Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

A. Vamanu*, O. Popa*, Gh. Cmpeanu*, I. F. Dumitru***, Doina Dobrovolski**, S. Cmpeanu*, E. Vamanu*, Carmen Cmpeanu*
*

Facultatea de Biotehnologii, Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar Bucureti, B-dul Mrti 59, Romnia ** Departamentul de Biotehnologii Farmaceutice, Institutul Naional de Cercetare Dezvoltare Chimico Farmaceutic Bucureti ICCF Bucureti, os. Vitan 112, Bucureti, Romnia *** Centrul de Cercetri n Enzimologie, Biotehnologii i Bioanaliz, Universitatea Bucureti, Spl. Independenei 91-95, CP 15-28, 7000 Bucureti, Romnia

1. Introducere
Originea probioticelor dateaz din 1903 cnd n studiile lui Metchinikoff se descrie efectele benefice ale folosirii lactobacililor din iaurt de ctre om. Termenul de probiotic a fost folosit pentru prima dat n anul 1965 de ctre Lilly i Stillwell, apoi de Parker n anul 1974 pentru a defini: organismele sau substanele care contribuie la echilibrul microbian al intestinului. (Vanbelle i colab., 1990) n prezent, majoritatea cercettorilor accept c probioticele sunt concentrate viabile i atent selecionate de bacterii acido lactice, compuse adesea din tipuri de Lactobacillus acidophilus i Streptococcus faecium, ori tipuri de Bacillus. Acestea sunt folosite pe scar larg n hran, cu scopul de a preveni tulburrile digestive sau pentru creterea performanelor zootehnice. n alte studii, probioticele sunt definite ca bacterii intestinale naturale care, dup administrarea oral a dozelor, sunt capabile s se stabileasc, eventual s se colonizeze n tractul digestiv i s pstreze sau s determine creterea florei naturale a tractului digestiv pentru a preveni colonizarea organismelor patogene i pentru asigurarea inocuitii hranei. n rile aparinnd CEE, n grupul produselor probiotice sunt incluse drojdii, enzime i alte substane cu rol probiotic, nct anul 1988 existau cel puin 20 preparate biologice diferite, avnd la baz microorganisme aparinnd genurilor: Streptococcus, Lactobacillus, Bacillus, Aspergillus, Saccharomyces, Enterococcus, Pediococcus, enzime (lactoperoxidaza, gluconaza, enzime nespecifice) i extracte de rumen. S-a observat c 90% din cele 1014 celule ale corpului uman sunt microorganisme i o mare parte din ele se gsesc n intestinul gros. Un numr de 1011/g microorganisme se gsesc n fecale. Cteva sute de specii de bacterii se gsesc n intestinul gros n condiii normale. Majoritatea microorganismelor sunt anaerobe; totui unele au o toleran fa de oxigen care
9

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

variaz de la bacteriile metanogene de exemplu, strict anaerobe, la bacteroide i bifidobacterii relativ tolerante. Bacteriile anaerobe depesc numrul speciilor aerobe (~ 1000). Multe studii au artat c microorganismele Gram negative aparinnd grupului Bacteroides reprezint bacteriile predominante din colon (~ 30% din totalul bacteriilor anaerobe). Alte grupuri conin microorganisme Gram pozitive. Predominante n acest grup sunt bifidobacteriile (~ 25% din flora intestinal) ca Bifidus longum, Bifidus adolescentis, care sunt predominante la aduli.

2. Microflora intestinal
Pe plan mondial, datorit interesului suscitat de problematica n discuie, cercetrile privind microflora probiotic implicat n procesul de sanogenez au fost reluate i continuate n mod intensiv, cunoscnd noi direcii de dezvoltare. Cteva produse probiotice de uz veterinar comercializate pe piaa mondial sunt prezentate n Tabelul 1. rile productoare de microorganisme sau produse probiotice sunt listate n Tabelele 2 i 3. Sistemul ecologic al microflorei intestinale a fost ilustrat de ctre Gedek n anul 1987 (pentru speciile de eptel dup 5 6 zile de la natere) artnd c se gsesc circa 400-500 de tulpini microbiene, fa de 1014 micrograme ct conine tubul digestiv normal. Aceast microflor poate fi clasificat n trei grupe diferite: a b c Grupul dominant (>90%, strict anaerob) ce nsoete flora subdominant i flora rezidual este compus din Bifidus bacteria, Lactobacili (Gram +) i Bacteroidea (Gram -); Microflora nsoitoare (<1% facultativ anaerob) cuprinde alturi de Escherichia coli (Gram -) i Enterococi (Gram +); Restul microflorei (<0,001%) este n principal compus din Clostridia, Staphylococcus, Pseudomonas, Proteus i drojdii ale genului Candida.

