INSTITUCION: HOSPITAL DE ESPECIALIDADES SAN JUAN DEPARTAMENTO/AREA: laboratorio/hormonal

TITULO DEL PROCEDIMIENTO: CODIGO: Determinacin de la concentracin de triodotironina total (T3 TOTAL) en suero PAGUINAS: humano o plasma.

OBJETIVO: Determinacin de la concentracin de triodotironina total (T3 TOTAL) en suero humano o plasma por un micro plato de inmuno-Insayo de quimioluminiscencia. Mtodo Elisa. ALCANCE: este procedimiento se realizara en el equipo stat fast. Al laboratorio clnico del hospital de especialidades San Juan RESPONSABLES: BQF. Estela Mndez Lema. DEFINICIONES:

DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

FORMULARIOS Y REGISTROS REFERENCIAS ANEXOS LISTAS DE DISTRIBUCION REDACTADOMPOR ,REVISADO POR,APROBADO POR. ACTUALIZACIONES FECHAS

INSTITUCION: HOSPITAL DE ESPECIALIDADES SAN JUAN DEPARTAMENTO/AREA: laboratorio/hormonal

TITULO DEL PROCEDIMIENTO: CODIGO: Determinacin cuantitativa de la concentracin de Tiroxina Libre (FT4 ) en suero humano o PAGINAS: plasma

OBJETIVO: La determinacin cuantitativa de la concentracin de Tiroxina Libre (FT4 ) en suero humano o plasma, por un micro plato de inmuno-ensayo de quimioluminiscencia (CLIA). Mtodo Elisa. ALCANCE: este procedimiento se realizara en el equipo stat fast. Al laboratorio clnico del hospital de especialidades San Juan RESPONSABLES: BQF. Estela Mndez Lema. DEFINICIONES:

DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA Tiroxina, la hormona tiroidea principal, circula en la sangre casi completamente atada acarreando protenas. El sostn principal es la globulina tiroxina-atada (TBG) De cualquier manera, solo la porcin libre (desatada) de tiroxina responsable de la accin biolgica. Mas adelante, las concentraciones de las protenas de sostn estn alteradas en condiciones clnicas variables, tales como el embarazo. En funciones tiroideas normales como las concentraciones de las protenas sostn alteradas, el nivel de tiroxina total cambia as las concentraciones de tiroxina libre se mantiene constante. As, las mediciones de concentraciones de tiroxina libre correlaciones mejor con el status clnico que los niveles de tiroxina total. El incremento de tiroxina total asociada con el embarazo, anticonceptivos orales y terapia de estrgenos ocasionalmente resulta en niveles de T4 total sobre los lmites de lo normal del rango de referencia. Enmascarando la funcin tiroidea anormal puede ocurrir tambin tanto en condiciones de hiper o hipotiroidismo por alteraciones en la concentracin de TBG. El t4 Total puede elevarse o disminuir por los cambios de TBG tales como el resultado de los niveles normales de referencia. La concentracin de tiroxina libre puede ayudar a descubrir el status clnico actual del paciente.

En este mtodo, la referencia del suero, el espcimen paciente, o el control primero se agrega a una placa de micropozos. Se agrega a la enzima conjugada de T4 (mtodo anlogo), y se mezclan los reactivos. Resultado de una reaccin de la competicin entre la enzima conjugada y la tiroxina libre para un nmero limitado del anticuerpo que combina los sitios inmovilizados en el pozo. Despus de la terminacin del perodo requerido de incubacin, el anticuerpo lmite de la enzima-Tiroxina conjugada del es separada de la conjugacin desatada de enzima -Titoxina por un paso de lavado. La actividad de la enzima presente en la superficie del pozo es cuantificada por la reaccin con un substrato conveniente para producir luz. El empleo de varias referencias del suero de la concentracin conocida de tiroxina permite la construccin de un grfico de actividad y concentracin. De la comparacin a la curva de la reaccin a cierta dosis, la actividad de un espcimen desconocido se puede correlacionar con la concentracin de Tiroxina Libre. PRINCIPIO Inmunoanlisis de CLIA Competitivo Mtodo Anlogo para T4 Libre: Los reactivos esenciales requeridos por una fase slida de enzima en inmuno ensayo incluye el anticuerpo inmovilizado, enzima-antgeno conjugado y antgeno nativo. Mezclando el anticuerpo inmovilizado, conjugacin del enzima-antgeno y suero que contienen el antgeno nativo, una reaccin de la competicin resulta entre el antgeno nativo y la conjugacin del enzima-antgeno para un limitado nmero de insolubles sitios obligatorios. La interaccin es ilustrada por la siguiente ecuacin:

