de macaco para Adenovrus. H, portanto, especificidade.


Cultura em ovo embrionado

A cultura em ovo embrionado foi ultrapassada pelas culturas de clulas entretanto desenvolvidas, era
mais usada antigamente. H poucos vrus em que se usa actualmente.

Como se v na imagem, os
locais de inoculao da amostra
clnica presumivelmente infectada
pelo vrus vai desde o epitlio
corinico at ao amnitico ou
mesmo o saco vitelino. nestes
tecidos que depois se retiram
amostras para ver o tal efeito
citoptico. um processo mais
moroso, implica tcnicas especiais
e s necessrio para muito
poucos vrus, neste momento, e em
que no foram desenvolvidas linhas
celulares para a sua cultura.


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Microscopia Electrnica

A microscopia electrnica (ME) e a imunomicroscopia electrnica s muito raramente so
usadas para um diagnstico na prtica clnica. So tcnicas caras, morosas e que, portanto, so quase s
destinadas investigao. No , portanto, uma tcnica de referncia na prtica clnica.
A imunomicroscopia electrnica uma tcnica que tenta aumentar a acuidade da ME. Porqu?
Porque se as partculas vricas forem poucas no tecido ou na amostra, podemos estar muito tempo a
procur-las, j que a ME aumenta imenso o espao e a partcula vrica pode nunca ser encontrada, apesar
de l estar.
Na imunomicroscopia, marca-se com o antignio um determinado vrus (um anticorpo para um
antignio vrico) e, assim, mais fcil com a ME procurar esse anticorpo que se ligou a um antignio vrico e
direccionar-se para a rea que possa estar infectada.
So as caractersticas morfolgicas que nos permitem fazer um diagnstico em ME de um tipo de
vrus. No entanto, para alguns vrus, a ME no capaz de diferenciar, por exemplo, dentro de uma grande
famlia.


Deteco de Protenas Vricas

O diagnstico na deteco de partculas vricas est muito bem desenvolvido. Para muitos vrus
baseamo-nos neste diagnstico.

Podemos detectar antignios vricos pelos seguintes mtodos:
ELISA;
Imunofluorescncia (directa e indirecta);
Western blot (aumenta a sua sensibilidade e especificidade, apesar de ser mais caro).

A pesquisa de enzimas feita por:
Electroforese;
Actividade transcriptase inversa (pode ser pesquisada atravs de determinadas tcnicas
laboratoriais para determinados vrus).


Pesquisa de antignios Imunofluorescncia directa:



* Positividade para a presena do vrus Herpes.
Pesquisa de antignios por imunofluorescncia directa na suspeita de uma
infeco por Herpes nesta clula epitelial, com resultado positivo: anticorpo
adicionado ligou-se ao antignio vrico.




* Positividade para antignio do vrus citomeglico.


Imagem de uma amostra clnica, podendo ser de um exsudado de uma
leso vesiculosa, por exemplo.










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Deteco de Genomas Vricos

A deteco de genomas vricos foi desenvolvida na ltima dcada e aumentou a especificidade de
todas estas tcnicas.
PCR;
PCR transcriptase inversa (RT_PCR);
PCR real-time (carga vrica);
Southern, Northern blots.
Para algumas infeces, nomeadamente para o HIV, estas tcnicas vm eliminar quase
definitivamente a presena de falsos positivos e falsos negativos para a infeco por HIV (e mesmo a
deteco dessa infeco atravs de antignio e no de anticorpos).


Serologia

A serologia baseia-se na resposta humoral do hospedeiro. Procuramos o tipo de anticorpo presente
no hospedeiro, se so anticorpos do tipo IgG ou IgM e qual o ttulo, isto , quantificamos esses anticorpos
para estudar esse tipo de infeco. A serologia tem imensos vises, imensos falsos positivos e negativos
para algumas infeces.
Tm sido utilizadas tcnicas mais sensveis e mais especficas, mas muitas vezes a interpretao
destes resultados da resposta humoral do hospedeiro muito complicada e no d um diagnstico definitivo
de uma infeco, visto que em muitos casos no possvel diferenciar uma infeco recente de uma
infeco antiga.

