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AMINOACIDOS orregido

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Universidad Autónoma de Chihuahua.

Facultad de Ciencias Químicas.

TECNICAS DE SEPRACION.

“Separación de aminoácidos por Cromatografía en capa fina y detección mediante reacción con Ninhidrina”

TECNICAS DE SEPARACION.
DRA. MARIA DE LOURDES BALLINAS CASARRUBIAS.

Laboratorio de Química Analítica III

Carolina García Ponce 245468. Melissa Valenzuela Armenta 245374. Miche González Duran 245577.

Viernes 31 de Mayo de 2013

. Algunos de estos métodos son los de capa fina y columna. Puede abarcar escalas microanalíticas hasta escalas industriales y es una técnica poco o nada destructiva que puede aplicarse a sustancias lábiles. La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa. c) Limpieza de las placas. Es utilizada en la actualidad para lograr una purificación. La cromatografia en capa fina (CCF).) mientras que la otra (fase móvil. Existen variables que influyen en la eficacia de la separación en cromatografía de capa fina y cromatografía de columna: a) A menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria. se pueden clasificar los diferentes métodos cromatográficos. La cromatografía en capa fina se basa en una fase móvil la cual es un líquido y una fase estacionaria que es un sólido absorbente. F.) se mueve en una dirección definida. b) Las corrientes de aire que afectan la cromatografía. es una de los tipos de técnicas cromatográficas.Introducción La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases. d) La pureza y elección de los disolventes. la cual puede ser de vidrio. Las técnicas cromatográficas se basan en la afinidad que presentan los componentes de las muestras por alguna fase inmiscible con la que estarán en contacto. F. es que es capaz de separar componentes para obtenerlos mas puros y posteriormente ser utilizadas. éste solido se aplica sobre una placa de vidrio (una capa muy delgada de aproximadamente 0. dependiendo del proceso en el cual se vaya a llevar a cabo la separación. separación e identificación de distinto tipo de sustancias ya sean orgánicas o inorgánicas.25mm). Una de las mayores ventajas del uso la cromatografía.M. una de las cuales está en reposo (fase estacionaria. e) El Diámetro de la columna y cantidad de gel de sílice.E. aluminio u otro soporte.

toxicológicos. Los codones que codifican a la cisteína son UGU y UGC. la arginina puede ser sintetizada en el ciclo de la ornitina (o ciclo de la urea). cisteína. lisina y glicina. pero esta última se trata de un dímero de dos cisteínas a través de un puente disulfuro. Los aminoácidos son biomoléculas formadas por (C) Carbono. lo que significa que puede ser sintetizado por los humanos. La cisteína también es llamada cistina. (O) Oxígeno y (S) Azufre. y son precursores de otros compuestos nitrogenados. El tiol es susceptible a la oxidación para dar lugar a puentes disulfuros derivados de las cisteína que tienen un importante papel estructural en muchas proteínas. los componentes en una mezcla se separan en base a la fase móvil y la fase estacionaria. Se clasifica. La lisina es un aminoácido componente de las proteínas sintetizadas por los seres vivos. se usa como un método preparatorio. actuando como nucleófilo. en general. . La cisteína es un α-aminoácido con la fórmula química HO2CCH(NH2)CH2SH. Este aminoácido se encuentra involucrado en muchas de las actividades de las glándulas endocrinas. como un aminoácido esencial. éste se distribuirá entre ambas fases a favor de sus solubilidades relativas. En el tejido hepático. estructurales. si se encuentra un soluto y tiene contacto con dos fases inmiscibles que están en contacto una con otra. La arginina (arg o R) es uno de los 20 aminoácidos que se encuentran formando parte de las proteínas. Estos. son la única fuente aprovechable de nitrógeno para el ser humano. Dentro de los 20 aminácidos destacaremos cuatro de ellos: arginina. (H) Hidrogeno. La parte de la cadena donde se encuentra la cisteína es el tiol que es no polar y por esto la cisteína se clasifica normalmente como un aminoácido hidrofílico. En la cromatografía para la separación de aminoácidos.La cromatografía constituye una metodología imprescindible en estudios bioquímicos. además son elementos fundamentales para la síntesis de las proteínas. Es uno de los 10 aminoácidos esenciales para los seres humanos. Se trata de un aminoácido no esencial. Los aminoácidos son las unidades químicas o elementos constitutivos de las proteínas que a diferencia de los demás nutrientes contienen nitrógeno. Las moléculas se mueven a lo largo del cromatograma y dan como resultado un equilibrio entre fuerzas de transmisión o arrastre ejercido por la fase móvil al momento de desplazarse por la fase estacionaria. ya que además de utilizarse como técnica de separación e identificación. La parte tiol de la cadena suele participar en reacciones enzimáticas. en población pediátrica.

