You are on page 1of 24

www.eReferate.

ro -Cea mai buna inspiratie

AMINOACIZII
Aminoacizii sunt unitile constituente ale proteinelor i cuprind n molecula lor dou grupri funcionale: carboxil i amino.Exist 20 de aminoacizi proteinogeni specificai prin codul genetic, prezeni n toate organismele vii. Aminoacizii naturali au formula general: R-CH-COOH NH2 n care gruparea aminic se afl la carbonul fa de carboxil.Excepie face prolina al crui azot,dei tot n poziia fa de carboxil, face parte dintr-un inel pirolidinic, fiind o grup aminic secundar. Diversitatea aminoacizilor naturali este dat de natura lui R care poate fi o caten hidrocarbonat alifatic sau aromatic, un heterociclu sau care poate s cuprind o funcie adiional. CLASIFICARE Aminoacizii pot fi clasificai: dup natura catenei: alifatic, aromatic, heterociclic; dup numrul gruprilor COOH i NH2: monoamino-monocarboxilici, diaminomonocarboxilici; dup poziia relativ pe care o au gruprilor funcionale n molecul:, , -aminoacizi. dup prezena n cuprinsul catenei a altor grupri funcionale. Cea mai interesant clasificare ni se pare a fi cea bazat pe polaritatea catenei i cuprinde patru grupe : 1.)cu radical nepolar ( hidrofob ) : glicina, alanina, valina, leucina, izoleucina, prolina,fenilalanina, triptofanul i metionina.Toi sunt mai puin solubili n ap dect aminoacizii polari; 2.)cu radical polar nencrcat electric (la pH=6):serina,treonina,cisteina,tirosina asparagina,glutamina.Aceti aminoacizi sunt mai solubili n ap dect cei nepolari, deoarece catena poate stabili legturi de hidrogen cu apa, datorit gruprilor OH,-NH2 amidice i -SH pe care le conine; 3.)cu radical polar ncrcat negativ (la pH=6): acidul aspartic i acidul glutamic; 4.)cu radical polar ncrcat pozitiv (la pH=6): lisina,arginina,histidina. n afara acestor 20 de aminoacizi uzuali s-au izolat un numr de aminoacizi noi din hidrolizatul unor proteine foarte specializate, toi derivnd din aminoacizii uzuali. Astfel, 4hidroxiprolina a fost gsit ntr-o protein fibroas,colagen i unele proteine vegetale; 5hidroxilisina n colagen;desmosina i izodesmosina n elastin.(Stucturile acestor ultimi doi aminoacizi pot fi considerate ca fiind formate din 4 molecule de lisin,cu catenele laterale unite ntrun nucleu de piridiniu substituit.Aceast structur permite desmosinei i izodesmosinei s lege patru lanuri peptidice n structuri radiare. Elastina difer de alte proteine fibroase prin capacitatea sa de a suporta tensiuni n dou direcii).n anumite proteine musculare s-au gsit unii derivai metilai ai aminoacizii uzuali cum sunt : -N-metillisina,-N-trimetillisina i metilhistidina.Recent s-a descoperit prezena n protrombin a acidului -carboxiglutamic, cu importan biologic considerabil.Se mai pot gsi i ali aminoacizi n hidrolizatele proteice, dar numrul lor trebuie s fie mic, innd seama de cunotinele genetice actuale, iar distribuia lor se va limita la o protein dat.Aminoacizii rari din proteine se disting de cei uzuali prin faptul c nu au o codificare prin

triplet de baze (codon).n toate cazurile cunoscute ei sunt derivai ai celor uzuali i se formeaz dup ce acetia au fost deja inserai n lanul polipeptidic,n procesul de biosintez a proteinelor. n diferite celule i esuturi s-au pus n eviden nc circa150 de aminoacizi n form liber sau combinaii,care nu se gsesc n proteine.Majoritatea dintre ei sunt derivai ai -aminoacizilor din proteine; unii au ns gruparea amino la carbonul , sau fa de carboxil. Importan biochimic ca intermediari metabolici sau precursori au urmtorii: sarcozina i betaina, provenii prin N-metilarea (mono i respectiv trimetilarea) glicinei; -alanina care intr n constituia unor dipeptide (carnozina i anserina),a acidului pantotenic i a coenzimei A; acidul -aminobutiric cu rol de transmisie a influxului nervos; ornitina i citrulina care se gsesc n special n ficat i iau parte la circuitul urogenetic, fiind intermediari n sinteza argininei; homoserina i homocisteina,intermediari n metabolismul unor aminoacizi; acidul D-glutamic izolat din peretele celular al bacteriilor; D-alanina n larvele sau crisalidele anumitor insecte;D-serina din unii viermi.O varietate mare de aminoacizi ale cror funcii metabolice nu sunt definite nc, se gsesc n ciuperci i plantele superioare; unii dintre acetia,cum sunt canavanina,acidul djencolic i cianoalanina sunt toxici pentru alte vieuitoare !5!. Aminoacizii eseniali Cei 20 de aminoacizi naturali constituie alfabetul proteinelor.Distribuia lor calitativ i cantitativ ntr-o protein determin caracteristicile chimice,valoarea ei nutritiv i funciileei metabolice n organism.Dintre cei 20 de aminoacizi uzuali,organismul uman i al vertebratelor superioare poate sintetiza un numr limitat,restul trebuie s fie furnizai zilnic prin hran i se numesc aminoacizi eseniali !9!.Cei mai muli autori, consider drept aminoacizi eseniali urmtorii:valina,fenilalanina,metionina,lisina,triptofanul; alii, includ i leucina,izoleucina ,treonina i histidina!1,3,5,6,7,8,9,12!. Nomenclatur: n general, pentru aminoacizi se folosesc denumiri uzuale precum i prescurtrile acestora,acceptate de IUPAC, care nu dau nici o indicaie asupra structurii.n paralel se folosesc i denumirile tiinifice care respect logica secvenial: acid, poziia gruprii NH2,prefixul amino urmat de numele acidului carboxilic. Tabelul nr. 1 Aminoacizii uzuali /3,5/ Nr. Crt. 1 1. 2. Formula de structur 2 Aminoacizi cu radical nepolar CH2-COOH NH2 CH3-CH-COOH NH2 CH3-CH-CH-COOH CH3 NH2 CH3-CH-CH2-CH-COOH CH3 NH2 CH3-CH2-CH-CH-COOH CH3 NH2 C6H5-CH2-CH-COOH NH2 Denumire uzual Prescurtri IUPAC 3 (hidrofob) Glicina Gly, G Alanin Ala, A Valin Val, V Leucin Leu, L Izoleucin Ile, I Fenilalanin Phe, F Denumire raional 4 acid -aminoacetic acid -aminopropionic acid aminoizovalerianic Acid aminoizocapronic Acid -amino--metil valerianic Acid -fenil--amino propionic

3. 4. 5. 6.

1 9.

2 CH3-S-CH2-CH2-CH-COOH NH2

3 Metionin Met, M

4 Acid -amino metiltiobutiric pH=6 Acid -amino hidroxipropionic Acid -amino hidroxibutiric Acid -amino tiopropionic p-hidroxifenil alanin Acid -amino amidosuccinic Acid -amino amidoglutaric Acid aminosuccinic Acid -amino glutaric Acid ,-diamino caproic Acid -amino -guanidinovalerianic Acid -amino imidazolil propionic

10. 11. 12. 13. 14. 15.

16. 17. 18. 19. 20.

Aminoacizi cu radical polar, nencrcat electric la HO-CH2-CH-COOH Serin NH2 Ser, S CH3-CH-CH-COOH Treonin OH NH2 Thr, T HS-CH2-CH-COOH Cisteina NH2 Cys, C HO-C6H4-CH2-CH-COOH Tirosin NH2 Tyr, Y H2NOC-CH2-CH-COOH Asparagin NH2 Asn,N H2NOC-CH2-CH2-CH-COOH Glutamin NH2 Gln, Q Aminoacizi cu radical polar, ncrcat negativ la pH=6 HOOC-CH2-CH-COOH Acid aspartic NH2 (asparagic), Asp,D HOOC-CH2-CH2-CH-COOH Acid glutamic NH2 Glu, E Aminoacizi cu radical polar, ncrcat pozitiv la pH=6 CH2-CH2-CH2-CH2-CH-COOH Lisina NH2 NH2 Lys,K H2N-C-NH-CH2-CH2-CH2-CH-COOH Arginina NH NH2 Arg,R N C-CH2-CH-COOH CH CH NH2 NH Tabelul nr. 2 Histidina His, H

Aminoacizi neproteinogeni /5/ Denumire uzual Prescurtri IUPAC 3 -alanina Acid -aminobutiric Acid aminolevulinic Citrulina Ornitina Homocistina Denumire raional 4 Acid -amino propionic

Nr. crt. 1 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Formula de structur 2 H2N-CH2-CH2-COOH H2N-CH2-CH2-CH2-COOH H2N-CH2-CO-CH2-CH2-COOH H2N-CO-NH-(CH2)3-CH-COOH NH2 H2N-(CH2)3-CH-COOH NH2 HS-CH2-CH2-CH-COOH

Acid -amino amidinovalerianic Acid ,-diamino valerianic Acid -amino -

7. 8. 9. 10. 11. 12. 13.