Pesquisa de Anticorpos (m. imunolgicos)
Vantagens
rpido e simples de realizar.
Desvantagens
muitas vezes a pesquisa tardia em relao evoluo da doena;
por vezes, difcil distinguir entre infeco recente ou antiga;
falsos positivos e negativos presentes para muitas viroses.

0 Contacto com o vrus
O indivduo contacta com o vrus e tem
um perodo de incubao varivel conforme o
vrus, no qual h uma resposta do hospedeiro
com a produo de anticorpos do tipo IgM.
Estes anticorpos so os primeiros a serem
produzidos aps uma a duas semanas do
contacto com o vrus. Logo aps este
contacto h produo de IgG que vai subindo
e atinge o seu mximo quando a IgM j
desceu para um valor quase negativo. A
maioria dos doentes que chega ao mdico j
se encontra nesta fase, fase de queda da
IgM, que muitas vezes j negativa, e de subida de IgG.

Indicador de infeco recente: IgGs negativas e IgMs positivas. Nesta situao, indubitvel que se
trata da primeira vez que o indivduo em questo contactou com o vrus.

Complicam-se as infeces vricas quando h uma re-infeco. Imaginemos, por exemplo, uma
infeco pelo vrus Influenza, que d uma constipao vulgar.
Frequentemente, ao longo da vida, temos vrias infeces pelo vrus Influenza. O que acontece com o
estado imunolgico do indivduo na re-infeco? Grande parte das vezes, na re-infeco, h uma subida de
quatro vezes no ttulo de IgG, mas mais raramente a IgM sobe. Este tracejado nem sempre ocorre e, muitas
vezes, no . (??? ), portanto, a IgM continua negativa.
Para fazer diagnstico de re-infeco, necessrio ter um valor de comparao anterior, para saber
que houve uma subida de quatro vezes no ttulo de IgG, situao que grande parte das vezes no se tem.
Quando o doente chega com sintomatologia, no temos normalmente um valor anterior do doente para

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sabermos se aquele tipo de IgG subiu de facto 4x ou no, o que dificulta o diagnstico. Ficamos sem saber
se foi ou no uma re-infeco, visto que o doente mantm as IgGs toda a vida, indicando contacto com esse
vrus.
Para viroses que no do imunidade, h IgGs sempre presentes, como por exemplo o vrus Herpes. O
vrus Herpes promove no hospedeiro a produo de anticorpos, que permanecem no organismo, mas o
indivduo tem a manifestao da infeco de forma recorrente. Serologicamente, o que se observa que,
mesmo numa recorrncia aguda, a IgG mantm-se positiva e a IgM negativa. (No vos ajuda para saber se
aquelas pessoas que vem tm herpes recorrente ou se uma infeco por varicela-zoster). Estas so as
limitaes do diagnstico laboratorial por imunoglobulinas.

Em sntese

Critrios diagnsticos de infeco primria
Aumentos de 4 vezes ou mais no ttulo de IgG ou total de atc na fase aguda ou de convalescena
Presena de IgM
Seroconverso
Aumento de IgG (ou total) muito pouco provvel (se no tm registos de IgG)

Critrios diagnsticos de reinfeco (muito mais complicados)
Aumento de 4 vezes ou mais do ttulo de IgG or total Atc entre a fase aguda e a convalescena;
Ausncia ou ligeiro aumento de IgM.



ELISA para deteco Atc VIH

Na imagem observa-se a tcnica de ELISA para a deteco de
anticorpo para o VIH. A ELISA uma boa tcnica de rastreio, visto que
altamente sensvel, mas pode ter falsos positivos. Assim, os que
obtm resultados negativos so negativos, mas os que obtm
resultados positivos devem ser confirmados com tcnicas altamente
especficas como o Western blot.




