Termodinamica y crecimiento microbiano

EIcrecimiento de 105 microorganismos es un sistema abierto muy complejo en donde se realizan transferencias de masa y energia, y no es una excepcion que las leyes de la termodinamica y de la conservacion de las especies atomicas se cumplan en 105 cultivos bacterianos. Sin duda un fermentador continuo es un sistema muy complicado que requeriria muchas ecuaciones matematicas para poder definirlo. Sin embargo, sabemos que: a) Todos 105 atomos que entran al fermentador salen aunque sea siendo parte de otros compuestos. b) Las reacciones que se desarrollan dentro del fermentador son reacciones de oxido-reduccion principalmente, por 10 tanto se puede realizar un balance de electrones. c) Tanto 105 f1ujosentrantes como 105 salientes pueden ser referidos a la produccion de la biomasa. La teorfa macrosc6pica utiliza estas tres consideraciones para reducir el numero de ecuaciones necesarias para definir un fermentador.

La teoria macroscopica, aplicada al crecimiento de 105 microorganismos, esta definida por la cantidad de biomasa seca en el estado estacionario y considerando que no cambia la composicion de la biomasa. EIconcepto de mol-carbon de un microorganismo se define como la cantidad de biomasa que contiene un mol de carbon. La composicion atomica de un microorganismo esta dad a por su formula elemental CHal Obl Ncl. Como puede apreciarse, solo el C, H, 0 Y N fueron 105 elementos considerados. Esto es valido, si sabemos que ellos representan 95% de la biomasa en base seca. Se asume que el microorganismor-crece usando una Fuente de carbon y una fuente de nitrogeno, la cual puede contener carbon, y produce biomasa y productos conteniendo carbon y nitrogeno. La biomasa es una copia exacta del organismo, es decir con la misma composicion elemental. Ademas, durante el crecimiento se intercambian con el medio ambiente bioxido de carbono (C02), agua (H20) y oxigeno. En la figura 10.1 se muestra un fermentador continuo en don de crece un microorganismo. Los f1ujos y la composicion de 105 mismos se hallan indicados.

186

Termodinamica bio/6gica
<Po
2

H2O <I> H2O

<l>s

Producto CHa30b3Nc3

<l>p

<l>N

Biomasa CHal0blNcl CO2

<l>x

<l>H 0 2 <I>C0 2

En un caso general, la figura todos los flujos que contienen de nitrogeno.

10.1 representa
carbon

un sistema en estado estacionario, en donde estim dados en base mol-carbon, a excepcion del flujo por siete magnitudes:

EI vector de flujo <1> se halla definido

<1>x <1>s <1>p <1> = <1>N <1>0 <1>C02 <1>H20 y la composicion elemental esta dada por la matriz E:

1 1 1
E= d4

al a2 a3 a4

b1 b2 b3 b4

Cl C2 C3 C4

0 1 0

0 0 2

2 2 1

0 0 0

La ecuacion

10.1 considera

cuatro

ecuaciones

lineales entre los siete flujos. Solamente ser definidos por medio (<1>p) resultan haciendose

tres flujos pueden variar independientemente de un balance elemental. En un caso general, conocidos. los flujos EI sistema de ecuaciones,

los restantes deben (<1>x),sustrato

de biomasa

(<1>s) y producto ser resuelto,

hasta este punto,

no puede

necesario tal motivo

plantear

una serie de ecuaciones pueden analizarse como

para este efecto.

Los sistemas de crecimiento de oxidorreduccion.

de Por

microorganismos

una serie de reacciones del sistema.

es posible

hacer un balance electronico

EI concepto

de grados de reduccion

(a) fue introducido

por Minkevich

Eroshin en 1973,

mejorado por Erickson y colaboradores durante 1978. Este concepto puede definirse como el numero de electrones disponibles para ser transferidos al oxigeno en la combustion del compuesto. Este concepto de grado de reduccion resulta estrictamente una convencion. Debemos recordar que el crecimiento aerobio implica una combustion del sustrato, siendo el oxigeno el aceptor final de electrones. aerobio, Los electrones disponibles considerado para ser transferidos aqui son: al oxigeno durante un cultivo de cada elemento

Estos valores se deducen de la valencia de los elementos. En el caso del nitrogeno, se supone que el grado de reduccion es -3 porque esta es la valencia predominante en la biomasa y es la misma que se encuentra en el amonio. Para un compuesto de composicion elemental CHaObNc, su grado de reduccion sera:

Etanol Bi6xido de carbono Glucosa

Saccharomyces cerevisiae

4 + 3 + 1/2(-2)
4 + 2 + (-2)

= 4 + (2)(-2)
=

(biomasa)

Carbon Hidrogeno Oxigeno Nitrogeno Balance de los flujos con respecto a2<1>s + a4<1>N = a 1 <1>x + a3 <1>p b2<1>s + b4<1>N + 2<1>02 = bl <1>x + b3<1>P + 2<1>C02 C2<1>S + C4<1>N a la biomasa: .<1>x = Biomasa

Cl<1>X + C3<1>P

Rendimiento

biomasa / sustrato

= Yx/s = --;;;;

<Px

Rendimiento

biomasa / producto

= Yx/P =

<Px ;

A.