NH2 HO-CH2-CH2-CH-COOH NH2 H2N-C6H4-COOH CH3-NH-CH2-COOH (CH3)3N+-CH2-COOH H2N-C-NH-O-CH2-CH2-CH-COOH NH NH2 HOOC-CH-(CH2)2-S-CH2-CH-COOH NH2 NH2 N C-CH2-CH-COOH NH2

Homoserina Acid p-aminobenzoic Sarcozina Betaina Canavanina Acid djencolic -cianoalanina

tiobutiric Acid -amino hidroxibutiric N-metil glicina

Caracteristici generale : Aminoacizii ndeplinesc mai multe roluri biologice,fiind n acelai timp: ioni dipolari cu un moment de dipol mare, care determin o cretere considerabil a mediului n care se dizolv; electrolii amfoteri solubili n ap, cu capacitatea de a aciona ca substane tampon n diferite domenii de pH; sunt optic activi, datorit faptului c posed unul sau mai muli atomi de carbon asimetrici, cu excepia glicinei; sunt compui cu grupe reactive capabile s participe la reacii chimice avnd ca rezultat o mare gam de produse sintetice; sunt liganzi ai multor metale; sunt participani n reacii metabolice cruciale, de care depinde viaa i sunt substane in vitro pentru o gam mare de enzime; sunt constitueni eseniali ai moleculelor proteice ale cror caractere specifice,biologice i chimice sunt determinate n mare parte de numrul, distribuia i interrelaiile aminoacizilor din care se compun. Ei prezint unitate i diversitate n acelai timp:unitate, deoarece sunt -aminoacizi cu toate consecinele fizice care decurg din aceasta i pentru c cei care sunt componeni uzuali ai proteinelor au aceeai configuraie optic a atomului de carbon din poziia , i diversitate, deoarece fiecare din ei posed o caten diferit, care-i confer proprieti unice, deosebindu-l fizic,chimic i biologic de ceilali. Proprieti fizice Toi aminoacizii sunt substane solide,incolore,cristalizate.Forma cristalelor este caracteristic pentru fiecare aminoacid /11/.Se topesc la temperaturi ridicate (peste 200 C),cu descompunere; nu pot fi distilate nici chiar n vid.P.t. al cristalelor nu constituie un criteriu de difereniere ntre ei. Aminoacizii sunt, n general, solubili n ap, ns gradul de solubilitate este diferit de la un aminoacid la altul.Solubilitatea este determinat de caracterul mai mult sau mai puin polar al catenei i de pH, fiind minim la punctul izoelectric. Sunt n general insolubili n solveni organici, cu excepia prolinei, care este relativ solubil n etanol.Solubilitatea aminoacizilor ca i cea a proteinelor, este influenat de prezena srurilor. Termenii inferiori din seria aminoacizilor alifatici au gust dulceag,cei cu mas molecular mare au gust amar.

Tabelul nr.3 Nr. crt. 1 1. 2. 3. 4. 1 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. Aminoacidul 2 Glicocol Alanin Valin Leucin 2 Izoleucin Serin Treonin Tirosin Fenilalanina Triptofan Acid aspartic Acid glutamic Glutamin Asparagin Lisin Arginin Histidin Cistein Metionin Cistin Prolin Hidroxiprolin

Proprieti fizice ale aminoacizilor /1,3,9,11/ Forma de Prezentare 3 Monolitic Rombic Foie Foie 3 Plcue Plcue Cristale Ace Foie Plcue Foie rombice Rombic Ace Cristale Ace sau plci Foie, prisme Foie Pulbere cristalin Plcue hexagonal Plcue Ace Plcue p.t. 4 233d 297d 315 293 4 280d 228d 225 314d 283d 293d 270 206 256 225 224d 238d 277 260 280 259d 214 270 pHi 5 6,1 6,1 6 6 5 5,8 5,7 6,53 5,7 5,98 5,88 3 3,2 9,7 10,8 7,5 5,1 5,75 5,0 6,3 5,7 Rotaia optic 6 +3,5 +13,9 6 +12,8 -6,83 -28,3 -12,3 -35,14 -30 +4,36 + -6,7 +14,6 +12,1 -38,1 -7,2 -222,4 -84,9 MD 7 +1,6 +6,6 -14,4 7 +16,3 -7,9 -33,9 -57 -68,6 +6,7 +17,7 +19,7 +21,8 -59,8 -20 -14,9 50,9 -99,2 -99,6 Solubilitatea n ap la pHi 8 22,5 15,8 6,8 2,4 8 2,1 4,3 1,6 2,7 1,1 0,4 0,7 f. solubil f. solubil 4 f. solubil 3 0,009 154,5 34,5

Stereochimia aminoacizilor Toi aminoacizii proteinogeni (cu excepia glicocolului) au un atom de carbon asimetric i deci pot exista sub forma a doi antipozi optici.Treonina i izoleucina au doi centri asimetrici i deci au patru stereoizomeri. Prin sintez chimic se obin n general formele racemice.Scindarea acestora nu poate fi efectuat prin metoda chimic obinuit,cu ajutorul bazelor i acizilor optic activi,fiindc aminoacizii sunt acizi, respectiv baze prea slabe pentru a forma sruri stabile, cristalizabile cu aceti compui.Singurul aminoacid suficient de puternic pentru a putea fi scindat prin intermediul srii sale cu chinina, este acidul glutamic.Restul aminoacizilor se transform nti n derivai acilai,care blocheaz gruparea amino i permite reacia cu baze optic active.Mai avantajoase s-au dovedit metodele biochimice pentru scindarea racemicilor, folosind marea specificitate a enzimelor pentru stereoizomerii naturali./1,3/. Activitatea optic este exprimat cantitativ prin rotaia specific []D , la temperatura de 20 sau 25 ,iar D fiind lungimea de und de obicei linia D a sodiului, 589.3 nm.Activitatea optic

depinde de natura solventului ,iar n cazul soluiilor apoase, de pH. n general, rotaia optic specific a unui aminoacid monoaminic sau monocarboxilic este maxim la punctul izoelectric.Rotaia specific depinde de natura catenei aminoacidului. S a stabilit c toi aminoacizii din proteinele naturale se nrudesc cu L-glicerinaldehida,i deci fac parte din seria L.n peretele celular al unor microorganisme sau n unele antibiotice se gsesc i aminoacizi din seria D.(n notaia modern, literele D i L se nlocuiesc cu R, respectiv S)./5,8/. COOH H-C-NH2 R D-aminoacid COOH H2N-C-H R L-aminoacid

Proprieti spectrale Aminoacizii uzuali nu absorb lumina n vizibil. Dintre acetia, numai tirosina,fenilalanina i triptofanul dau spectre de absorbie la lungimi de und mai mari de 250nm,datorit nucleului aromatic din caten.Fenilalanina prezint un maxim de absorbie la 260nm,tirosina la 275nm i triptofanul la 280nm.ntruct majoritatea proteinelor conin tirosin, msurarea absorbiei luminii la 280nm la spectrofotometru poate constitui o metod satisfctoare de dozare a concentraiei proteinei ntr-o soluie.Cistina absoarbe la 240nm,datorit gruprii S-S-. Toi aminoacizii absorb n U.V. ndeprtat. Datorit comportrii diferite n soluie a aminoacizilor,n funcie de condiii,spectrele IR difer in ele n funcie de condiiile experimentale. n mediu acid se afl urmtoarele grupri la care corespund benzi caracteristice: -COOH OH 3570-3500 cm-1 -NH3+ 3130-3030cm-1, -NH2+ 2700-2250cm-1, NH+ 2450cm-1 -COOH C=O 1790-1760cm-1 (neasoc.), 1710cm-1. n mediu bazic: -COO-NH2 -NH C=O 1600-1550cm-1 3500-3300cm-1(neasoc.), 3000-2000cm-1 dou benzi o band

n spectrul RMN, protonul din aminoacizi are o deplasare chimic ( ) cuprins ntre 4.30 i 4.80 ppm./1,7,9/. Proprieti electrochimice Datorit prezenei n molecul att a unei grupri funcionale acide (-COOH),ct i a uneia bazice (-NH2), aminoacizii sunt substane cu caracter amfoter.Att n cristale ct i n soluie apoas,moleculele lor apar sub form de ioni dipolari (amfioni). Dovada acestui fapt s-a fcut prin difracia razelor X, determinarea constantelor de bazicitate i aciditate, a momentelor dielectrice, precum i pe baza interpretrii spectrelor Raman.Structura care reprezint caracterul lor dipolar rezult prin reacia protolitic intramolecular: R-CH-COOH R-CH-COONH2 +NH3 n prezena acizilor sau bazelor, soluiile aminoacizilor funcioneaz ca soluii tampon.Dac se adaug soluiei de aminoacid un acid tare (HCl), protonii si sunt consumai, dnd un acid slab: R-CH-COO- + H3O+ +NH3 R-CH-COOH + H2O +NH3