Western blot

Western Blot HIV-1
Coluna 1: Control Positivo
Coluna 2: Controlo Negativo
Amostra A: Negativa
Amostra B: Indeterminada
Amostra C: Positiva

Esto representadas glicoprotenas do VIH. Pesquisa
a presena desses antignios, sempre com uma tira que
positiva e o controlo (1), relativamente ao doente. A tira
C positiva, j que a compatvel com o controlo.
O Western-blot veio melhorar o diagnstico de
infeco por VIH, j que permite a pesquisa de antignios
do vrus antes do doente ter anticorpos. O doente
desenvolve anticorpos duas semanas de ter contactado
com o vrus. Muitas vezes, a presena desses anticorpos
muito tardia e ns podemos saber, de uma forma precoce, se o doente foi infectado pelo VIH, no
procurando os anticorpos, mas procurando os seus antignios, antes portanto do indivduo desenvolver
qualquer resposta imunolgica ao vrus.




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Que tipo de amostras clnicas so pedidas nas viroses?
Conforme o tipo de viroses e as queixas pode-se pedir:
- Zaragatoas ou aspirados respiratrios (naso e orofarngeas)
- Lavados broncoalveolares ou brnquicos
- Fezes ou zaragatoa rectal
- Urina
- Leses da pele e mucosas (cutneo-mucosas)
- LCR, lquido pleural e lquido peritoneal
- Sangue, aspirados de medula ssea
- Tecidos biopsados

nestas amostras que ns vamos pesquisar os vrus que achamos ou suspeitamos como sendo os
mais provveis. Conforme o tipo de virose temos estes pedidos que tm que ser ajustados a cada doente.

Combate das viroses

Para combater as viroses ns temos, neste momento, antivricos e temos vacinas; mas no existem
para todos os vrus.

Os antivricos disponveis tm a sua aco em vrios caminhos da infeco da partcula vrica na
clula do hospedeiro (como foi mostrado num slide), e j comeam a aparecer algumas resistncias
presena destes antivricos, nomeadamente para o VIH.

Antivricos - deu mais importncia ao diagnstico, alguns tm indicao para tratamento; alguma
resistncia.

As vacinas no esto disponveis para todos os vrus, podendo ser vivas ou atenuadas, mas foi
custa de uma vacina que conseguimos erradicar uma virose como a Varola (vacina viva) e, portanto, foi
uma grande conquista a nvel mundial a partir do aparecimento de uma vacina capaz de controlar estas
infeces.

Vacinas - vivas atenuadas ou mortas, problemas com a grande diversidade e dinmica antignica.


Clnica
Agora vamos entrar nos vrus propriamente ditos. Queria relembrar-vos que:
- as viroses podem evoluir de uma forma assintomtica ou podem ter uma clnica exuberante;
- h sndromes especficos que podem ser causados por diferentes vrus por ex. a hepatite vrica
pode ser provocada por 5 vrus diferentes;
- um tipo de vrus pode causar vrios sndromes;
- vrus da mesma famlia afectam diferentes aparelhos ou sistemas.



















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V V R RU US S D DN NA A

Existem 7 grandes famlias de vrus DNA, dos quais vamos comear a estudar as particularidades
e aquilo que tm que saber. Nesta aula, vamos estudar as trs primeiras famlias abaixo indicadas.

O OO O Poxviridae
O OO O Herpesviridae
O OO O Parvoviridae
O OO O Papilomaviridae
O OO O Adenoviridae
O OO O Hepdanaviridae
O OO O Polioma viridae


O OO O Poxviridae

Vrus DNA cadeia dupla, revestido com invlucro ou revestimento;
Um dos maiores vrus, em termos de tamanho, dentro desta famlia de vrus DNA;
Responsvel por duas viroses exclusivamente humanas:

Varola:
+ Doena erradicada em 1970 no mundo;
+ Vacinao comeou em 1967 e j em 1977 foi registado o ltimo
caso de Varola em todo o mundo;
+ Foi utilizada uma vacina viva para induzir a produo de
anticorpos que so protectores;
+ Era uma doena com uma taxa de mortalidade elevadssima e
medida que o nmero de casos comeou a ser reduzido a
vacinao comeou a ser mais perigosa que a prpria doena,
pelo que foi suspensa a vacinao e, desde ento, no foi
relatado nenhum caso; no entanto, continua-se a desenvolver
vacinas mais eficazes em laboratrio com receio que este vrus
seja usado no bioterrorismo tem sido dos vrus mais
incriminados e temidos se eventualmente for utilizado como arma
de guerra.