sino formando un área debido a que son parcialmente solubles en las dos fases y a otros fenómenos tales como la difusión. de manera que si éstos son diferentes aquélla también lo será. Pesafiltro Gradilla. Objetivo Aprender. La mezcla que se pretende separar se hace avanzar junto con la fase móvil por la fase estacionaria por medio de capilaridad. Barker)  Arginina  Cisteína (Analytyca)  Glicina (FagaLab)  Lisina (Analytyka)  Ninhidrina (HYCEL Reactivos químicos) . Espátula 3 vasos de precipitados 250ml Reactivos  Resina intercambiadora (GOLDEN BELL Reactivos)  Alcohol Etílico Absoluto (FagaLab)  Ácido acético (J. conocer y aplicar las distintas técnicas de cromatografía y lograr la separación de los cuatro aminoácidos mencionados llevando a cabo los diferentes métodos. siendo posible la separación si se utiliza el volumen de eluyente apropiado. 3 vidrios reloj 10 tubos de ensaye Fibra de vidrio Capilares 2 matraces aforados 25ml. las moléculas de soluto se distribuirán no puntualmente.T. En su desplazamiento. equipo y reactivos             Bureta de 25 ml. Pipeta 10ml. En dicho avance. La mezcla a separar junto con la fase móvil se hace avanzar a lo largo de la fase estacionaria por capilaridad. La distancia recorrida por cada uno de los componentes de la muestra dependerá de la cantidad de solvente o eluyente que se haga pasar y de los coeficientes de reparto.En esta cromatografía se tiene un soporte unido a la fase estacionaria liquida. la fase móvil arrastrará consigo un porcentaje de moléculas de cada componente a separar de acuerdo con los respectivos coeficientes de reparto. Materiales y Métodos Material. En este avance se arrastrarán las moléculas de cada componente que se desea separar de acuerdo con los coeficientes de reparto. Propipetero. En la cromatografía de reparto tenemos un soporte inerte al que está unida la fase estacionaria líquida.

FIjar la columna y dejar el nivel de líquido lo más cerca posible a la resina (tomar el tiempo para preparar las muestras de aminoácidos). Agregar el eluyente en la cámara de reacción con una altura de aproxumadamente 1 centímetro. Tomar muestras usando capilares y ponerlas en la placa de silica gel (diferenciar la muestra del aminoácido). Cortar o preparar las placas de gel sílica dibujando círculos en las extremidades 2. Dejar secar la muestra. Metodos decapa fina en columna de intercambio iónico.Método Cromatografía de capa fina. 4. Repartir los 25 ml en 5 tubos de ensaye de 5 mil cada uno. 1. 6. Poner una pequeña cantidad de la muestra (menos de una gota) en papel filtro 8. Meter la tira de silica gel al horno 9. Rociar con un pulverizador la solución reveladora 8. 4. hasta que eluyente llegue al borde. 6. Repetir los dos pasos anteriores con NaOH. Retirar la placa de silica gel (terminada la cromatografía) y dejar secar 7. 7. Preparar la columna de intercambio iónico y colocar la resina en aproximadamente 9 ml de una bureta. Adicionar alrededor de 2 a 3 ml de la muestra de aminoácidos) y vovler a fijar la columna. Colocar la placa de silica gel dentro de la cámara y dejar correr la cromatografía. 1. 2. 3. 5. Interpretar los resultados. para no permitir el paso de la resina de intercambio iónico. 5. Adicionar inhidrina y meter al horno por un período de tiempo de 15 a 20 min. Adicionar 25 ml de agua destilada. 3. . colocando en la parte del fondo un tapón de fibra de vidrio.

Tabla 1. Distancia recorrida por cada aminoácido y calculo de RF (cromatografía capa fina ) Aminoacido Arginina Glicina Cisteína Lisina Distancia recorrida (cm) . y del otro lado otra pequeña cantidad de solución de aminoácidos.4731 .3 Rf . Resultados y Discusión.0603 . Correr por cromatografía de capa fina las muestras con resultados positivos añadiendo una pequeña cantidad de la muestra en placa por un lado.5 2. Interpretar resultados. 10.1 2.9.8 .6076 .5 2.

5 2 2.3 Rf 0 . .5914 . Los aminoácidos en contacto con la nihidrina son los que presentan una reaccion colorimetrica pues ésta reacciona con los aminoacidos que tienen el grupo amino libres dando lugar a la formación de amoniaco y anhídrido carbónico. En el cálculo de los factores de retención se observa una correlación entre ellos y la forma en que los aminoacidos fueron presentandose. glicina.Tabla 2.6 . Distancia recorrida por cada aminoácido y calculo de RF (cromatografía capa fina columna de intercambio iónico ) Muestra A B C D Distancia 0 2. de esta manera se pueden determinar los aminoácidos presentes en ella. con reducción del reactivo a hidrindatina. arginina y lisina comparando las distancias de los estándares de los aminoácidos mismos en estado puro con la muestra de aminoácidos.5060 Salida 1(H2O destilada) 2(NaOH) 4 (NaOH) 5 (NaOH) Se puede observar que en la cromatografía de capa fina la presencia de aminoacidos como la cisteína. esta reacciona a su vez con el amoniaco y otro molécula ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta un coloración azul-purpura. . Conclusión Se llevó a cabo el cumplimiento efectivo del objetivo general de la práctica que fue aprender conocer y aplicar las distintas técnicas de cromatografía y se logró la separación de los cuatro aminoácidos mencionados llevando a cabo esos diferentes métodos.

Jorge David Roriguez Miranda. 159-190. Fundamentos de tecnología de productos fitoterapéuticos. Cap. Editorrial Convenio Andrés Bello. ISBN: 9581701192. Barcelona. Introducción a la Cromatagrafía. Nacional de Colombia.l Glosario de los términos más usados en cromatografía. Ediciones de la Univ. Pág. 2004.Bibliografía   Técnicas de bioquímica y biología molecular. ISBN: 9586980014. Nikolai Sharapin. 2000. Reverté. Pág. 4ª edición. Bioquímica. T. ISBN 84-291-7208-4   . M. 179 La cromatografía. Pág. Editorial Reverté. Stella Torres de Young. ISBN: 8429118195. 8: Cromatografía. 1991. 15 Devlin.

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