n prezena unei baze tari, ionii HO- sunt consumai, formndu-se o baz slab: R-CH-COO- + HOR-CH-COO- + H2O +NH3 +NH2 Amfionul dipolar nu migreaz n cmp electric;n mediu acid ns, aminoacidul se afl sub form de cation i va migra ctre anod, iar n mediu bazic se afl sub form de anion i va migra ctre catod. Toi aminoacizii pot fi neutri n soluie, deoarece gruprile amino i carboxil se neutralizeaz reciproc;predomin forma amfionic a crei concentraie maxim este condiionat de o anumit valoare a pH-ului, numit punct izoelectric,notat pHi.Punctul izoelectric este pH-ul la care soluia apoas conine anioni i cationi ai aminoacidului n proporie egal: pHi=(pK1+pK2)/2 Valoarea punctului izoelectric depinde de valoarea constantelor de ionizare: K1 pentru funciunea carboxil i K2 pentru funciunea amin;pK1 i pK2 se determin titrimetric./1,2,5,8,9,11/. Pentru aminoacizii monoamino-monocarboxilici pHi se gsete situat n domeniul de pH=4.8-6.3,deoarece grupa COOH este mai puternic ionizat dect gruparea NH2,variaiile fiind determinate de efectul exercitat de radicalul R de la C asupra celor dou funciuni,amino i carboxil. Aminoacizii monoamino-dicarboxilici au pHi situat la valori mai mici ale pH-ului ( domeniu acid) ca o consecin a faptului c n molecul exist nc o grupare carboxil,care nu particip la salifierea intern i pentru a nu fi disociat este firesc ca valoarea pH-ului soluiei s se gseasc situat n domeniul acid. Aminoacizii diaamino-monocarboxilici, din aceleai considerente,au puncte izoelectrice situate la valori mari ale pH-ului,respectiv n domeniul bazic. La punctul izoelectric solubilitatea aminoacidului respectiv este minim, deoarece momentul de dipol mare al amfionului duce la o puternic atracie ntre moleculele din cristal.Aceast proprietate prezint importan pentru separarea unor aminoacizi din amestecuri./5,9/. Pe baza celor menionate, se poate explica i comportarea soluiilor de aminoacizi la trecerea unui curent electric,conductibilitatea acestora fiind determinat de valorile pH-ului. Din punct de vedere structural,sub aspect funcional, electronic i steric, -aminoacizii se prezint ca specii moleculare cu caracteristici bine determinate. Proprieti chimice Prezena grupelor amino i carboxil confer aminoacizilor caracter acid i caracter bazic,precum i capacitatea de a da reaciile generale caracteristice acizilor carboxilici i aminelor, innd seama totodat i de efectele reciproce pe care le exercit aceste grupri. Aminoacizii dau cu ionii cuprici i ai altor metale tranziionale sruri complexe interne sau chelai, colorai,greu solubili,stabili.Acetia au structuri ciclice fr tensiune, n care aminoacidul ocup dou poziii coordinative ale metalului,una prin oxigen, alta prin perechea de electroni neparticipani ai grupei amino, de tipul /2,3,9/: COO NH2-CH-R Cu R-CH-NH2 OOC Proprieti determinate de gruparea carboxil Aminoacizii formeaz derivai normali amide,anhidride,nitrili,cloruri acide etc.

ai

acestei

funciuni:

esteri,

Clorurile acide (obinute prin tratare cu PCl5) ale aminoacizilor suspendai n clorur de acetil se obin numai sub form de clorhidrai i sunt foarte reactive.Derivaii N-acilai ai aminoacizilor ,n aceleai condiii, formeaz i ei cloruri acide care elimin ns HCl i dau azlactone: R-CH-COOH R-CH-COCl R-CH-C=O NH-COR NH-COR N=C-R Esterii se obin sub form de cristalohidrai, prin tratare direct cu metanol sau etanol saturai cu acid clorhidric gazos.Esterii aminoacizilor inferiori se pot distila la presiune redus.Ei au caracter bazic, dat de gruparea -NH2, gruparea -COOH fiind blocat. La conservare sau la nclzire, esterii aminoacizilor se transform n polipeptide i n 2,5-dicetopiperazine-1,4-disubstituite: O C R-CH HN NH CH-R C O Esterii se pot reduce prin hidrogenare catalitic sau cu sodiu i alcool, cu hidrur de litiu i aluminiu, cu borohidrur de sodiu etc,dnd -aminoalcooli: H2N-CH-COOR H2 H2N-CH-CH2-OH R R Esterificarea cu etanol sau alcool benzilic este adesea utilizat pentru a proteja gruparea carboxil n cursul sintezei chimice a peptidelor. Sub aciunea amoniacului sau a aminelor, aminoacizii i esterii lor dau natere la aminoamide H2N-CHR-CONH2. Atunci cnd gruparea -COOH reacioneaz cu gruparea -NH2 din alt molecul de aminoacid se obine o legtur amidic de tip special, legtura peptidic: H2N-CHR-COOH + H2N-CHR-COOH H2O Pot reaciona mai multe molecule de aminoacid n acest fel, obinndu-se un lan sau o caten polipeptidic.Compuii cu numr mare de resturi de aminoacizi sunt proteine.Aceast proprietate de a se combina ntre ei dnd natere polipeptidelor i proteinelor este una din cele mai importante caracteristici ale aminoacizilor./1,2,4,5,8,9/. Proprieti determinate de gruparea -NH2 Funciunea -NH2 din aminoacizi poate lua parte la alte tipuri de reacii.Astfel, prin tratare cu cloruri acide sau anhidride, se obin derivai acilai.Acest procedeu se folosete de obicei pentru a proteja funciunea aminic n timpul sintezei chimice a peptidelor: C6H5-COCl + R-CH-COOH R-CH-COOH + HCl NH2 NH-CO-C6H5 ( R=H- acid hipuric) Se mai pot folosi sulfoclorurile aromatice, cloroformiaii de alchil, n special cei de t-butil, sau chiar acidul formic.Derivatul benziloxicarboxilic Ph-CH2-O-CO-NH-CHR-COOH , corespunztor aminoacidului ( numit i derivat carbobenzoxi ) sau t-butiloxicarbonilic (t-BOCderivatul) Me3C-OOC-NH-CHR-COOH, sunt cei mai comuni derivai protejai ai -aminoacizilor. Cnd prepararea lor se efectueaz n condiii suficient de blnde, configuraia atomului de carbon este conservat, dar n condiii mai energice are loc o racemizare. H2N-CHR-CO-NH-CHR-COOH +

Prin acilare, grupa -NH2 pierde caracterul ei bazic, iar aminoacizii acilai, de tipul acidului hipuric, sunt acizi de tria acizilor carboxilici obinuii.n prezena hidroxizilor, aminoacizii se combin cu CO2, dnd derivai ai acidului carbonic. R-CH-COOH + CO2 + Ba( OH)2 R-CH-COO- Ba2+ NH2 NH-COOReaciile de acest tip au loc probabil n cazul transportului dioxidului de carbon de ctre hemoglobin.Aminoacizii se pot alchila la grupa -NH2 prin metodele uzuale (cu iodur sau sulfat de metil n prezena unui hidroxid alcalin). Derivaii metilai cuaternari ai aminoacizilor sunt denumii betaine. Reprezentantul cel mai cunoscut, betaina, este derivatul trimetilic al glicinei i se obine din acid cloracetic i trimetilamin: HOOC-CH2Cl + N(CH3)3 HOOC-CH2-N(CH3)3]+Cl- -HCl OOC-CH2-N+(CH3)3 Betaina este mult rspndit n plante, de exemplu n sfecl (Beta vulgaris), acumulndu-se n melas n timpul extraciei i purificrii zahrului.Se gsete i n muchii multor nevertebrate.Betainele, fiind sruri cuaternare de amoniu, sufer prin nclzire transpoziie de tip degradare Hofmann;reacia este reversibil/1,3,5,8,9/. (CH3)3N+-CHR-COO(CH3)2N-CHR-COOCH3

O reacie mult folosit a aminoacizilor este cea cu bromur de nitrozil sau cu acid azotos n soluie acid, obinndu-se hidroxiacizii corespunztori i degajndu-se azot : H2N-CHR-COOH HONO HO-CHR-COOH + N2 + H2O Aceast reacie se folosete n chimia analitic pentru dozarea cantitativ a gruprii libere -NH2 din aminoacizi i proteine, msurnd volumul de azot degajat ( metoda Van Slyke).n soluie de HCl sau HBr se formeaz prin aceast reacie acizii clorurai sau bromurai respectivi. Esterii -aminoacizilor dau cu acid azotos diazoesteri /3,8,9/: EtOOC-CH2-NH2 + HNO2 EtOOC-CHN2 + 2H2O ester diazoacetic Prin tratamente termice, aminoacizii se descompun , dnd diferii compui , n funcie de poziia gruprii -NH2 fa de -COOH.Astfel -aminoacizii dau 2,5-dicetopiperazine; -aminoacizii duc la acizi nesaturai prin eliminare de NH3: H2N-CHR-CH2-COOH R-CH=CH-COOH + NH3 i -aminoacizii elimin uor apa intramolecular dnd lactame /1,5,8/: R-CH-CH2-CH2-COOH R-CH-CH2-CH2 + H2O NH2 NH CO Prin distilare uscat, n prezena hidroxidului de bariu ori sub aciunea enzimelor de putrefacie, aminoacizii se decarboxileaz, conducnd la amine: H2N-CHR-COOH R-CH2-NH2 + CO2 Multe dintre acestea sunt substane cu proprieti fiziologice i farmacologice remarcabile (amine biogene) /1,2,5,8,9/: HOOC-(CH2)3-NH2 CH2-CH2-NH2 H2N-(CH2)5-NH2 Acid -aminobutiric OH etanolamina cadaverina N C-CH2-CH2-NH2 CH2-CH2-NH2 CH CH SH NH histamina cisteamina Prin topire cu hidroxidul de potasiu, aminoacizii sufer descompuneri adnci, ducnd la acizi grai i amoniac sau amine. Cu anumii ageni oxidani,aminoacizii sufer degradri,dnd aldehidele imediat inferioare sau nitrilii corespunztori /3,5,8/: R-CHO + NH3 + CO2