Studii la microscopul electronic au artat c aproximativ 20% din tipurile de bacterii sunt nc n faza de a fi identificate, obinerea culturilor pure fiind greu de realizat. Colonizarea intestinal ncepe cu Escherichia coli, urmat de Streptococi, iar dup cteva zile de Bifidobacterium, apoi Bacteroidea i, n final, Lactobacillus, dar exist mari diferene ntre unele specii de animale i de om. Starea de echilibru ntre diferitele specii bacteriene variaz ntre duoden, ileon, colon i cecum. Aceast variabilitate depinde de o mulime de factori diferii ca: secreiile digestive, pH gastric, secreiile srurilor biliare (motilitatea), integritatea mucoasei intestinale i glicocalixul. La psri, unde tranzitul este foarte scurt (2 5 ore), ecologia microbian este direcionat ctre microflora din gu. Compoziia chimic a dietei este un alt factor important. Cele mai ntlnite bacterii din tractul digestiv al porcilor i psrilor sunt listate n Tabelele 4 i 5. (Vanbelle i colab., 1990)

10

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

Tabelul 1. Produse probiotice comercializate pe piaa mondial.

Produsul
All Lac Lacto Sacc Toyocerin Fralac Lbc Cocbactin Oralin Protexin Lactobacili Lactobacili, Saccharomyces sp. Bacillus toyoi (spori) Streptococcus faecium Lactobacillus acidophilus Enterococcus faecium Streptococcus faecium, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei Orz ncolit, bacterii lactice

Conine

Recomandrile productorului Specia/Categoria Efecte beneficiar

Tineret porcin Purcei Porci, psri Toate speciile Tineret taurin Taurine, porcine, psri Cabaline, ovine, porcine Reduce mortalitatea, crete sporul mediu zilnic (smz) Crete smz, reduce incidena diareei i mortalitatea Reprim dezvoltarea germenilor patogeni, atenueaz stresul Profilactic pentru diaree, promotor de cretere Crete smz mbuntete performanele productive mbuntete starea de sntate i performanele productive Crete apetitul, producia de lapte, reduce mortalitatea

Probios Acosil F.3

Viei, porcine Vaci lapte, ovine i scroafe gestante

Tabelul 2. Produse probiotice comercializate n Frana.

Produsul probiotic Paciflor Adjulact standard Adjulact 1000 Adjulact 2000 Yea sacc Fermacton Bio plus porc Lyobacter P1 Lyobacter SFL Multigerm Biosaf SC 47 Bioplus 2B SF 68 Enteroferm Degefermenti Bacteriolact Microorganismele componente Bacillus cereus CIP 5832 Enterococcus sp., Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis Lactobacillus helveticus, Enterococcus sp. Lactobacillus plantarum, Enterococcus sp. Saccharomyces cerevisiae Lactobacillus sp., Pediococcus sp., Enterococcus faecium SF 368 Lactobacillus sp., Pediococcus sp., Enterococcus faecium SF 368 Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Enterococcus faecium Enterococcus faecium SFL Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium Saccharomyces cerevisiae SC 47 Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis Enterococcus faecium SF 68 Trei sue de Lactobacillus, Enterococcus sp., Saccharomyces sp. Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis Lactobacillus casei, Streptomyces thermophilus 11 Destinaia Toate animalele Viei, purcei Viei, purcei Viei, purcei Poligastrice Toate animalele Porci Toate animalele Toate animalele Porci Toate animalele i mai ales poligastrice Toate animalele Toate animalele Toate animalele Toate animalele, probiotic, medicament Probiotic, medicament, viei, porci

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

Tabelul 3. Lista de microorganisme/Produse care ar putea fi probiotice. Microorganisme sau Produse S P A N I A B E L G I A D A N E M A R C A G E R M A N I A G R E C I A F R A N A I R L A N D A I T A L I A L U X E M B U R G P O R T U G A L I A X X O L A N D A A N G L I A