't'P -

-~

Yx/P

<Do = Oxigeno

Balance por grado de reducci6n (oi)

00 <Do = Ox <Dx - Os <Ds + Op <Dp - ON <DN + OC02 <DC02 - OH20 <DH20

La ecuaci6n 10.15 es un balance general del grado de reducci6n. Este grado aparece como una cantidad conservada y no hay consumo ni producci6n de grados de reducci6n. Es importante hacer notar que el grado de reducci6n resulta aqui puramente una convenci6n de calculo y tiene poco que ver con las valencias. Es una opci6n de combinaciones lineales de balances elementales.

-4<D

0=<JX<DX-<JS[:X Os [ Ox

xIS

]+Op[:X] xlP
'(xiP

-4<D0 =<Dx

---+--Op]
YxlS

<Do = <Dx - 4

[OX -~+~
YxlS YXIP

Siguiendo las rutinas estandares de algebra usadas hasta ahora, tenemos para el C02 y el agua las siguientes ecuaciones:

Ejemplo 10.1 EI crecimiento de Saccharomyces cerevisiae, en un cultivo continuo con glucosa como {mica fuente de carbon y energia, consume 4.26 mol-C de glucosa por cada mol de biomasa producida. Ademas, se originan 1.92 mol-C de etano!. Calcular el consumo de oxigeno, si la fuente de nitrogeno es amonio. La composicion elemental de la biomasa seca de la levadura es CH 1.800.56No.17. Usando la ecuacion 10.22,

determinando el grado de reduccion de cada flujo,

(jx

= 4 + (1 )(1.8) + (-2)(0.56) + (-3)(0.17) = 4.17

(js

(biomasa)

= 4 + (1 )(2) + (-2)(1) = 4 (glucosa, CH20)

(jp

= 4 + (1 )(3) + (-2)(0.5) = 6 (etanol, CH300.S)

1 Yxis =-=0.235 4.26

1 Yx/P =--=0.521 1.92

= ---4-

1 [

4 6] moles O2 4.17 - -0-.2-3-5 + -0-.5-2-1 = 0.34-m-o-I---C-bi-o-m-a-sa-

Experimentalmente, se obtuvo un valor de <Po= 0.35 moles 02/mol-C. EI concepto de grado de reducci6n puede utilizarse facilmente en otros elementos, aparte del C, H, 0 Y N. Por ejemplo, si se considera al azufre (S) y al f6sforo (P), se puede considerar como fuente de azufre al H2S04 y de f6sforo al H3P04. Siendo estos dos compuestos los productos oxidados, su grado de reducci6n debera ser igual a cero y sabiendo que el hidr6geno es +1 y el oxigeno -2, tenemos entonces que Os= +6 Y Op= +5. De 10 anterior, tendremos que el grado de reducci6n para un compuesto CHaObNcSdPe estara dado por:

Cuando se conocen 105 flujos de bi6xido de carbono y oxigeno, en lugar de 105 flujos de producto y biomasa, el sistema puede resolverse aplicando el mismo procedimiento. Paraeste efecto podemos utilizar los siguientes cocientes: 2 ----0= -",-2

CO

Coeficiente respiratorio= QR=

c02
'1'02

02
Consumo de oxigeno= Ro= -S-

o, =--;p;-

EI coeficiente respiratorio es un valor que relaciona el flujo de C02 que sale del fermentador y el flujo de oxigeno que entra al sistema. EIconsumo de oxigeno relaciona el flujo de oxigeno con el consumo de sustrato. Todos estos valores estan dados en mol-C. Los flujos de biomasa <Px y de producto <pppueden determinarse facilmente de la siguiente manera:

La composici6n elemental de la biomasa parece ser independiente del organismo, las condiciones de cultivo y la tasa de diluci6n, como se puede apreciar en la tabla 10.1, en donde se presentan composiciones elementales de diferentes organismos cultivados bajo diferentes condiciones. Esta biomasa presenta un grado de reducci6n promedio, si se usa

NH3 como cuando

fuente

de nitr6geno, de nitr6geno

de 4.2, de 5.8 cuando atmosferico.

acido

nitrico

es usado

0 de

4.8

la fuente

es nitr6geno

Tabla 10.1 Composici6n

elemental

de biomasas de cultivo

producidas

bajo diferentes

condiciones

Velocidad de crecimiento (h-1)