R-CH-COOH NH2 R-CN + H2O + CO2 O reacie caracteristic a aminoacizilor este cea cu ninhidrina (hidratul tricetohidrindenului).Se formeaz compui colorai n albastru cu majoritatea -aminoacizilor; excepie fac prolina i hidroxiprolina care formeaz compui galbeni.n prima faz se produce o degradaere oxidativ a aminoacizilor la aldehide. Prin condensarea cetoalcoolului cu o nou molecul de ninhidrin i cu amoniac se formeaz produsul colorat.Una din structurile posibile ale acestuia este urmtoarea. Reacia cu ninhidrin are o mare importan n chimia analitic, servind la recunoaterea i dozarea aminoacizilor /1,2,3,5,9,11/. Transformri biochimice Transformrile pe care le sufer -aminoacizii n organismele vii sunt reacii catalizate de enzime specifice.Biochimia aminoacizilor include toate transformrile chimice pe care le sufer -aminoacizii n organismele vii.Analiza acestor transformri evideniaz faptul c n ele sunt implicate direct grupele funcionale amino i carboxil i chiar radicalul pe care sunt grefate aceste grupri. Grupa amino poate fi eliminat din moleculele -aminoacizilor, formndu-se n final amoniac, care la rndul su este supus altor transformri biochimice, conducnd la uree sau acid uric care se elimin din organism. Dezaminarea poate fi: oxidativ, hidrolitic sau reductiv, enzimele respective fiind, n funcie de tipul de reacie, o oxidaz, hidrolaz i respectiv reductaz. ox R-C-COOH H2O R-C-COOH + NH3 NH O dezaminare hidr. R-CH-COOH R-CH-COOH + NH3 NH2 OH red. R-CH2-COOH + NH3 -ceto, -hidroxi i respectiv acidul organic, care se formeaz n urma dezaminrii, devin n organism o surs de formare a glucidelor sau grsimilor /2,3,5,7,8/. Pierderea CO2 n prezena unor enzime specifice fiecrui aminoacid conduce la formarea de amine biogene. R-CH-COOH R-CH2-NH2 + CO2 NH2 Dezaminarea i decarboxilarea prin reacii enzimatice pot avea loc i simultan sub influena unor microorganisme.Astfel se explic,de exemplu,prezena alcoolului izoamilic, a alcoolului amilic optic activ i a alcoolului izobutilic n "coada" de distilare care se obine la fabricarea alcoolului etilic /1,2,5,8,9,11/. -cetoacizii i -aminoacizii prezeni n organism, pot participa la reacii, n urma crora prin mai multe etape, acizii -cetonici se transform n -aminoacizi i invers. Enzimele care catalizeaz reaciile de transaminare se numesc transaminaze.n organismele vii poate fi sintetizat orice -aminoaci dac este prezent acidul -cetonic corespunztor /1,2,3,7,12/. Acidul glutamic joac un rol important n reaciile de transaminare, fiind donorul de grup -NH2, iar pe de alt parte acidul -cetoglutaric este capabil s accepte grupa -NH2 de la aproape toi L-aminoacizii naturali, tramsformndu-se n acid glutamic: HOOC-(CH2)2-CH-COOH + CH3-C-COOH HOOC-(CH2)2-C-COOH + NH2 O O CH3-CH-COOH NH2

Transformrile catalizate de enzime, care au loc n cursul transferului grupei amino fr formare de amoniac, de la acidul L-glutamic la acidul piruvic, sunt complexe.Acidul L-glutamic, la rndul su, poate reface acidul -ceto glutaric i prin desaminare oxidativ. Organismul animal nu-i poate sintetiza unii -aminoacizi ( aminoacizii eseniali) datorit faptului c nu posed -cetoacizii corespunztori. n prezena unor microorganisme au loc i degradri mai profunde, scindri de legturi carbon-carbon, concomitente cu reacii de oxidare, esterificare .a. explicndu-se, astfel, diversitatea de compui organici identificai n organism sau compui care se elimin /1,2,5,7,8,9,11/. Identificarea i dozarea aminoacizilor Se realizeaz prin mai multe metode i anume: 1.Reacii de culoare: cea mai important este reacia -aminoacizilor cu ninhidrina.Compuii de culoare albastr au un maxim de absorbie la 570nm.Prolina i hidroxiprolina dau cu ninhidrina compui galbeni cu maxim de absorbie la 440nm.Adaosul de compui de cadmiu stabilizeaz culoarea /1,2,5,8,9/. 2. Msurarea absorbiei n u.v. se poate folosi pentru dozarea aminoacizilor aromatici, n amestec cu ali aminoacizi.Citirea se face la 260nm pentru fenilalanin i 280nm pentru tirosin i triptofan /5,8/. 3.Metode cromatografice.Se folosesc toate variantele acestei tehnici:CH,CSS,CSI,GC,HPLC. n cromatografia pe hrtie (CH) i n strat subire (CSS) exist o strns dependen ntre constituia catenei unui aminoacid i viteza sa de migrare.Cei cu catene hidrofobe mari (valina,leucina,izoleucina,fenilalanina,tirosina,triptofanul,metionina) migreaz mai repede dect cei cu catene hidrofobe mai scurte (alanina, glicina,prolina) i dect cei cu catene hidrofile (cistein,serin, treonin, acid aspartic, acid glutamic, lisin, arginin,histidin).Migrarea difereniat a aminoacizilor este determinat de afinitatea mai mare pe care o au aminoacizii cu catene hidrofile pentru faza staionar (apoas) i cei cu catene hidrofobe pentru faza mobil (solvent organic).n cazul amestecurilor complexe de aminoacizi se folosete cromatografia bidimensional, folosindu-se un amestec de solveni organici cu migrare ntr-un sens i un alt amestec de solveni pentru sensul perpendicular pe primul.Aminoacizii se dozez prin tratare cu o soluie de ninhidrin, la cald,eluia fiecrui spot colorat ntr-un solvent al compusului cu ninhidrin, stabilizarea acestuia prin combinaii cu sruri de cadmiu i citirea absorbiei la o lungime de und de 570nm la un spectrofotometru. Separarea cromatografic pe schimbtori de ioni are loc datorit afinitii diferite a aminoacizilor pentru acetia, n funcie de constantele de disociere a gruprilor -COOH i NH 2. Eluia aminoacizilor reinui n coloan se face cu solveni cu valori de pH crescnde (n gradient de pH); eluia aminoacizilor se va face n ordinea invers afinitii lor pentru schimbtorul de ioni folosit.S-au elaborat dou tehnici: una folosind un colector automat de fraciuni i a doua, folosind un analizor automat de aminoacizi. n cazul cromatografiei de difuzie pe gel, aminoacizii cu molecul mai mic i mai hidrofili difuzeaz n gel i sunt mai puternic reinui;cei cu molecule mai mari rmn n apa dintre particulele de gel i ies mai repede de pe coloan. n electroforez sau ionoforez, separarea are loc sub aciunea unui cmp electric.Aminoacizii se separ n funcie de valoarea constantei lor de disociere la un anumit pH dat.Se folosete de obicei pH-ul 4,0 la care separarea este net pentru toi aminoacizii (n condiiile unei tensiuni electrice mari, 70 V/cm). Indiferent de metoda de separare,prelucrarea probelor cu ninhidrin i citirea absorbiei la 570nm este procedura final comun. Pentru dozri exacte, n special pentru stabilirea unor mecanisme de reacie sau a unor ci de metabolizare sau de biosintez se aplic metoda diluiei izotopice /1,3,5,8,9/.

Prezena unor anumii aminoacizi este indicat dup poziia maximelor, iar raportul n care se gsesc,dup intensitatea maximelor de absorbie: Asp:Thr:Ser:Glu:Pro:Gly:Ala=15:10:15:12:4:3:12 4.Determinri microbiologice.Exist dou tipuri de metode microbiologice folosite la dozarea aminoacizilor.Prima metod se bazeau pe compararea gradului de dezvoltare a unui microorganism dependent de aminoacidul ce urmeaz s fie dozat, cu o curb de dezvoltare prestabilit n funcie de concentraia aminoacidului.A doua metod de dozare microbiologic se bazeaz pe faptul c unele microorganisme conin enzime specifice de degradare pentru anumii aminoacizi, de exemplu decarboxilaze care catalizeaz decarboxilarea aminoacidului cu degajare de CO2.Se msoar cantitatea de CO2 degajat n condiii de lucrubine stabilite, care este proporional cu concentraia aminoacidului n prob /2,3,5,8,9,11/. Metode de preparare Importana deosebit a aminoacizilor att pentru cercetrile biochimice, nutriionale i microbiologice, ct i pentru utilizarea lor n preparate farmaceutice, alimente i furaje a determinat elaborarea unei multitudini de metode de preparare n laborator i n industrie.Astfel, aminoacizii pot fi obinui prin izolarea lor din hidrolizatele acide,bazice sau enzimatice ale proteinelor, prin sinteze chimice i prin biosintez. I.Izolarea din hidrolizatele proteice Izolarea aminoacizilor se poate realiza folosind adsorbia pe crbune activ, pmnturi adsorbante, schimbtori de ioni, cromatografie de repartiie, electroforez,coprecipitare cu reactivi specifici.n timpul hidrolizei acide, triptofanul este degradat aproape complet; el se separ din hidrolizatele alcaline.Serina i treonina sunt i ele distruse parial n condiiile hidrolizei acide.De asemenea, n timpul hidrolizei acide i alcaline, aminoacizii se racemizeaz parial.Prin hidroliz enzimatic se obin aminoacizi optic activi, cu configuraiaL.Izolarea din hidrolizatele proteice servete la prepararea industrial a multor aminoacizi, cum sunt:acidul glutamic,lisina,cisteina,arginina,triptofanul,tirosina. II.Sinteze chimice de aminoacizi 1.Aminarea acizilor -halogenai Prin tratarea unui acid -clorurat sau -bromurat cu amoniac sau hexametilentetramin se obine aminoacidul corespunztor: R-CH-COOH + 2NH3 R-CH-COOH + NH4X X NH2 Metoda se aplic la toi -bromacizii accesibili prin bromurarea acizilor, folosind metoda HellVolhard-Zelinski.Se utilizeaz un exces mare de amoniac, pentru evitarea formrii de amine secundare i teriare.Cu HMTA se formeaz un aduct care se descompune prin nclzire cu HCl, dnd aminoacidul cu randament mare. 2. Aminarea reductiv Prin reducerea catalitic (cu Pd i H2) a unui -cetoacid n prezena amoniacului se obine aminoacidul corespunztor: +H2 R-C-COOH +NH3 R-C-COOH R-CH-COOH O NH NH2 -H2o -cetoacidul sau esterul acetilacetic substituit pot fi transformai n oxime, hidrazone sau fenilhidrazone, care formeaz aminoacidul respectiv, prin reducere chimic sau catalitic: R-CO-COOH +PhNHNH2 C6H5-NH-N-CR-COOH H2 H2N-CHR-COOH CH3-CO-CHR-COOEt HON=CR-COOEt H2N-CHR-COOH Reducerea se poate efectua cu Sn i HCl sau Zn i CH 3-COOH, cu amalgam de sodiu sau de Al, catalitic (cu Ni Raney) sau electrolitic.