Streptococcus faecium

X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

Streptococcus termophilus Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus acidophilus Lactobacillus casei Lactobacillus plantarum Lactobacillus lactis Lactobacillus brevis Lactobacillus ferment Lactobacillus bifidus Lactobacillus helveticus Bacillus subtilis Bacillus toyoi Bacillus licheniformis Aspergillus oryzae Saccharomyces cerevisiae Escherichia coli Kluyveromyces fragilis Pediococcus sp. Extract de rumen Lactoperoxidaz Enzimes, nespecifice Enzime, Glucanaz
12

X X X X X X X X X X X X X

X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

Tabelul 4. Cele mai ntlnite bacterii din tractul digestiv al porcilor.

Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Specia de microorganisme Bacteroides ruminicola Bacteroides uniformis Bacteroides succinogenes Butyrivibrio fibrisolvens Clostridium perfringens Escherichia coli Eubacterium aerofaciens Lactobacillus acidophilus Lactobacillus brevis Lactobacillus cellobiosus Nr. crt. 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Specia de microorganisme Lactobacillus salivarius Peptostreptococcus productus Proteus sp. Ruminococcus flavefaciens Selenomonas ruminantium Streptococcus bovis Streptococcus equinus Streptococcus salivarius Veillonellae sp. Lactobacillus fermentum

Tabelul 5. Cele mai ntlnite bacterii din tractul digestiv al psrilor. Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 Specia de microorganisme Bacteroide sp. Bacteroides fragilis Bifidobacterium bifidus Clostridium perfringens Clostridium beijerinckii Clostridium sp. Eubacterium sp. Fusobacterium sp. Nr. crt. 9 10 11 12 13 14 15 16 Specia de microorganisme Gemmiger formicilius Lactobacillus acidophilus Lactobacillus fermentum Lactobacillus salivarius Micrococcus sp. Streptococcus faecium Streptococcus faecalis Ruminococcus obeum

3. Modul de aciune al probioticelor

n anul 1989 Raibaud i Raynaud, au ncercat s fac un rezumat privind mecanismul de aciune al probioticelor, s explice creterea performanelor zootehnice i mbuntirea sntii la om i animale. Au fost emise o mulime de ipoteze, asupra modului de aciune a probioticelor, precum i mai multe speculaii dar, n principal trebuie avute n vedere urmtoarele: - Probioticele inhib proliferarea bacteriilor patogene prin producerea de acizi organici i prin reducerea pH; - Produc H2O2 i previn aderarea bacteriilor patogene la peretele intestinului; - Produc metabolii capabili s neutralizeze toxinele bacteriene in situ ori s inhibe producia lor. Datorit atenurii catabolismului intradigestiv, apare o reorientare a microflorei intestinale cu scopul reducerii absorbiei substanelor toxice cum ar fi NH3, amine, indoli precum i diminuarea biotransformrilor srurilor biliare i ale acizilor grai, n produi toxici; - Prin enzimele propii probioticele cresc utilizarea digestiv a hranei precum i procesele de detoxifiere. Ameliorarea digestibilitii alimentelor ingerate se realizeaz prin: hidroliza lactozei de ctre - galactozidaz; degradarea - glucanilor de ctre anumite sue probiotice glucanolitice; stimularea activitii enzimatice a microorganismelor endogene care permite o mai bun asimilare a alimentelor; stimularea unor enzime propii celulelor epiteliale ale tractului digestiv (lactaz, invertaz, maltaz)
13