Candida utilis Candida utilis Candida utilis Candida utilis Klebsiella aerogenes Klebsiella aerogenes Klebsiella aerogenes Klebsiella aerogenes Saccharomyces Saccharomyces cerevisiae cerevisiae CH1.8300.54No.10 CH 1.8700.56No.zo CH1.8300.46No.19 CH 1.8700.56No.zo CH 1.7500.43No.22 CH 1.7300.43No.Z4 CH1.7500.47No.17 CH1.7300.43No.24 CH1.6400.5zNo.16 CH 1.8300.56No.17 CH1.8100.51 NO.17 CH 1.81 00.51 No.zo CH 1.51 00.46No.19 CH 1.7700.49No.24 CHz.0000.5ZNo.Z3 CH 1.8300.55N 0.Z5

Saccharomyces cerevisiae Paracoccus denitrificans Para coccus denitrificans Escherichia coli Pseudomonas Cl2B Aerobacter aerogenes

Cultivo aerobio
Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces Sacchar9myces Saccharomyces Saccharomyces Saccharomyces cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae cerevisiae importante

0.073 0.102 0.144 0.200 0.220 0.259 0.010 0.015 0.031 0.061 0.088 0.108

CHZ.0000.60No.17 CH 1.8900.5ZNo.17 CH1.9500.5ZNo.17 CH1.5900.49No.17 CH1.6500.56No.18 CH 1.8900.59NO.ZO CH1.8500.74No.14 CH 1.7900.60No.15 CH1.9800.63No.16 CH1.8300.56No.19 CH 1.8900.51NO.16 CH 1.8000.55No.18

Cultivo anaerobio

Otra consideraci6n esta constituida tambien cantidades

que debe hacerse, es el hecho que si bien la biomasa seca la biomasa contiene de cenizas puede variar de 5.25% a de 8%. Las cenizas deben ser

principalmente significativas

de C, H, 0 Y N como materia combustible, de cenizas. EI contenido elemental de alrededor

13.75% de la biomasa seca con un valor promedio

consideradas para convertir la composici6n

en f1ujo de biomasa seca.

Crecimiento sin formacion de producto y con una fuente simple de nitrogeno

En esta parte, analizaremos un caso restringido, en donde no hay formaci6n de producto (<I>p = 0) y el sustrato no contiene nitr6geno. Ademas, en este caso la fuente de nitr6geno puede ser NH3, HN03 0 N2. En esta situaci6n s610se consideran seis flujos y s610 se requiere conocer a dos de ellos para definir al sistema. Tambien, el balance elemental es posible para los cuatro elementos. Realizando un balance general de grade de reducci6n se puede calcular el flujo de oxigeno <1>0 = <1>5, quedando definido por la ecuaci6n siguiente:
1 o=-x ( ---

Ys/x

as ] - ax

La ecuaci6n 10.32 puede simplificarse, si usamos el termino lIamado eficiencia del

oxigeno, llO:

De las ecuaciones 10.32 Y 10.33 resulta claro que si la eficiencia del oxigeno es igual a uno (llo = 1) el flujo desde y hacia el sistema sera igual a cero (<1>0 = 0). Sin embargo, si el valor de la eficiencia del oxigeno es menor a uno (llO < 1), habra un suministro 0 consumo de oxigeno en el sistema. La combinaci6n de las ecuaciones 10.31 Y 10.32 nos permite determinar el rendimiento del de la biomasa con respecto al oxigeno:

Yx

=
/0

Biomasa Oxigeno

= (~]

ax

(~)
1-1]0

En donde Yx/o es la cantidad de biomasa producida (moles-C) por mol de oxigeno consumido. Si consideramos, como ya se vio, que permanece casi con stante el grade de reducci6n de la biomasa (ox), entonces debe de existir una relaci6n del rendimiento de la biomasa (ox/o) y la eficiencia del oxigeno (llO), la cual seria independiente del sustrato, del organismo y del sistema de cultivo.
Ejemplo 10.2 Una levadura esta creciendo con metanol como fuente de carb6n yenergia.

Durante el crecimiento se producen 0.4 g de biomasa seca por cada gramo de metanol consumido. La composici6n de la biomasa es CH1.800.5No.2y contiene 5% de cenizas. Calcular el consumo de oxigeno. EI rendimiento biomasa/sustrato se puede calcular convirtiendo a cantidades molares:

(0.4)(0.95)(32) Yx/s =
(

24.6

)()

- 0.494

ax= 4 + (1.8) (1) + (-2) (0.5) + (-3) (0.2) =.L2

as=
4 + (4) (1) + (-2) (1) = 6

110=Yx/sl ;;

)=(0.494{

4~2)=0.346

Yx/

o = (~)l~) (J x

1-110

= ~( 4.2

0.346 ) = 0.504 moles - C biomasa 1- 0.346 moles 02

De otra manera, el consumo de oxigeno es de 1.98 moles/mol-C de biomasa a de 76.9 x 10-3 moles/g de biomasa seca.
Ejemplo 10.3 Enun cultivo continuo de levadura, se utiliza glucosa como fuente de carbon y energia. La fuente de nitrogeno es NH3. EIconsumo de glucosa es de 2.24 moles-C par mol-C de biomasa formada y el consumo de oxigeno en base mol-C de biomasa es de 0.69 moles. Determinar si hay formacion de producto. Se tiene un consumo de oxigeno medido de: 1 1