Importana preparativ a metodei reductive este mult mrit prin obinerea compuilor azotai intermediari pe ci mai simple dect cele de la acizii -cetonici.O astfel de cale este cuplarea esterilor -cetonici -substituii cu sruri de diazoniu aromatice (Feofilaktov, 1938). R-CH-COOEt + C6H5-N=N]+ClR-C-COOEt R-CH(NH2)-COOH + COCH3 N-NHC6H5 +H2N-C6H5 3.Aminarea prin transpoziie intramolecular Aceast metod implic transformarea unui derivat al acidului cianoacetic ntr-o azid sau amid i apoi n aminoacidul dorit, folosind transpoziiile (degradrile) Schmidt, Curtius sau Hofmann: CN CN CN CN COOH R-CH R-CH R-CH R-CH R-CH COOEt CONHNH2 CON3 NHCOOEt NH2 CN CONH2 NH2 R-CH R-CH R-CH COOH COOH COOH 4.Reacia cianhidrin (sinteza Strecker, 1858) Aceast metod implic interaciunea unei aldehide cu ionul cianur, n prezena amoniacului sau a carbonatului de amoniu.Se formeaz aminonitrilul,respectiv hidantoina substituit, care prin hidroliz cu acizi sau baze, se transform n aminoacidul respectiv: R-CH-CN R-CH-CN R-CH-COOH OH NH2 NH2 +(NH4)2CO3 R-CH-CO-NH +H2O NH-CO -NH3, -CO2 5.Condensarea cu esteri N-acilai ai acidului aminomalonic Esterul aminomalonic se obine prin reducerea esterului izonitrozomalonic.Derivaii Nacilai formeaz combinaii sodate, care reacioneaz n acelai mod ca esterul malonic sodat.Se utilizeaz de obicei derivatul N-acetilat sau N-formilat. EtOOC EtOOC EtOOC ONOH +H2, -H2O CH2 C=NOH CH-NH2 Ac2O EtOOC EtOOC EtOOC EtOOC CH-NH-COCH3 EtOOC Se pot folosi i esteri aminocianoacetici N-acilai: EtOOC-CH-NH-COCH3 CN Derivaii esterilor acidului aminomalonic se transform n combinaii sodate (cu etoxid de sodiu) care, prin condensare cu halogenuri de alchil sau acil i hidroliz ulterioar, formeaz aminoacizii corespunztori. EtOOC R-X EtOOC H2O HOOC-CH-R C-Na+ -NaX CR -CO2 NH2 EtOOC NHAc EtOOC NHAc -AcOH NC NC C-Na+ + RX -NaX CR H2O EtOOC NHAc EtOOC NHAc -CO2,-NH3,-AcOH R-CH=O + HCN

6.Condensarea unei aldehide cu un compus avnd o grup metilen activ Aceast metod se folosete pentru obinerea aminoacizilor aromatici sau heterociclici i se realizeaz pornind de la o aldehid aromatic, care se condenseaz cu o azlacton (de exemplu 2,5 dicetopiperazina, hidantoina, rodanina sau 2-mercaptotiazolin-5-ona).Dup reducere cu amalgam de sodiu sau zinc i acid acetic i hidroliz se obine aminoacidul corespunztor.Aceast metod este o aplicare a condensrii Perkin. NH O= H2C-CO H2C-CO H2C-CO =O NH NH S NH HN-CO S-CS HN-CS 2,5 dicetopiperazin hidantoin rodanin 2-mercaptotiazolin-5-on H2C-CO Ar-CH= =O Ar-CH=O + N O H2O N O H2 Ph azlacton =O O Ph

H2O Ar-CH2-CH-COOH N -PhCOOH NH2 Ph 7.Oxidarea aminoalcoolilor Metoda este limitat la aminoalcoolii accesibili. AcHN-CHR-CH2OH + [O] AcHN-CHR-COOH + H2O 8.Se cunosc o serie de metode chimice de sintez specifice unor aminoacizi, deci cu aplicabilitate limitat; de exemplu, adiia amoniacului la dubla legtur a acizilor nesaturai: HOOC-CH=CH-COOH + NH3 HOOC-CH2-CH-COOH acid fumaric NH2 acid asparagic Obinerea formelor optic active Metodele chimice de sintez conduc de obicei la aminoacizi racemici.Dedublarea formelor racemice ale aminoacizilor se poate realiza, n principiu, prin urmtoarele metode : a.) Cristalizarea selectiv a unuia din enantiomeri din soluia saturat a acestuia. b.) Formarea de sruri diastereoizomere cu baze sau acizi chirali.Se folosesc de obicei aminoacizi N-acilai, pentru a le intensifica caracterul acid i a forma sruri cu baze optic active. Se pot utiliza i esteri ai aminoacizilor, care au caracter bazic mai pronunat dect aminoacizii i formeaz sruri cu acizi optic activi.Aminoacizii bazici reacioneaz ca atare cu acizii optic activi (acid D-camforic).Srurile diastereoizomere se separ prin diferena de solubilitate.Dup separare, prin hidroliz se obin aminoacizi liberi. c.)Tratarea racemicului cu preparate enzimatice.Aceast metod este nalt selectiv datorit marii specificiti a enzimelor i posed avantajul c permite obinerea unor izomeri cu coufiguraie cunoscut.Procedeele constau n: - introducerea amestecului racemic, prin ingerare (furaj) sau prin injectare, ntr-un animal, ale crui enzime metabolizeaz numai forma L.Din urin se separ apoi enantiomerul D rmas netransformat; - oxidarea sau decarboxilarea cu ajutorul unor microorganisme specifice sau esuturi, ale unuia din izomeri, cellalt rmnnd neatacat. - hidroliza asimetric sub aciunea unor enzime (amidaze, esteraze, acilaze) ale derivailor aminoacizilor racemici substituii n mod adecvat, prin care se elibereaz numai antipodul L, care se separ de enantiomerul D rmas nehidrolizat. III. Metode de biosintez a aminoacizilor /2,5,7,8,9,10,12/

Ar-CH2

Aceste metode se bazeaz pe capacitatea de biosintez a microorganismelor i au avantajul c se obin aminoacizi din seria L, avnd configuraia aminoacizilor naturali din proteine.Mecanisme foarte precise de reglare menin concentraia aminoacizilor n celule n limite foarte strnse.Prin mutagenez, celulele microbiene sufer modificri genetice, cu implicaii asupra mecanismelor de reglare.Ele pot suferi o mutaie sau deleie a genelor operatoare sau reglatoare ale unora din enzime sau prin mutaie genetic se pot codifica enzime modificate astfel nct s nu mai fie sensibile la metabolitul care le regleaz n mod normal.Acest fel de microorganisme cu mecanismele de reglare modificate, cu permeabilitatea membranei celulare schimbat sau cu deficiene metabolice, pot fi ntrebuinate industrial pentru producerea unor metabolii importani pentru om, printre care i aminoacizii. Pentru obinerea aminoacizilor se folosesc mutani de Brevibacterium sau Corymbacterium, dependeni de ali aminoacizi ce fac parte din schema de biosintez a aminoacidului n cauz (de exemplu pentru producerea lisinei se folosesc mutani dependeni de homoserin) sau mutani rezisteni la analogi ai respectivului aminoacid. Drept materii prime se folosesc hidrai de carbon, alcooli,hidrocarburi alifatice cu cel puin 10 atomi de carbon, compui cu azot (proteine, peptide, uree, sruri de amoniu), sruri minerale (ce conin K, Mg, Ca, P, Fe, Mn, Zn etc) i factori de cretere.Aceste substane sunt folosite de microorganisme pentru a se dezvolta i pentru a efectua biosinteza propriu-zis a aminoacidului. n timpul biosintezei se introduce aer sub presiune, steril, care furnizeaz oxigen diferitelor procese metabolice.n funcie de aminoacid, concentraia acestuia n mediile fermentate este cuprins ntre cteva grame i pn la 90-100 g/l.Aminoacizii astfel sintetizai sunt izolai i purificai cu ajutorul schimbtorilor de ioni, cristalizrii fracionate, adsorbiei pe diferii adsorbani. IV.Metode mixte Aceste metode se folosesc de avatajele metodelor chimice i biochimice,deopotriv.Astfel, se produc n cantiti mari intermediari prin sintez chimic i apoi sunt supui transformrilor stereospecifice, cu obinerea direct a L-aminoacidului. Utilizrile aminoacizilor Aminoacizii se folosesc n medicin pentru prepararea unor medicamente i pentru alimentaia artificial n anumite mbolnviri ale sistemului digestiv, n caz de intervenii chirurgicale etc.Se folosesc n alimentaie, pentru suplimentarea unor produse deficitare n aminoacizi eseniali, pentru accentuarea aromelor, pentru prepararea supelor concentrate,a alimentelor pentru copii, alimentaia dietetic pentru cosmonaui,ca antioxidani la prepararea conservelor i buturilor etc /5,10/. Cantiti mari de aminoacizi se folosesc n zootehnie, pentru obinerea concentratelor furajere i pentru a mri digestibilitatea furajelor bogate n hidrai de carbon i srace n proteine complete.Se folosesc, de asemenea, pentru prepararea unor medii bacteriologice necesare depistrii unor boli /5,10/. Din punct de vedere fiziologic aminoacizii au un rol deosebit. Astfel, acidul glutamic are un rol major n dezintoxicarea organismului, glutamina obinut prin aminarea lui fiind recomandat mpotriva oboselii, depresiei i impotenei.Glicina intervine n sinteza hemoglobinei; ca precursor al glutationului, glicina se combin cu acidul colic i formeaz glucocolai (sruri biliare) cu rol deosebit n digestie.Serina particip la sinteza cefalinei i stingomielinei.Arginina trece n ornitin care permite sinteza spermidinei i sperminei, prolamine considerate principali factori decretere.Tirosina este precursorul a doi hormoni tiroidieni i anume: triiodotironina i tiroxina.De aceea, tirosina este deosebit de important n eliminarea dereglajelor tiroidiene.De remarcat c tirosina este precursor al adrenalinei i noradrenalinei, substane cu rolimportant n pstrarea echilibrului psihic.Triptofanul conduce la formarea serotoninei care este un vasoconstrictor puternic, un bun stimulator al contraciei muchilor netezi, un excelent neurotransmitor al sistemului nervos central.Am menionat o parte din aminoacizi, n special cei a cror activitate

fiziologic este remarcabil i care nu se gsesc ntotdeauna ct ar trebui n alimentaia zilnic / 1,3,7,12/.