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

Probioticele stimuleaz producia de vitamine aparinnd n general grupului B i determin creterea activitii lactazei, sucrazei i maltazei; - Se inmulesc n tubul digestiv i distrug bacteriile patogene; - Reduc catabolismul microbilor, tinznd ctre un echilibru mult mai bun ntre lactobacili; - Stimuleaz imunitatea gazdei prin aciune asupra celulelor implicate n imunitatea natural i n imunitatea specific. Se tie c fagocitoza este realizat, n principal, de macrofagi i aceasta se constituie ca un mecanism principal de aprare nespecific al organismului la ptrunderea unei substane strine. Probioticele stimuleaz deci activitatea macrofagilor. Probioticele pot influena imunitatea nespecific. Aceasta cuprinde dou sisteme: un sistem care acioneaz prin anticorpii secretai de limfocitele B (imunitate umoral) i un alt sistem care acioneaz prin intermediul direct al limfocitelor T (imunitate cu mediere celular). Cele dou sisteme comunic ntre ele prin intermediul substanelor chimice denumite interleukine. Creterea rspunsului imunitar specific se traduce printr-o activare a limfocitelor T i B ceea ce provoac o cretere a nivelului de interleukine i anticorpi circulani (imunoglobulinele M i imunoglobulinele G). Probioticele au i efect asupra produciei de anticorpi (n principal imunoglobulinele A) n lumenul intestinal. n contact cu antigenii prezeni n coninutul digestiv, imunoglobulinele A sunt foarte importante n tractul digestiv, constituindu-se ca o prim cale de aprare contra infeciei. Imunoglobulinele A pot inhiba adeziunea bacteriilor patogene la suprafaa mucoasei tractului digestiv prin: - aglutinarea bacteriilor; - fixarea pe proteinele adezive, prezente la suprafaa bacteriilor; - interferarea n complexul substane adezive/receptori celulari. Este important de amintit faptul privitor la adeziunea microorganismelor la animalele Terestre unde microbiologii deosebesc adeziunea nespecific de adeziunea specific. Cuvntul adeziune definete suprafaa unei macromolecule, cunoscut a fi responsabil de aderena specific. Specificitatea adeziunii celulelor animale apare ca rezultat al compoziiei chimice a structurilor responsabile de activitatea adeziv. Adezivii bacterieni n majoritatea lor sunt de natur proteic, n special la bacteriile Gram negative i Gram pozitive. Aceste proteine de aderen, care difer semnificativ ntre ele prin greutatea molecular, compoziia n aminoacizi i structura cuaternar, se pare c recunosc i leag receptorii carbohidrani de suprafaa glicocalixului. O a doua activitate de adeziune este exercitat de acizii lipoteicoici ai Streptococcus pyrogenes care s-a presupus c se ataeaz pe membranele celulei gazd prin intermediul resturilor de acizi grai din acizi lipoteicoici prin interaciuni hidrofobe. n final, al treilea mecanism de adeziune specific rezult din depozitarea matricelor de polizaharide insolubile de ctre bacteria Streptococcus mutans, pe suprafaa dinilor, urmat de o lipire a polizaharidelor extracelulare la suprafaa componentelor bacteriene. Ar trebui notat c multe activiti adezive nu sunt cunoscute nc. Numrul i puterea acestor interaciuni variaz de la caz la caz ca i nivelul aderrii unui microb la o varietate de suprafee. Toate acestea nu implic specificitate. Numeroase studii de microscopie electronic au demonstrat claritatea apariiei aderrii, colonizarii ori asocierii bacteriilor n diferite pri ale intestinului la o varietate de animale vertebrate, cum ar fi: obolani, oareci, porci, psri, rumegtoare i oameni. (Chan i colab., 1984) nainte de toate, cu privire la colonizarea microbian, conceptul iniial a fost c probioticele trebuie s colonizeze mucoasa i s se multiplice in situ n scopul de a produce
14