Despus de logrado el equilibrio, la fraccin anticuerpo-limite es separada del antgeno desatado

por la decantacin o la aspiracin. La actividad enzimtica, determinada por la reaccin con un sustrato que genera luz, la fraccin del anticuerpo-limite es inversamente proporcional a la concentracin nativa del antgeno libre. Utilizando varias diversas referencias del suero de los valores del antgeno conocido, una curva a la reaccin a cierta dosis puede ser generada de la cual la concentracin del antgeno de un desconocido puede ser comprobada. REACTIVOS MATERIAL PROVEIDO A. SUERO HUMANO DE REFERENCIA- 1.0 ml/ vial frascos A-F seis (6) frascos de referencia del suero para tiroxina libre en las concentraciones de 0 (A), 0.4 (B), 1.0 (C), 1.85 (D), 3.5 (E) y 7.2 (F) ng/dl. Almacenados a 2-8C. Se ha agregado preservativo. Para unidades SI: 1ng/dl x 12.9 = pmol/L. Niveles exactos estan dados en las etiquetas en base a lote especfico. B. Trazador DE T4 Libre - 13ml/vial - frasco icono Un (1) frasco de peroxidasa conjugada de Tiroxina-horseradish (HRP) en una matriz protena-estabilizada. Se ha agregado un preservativo. Almacn a 2-8C. C. POZOS DE REACCION A LA LUZ. 96 pozos icono. Una micro placa con 96 pozos cubierto con el suero de oveja anti-Tiroxina y empaquetado en un bolso de aluminio con un elemento deshidratador. Almacn en 2-8C.

D. CONCENTRADO LAVADOR DE WHAS-20 ml- icono. Un frasco que contiene un surfactant en solucin salina. Se ha aadido un preservativo. E. Reactivo seal A 7ml/vial icono Un frasco que contiene Luminol en solucin. Almacn en 28C. F. Reactivo de Seal B -- 7ml/vial - icono

E. Reactivo Seal A -- 7ml/vial - icono SA Un (1) frasco que contiene Luminol en solucin. Almacn en 2-8C. F. Reactivo de Seal B -- 7ml/vial - icono SB Un (1) frasco que contiene el perxido de hidrgeno (H2O2) en solucin. Almacn en 28C. (Ver seccin de Preparacin de reactivo). G. INSERTO DE LA PRUEBA.
Nota 1: No utilice los reactivos ms all de la fecha de vencimiento del kit. Nota 2: Los reactivos abiertos son estables por sesenta (60) das cuando estn almacenados en 2-8C. Nota 3: Los reactivos son para un microplato de 96 .

MATERIAL REQUERIDO PERO NO PROPORCIONADO:

1. Una pipeta capaz de entregar los volmenes 50l con una precisin de mejor de 1.5%.

2. Dispensadores para las entregas repetidas de los volmenes 0.100ml y 0.350ml con una precisin mejor de 1.5%. 3. Volumen ajustable (20-200l) y (200-1000l) dispensadores para diluciones conjugadas y de sustrato con una precisin mejor de 1.5%. 4. Lavador de Micro placa o una botella de apretn (opcional). 5. Lumin metro de Micro placas. 6. Papel absorbente para retirar excesos de los pozos de la microplaca. 7. Aspirador (opcional) para los pasos de lavado. 8. Contador de tiempo. 9. Materiales del control de calidad

PRECAUCIONES
Para el uso de diagnstico in vitro no para el uso interno o externo en seres humanos o animales Todos los productos que contienen el suero humano han sido encontrados para ser no-reactivos para el antgeno superficial de la hepatitis B, los anticuerpos del VIH 1&2 y de HCV por los reactivos con licencia del FDA. Puesto que ninguna prueba sabida puede ofrecer el aseguramiento que los agentes infecciosos estn ausentes, todos los productos humanos del suero deben ser dirigidos como potencialmente peligrosos y capaces de transmitir enfermedad. Los buenos procedimientos del laboratorio para manejar productos de la sangre se pueden encontrar en el centro para el control de enfermedad/el instituto nacional de la salud, "Bioseguridad en laboratorios microbiolgicos y biomdicos," 2da Edicin, 1988, publicacin No. (CDC) 88-8395 de HHS.

RECOLECCION DE LA MUESTRA Y PREPARACION

Colecte las muestras por venipunctura en tubos de silicona evacuada de diez (10) ml o tubos evacuados conteniendo EDTA o heparina. Las precauciones generalmente en la coleccin de muestras de veni-puntura deben ser observados. Separe las clulas de sangre roja por centrifugacin usando suero o plasma para el procedimiento de T4 total. Las muestras se pueden refrigerar en 2-8C por un perodo mximo de 48 horas. Si el espcimen no se puede probar dentro de este tiempo, la muestra se puede almacenar en las temperaturas de 20C por hasta 30 das. Antes de hacer el ensayo tenga los reactivos y muestras a temperatura ambiente de 20 C- 27 C. Evite congelar y deshelar. Cuando est probado en duplicado, es requerido 0.10 ml del espcimen.

FORMULARIOS Y REGISTROS REFERENCIAS ANEXOS LISTAS DE DISTRIBUCION REDACTADOMPOR ,REVISADO POR,APROBADO POR. ACTUALIZACIONES FECHAS