PEPTIDE
Peptidele sunt combinaii de tip amidic rezultate prin condensarea a dou sau mai multor molecule de aminoacizi. R-CH-COOH + H2N-CH-COOH H2N-CH-CONH-CH-COOH -H2O NH2 R R R Peptidele pot rezulta din dou, trei sau "n" molecule de aminoacizi.Pentru sistematizarea acestor compui, convenional ei se clasific n /3/: - peptide (oligopeptide) - compui formai dintr-un numr relativ mic de -aminoacizi; - polipeptide - compui formai dintr-un numr mai mare de -aminoacizi, dar cu masa molecular mai mic de 10000; - proteine (poliprotide superioare, holoproteide) - compui cu masa molecular mai mare de 10000; - heteroproteide - compui care pe lng un lan proteic,mai conin i o grupare neproteic numit grupare prostetic. Deci, fiecare molecul de peptid, polipeptid sau protein va conine: "n" resturi de aminoacizi; (n-1) legturi peptidice (de tip amid substituit); un N-acid (aminoacidul N terminal), rest de -aminoacid de la captul lanului, care posed grupa amino liber i un C-acid (aminoacidul C-terminal), rest de -aminoacid, de la cellalt capt al lanului, care posed grupa carboxil liber /3/. Denumirile peptidelor se construiesc socotindu-le derivai acilai ai aminoacidului Cterminal.Se citesc succesiv radicalii aminoacizilor ncepnd cu captul N-terminal pn la restul Cterminal /1,3,8/.De exemplu: H2N-CH-CO-NH-CH2-CO-NH-CH-CO-NH-CH-COOH CH(CH3)2 CH2-OH CH3 valil-glicil-seril-alanina sau Val-Gli-Ser-Ala Datorit posibilitii de legare a acelorai aminoacizi n secvene diferite, peptidele pot prezenta fenomenul de izomerie de structur, de poziie.Doi aminoacizi diferii pot da natere la dou dipeptide izomere dup cum unul sau altul ocup poziia N- sau C-terminal. n organismele vii se ntlnesc numeroase peptide (oligopeptide sau peptide mai mari) cu funcii particulare.Unele din aceste peptide au legturi peptidice atipice, cuprind resturi de aminoacizi modificai, structuri ciclice, altele cuprind D-aminoacizi /1,3,4,8,9/. Peptidele se deosebesc de proteine prin aceea c dializeaz prin membrane de celofan.Spre deosebire de peptide, proteinele sunt precipitate din soluie cu acid tricloracetic /4/. PROPRIETI Cele mai multe peptide sunt cristaline, incolore, solubile n ap i insolubile n alcool absolut, solubilitatea lor fiind condiionat de mrimea moleculelor.La fel ca aminoacizii, au caracter amfoter, formnd sruri solubile cu acizii i cu bazele. Peptidele arat unele proprieti ale proteinelor.Cele compuse din mai mult de 3-4 aminoacizi dau reacia biuretului.Unele dintre ele se precipit din soluie, prin adugare de electrolii, ise redizolv dup ndeprtarea lor.

Prin hidroliz elibereaz aminoacizii componeni.Peptidele n a cror componen intr aminoacizii optic activi naturali, pot fi hidrolizate de enzime proteolitice (peptidaze). Unele peptide apar ca produi intermediari la hidroliza proteinelor cu acizi sau cu enzime i servesc la stabilirea structurii proteinelor din care provin /3,4/. STRUCTUR Comportarea general a peptidelor poate fi explicat pe baza structurii lor, problemele de structur fiind complexe, un exemplu de corelaie ntre efecte electronice i sterice, ntre aspecte calitative i cantitative.Elementul central l constituie gruparea peptidic. Examinarea geometriei i dimensiunilor legturii peptidice pe structuri cristaline ale unor oligopeptide, confirm cunotinele generale asupra lagturii amidice.Distana C-N este cu 10% mai scurt dect n amine iar dubla legtur C =O este cu 0,02A mai lung dect cea cunoscut pentru aldehide i cetone.Aceste efecte sunt puse pe seama conjugrii p- din gruparea amidic, reprezentat ca o structur de rezonan ntre structurile limit I i II /3,4,8/. O R' OR' + R-CH-C-N-CH-COOH R-CH-C=N -CH-COOH NH2 H NH2 H ' I II Din lungimile de legtur i din spectre RMN s-a calculat c structura hibrid conine aproximativ 60% I i 40% II, electronii fiind delocalizai pe legturile C-O i C-N.Datorit acestei conjugri grupa C=O din amide i peptide nu d reaciile caracteristice cetonelor, iar electronii neparticipani ai azotului nu sunt disponibili pentru legarea protonului i ele sunt baze foarte slabe.De asemenea, conjugarea face ca legtura carbon-azot din gruparea peptidic s aib caracter parial de dubl legtur.Structura steric a gruprii peptidice este condiionat de distribuia electronic din aceast grupare, care are ca efect o anumit orientare n spaiu a substituenilor legai de atomii implicai n legtura peptidic i anume, acetia sunt orientai n acelai plan.Rotirea n jurul legturii carbon-azot este frnat, fapt care creeaz condiia necesar existenei unor aranjamente geometrice temporare, a izomerilor conformaionali de tip S-trans (transoid) i S-cis (cisoid); dintre acetia, izomerul S-trans fiind cel mai stabil /4/. Studiul peptidelor cu ajutorul difraciei razelor X, a evideniat faptul c acestea adopt preferenial structura corespunztoare formei S-trans, n timp ce structura corespunztoare formei Scis se regsete n sisteme ciclice de tipul 1,4-dicetopiperazinelor substituite. Avnd lungimile legturilor i unghiurile relativ rigide, legtura peptidic n ansamblu este i ea rigid, dei o uoar deformare este totui posibil.Fiecare unitate peptidic este relativ voluminoas i datorit rigiditii legturii peptidice, flexibilitatea de ansamblu a lanului polipeptidic este apreciabil restrns /3,4,9/. SINTEZE DE PEPTIDE O trstur caracteristic a stadiului actual de cercetare a peptidelor o reprezint interferena i condiionarea strns dintre metodele de studiu i sinteza de peptide sau de analogi structurali. Construirea unei catene polipeptidice formate dintr-o succesiune de aminoacizi diferii are loc n etape.Deoarece aminoacizii au dou grupe funcionale reactive care pot reaciona ntre ele intrnd n competiie cu grupri echivalente dintr-un nou aminoacid cu care se face condensarea, n sintezele de peptide se pornete ntodeauna de la un aminoacid cu una din gruprile funcionale blocate.Alegerea agenilor de blocare se face n aa fel ca ndeprtarea lor, la sfritul sintezei s se fac n condiii care nu afecteaz legtura peptidic creat /1,3,4,8,9,11/. Metode de blocare i activare a gruprilor amino i carboxil Pentru blocarea gruprii aminice se utilizeaz mai ales cloroformiai i anhidride. 1.)Protejarea gruprii aminice prin carbobenzoxilare const n acilarea aminoacidului cu cloroformiat de benzil (Cbz); produsul obinut se transform ntr-un derivat funcional reactiv care

reacioneaz cu gruparea aminic (neblocat) a aminoacidului cu care se face condensarea.Eliminarea gruprii protectoare se face prin hidrogenare catalitic n prezen de paladiu /1,9/. C6H5-CH2-O-COCl + H2N-CHR-COOH Cbz-NH-CHR-COOH PCl5 Cbz-NH-CHR-COCl + H2N-CHR'-COOCH3 -HCl Cbz-NH-CHR-CO-NH-CHR'-COOCH3 H2/Pd C6H5-CH3 + CO2 + H2N-CHR-CO-NH-CHR'-COOH 2.) Protejarea gruprii aminice prin ftalilare se bazeaz pe observaia c gruparea ftalil se elimin foarte uor prin tratare cu hidrat de hidrazin /1,8,9/. CO CO C6H4 O + H2N-CHR-COOH C6H4 N-CHR-COOH PCl5 CO CO CO CO C6H4 N-CHR-COCl H2N-CHR'-COOH C6H4 N-CHR-CO-NH-CHR'-COOH CO CO Ca i metoda carbobenzoxilrii, metoda aceasta nu provoac racemizarea aminoacizilor. 3.) Protejarea gruprii aminice prin butoxicarbonilare se bazeaz pe observaia c eliminarea gruprii terbutoxicarbonil are loc deosebit de uor, la tratarea cu acid trifluor acetic n acid acetic sau n clorur de metilen, marele avantaj constnd n faptul c, n afar de peptid rezult numai compui gazoi /1,8,9/. (CH3)3C-OCON3 + H2N-CHR-COOH (CH3)3C-OCONH-CHR-COOH (Boc) PCl5 (CH3)3C-OCONH-CHR-COCl + H2N-CHR'-COOH (CH3)3C-OCONH-CHR-CONH-CHR'-COOH (CH3)3C=CH2 + CO2 + H2N-CHR-CO-NH-CHR'-COOH 4.) Blocarea gruprilor carboxil se realizeaz prin esterificare cu alcool benzilic, ter-butanol .a./1,3,8,9/. 5.) Activarea gruprii COOH se realizeaz prin transformarea ei n cloruri acide, esteri i prin utilizarea unor reactivi ca diciclohexilcarbodiimida (DDC) sau carbonildiimidazolul. Clorurile acide ale aminoacizilor care conin i alte grupri funcionale n molecul sunt greu de obinut.Utilizarea esterilor obinuii este limitat de reactivitatea redus a acestora; se folosete mult esterul p-nitrofenilic, ("ester activat") obinut prin tratarea aminoacidului (protejat) cu p-nitrofenol, n prezena DDC. N,N'-carbonildiimidazolul reacioneaz cu gruparea carboxil din aminoacizi sau peptide protejate, dnd N-acil-imidazol care n reacie cu o amin sau un aminoacid conduce la o amid,respectiv o peptid /1,3,8,9/. 6.) Sinteza peptidelor n faz solid (metoda Merrifield) Aceast metod utilizeaz ca agent de blocare al gruprii carboxil, polistiren clorometilat.Polimerul clorometilat este tratat cu o soluie a srii de sodiu a aminoacidului care se fixeaz, sub form de ester benzilic, pe polimerul solid: Avantajul metodei const n faptul c peptida intermediar ataat de polimer este insolubil i poate fi uor izolat prin simpl filtrare i splare.Se evit izolarea i purificarea, dup adugarea fiecrui aminoacid. Desprinderea polipeptidei de pe polimer se poate face prin tratare cu HF anhidru care nu scindeaz legturile peptidice.Prin aceast metod s-au sintetizat, cu rezultate bune, insulina i unii hormoni hipofizari /1,3,4,8,9/. Reprezentani Carnozina (-alanilhistidina) i anserina (-alanil-N-metilhistidina) sunt dipeptide prezente n muchi, care intervin n schimburile energetice din organism.