Mollusco contagioso:
+ Infeco vrica puramente cutnea e mucosa;
+ devida a um Poxvrus bastante resistente e tambm uma virose
exclusivamente humana;
+ A transmisso faz-se por contacto directo necessrio contacto
pessoa-a-pessoa, pele-a-pele para ser contagiosa;
+ Manifesta-se pelas leses elevadas de centro umbilicado
representadas nas imagens, e cada uma destas leses contm
numerosos vrus de caractersticas histolgicas tpicas;
+ encontrado frequentemente em crianas, pois mais contagioso na
criana do que no adulto. No adulto tem aparecido frequentemente
na regio genital e tem sido considerada, portanto, uma virose de transmisso sexual.

Tratamento disponvel consiste na remoo mecnica destas leses ou na destruio destas pelo
frio.
Diagnstico Laboratorial - clnica e, na dvida, histologia. A microscopia electrnica identifica o
vrus, mas, nestes casos, no h necessidade de a utilizar porque estas imagens so tpicas.
Cada uma das leses observadas nas imagens contm numerosos vrus.


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O OO O Parvoviridae

Parvovirus B-19 dentro desta famlia o responsvel por grande parte das infeces;
Vrus de DNA de cadeia simples, capside icosadrica, sem revestimento;
Transmisso- faz-se por via respiratria, por inalao de pequeninas partculas presentes na saliva
com pessoas no contacto mais ntimo, familiar;
extremamente frequente at aos 40 anos, 65% da populao mundial j contactou com o
Parvovrus B19;
Tem uma apetncia ou um tropismo especial por clulas eritrocitrias imaturas ainda em replicao
na medula ssea. Assim, quando somos infectados por este vrus, ele dirige-se directamente para a
medula ssea e vai infectar estas clulas da linha eritrocitria que ainda esto em mitose,
provocando a lise destas. Esta lise dos glbulos rubros, frequentemente, regista-se num indivduo
infectado pelo vrus por uma ligeira anemia. Existe mesmo anemia aplsica grave que pode
levar morte em doentes que previamente j tm anemia grave por outras razes.

Diagnstico Laboratorial:

Pesquisa de anticorpos:
Se IgMs positivas e IgGs negativas estamos perante uma infeco aguda ( o nosso vrus)
Se IgMs negativas e IgGs j positivas poder no ser esse vrus se o apanharmos mais
tardiamente;

Tcnicas de Biologia Molecular PCR extremamente sensvel e especfico, podendo ser utilizado
na pesquisa do vrus mesmo nos tecidos (nos aspirados da medula ssea ou nas leses que o vrus
provoca).


Clnica:
Provoca 2 tipos de doena:

+ 5 doena, muito da infncia, muito frequente, tambm chamada de
eritema infeccioso; o que acontece que quando o vrus passa da
rvore respiratria para o sangue provoca uma virmia, e,
consequentemente h uma activao macia da resposta imunolgica de
anticorpos, com formao de imunocomplexos. Estes imunocomplexos
caracteristicamente no activam o sistema complemento, mas so causa
de um eritema que comea por ser da face e depois se estende para o
corpo.
O eritema da face caracterstico: criana com febre, e que est
vermelha apenas nas hemifaces com aspecto de ter sido esboteada, da o
nome doena do estalo. Muitas vezes, o eritema infeccioso acompanha-se de artralgias, artrite,
sendo uma resposta presena de imunocomplexos circulantes.