Yx/o =--=--=145
Yo/x 0.69

Yx/s = --

1 = -= 0.446 Ys/x 224

ax = 4 + (1.79) (1) + (0.56) (-2) + (0.17) (-3) = 4.16

as
110

= 4

+ (2)

(1)

+ (1)

(-2) = 4

=Yx/s( :;

)=(0.446)(

4~6 )=0.464

Y (_4_) (
/ XO
(J

110 1-110

) = _4_( 4.16

0.464 ) = 0.832 moles - C biomasa 1- 0.464 moles 02

Como el valor medido es mayor que el calculado, se supone que posiblemente hay formacion de algun producto. La medicion del carbono orgimico total (COT) del f1uido a la salida del fermentador del ejemplo anterior mostro que, adem as de la biomasa y el C02, se tenia el equivalente a 0.34 moles de carbon por mol-C de biomasa producida. La diferencia en el consumo de oxigeno entre 10 determinado y 10 calculado es de 0.512 moles de 02 por mol-C de biomasa seca. Si sabemos que cada mol de oxigeno tiene cuatro electrones disponibles, sabemos que esta

diferencia implica una disponibilidad de, 0.512 x 4 = 2.05 electrones. De donde, 105 electrones disponibles 0 el grade de reducci6n del producto puede ser estimado de la manera siguiente:
(Jp

2.05 =--=6.03 0.34

Sabemos que el etanol tiene un grade de reducci6n de seis, as! que probablemente este sea el producto de la fermentaci6n.

Crecimiento anaerobio sin aceptor de electrones externo

Una gran variedad de procesos formadores de productos no requieren del aporte de un aceptor externo de electrones. En estes casas el sustrato tiene funciones tanto como donador como aceptor de electrones. Para este caso tam bien se aplican sin ninguna restricci6n 105 balances elemental y de grade de reducci6n. EI sistema se muestra en la figura 10.2. La ecuaci6n general de balance de grade de reducci6n queda como sigue:

H2O

<I> H2O

Producto CHa30b3Nc3

<I>p

cr3=crp crJ=crX

Biomasa CHa,Ob,Nc,

<I>X

Figura 10.2 Sistema de flujos para el ana/isis macrosc6pico del crecimiento microbiano anaerobio sin aceptor de electrones.

EIvalor de llO se calcula de la ecuacion 10.33 Y esta relacion es muy util para el analisis de estos procesos. Otro factor importante en el crecimiento anaerobio es la produccion de C02. Este flujo puede deducirse a partir de un balance de carbon y de la ecuacion 10.34, quedando:

Crecimiento anaerobio con aceptor de electrones externo

Un gran numero de compuestos pueden sustituir al oxigeno como aceptor de electrones en los procesos de crecimiento microbiano. Algunos ejemplos son la reduccion del bioxido de carbono a metano, usando hidrogeno gaseoso; la reduccion del sulfato a sulfuro, y la reduccion del nitrato a nitrito 0 a nitrogeno molecular. Estos casos tambien pueden ser tratados facilmente en terminos de eficiencia del oxigeno,o mejor dicho en eficiencia electronica del crecimiento. Dicha eficiencia se indicara como llO, como en el caso de la eficiencia del oxigeno. EI consumo de un aceptor de electrones durante el crecimiento, sin formacion de producto puede ser obtenido de la siguiente ecuacion:

x/ =(:x
e

)(,~~oJ

donde K es una constante que depende del numero de moles de electrones que son transferidos por mol de aceptor de electrones y YX/e es el rendimiento de biomasa en terminos de aceptor de electrones (mol-C/mol). Para el oxigeno, el valor de K es de cuatro, pero existe una gran variedad de aceptores de electrones (tabla 10.2).

02 + e- -+ 2 02C02 + 4 H2 -+ CH4 + H20

504
N03 N03 N02 2 CH2

-+ $2-+ -+

NH3 N02 1 2N2 1

4 8 8 8

moles/mol moles/mol moles/mol moles/mol 2 moles/mol

02 C02 sulfato nitrato nitrato

-+

-+

"3 CH30,j, + "3 C02

Ejemplo 10.3 Un organismo con composicion elemental de CH l.S00SNO.2 crece anaerobicamente usando glucosa como fuente de carbon y amonio como fuente de nitrogeno. EI nitrato es el aceptor de electrones y se producen 0.6 moles-C de biomasa por cada mol-C de sustrato. EI nitrato es reducido a nitrogeno gaseoso. lCuanto nitrato es reducido por mol de biomasa producida? La eficiencia de oxigeno se determina con la ecuacion 10.33: 1]0 = Yx/s( :; )=(0.6)( 4~2)=0.63

La reduccion del nitrato en nitrogeno tiene una K de 5, usando la ecuacion 10.39:

YX/e =

(:J(

1:~0)

= ( 4~2) ( 1~~.~3) = 2.03

Entonces por cada mol de biomasa producida se reducen 0.49 moles de nitrato.