L-aspartil- -fenil-L-alanil metil eterul (aspartam) este o dipeptid de 152 de ori mai dulce dect zaharoza;dac radicalul fenil este nlocuit cu un radical ciclohexil, compusul rezultat este de 225 ori mai dulce dect zaharoza.Acest compus este folosit ca edulcorant artificial, cu slab aport caloric, de ctre diabetici i pentru controlul greutii corporale ncepnd din anul 1983. Glutationul (-glutamil-cisteinil-glicina) - prima tripeptid natural cunoscut i izolat din drojdia de bere, prezent n toate celulele, joac un rol important n procesele de oxido-reducere, datorit prezenei n molecul a gruprii -SH, care are caracter reductor conducnd la disulfura corespunztoare.Glutationul funcioneaz ca i coenzim a unor enzime. Oxitocina i vasopresina sunt nonapeptide cu structur ciclic, datorit formrii unei puni disulfurice ntre gruprile -SH, care provin de la dou resturi de cistein, prezente n lanul polipeptidic.n structura acestor peptide s-a constatat prezena a trei grupri amidice, formate la gruprile carboxil libere, care provin de la aminoacizii monoaminodicarboxilici prezeni n molecul.Diferenele structurale ntre aceste peptide sunt mici, dar aciunea fiziologic este diferit.Aceste peptide sunt hormoni hipofizari.Oxitocina acioneaz asupra musculaturii netede, n special a uterului, provocnd contracii.Vasopresina are o aciune similar dar mult mai redus, provocnd creterea tensiunii arteriale prin inhibarea diurezei. Insulina este de asemenea un hormon de natur proteic, secretat de pancreas.Masa molecular a insulinei este de aproximativ 6000, dar moleculele sunt asociate formnd agregate cu mase moleculare de 12000, 48000 care n anumite condiii disociaz. Insulina regleaz metabolismul glucidic i indirect influeneaz i asupra metabolismului altor compui organici.Hipofuncia pancreasului conduce la diabet zaharat, boal care se caracterizeaz prin hiperglicemie i glicozurie, aprnd totodat i modificri n metabolismul proteinelor i lipidelor.Hiposecreia de insulin poate fi compensat prin administrare periodic de insulin, care influeneaz direct asupra sintezei glicogenului hepatic i asupra oxidrii glucozei n muchi /1,3,4,8,9,11/.

PROTEINE
Proteinele sunt compui organici naturali, considerai ca fiind suportul material al tuturor fenomenelor vieii.Aceti compui sunt principalii constitueni cu structur macromolecular ai protoplasmei tuturor celulelor vegetale i animale.Denumirea lor deriv de la cuvntul "protos" care nseamn de prim rang, cel dinti,fundamental /2,3/. Proteinele sunt substane macromoleculare de natur polipeptidic, la construcia crora particip 20 de aminoacizi fundamentali.Proteinele sunt macromolecule informaionale, cu secvene specifice de aminoacizi, sunt expresia epigenetic a genomului celular. Chimia proteinelor este deosebit de complex, ea presupunnd, mai nti, nelegerea principiilor generale de construcie a moleculelor proteice, a modului n care dintr-un numr limitat de uniti structurale se pot forma infinit de multe proteine i ce factori intervin n realizarea arhitecturii lor.n al doilea rnd, studiul proteinelor necesit abordarea fiecrui tip de protein n parte, stabilirea pentru fiecare specie molecular a constituiei chimice, a arhitecturii ei spaiale i a funciei sau a funciilor pe care le exercit /1,3,8,9/. Structur Cu ct numrul de -aminoacizi, care formeaz molecula unui compus de natur proteic este mai mare, cu att problemele pe care le ridic structura acestor compui sunt mai complexe.Cercetrile efectuate n acest domeniu, au condus la rezultate experimentale pe baza crora se disting patru grade structurale sau niveluri de organizare, deosebindu-se prin complexitatea lor.Acestea au fost numite structuri primare, secundare, teriare i cuaternare /2,8,9/. Structura primar a unei proteine este determinat prin felul aminoacizilor, numrul lor i succesiunea lor specific, respectiv secvena lor.Structura primar red totalitatea legturilor covalente din molecul, fiind denumit i structur covalent.Distanele interatomice i unghiurile de valen calculate sunt cele precizate pa peptide /1,2,3,8,9/. Cunoaterea structurii primare are o importan deosebit pentru nelegerea rolurilor proteinelor. Prin studii de secvenialitate s-a stabilit c o protein dat are o structur unic, nu este un amestec de specii moleculare diferite, cum este cazul polimerilor de sintez.S-a constatat c nu exist regularitate n nlnuirea aminoacizilor, nu exist anumite secvene preferate fa de altele, astfel c dac la o protein cu 100 de resturi de aminoacizi se cunoate natura i secvena a 99 dintre ei, nu exist nici o regul care s permit prevederea celui de al 100-lea. Structurile primare ale proteinelor constituie baza nelegerii la nivel molecular a activitii lor biologice.Prin compararea structurilor primare ale proteinelor care ndeplinesc funcii omoloage la organisme diferite se poate stabili gradul de varietate structural compatibil cu o anumit funcie.Secvena aminoacizilor ntr-o protein este veriga ntre mesajul geneti nscris n ADN i expresia acestui mesaj.S-au descoperit specii de proteine anormale (mutante) ca expresie a unor modificri la nivelul genomului.Aceste proteine anormale se pot manifesta sub forma unor bolibolile moleculare. Structura secundar este determinat de aranjarea n spaiu a catenei polipeptidice i de legturile care se stabilesc ntre catene.Legturile de hidrogen, ntre gruprile NH- i C=O, joac un rol esenial la acest nivel de organizare /2/. Prin studii de difracie cu raze X pe cristale pure de polipeptide sintetice i naturale, Pauling i Corey au indicat modalitile de realizare a structurii secundare: atomii implicai n legtura peptidic sunt coplanari; atomii de carbon din lanul peptidic sunt poziionai trans unul fa de

altul, fcnd s scad forele de respingere;distanele interatomice i unghiurile de valen au aceleai valori indiferent de dimensiunile catenei;numrul legturilor de hidrogen care se stabilesc ntre oxigenul carbonilic i azotul amidic este maxim posibil, hidrogenul fiind plasat pe linia imaginar care ar uni oxigenul de azot.Legtura de hidrogen poate fi intramolecular, rezultnd o structur -elicoidal, format printr-o rsucire n spiral a catenei polipeptidice, i intermolecular, obinndu-se o structur pliat, prin simpla pliere a catenei.S-a dovedit c aceste structuri sunt concordante cu proprietile fizico-chimice i biologice /2,3/. Structura de -helix Lanul polipeptidic se rsucete la nivelul legturilor simple, pentru ca gruprile C=O i NH s devin adiacente stereochimic pentru a forma puni de hidrogen.Se obine astfel o structur repetitiv elicoidal n care toate unitile se afl n raporturi spaiale identice cu unitile vecine.O grupare NH formeaz legtura de hidrogen cu gruparea C=O a celui de-al patrulea rest de aminoacid din secvena liniar.n acest fel toate gruprile C=O i NH sunt unite prin puni de hidrogen. Stereochimia gruprii peptidice, unghiurile de legtur, distanele interatomice,colinearitatea legturilor de hidrogen, apartenena tuturor aminoacizilor la aceeai serie optic ( seria L) determin o anumit geometrie a elicei : - cu fiecare rest de aminoacid se avanseaz pe vertical cu 1,47A; - pasul elicei, distana ntre dou puncte echivalente pe vertical, este de 5,21 A i cuprinde 3,6 resturi de aminoacizi; - diametrul elicei, diametrul suprafeei cilindrtce n care se afl atomii C , este de 10,1A; - sensul rsucirii lanului polipeptidic este de la stvga la dreapta; - radicalii R ai tuturor aminoacizilor sunt orientai spre exteriorul elicei, configuraia atomilor C fiind aceeai pentru toi aminoacizii; - toate gruprile NH i C=O formeaz puni de hidrogen. Un lan polipeptidic sub form de -elice se prezint ca un bastona cu diametrul de 10.1A, pentru 300 de resturi de aminoacid, lungimea fiind 450A /1,2,3,9,11/. Structura O alt structur secundar a lanurilor polopeptidice n care se realizeaz potenialul maxim de legare prin puni de hidrogen a gruprilor C=O i NH este structura sau structura pliat.n acest caz punile de hidrogen sunt intercatenare, lanurile polipeptidice aezndu-se n straturi.Cea mai stabil structur se obine dac lanurile evolueaz unul de la captul N-terminal i cellalt n sens invers (structura cu lanuri antiparalele).Datorit rigiditii legturii peptidice i coplanaritii gruprii -CH-NH-CO-CH- se realizeaz structuri asemntoare unei foi plisate.Radicalii R sunt orientai, alternativ,de-o parte i de alta.Structura este ntlnit n proporie de 100% n fibroin, proteina din mtase, i n proporii variabile n alte proteine fibrilare.Structura se ntlnete ns i la proteine globulare, fie ntre segmente aparinnd la lanuri diferite, fie ntr-un acelai lan polipeptidic. -keratina este compus din straturi formate din catene polipeptidice orientate paralel, n acelai sens i unite prin legturi de hidrogen.Fiecare caten este legat astfel de cele dou catene vecine, prin legturi de hidrogen ntre gruprile CO i NH ale lor /1,2,3,8,9/. Structura teriar Acest nivel de organizare nglobeaz structura secundar i definete raporturile dintre segmentele de -elice i structur , modul de mpachetare a lanului polipeptidic.Factorii determinani ai structurii teriare ai unei proteine sunt interaciunile necovalente ntre radicalii R de

