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REQUISITOS TECNICOS (Apdo. 5) Generalidades Personal Instalaciones y condiciones ambientales Mtodos de ensayo y de calibracin y validacin de los mtodos Equipos Trazabilidad de las medidas Muestreo Manipulacin de los tems de ensayo Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo Informe de resultados
La acreditacin en laboratorios agroalimentarios
COMPETENCIA TECNICA
Personal
Equipamiento
Mtodos
Integraciones anmalas (analitos con varios picos, baja relacin S/R,) Identificaciones espectrales no adecuadas Desarrollo de mtodos defectuosos (fragmentaciones iones en MS/MS, mtodo cromatogrfico) Preparacin de muestra y disoluciones no adecuadas (manipulacin...)
Personal
Internos
etc
HPLC CG
HPLC
Reglamento CE 401/2006. Mtodos muestreo micotoxinas en alimentos Directiva CE 63/2002. Mtodos muestreo pesticidas en alimentos Etc Reglamento CE 396/2005. Partes a analizar pesticidas en alimentos y piensos. Reglamento CE 1883/2006. Dioxinas y PCBs en alimentos Etc
MUESTRA REPRESENTATIVA
Micotoxinas (agua/acetonitrilo,) Pesticidas, PAHs en aguas (SPE, ELL) Inyeccin directa (pesticidas aguas)
0.025 g/L
0.2 seg/scan
o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o
B
o oo o ooooo oo oo o o o ooooooo
3 seg (8 puntos)
Velocidad de adquisicin
8 0.
2 0. an sc g/ se
) Ruido
SEAL (S)
S/R = 3
LD = 3 LOQ = 5
S S
RUIDO (R)
ut
Mtodos de ensayo y validacin
Tolerancias Ion Ratios Intensidad relativa >50% 20-50% 10-20% <10% EI/CG/MS CI/CG/MS, CG/MSn, LC/MS, LC/MSn 20% 25% 30% 50%
Cl
ClBr
ClBr2
ClBr3
Cl2
Cl2Br
Cl2Br2
Cl2Br3
Cl3
Cl3Br
Cl3Br2
Cl3Br3
Establecer criterios tR: 0.5% CG y 2.5% HPLC tR 2 t0 (frente cromatogrfico interferencias) Forma de picos adecuada: compuestos muy polares en HPLC (eluyen al inicio) y CG (forman colas por adsorcin sobre grupos silanoles, baja volatilidad) Area cromatogrfica (preferentemente) S/R seal cuantificacin 6/10 S/R iones cualificacin (MS) 3 Preferentemente, intensidad iones >10% del in ms intenso (cuantificacin)
ACN ACN
1.03 (0.92) 0.78 (0.74) 1.00 (1.12) 1.06 (0.98) 0.49 (0.56) 1.28 (1.46) 0.91 (0.93)
Aflatoxina B2 1
Aflatoxina B2 2
Aflatoxina G1 1
Aflatoxina G1 2
Aflatoxina G2 1
Aflatoxina G2 2
Ocratoxina A 1
Ocratoxina A 2
Zearalenona 1
Zearalenona 2
Morfina
Fit<500
Identificacin
Codeina
Fit<700
Codeina
m/z 165 Ion Ratio= 0.13 (0.10-0.20)
MORFINA
m/z 214
CODEINA
TEBANA
42.50
43.00
43.50
44.00
44.50
45.00
-Cihalotrina
Deoxinivalenol 25-1250 ppb Aflatoxina B1 0.1- 5 ppb Aflatoxina B2 0.1-5 ppb Aflatoxina G1 0.1-5 ppb Aflatoxina G2 0.1-5 ppb Ocratoxina A 0.1-5 ppb Zearalenona 2.5-125 ppb
Deteccin masa exacta de iones: desviacin mDa/ppm Alta selectividad en confirmacin Cromatogramas iones masa exacta muy limpios No es necesario realizacin MS/MS, otros iones confirmacin Simplicidad de preparacin mtodos Analizadores masas Alta Resolucin: MAGNETICOS TOF ORBITRAP TRAMPAS LINEALES
70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 299.0825 300.0856 301.0801 302.0828 m/z
ESI -
ESI+
Cromatogramas HPLC/ESI (fullscan) extracto naranja Fortificacin 0.01 ppm (250 pesticidas)
Demostrar robustez mtodo: evaluacin de la recuperacin media y reproducibilidad del mtodo Pequeos ajustes en mtodo en el tiempo no afectan al funcionamiento Demostrar su aplicabilidad a matrices de la misma categora Determinar los valores de aceptabilidad (por ejemplo, recuperacin) en anlisis de rutina Recopilar informacin para determinar la incertidumbre del mtodo
Objetivos
Informacin suficiente que pruebe, para el alcance fijado (ANALITOS, CONCENTRACIONES, MATRICES), que el mtodo es: ESPECIFICO, SENSIBLE, VERAZ y PRECISO = EXACTITUD
Mtodos de ensayo y validacin
Resultado
Requisito A Requisito B
Menor concentracin de analito en una muestra de ensayo que puede ser confiablemente distinguida del blanco). LD=3 Sblanco
Capacidad de un mtodo analtico de producir resultados que sean directamente o por medio de una transformacin matemtica definida, proporcionales a la concentracin de analito en la muestra
Menor concentracin de analito en una muestra de ensayo que puede ser determinada con un aceptable nivel de incertidumbre. LOQ=10 Sblanco
Capacidad del mtodo de mantenerse sin cambios ante pequeas variaciones en los parmetros del mtodo. Medida de su confiabilidad durante su uso rutinario
Parmetro asociado con el resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que podran se razonablemente atribuidos al mesurando.
120
110
Clorpirifos en aceite
Recuperacin (%)
100
90
80
70
60 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55
Cc
Cc
Capacidad de deteccin
Especificidad Exactitud
Blancos y muestras de control Recuperacin media en muestras adicionadas o materiales referencia Criterio depende concentracin Obtenida en cada nivel de concentracin Reproducibilidad intralaboratorio (QC)
a-ENDOSULFAN a-HCH ALDRIN AZOXISTROBIN b-ENDOSULFAN b-HCH BIFENTRIN BROMOPROPILATO BUPIRIMATO CAPTAN CIPERMETRINA CLORFENVINFOS CLORPROFAM
0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
si si si si si si si si si si si si si
si si si si si si si si si si si si si
Concentracin
mg/Kg 0.01 0.01 0.1 0.1 Lechuga 79 - 109 75 - 112 77 - 104
Recuperacin (%)
Tomate 77 - 106 73 - 113 72 - 99 Limn 74 - 110 72 - 106 72 - 96 Uva 71 106 73 107 73 - 98 1 - 11 1 - 14 0- 8
Repetibilidad (CV %)
Lechuga Tomate 1 - 11 0 - 13 0- 6 Limn 2 - 13 1 - 15 1 - 10 Uva 2 11 0- 8 1- 6
Reproducibilidad (CV %)
Lechuga 1 - 19 1 - 17 1 - 15 Tomate 4 - 16 1 - 21 2 - 19 Limn 2 - 16 1 - 19 2 - 20 Uva 3 18 2 18 2 - 17
Benzo(a)pireno en pescado
INTERNO
EXTERNO
Informes de resultados
Valor
Sin evaluar U
Evaluacin U
INFORME DE ENSAYO
Concentracin
Informes de resultados
1.0 mg/kg
Resultado no violativo
0.6 mg/kg
LMR=0.4 mg/kg
Informes de resultados
Informes de resultados
Informes de resultados