+ Crise aplstica em doentes com anemia hemoltica crnica (corresponde ao efeito lateral da lise
dos glbulos rubros na medula ssea); atravessa a placenta, no sendo causa de malformaes
congnitas, contudo ao infectar o feto pode levar a morte fetal por anemia grave e a parto pr-termo.

Diagnstico Laboratorial:

Pesquisa de anticorpos:
Pesquisa de antignios por PCR em biopsia de tecido cutneo ou em biopsia de medula ssea
mais fidedigno.








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O OO O Herpesviridae

Dupla cadeia DNA, cpside icosadrica, com revestimento (representados
na imagem);
So conhecidos 8 vrus identificados at recentemente. Estes vrus tm
sido numerados de 1 a 8:

Vrus Herpes C CC C: Herpes simplex 1 e 2 (HSV 1 e 2)
Vrus com o mesmo nome, mas diferente nmero porque so vrus muito semelhantes que do uma
clnica exactamente igual causam o Herpes e apenas so diferenciveis por uma glicoprotena (por uma
destas estruturas que saem do revestimento), ou seja, so diferenciados por pequeninas variaes
antignicas na sua superfcie.

Vrus Herpes C CC C: Varicella-zoster (VZV)

Vrus Herpes : Epstein-Barr (EBV)

Vrus Herpes C CC C: Citomegalovirus ou Vrus Citomeglico (CMV)

Vrus Herpes C CC C C CC C : Herpes Virus 6, 7 e 8 (HH6, HH7 e HH8)
No tm outro nome como os outros, uma vez que do uma srie de doenas, no so to especficos
nas doenas que provocam como os anteriores e, portanto, foram os ltimos a serem identificados, tendo
sido o 8 o mais recentemente identificado desta grande famlia.

Todos os vrus desta famlia tm em comum o facto de estabelecerem uma infeco crnica no
hospedeiro, mantendo-se longos perodos e anos latentes dentro da clula sem a destruir, vivos,
metabolicamente activos e s quando se replicam, quando o seu genoma comea a replicar, que levam
lise das clulas (efeito citoptico); mas mantm-se sempre no organismo. Quase 100% da populao
mundial j contactou com um destes vrus Herpes, o que significa que so vrus extremamente comuns. O
indivduo desenvolve anticorpos contra estes vrus que tm a sua utilidade, mas no evitam a recorrncia
das infeces.


Herpes simplex 1 e 2

A sua transmisso feita por contacto directo com as leses (imagem: leso de herpes labial).
Tm um caminho muito comum: o vrus entra na pele ou nas mucosas, no
epitlio de revestimento, atravessa a espessura da pele e tem tropismo para os nervos
aferentes, portanto estruturas nervosas que vo ter pele. Da, vo ter aos gnglios
sensitivos regionais e nos gnglios sensitivos regionais que estabelece uma
latncia, permanecendo l. Volta a replicar em qualquer altura, caminha ao longo do
nervo eferente e volta pele. Assim se justifica que as infeces herpticas frequentes
sejam geralmente no mesmo local. Porqu? Porque o local que enervado pelo gnglio sensitivo que tem
o vrus. Uma pessoa pode ter um herpes oral e pode ter um herpes na coxa. A entrada foi diferente e o
gnglio infectado foi diferente. Esta a fisiopatologia da doena.

Clnica:
Grande parte da populao quando contacta com o vrus, no se apercebe, a primoinfeco
assintomtica. Uma minoria tem infeco evidente, que varia.

A gengivoestomatite (HSV 1) nas crianas geralmente devido a um herpes. O primeiro contacto
com o vrus leva a uma reaco imunolgica exuberante, com febre, adenopatias regionais, aftas orais
extremamente dolorosas que duram cerca de 1 a 2 semanas e desaparecem espontaneamente.
A faringite tambm pode ser herptica.
O herpes labial mais comum, e geralmente devido ao herpes tipo 1.
A infeco genital, em geral, devido ao herpes tipo 2.