Los principios de la termodinamica revisados en 105 primeros capitulos del presente libro, pueden aplicarse al crecimiento microbiano. Los cambios de ental pia 0 calor, asi como 105 cambios de energia libre durante el crecimiento de los microbios pueden ser determinados realizando una serie de calculos numericos. Suponiendo la idealidad, podemos decir que la entalpia 0 la energia libre de Gibbs del sistema sera igual a la suma de las entalpias 0 energias libres parciales molares de 105 componentes, Estos valores parciales molares dependeran unicamente de las condiciones de temperatura, presion y concentracion del componente en cuestion. Asi por ejemplo, la energia libre de Gibbs parcial molar (potencial quimico) sera funcion de la concentracion del componente en cuestion.
-=fli

c
n

=fli

+RTln .() Ci

donde f.!i es el potencial quimico 0 energia libre molar del compuesto i y donde f.!? es la energia libre molar del compuesto a una concentracion de 1 M. Para efectuar esta estimacion es necesario hacer dos consideraciones: La ental pia y la energia libre deben ser tratadas como energias estandares, 0 sea a concentraciones de 1 M, a presion atmosferica y a 298 oK de temperatura. La segunda consideracion concierne al hecho de que en crecimientos aerobios la combustion del sustrato produce C02 y H20, de donde el bioxido de carbona, el agua y el mitrogeno elemental no pueden suministrar energia para 105 sistemas vivos. Entonces, podemos decir que el contenido energetico disponible sera equivalente a la entalpia de combustion (llHcl y energia libre de combustion (llGod del sustrato. Lasentalpias y las energias libres de combustion pueden ser referidas a mol-C y relacionadas al grado de reduccion. Un analisis estadistico (tabla 10.3) nos muestra de la existencia de las siguientes relaciones: llHg= 775 a [KJ/mol-C] llCg= 94.4 a+ 86.6 [KJ/mol-C] En ambos casos, el error estandar es de alrededor de 18 KJ/mol-C. [10.41] [10.42]

Termodinamica

y crecimiento

microbiano

197

Tabla 10.3 Calor de combustion

y energia Iibre de combustion (1 M, 298 oK, 1 atm y pH 7)

Grado de reduccion 2 4 1 4.67 4 3 3 3.5 5 3 5.75 8 7 6 5 6 6 6 6 5 4.67 4.33 4 5.33 4 5 5 5.67 4.5 4.2 3.75 4.8 4.5 5.5 5.5 4.78 4.33 4.75 4.73 4.56 5.4 4.6 2

en condiciones

estandar

KJ/mol ~Hg 281 894 327 1533 1377 1448 1444 1599 2173 2147 9800 818 1467 1331 1235 693 1319 1946 2592 1170 1643 3084 2872 1734 501 1123 1642 3786 1999 2315 1686 2628 1011 3565 3564 4647 1502 2130 5649 4483 2920 2612 238 ~Gg 255 876 246 1529 1369 1337 1329 1493 2194 1963 9989 892 1562 1413 1310 798 1369 1989 2680 1160 1663 3049 2807 1793 572 1168 1707 3744 1936 2250 1608 2570 974 3588 3588 4653 1455 2104 5632 4437 2920 2500 286 ~Hg;O' 140.5 111.8 163.5 109.4 114.8 120.7 120.3 114.2 108.7 119.3 106.5 102.3 104.8 110.9 123.5 115.5 109.9 108.1 108.0 117.0 117.4 118.6 119.7 108.4 125.3 112.3 109.5 111.3 111.1 110.2 112.4 109.5 112.3 108.0 108.0 108.0 115.6 112.1 108.6 109.2 108.2 113.6 119.0 ~Gg;O' 127.5 109.5 123.0 109.2 114.1 111.3 110.8 106.7 109.7 109.1 108.6 111.5 111.6 117.8 130.1 121.3 114.1 110.5 111.7 118.1 118.7 117.3 117.0 112.1 142.9 116.8 113.8 110.0 107.6 107.1 107.2 107.1 108.2 108.7 108.7 108.2 112.0 110.7 108.3 108.1 108.2 108.7 143.0

Compuesto

Formula

Acido f6rmico Acido acetico Acido oxalico Acido propi6nico Acido lactico Acido fumarico Acido malico Acido succinico Acido butfrico Acido citrico Acido palmftico Metano Etano Eteno Etino Metanol Etanol iso-Propanol Butanol Etilenglicol Glicerol Glucitol Glucosa Acetona Formaldehfdo Acetaldehfdo Alanina Arginina Asparagina Acido glutamico Acido aspartico Glutamina Glicina Leucina Isoleucina Fenilalanina Serina Treonina Tript6fano Tirosina Valina Guanina Hidr6geno