la C, fie c acetia se afl n regiuni cu structur sau , fie c sunt cuprini n segmente neorganizate.La acest nivel de organizare teriar, molecula proteic dobndete forma sa specific / 2/. ntre diverii radicali ai aminoacizilor se pot stabili urmtoarele tipuri de legturi necovalente: 1.puni de hidrogen ntre radicalii cu grupri alcoolice (din resturi seril, treonil), fenolice (din resturi tirosil), amidice (din resturi glutaminil i asparaginil). 2.legturi ionice, saline, ntre radicalii cu sarcini electrice sau interaciuni polare ntre radicalii polari, fr sarcini. 3.interaciuni hidrofobe ntre resturile aminoacizilor nepolari ca: valin, leucin, izoleucin, fenilalanin, alanin. Resturile cisteinil din multe proteine formeaz legturi disulfurice care leag covalent regiuni mai ndeprtate ale lanurilor polipeptidice /3/. Un lan polipeptidic adopt, n msura n care i permite structura sa primar, configuraii de -elice sau de structur i prin pliere, mpachetarea lanului caut s satisfac i afinitile radicalilor R.Rezultanta tuturor acestor interaciuni determin conformaia moleculei proteice.Factorul ultim care determin conformaia unei proteine este structura sa primar.Informaia genetic tradus n secvene de aminoacizi, prin jocul forelor fizico-chimice, se transform spontan n edificii tridimensionale specifice /1,2,3,9/. Prima protein a crei structur tridimensional a fost stabilit n cele mai mici detalii, precizndu-se poziia n spaiu a tuturor atomilor componeni este mioglobina. Numrul proteinelor cu structur teriar cunoscut este n continu cretere i analiza acestor structuri dovedete pstrarea trsturilor calitative dar cu o mare plasticitate n detalii.Structura teriar, spre deosebire de cea secundar, este determinat de elemente nerepetitive; totui i la acest nivel au fost recunoscute cteva scheme de organizare spaial.Aceasta a permis clasificarea proteinelorglobulare n cteva clase /2/: a.) proteine all- -lanul polipeptidic are structur secundar de -elice n proporie de aproape 100% i elicele sunt mpachetate ntr-o form compact, globular; b.) proteine all- -lanul polipeptidic prin ndoire formeaz structuri cu lanuri antiparalele,aezate unele lng altele; c.) proteine + -segmentele cu organizare secundar i sunt segregate n structura teriar; d.) proteine / -segmentele i alterneaz n structura teriar; e.) proteine fr organizare secundar sau , plierea lanului fiind hotrt numai de interaciunile ntre R;n general sunt proteine mici ce cuprind un numr relativ mare de puni disulfurice Organizarea pe domenii a proteinelor /2,3/ Dup recunoaterea unor scheme structurale la nivelul organizrii teriare a moleculelor proteice,un concept nou, care permite o mai bun nelegere a raporturilor dintre structura i funciile unei proteine este conceptul organizrii proteinelor mai complexe, pe domenii structurale. Prin domenii structurale ale unei proteine se nelege regiunile compacte cu organizare teriar specific, relativ rigide, separate ntre ele de segmente mai puin organizate, care permit micarea unui domeniu n raport cu altul (dinamica domeniilor).Fiecare domeniu structural al unei proteine este rspunztor de o anumit funcie.Gradul de flexibilitate al domeniilor variaz de la micri mai ample la altele restrnse, depinznd de natura segmentelor interdomenii. Un aspect de cea mai mare importan care a rezultat din dezvolterea conceptului de organizare pe domenii a proteinelor este acela c domenii cu structuri i proprieti asociative similare sunt prezente n proteine diferite.Complexitatea structurilor i funciilor proteinelor poate rezulta prin asocierea de domenii structurale diferite (construcie modular).

Construcia proteinelor complexe din module funcionale independente confer proteinelor potenialiti noi.Organizarea pe domenii este ntlnit la unele enzime solubile, fiecare domeniu cataliznd o etap dintr-o secven metabolic.Eficiena crete foarte mult deoarece este mpiedicat pierderea intermediarilor n reacii colaterale, procesul desfurndu-se n flux continuu /2/. Structura cuaternar a proteinelor Multe proteine sunt alctuite din mai multe lanuri polipeptidice, de regul un numr mic i pereche (proteine oligomere).Lanurile individuale sunt denumite protomeri.La aceste proteine, pe lng structurile primar, secundar i teriar ale fiecrui protomer, apare un nivel superior de organizare-structura cuaternar.Aceasta definete natura, numrul i modul de asociere a protomerilor /1,2,3,8,9/. Funcia specific a unei proteine oligomere se manifest numai la nivelul structurii cuaternare, protomerii separai fiind inactivi. Asocierea protomerilor, structura cuaternar, se relizeaz numai prin fore slabe, necovalente i devine stabil, permanent, numai dac suprafeele de contact sunt complementare i un numr ct mai mare de atomi se apropie pn la nivelul razelor por van der Waals.Complementaritatea suprafeelor de contact asigur un grad foarte nalt de exactitate i de specificitate a structurilor cuaternare.Protomerii unor proteine omoloage de la specii diferite nu se asociaz. Interaciunile prin suprafee complementare prezint fenomenul de cooperare, adic primele interaciuni favorizeaz formarea celorlalte.La nceput moleculele se juxtapun prin cteva puncte, dup care celelalte grupri i gsesc mai uor partenerii. Capacitatea de interaciune a moleculelor prin suprafee complementare explic nu numai formarea proteinelor oligomere, a unor structuri supramoleculare, dar i modul n care proteinele i ndeplinesc funciile caracteristice. Structurile cuaternare permit funcionarea unor mecanisme fine de reglare a activitii proteinelor.O perturbaie care are loc la nivelul unui protomer poate fi transmis n restul moleculei, fiind resimit la nivelul contactului dintre protomeri;structura cuaternar este alterat i totodat i funcia proteinei.Acest mecanism de reglare este denumit reglare alosteric. Un exemplu de structur cuaternar este aceea a hemoglobinei, studiat prin analiz cristaligrafic cu razeX.n acest caz, lanurile polipeptidice, n numr de patru, sunt legate ntre ele prin legturi de hidrogen, fore van der Waals,legturi polare, formnd o legtur tetramer, care sub aciunea unor factori din mediu, se desface n protomeri, iar sub aciunea condiiilor iniiale, se srtuctureaz din nou cuaternar /2,9,11/. METODE DE DETERMINARE A STRUCTURII Pentru a fi studiate, proteinele trebuie izolate din diverse organe i apoi purificate.De obicei, proteinele se separ din materiale biologice cu o soluie salin sau cu solveni organici diluai cu ap.n principiu, proteinele se separ de substanele cu care se gsesc n amestec n soluie, fie prin dializ prin membrane semipermeabile, fie prin electroforez; apoi se cristalizeaz prin precipitare cu etanol sau sruri neutre /9/. Analiza elementar calitativ i cantitativ a proteinelor a pus n eviden prezena elementelor:C (50-52%); H(6,8-7,7%); O(20-25%); N(15-18%) i S(0,5-2%).n unele cazuri s-au identificat i elementele: P,Fe,Cu,I,Cl,Br /8,9/. Pentru stabilirea structurii peptidelor, polipeptidelor i proteinelor se utilizeaz metodele fizico-chimice, problemele de structur fiind deosebit de complexe. Pentru determinarea structurii primare a substanelor proteice este necesar cunoaterea felului i numrului -aminoacizilor din care este format compusul proteic analizat (adic identificarea i dozarea -aminoacizilor) precum i stabilirea secvenei -aminoacizilor, adic stabilirea ordinei n care acetia se succed n molecul /3/. Identificarea i dozarea aminoacizilor

Extractele proteice sunt supuse unor operaii de separare i purificare laborioase, obinnduse n final polipeptide sau proteine n stare pur.Acestea sunt hidrolizate, pe cale chimic sau enzimatic, conducnd la hidrolizate proteice. Din hidrolizatele proteice, aminoacizii se identific folosind mai ales metodele cromatografice (vezi aminoacizi).Apoi se determin cantitativ aminoacizii, mai ales prin metode spectrofotometrice.Se cunosc aparate bazate pe separarea cromatografic a aminoacizilor i dozarea spectrofotometric a acestora, cu funcionare automat /3,9/.

www.eReferate.ro -Cea mai buna inspiratie