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A conjuntivite, a queratite, a encefalite herptica pode ocorrer na primoinfeco nos doentes
imunodeprimidos, o vrus pode induzir uma viremia e nessa situao alojar-se no SNC e dar doena
disseminada. Isto ocorre sobretudo no herpes neonatal.
O herpes neonatal uma situao grave de prognstico reservado, em que a criana infectada
pelo herpes durante o parto, quando contacta com secrees genitais da me (que tem herpes) e nessa
altura adquire o herpes, que promove uma doena grave.

Diagnstico Laboratorial:

A serologia pode ser uma ajuda, mas grande parte das vezes no . Grande parte das vezes o doente
j contactou com o herpes e tem anticorpos IgG positivos.
A pesquisa de antignio o que mais utilizado, usando tcnicas de PCR e LCR, que podem ser
procuradas nas leses. Estas leses so picadas, faz-se uma colheita da base da vescula para a pesquisa de
herpes por tcnicas de PCR ou de imunofluorescncia, que altamente sensvel. Pode ser tambm feita esta
tcnica em tecidos e na suspeita de meningoencefalite, no lquido cefaloraquidiano, sendo neste lquido
obrigatrio a utilizao de tcnicas de biologia molecular como PCR ou LCR.

Para o controlo do herpes no h controlo epidemiolgico. O que temos em mos so antivricos.
Estes antivricos anti-herpticos s actuam enquanto o vrus est a replicar, no actuam nos vrus
latentes e por isso um tratamento no curativo.
Esto em desenvolvimento vacinas, que devem estar comercializadas nos prximos 2 anos contra o
herpes tipo 2, que um herpes que um herpes que neste momento do ponto de vista epidemiolgico mais
preocupa. Esta vacina parece ser mais eficaz em mulheres do que em homens e prev-se a sua
comercializao em 2008 ou 2009.


Varicella-zoster

O vrus Varicella-zoster tem um caminho muito semelhante ao herpes simples.
A transmisso ocorre por contacto ntimo e por respirao, inalao. Uma criana com varicela (que
a primoinfeco deste vrus) transmite a varicela outra por contacto chegado e respirando para ela. A
inalao das pequenas partculas respiratrias faz com que a outra pessoa fique com varicela.
Entra por via respiratria, provoca uma viremia e o vrus vai-se alojar nos gnglios sensitivos
dorsais. Todos os gnglios sensitivos dorsais que acompanham a coluna. O vrus sai do sangue, entra l e
fica l alojado.
A primeira vez que o indivduo contacta com este vrus tem varicela, se for clinicamente evidente.
uma doena da infncia.
O doente tem varicela mas fica com o vrus l. A varicela cura, desaparece, mas o vrus fica sempre
nos gnglios paradorsais. Em qualquer altura o vrus replica e vai provocar a zona ou herpes zoster.
O vrus varicella-zoster um nome que representa a varicela como sendo a primoinfeco
e a zona como sendo a reactivao.
No herpes, temos o mesmo nome para a primoinfeco e para as recorrncias, aqui temos dois
nomes diferentes. Porqu? Porque quando este vrus reactiva, s reactiva um dos gnglios, um ou dois, e
provoca uma zona. Zona quer dizer leses numa rea, e essas leses so tipicamente na rea do
dermtomo, sendo o dermtomo a rea cutnea ou mucosa que enervada por um determinado gnglio
sensitivo.

Diagnstico Laboratorial:

Para se fazer o diagnstico definitivo temos a cultura celular, o shell vial, a imunofluorescncia
directa contra o vrus e ainda o PCR.
Em todas estas situaes se usa como amostra clnica as leses
cutneas so vesculas em tudo muito semelhantes ao que acontece no
herpes

Clnica:
Na imagem est representada uma zona.
Na varicela temos grandes vesculas que aparecem hora a hora,
caracteristicamente da cabea para os ps, isto : so muito frequentes na
rea central e depois na rea lateral so leses muito mais dispersas.