CH202 C2H402 C2H204 C3H602 C3H603 C4H404 C4H60S C4H604 C4HS02 C6Hs07 C16H3203 CH4 C2H6 C2H4 C2H2 CH40 C2H60 C3HsO C4H100 C2H602 C3HS03 C6H1406 C6H1206 C3H60 CH20 C2H40 C3H7N02 C6H14N402 C4HSN203 CsHgN04 C4H7N04 CSHlON203 C2HsN02 C6H13N02 C6H13N02 C9HllN02 C3H7N03 C4HgN03 CllH12N202 C9HllN03 CSHllN02 CsHsNsO H2

Tabla 10.3 (Continuacion.) Calor de combustion

en condiciones (1 M, 298

energia libre de combustion

estandar

oK,

1 atm

pH 7). KJ/mol

Compuesto

Formula

Grado de reduccion

~Hg 394 257 329 7.3 602.4 323 -249.4 -507.4 541.2

~Gg 394 283 383 -30 622 247 -329 -602 560

~Hg

/a

~Gg

/a

Grafito Mon6xido de carbono Amonio Acido nitrico Hidrazina Acido sulfhidrico Acido sulfuroso Acido sulfurico Biomasa La ecuacion

C CO NH3 HN03 N2H4 H2S H2S03 H2SO4

4 2 3 -5 4 2 -4 -6 CH1.800.SNO.2 4.8

98.5 128.5 109.7 -1.5 150.6 161.5 62.4 84.6 112.8

98.5 141.5 127.7 6.0 155.5 123.5 82.3 100.3 116.7 directamente 10.42

10.41 establece que el calor de combustion del compuesto

esta correlacionado

con el grado de reduccion

en base mol-C. Mientras

que la ecuacion

establece que existe una proporcionalidad entre el grado de reduccion y la energia libre de combustion. Esta ultima relacion no es lineal y tiene una desviacion que varia desde 164 para un grado de reduccion de 1, hasta 102 para un compuesto con grado de reduccion de 8. Esta desviacion sistematica entre la entalpia

la energia libre de combustion

esta descrita por la entropia.

La figura 10.3 muestra los valores de entropia de combustion calculados por medio de la ecuacion 10.43 Y correlacionados al grado de reduccion de todos los compuestos de la

III

a I
-:>

<aE 1- .

2.5

5.0 cr

Grado de reduccion,

Figura 10.3 Contribucion de la en tropia, TDoS (KJ/molC), a la entalpia de combustion, en condiciones funcion del grado de reduccion, cr, de los compuestos de la tabla 10.2.

estandar, en

tabla 10.3. Hay una clara tendencia y la contribuci6n entr6pica se aumenta cuando incrementa el grado de reducci6n. Existen compuestos en los cuales sus calores de combusti6n no siguen la ecuaci6n 10.41, Por ejemplo, el oxigeno y el acido dtrico que presentan grados de reduccion de -4 y -5, respectivamente, siendo calores de combustion cercanos a cero. Por esta razon, estos compuestos son aceptores de electrones efectivos.

Debido al incremento de la entropia en los sistemas, la energia libre que ingresa a un sistema nunca es menor de la energia libre que deja al sistema. De esta situacion, podemos definir a la eficiencia termodinamica del proceso, en relacion al balance de la energia libre entrante y saliente. Sin embargo, existe el problema de que la energia libre no puede ser definida por si sola y requiere para esto ser definida por medio de un valor de referencia. Si nosotros escogemos arbitrariamente un valor basal, entonces pod em os calcular facilmente la eficiencia termodinamica de la manera ilustrada en la figura 10.4. La relacion entre la energia libre saliente del sistema y la energia libre entrante es la eficiencia termodinamica, ~C2

77th = ~C
1

Energfa Iibre entrando al sistema

Energfa Iibre saliendo del sistema

Ahora aplicaremos la teoria termodinamica al crecimiento aerobio sin formacion de producto. Tratandosede una combustion y con fundamento a 10 discutido anteriormente, pod emos proponer que los cambios de energia libre de combustion para el H20, C02 Y N2 son igual a cero:
~GH20 = ~GC02 = ~GN2=

[10.45]

De esta manera, nuestro balance de energias libres de combustion quedara:

donde 0 es la disipacion

de energia dentro del biorreactor

y donde las participaciones esta ecuacion

del agua,

bioxido de carbono y nitrogeno elemental no aparecen. Sustituyendo 10.44 obtendremos la eficiencia termodinamica:
T)c

en la ecuacion

cDx 6Cx cDs 6Cs + cDN 6CN

de masas, tenemos,

Combinando

con nuestro balance elemental 1]c =

6CX 6Cs Yx/s

+ (~)
c4

6CN
podremos

[10.48) definir

la eficiencia

Si referimos nuestro analisis termodinamico entalpica,

a la ental pia de combustion

1]H

6Hx ( 6Hs + ~)6HN Yx/s c4

de la biomasa y de la fuente de nitrogeno, el balance de

en donde

C1

C4

son 105 contenidos

de nitrogeno

respectivamente. En un sistema de cultivo sin aporte de p.nergia mecanica, entalpia (figura 10.5) estara dado por la siguiente igualdad:

0 sea sin agitacion,

cDs6Hs + cDN6HN= cDx6Hx + cDo donde cDo es el f1ujo de calor del sistema 0 calor disipado durante el cultivo.

cDO= cDs6Hs + cDN6HN - cDx6Hx

<1> CO

Figura 10.5 Diagrama de f1ujo de enta/pia en un sistema de crecimiento microbiano sin agitacion.