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Para o vrus varicella-zoster temos um antivrico, que tambm apenas actua na replicao do vrus.


Epstein-Barr

O vrus Epstein-Barr o 4. vrus da famlia herpes. um vrus que se adquire por contacto com a
saliva. considerada a doena da adolescncia, ou a doena do beijo. As clulas-alvo do vrus so os
linfcitos B. Em relao ao herpes 1 e 2 as clulas-alvo so as clulas cutneas, os queratincitos, e os
nervos, tm grande tropismo para essas reas. Aqui so os linfcitos B.
As doenas que o EBV provoca esto aqui resumidas:

+ mononucleose infecciosa (caracterizada por febre, mialgias, astenia, linfadenopatia;
extremamente frequente);
+ doena linforreticular progressiva;
+ leucoplasia de clulas em cabeleira;
+ linfoma de Burkitt;
+ carcinoma nasofarngeo.

A mais frequente de facto a primeira, tem um prognstico bom, contrariamente a todas as outras,
que so mais complicadas.

semelhana dos outros vrus herpes, este vrus, depois de contactado, fica presente no organismo e
pode ser reactivado em determinadas situaes. Isso tem sido verificado em doentes imunocomprometidos.

Diagnstico Laboratorial:

O diagnstico baseia-se na presena de uma linfocitose. H presena de linfcitos B atpicos,
linfcitos que respondem presena do vrus (os linfcitos B so o rgo-alvo) e de linfcitos T tpicos, que
so uma resposta para matar os linfcitos B infectados pelo vrus.
possvel ainda a utilizao da serologia, atravs da pesquisa de anticorpos heterfilos, anticorpos
especficos contra o vrus Epstein-Barr. Este mtodo tem alguns falsos negativos. Usa-se cada vez mais a
pesquisa de anticorpos especficos para o vrus Epstein-Barr que j esto disponveis e so esses em que se
baseia o nosso diagnstico.
Podemos ainda usar tcnicas de PCR para o diagnstico.


Citomegalovirus

Como o nome indica, um vrus que aumenta a clula. Este vrus o paradigma do efeito citoptico,
aquele vrus que entra na clula, torna-a vacuolizada, grande, arredondada. Muitas vezes nas leses que o
CMV d ns podemos ver esses efeitos citopticos nas clulas.
A transmisso ocorre por contacto com secrees infectadas, atravs de sangue e em rgos
transplantados.
tambm um vrus extremamente frequente e causador de doena especificamente em doentes
imunodeprimidos.
A latncia ocorre em leuccitos, clulas endoteliais e clulas de vrios rgos.
uma doena assintomtica, importante como infeco congnita, causa de partos pr-termo e de
malformaes e sempre sintomtica em imunodeprimidos.

Diagnstico Laboratorial:
O diagnstico pode fazer-se por cultura, shell vial, pesquisa de antignio por
imunofluorescncia ou ELISA, ou ento por PCR, no sangue, nas secrees infectadas, ou mesmo esse
estudo feito nos rgos antes de serem transplantados.






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Herpes vrus 6, 7 e 8

So vrus extremamente prevalentes, cuja transmisso ocorre por contacto directo ou respiratrio.
Tm afinidades diferentes: a latncia ocorre em linfcitos T, para o vrus 6 e 7, e em linfcitos B, para
o vrus 8.
Os vrus herpes 6 e 7 do infeces da infncia - so responsveis pelo exantema sbito.
O vrus herpes 8 responsvel pelo sarcoma de Kaposi (neoplasia muito frequente em doentes
com SIDA), linfoma de clulas B e doena de Castleman.

Diagnstico Laboratorial
O diagnstico faz-se procurando estes anticorpos IgG e IgM e a pesquisa directa destes vrus por
PCR no sangue ou nas leses.



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Bom Estudo, pessoal!

Ctia Cunha
Cludia Patraquim
Ins Valdoleiros
T12