La ecuaci6n 10.52 nos permite estimar la producci6n de calor durante el crecimiento, si se conocen el calor de combusti6n de la biomasa y la eficiencia entalpica del cultivo. Regresemos a la ecuaci6n 10.41, la cual nos relaciona a la entalpia de combusti6n y el grado de reducci6n: !'..Hx !'..Hs
= =

115 ax 115 as

[10.53] [10.54] [10.55]

!'..HN = 115 d4aN

La sustituci6n de las ecuaciones anteriores en la ecuaci6n de eficiencia entalpica, nos queda: 1150"x
1JH

1150"s Yx/s

+115(

C~~4

)O"N

<1>Q= 4<1>0

1150"
o"x

460 <1>0

La ecuaci6n 10.58 nos indica el valor constante del calor producido durante el crecimiento con respecto al consumo de oxigeno. Esta proporcionalidad tiene un valor de 460 Kl/mol 02. Dicha relaci6n puede ser facilmente generalizada para todos 105 cultivos aerobios. La relaci6n del flujo de calor y del flujo de oxigeno (ecuaci6n 10.58) se deriv6 para un proceso aerobio, sin formaci6n de producto y usando una fuente de carb6n que no contiene nitr6geno. Ahora, haremos el analisis para un proceso de crecimiento microbiano aerobio, con la formaci6n de producto. Comenzando con un balance del grado de reducci6n, tenemos:

Si la fuente de nitr6geno es Cd4Ha40b4Nc4,la ecuaci6n anterior puede escribirse de la siguiente manera:

<1>sC2= <1>,\JC4 + <1>xc 1 + <1>pC] combinando las dos ecuaciones anteriores: <1>s(Ys= <1>Nd4(YN= <1>X(YX + <1>p(Yp + 4<1>0 multiplicando por 115 y aplicando la ecuacion 10.39 en su forma:
(Y.
I

=--

tlHj 115

<1>stlHs + <1>NtlHN = <1>xtlHx + <1>ptlHp + 4<1>0 combinando con la ecuacion 10.50 del balance de calor, obtendremos:

Con esto queda demostrado que la relacion es general y su validez depende de que sea valida la igualdad tlH; = 115 OJ.Una clara excepcion es cuando se usa acido nitrico (HN03) como fuente de nitrogeno, debido a que este compuesto no obedece ala ecuacion anterior, tlHj = 6oj.
Ejemplo 10.4 Un organismo crece en acido acetico como (mica fuente de carbon yenergia.

La fuente de nitrogeno es el amonio y no hay formacion de productos durante el crecimiento. La composicion elemental de la biomasa es CH1.800.sNo.2.Calcular la produccion de calor si el rendimiento biomasa/sustrato es de 0.4. Existen dos maneras de solucionar este problema. a) Calculando Tjo por medio de la ecuacion 10.33:

ryo

= Yx/s(

::

Sabemos que Ox= 4.2 yOs = 4 , de donde 1]0 = 0.4(4.2 ) = 0.42 Ahora podemos calcular el consumo de oxigeno usando la ecuacion 10.34: Yx/o =(~)(~)=~( (Yx 1-1]0 sabiendo que,
I/Jo

42

0.42 )=0.69 1-0.42

mol-C biomasa/mol

02

= _1_

= 1.45moles 02 / mol- C biomasa

Yx/o

<1>Q = 460 <1>0 = (460) (1.45) = 667 KJ/ mol-C de biomasa b) Lasegundavia de solucion es usandael balancede entalpiasde combustion (ecuacion 10.50) <1>s ~Hs + <1>N ~HN = <1>x ~Hx + <1>Q en donde el flujo de nitrogeno puede estimarse a partir del balance de este elemento:

EIflujo de sustrato esta dado par:

f/J

s = ~=_1_=
Yx/s

0.4

2.5 mol-C /mol-C

biomasa seca

Del balance de entalpias de combustion: <1>0 = <1>s ~Hs + <1>N ~HN - <1>x + ~Hx <1>0 = <1>s ( 1150s) + <1>N ( 1150N) - <1>x ( 11 50x) <1>0= 115 [(2.5) (4) + (0.2) (0) - (1) (4.2)] = 667 KJ/ mol-C biomasa seca 5i se sustituyen a la ecuacion de balance de entalpias los valores de entalpias de combustion presentados en la tabla 10.3 se obtiene un resultado de 612 KJ por mol-C de biomasa seca producida. Esta diferencia menor de 10% del valor se debe a que el calor de combustion del acido acetico esta sabreestimado en la ecuacion 10.64. Ejemplo 10.5 La produccion de levadura (Saccharomyces cerevisiae) en un fermentador continuo consume glucosa a razon de 0.096 mol-C por gramo de biomasa seca producida. La composicion elemental de la biomasa es CH 1.7900.56No.17 y esta contiene 8% de cenizas. Hay formacion de etanol a razon de 0.0141 mol-C por gramo de biomasa. La fuente de nitrogeno usada es el amonio, NH3. Calcular la produccion de calor.

PMbioma,a

= 12 + 1.79 + (0.56) (16) + (0.17) (14) = 25.13 f/Js= (0.096)(25.13) 0.92

- 2.622f/Jx

(0.0141)(25.13) f/Jp=-----=0.385f/Jx 0.92 f/JN= (C )f/Jx=0.17f/Jx

4

(C1)

t/Jo

= ( ~~

)[4.16

+ (0.385)(6) - (2.622)(4)] = 1.0045t/Jx

<PQ= 460 <Po(460) (1.0045 <Px)=462 <Px

Crecimiento con aceptores de electrones diferentes del oxigeno

En secciones anteriores mencionamos que el oxfgeno no es el unico aceptor de electrones que puede sostener el crecimiento microbiano. Los nitratos 0 105 sulfatos tambien pueden hacerlo. La propiedad caracterfstica es que durante la transferencia de un electron del sustrato al aceptor de electrones se produzca una ganancia de energfa libre de Gibbs. Esta ganancia de energfa libre puede, entonces, utilizarse para el crecimiento del microorganismo. La energfa puede ser disipada para cumplir con la irreversabilidad 0 para transferir atomos de carbon de un nivel de baja energfa a uno maS alto. La tabla 10.4 muestra 105 valores de energfa libre de Gibbs que son disponibles cuando se transfiere un mol de electrones de la glucosa al aceptor de electrones durante el proceso de reducci6n. Todos estos valores son para condiciones estandar y a pH de 7. Como se puede observar, 105 aceptores basados en azufre ofrecen bajas ganancias de energfa, seguidos por 105 compuestos de nitrogeno y siendo el oxfgeno el que presenta la ganancia mas elevada de energia libre por mol de electrones transferidos. Ejemplo 10.6 La produccion de biomasa de un organismo creciendo con oxigeno como aceptor de electrones es de 0.55 mol-C de biomasa por mol-C de sustrato. EIsustrato es glucosa y la fuente de nitrogeno el amonio. Calcular la produccion de biomasa, si el aceptor de electrones es nitrato, el cual se reduce a N2 y si el amonio sigue siendo la fuente de nitrogeno. En ambos casas no hay formacion de productos. EI numero de electrones transferidos al oxigeno durante el crecimiento esta dado por:

e-

[_4_ 0.55

4.19]C\>x

= 3.08C\>x

EI cambio de energia libre de Gibbs en la transferencia de una mol de electrones al oxigeno es de 118.5 Kj, de donde: L1Go=(118.5) (3.08) <1\= 365 KJ/ mol-C biomasa Cuando el nitrato es el aceptor de electrones, la energia libre es de 111.9 KJ por mol de electrones transferidos del sustrato al nitrato L1Go=(111.9) (3.08) <Dx=344.6 KJ/ mol-C biomasa Para producir una biomasa con la misma composici6n elemental a partir del mismo sustrato se requiere la transferencia de la misma cantidad de energia libre de Gibbs. Por 10 que la producci6n de biomasa en el cultivo con nitrato estara dado por la siguiente ecuaci6n:

Yx/s =

(t.C

O ] N~J

(0.55)

L1CN,

= --'-

(3446)
365

(0.55) = 0.52 mol- C biomasa / mol- C sustrato

Como se puede observar, el rendimiento es muy diferente al obtenido con oxigeno como aceptor de electrones.

Tabla 10.4 Ganancia de energia libre de Gibbs durante la transferencia de una mol de electrones de la glucosa a diferentes aceptores de electrones Aceptor de electrones 5 503~ 503~ 504= 504= 504~ N2 N02N03N03N0302 Moles de etransferida 2 4 6 2 6 8 6 6 2 8 5 4 ~G (reacci6n) (KJ) 27.7 144.6 171.9 -21.2 123.4 150.7 79.1 435.5 162.9 598.4 559.5 473.9 L1G(mol e-) (K) / mol e-) 13.9 36.2 28.7 -10.6 20.6 18.9 13.2 72.6 81.5 74.8 111.9 118.5

Producto H25 5 H25 503= 5 H25 NH4+ NH4+ N02NH4+ N2 H2O