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

substane ori metabolii n beneficiu lor. Faptul c numrul microorganismelor probiotice viabile este constant n fazele respective nu este suficient pentru a ncheia colonizarea. ntradevr nmulirea bacteriilor probiotice n timpul tranzitului lor n tubul digestiv este cteodat foarte limitat i nu suficient. Muli autori pretind c bacteria acidului lactic folosit ca probiotic ader la celulele marginale cu cili intestinali. Aceast proprietate ar trebui s permit microorganismelor s prolifereze in situ. ns datele experimentale arat c nu este o condiie sine qua non. (Lee, 1980) La obolani i oareci holoxenici, dominantul Lactobacillus murinus nu ader la celulele stomacale. Cteva tipuri de lactobacili ader bine la celulele stomacale ale obolanilor i oarecilor holoxenici, dar nu ader la pereii celulari ai puilor. Probioticele inhib aderarea enterobacteriilor patogene (E. coli)care scad considerabil numrul celulelor ce conin imunoglobina A. Locurile de aderare pentru lactobacili i E. coli nu sunt aceleai iar mecanismul exact de aciune se refer fie la controlul direct al microorganismelor, fie la aciunea indirect prin stimularea microflorei autohtone i a metabolismului lor. Imediat dup natere se pot implementa tipuri aparinnd microflorei autohtone normale. Este interesant a relata cercetrile franceze recente efectuate pe copii cu Bifidobacterium longum, o bacterie anaerob (Gram pozitiv) i care este un locuitor normal al intestinului copiilor, adulilor i animalelor. Laptele fermentat de Bifidobacterium longum a dat rezultate mult mai bune la copii mpotriva diareii, consecutiv folosirii antibioticului eritromicin dect iaurtul; mai mult dect att laptele fermentat este activ mpotriva infeciei cu Rotavirus. Cel mai relevant fapt al acestui experiment este n primul rnd acela c are o activitate pozitiv n reducerea Escherichia coli i Clostridium perfringens, prin metaboliii (glicoproteine) formai n timpul fermentrii laptelui cu Bifidobacterium longum. Este important de notat faptul c Bifidobacterium longum are nevoie de urmtorii factori de cretere: lactoz, N acetilglucozamin sau derivai, peptide i glicopeptide. Ramond (1989) a relatat c tipurile de Bifidobacterium ader la mucoas i la receptorii de - glucosamin la fel ca i unele tipuri patogene de E. coli. Se pare c Bifidobacterium longum este dificil de implementat, dac numrul de germeni autohtoni este de 1011/g. Aceste experimente arat clar c importan au at viabilitatea i natura receptorilor, c i unii metabolii formai din fraciunea de - cazein n timpul fermentrii laptelui, care pot aciona mpotriva bacteriilor patogene i a corva infecii virale. Lactobacili viabili din iaurt au ase proprieti (Antoine, 1989): - supravieuiesc n timpul tranzitului digestiv; - dezvolt activitatea antidiareic la copii i aduli; - diger lactoza; - desfoar o activitate probiotic la animale; - sunt capabili de a detoxifia prin reducerea activitii activitatea nitroreductazei glucoronidazei i azotoreductazei; - administrarea iaurtului i lactobacililor crete nivelul interferonului la oameni. Cteva tipuri de Bacillus licheniformis produc un antibiotic la oriceii monoxenici care inhib puternic Clostridium perfringens. Nu a fost dovedit in situ, dac probioticele produc antitoxine. Exist o cretere a utilizrii digestive a hranei, care a fost verificat pe oricei i oameni n experimente cu iaurt i Saccharomyces boulardi. Aceasta nseamn c celulele vii n timpul tranzitului intestinal pot modifica producia de enzime n celulele marginale cu cili. Probioticele stimuleaz sistemul imunitar nespecific al
15

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

animalelor. Exist cteva indicaii clare c la oricei holoxenici ingerarea iaurtului proaspt crete nivelul imunoglobinei 2A sau crete activitatea fagocitar i limfolitic. La oameni, iaurtul induce de asemenea o cretere uoar de - interferoni. Referitor la modul de aciune a probioticelor, au fost emise o mulime de ipoteze, i mai multe speculaii dar, n principal trebuie avute n vedere urmtoarele: - Probioticele inhib proliferarea bacteriilor patogene prin producerea de acizi organici i prin reducerea pH; - Produc H2O2 i previn aderarea bacteriilor patogene la peretele intestinului; - Prin enzimele propii probioticele mresc utilizarea digestiv a hranei precum i procesele de detoxifiere; - Probioticele stimuleaz producia sistemului imunologic ca barier de protecie a tubului digestiv, fiind demonstrat c administrarea de preparate cu Lactobacillus poate stimula producia de - globuline, - interferoni i intensific activitatea macrofagelor responsabile de ndeprtarea agenilor patogeni din organism; - Probioticele stimuleaz producia de vitamine aparinnd n general grupului B i determin creterea activitii lactazei, sucrazei i maltazei; - Prolifereaz n tractul digestiv fiind n competiie cu bacteriile patogene; Utilizarea probioticelor n hrana animalelor are efecte benefice n urmtoarele activiti: - Tulburri ale microflorei indigene: - disbacterioze neinfecioase dup doze mari cu antibiotice; - stress (schimbri n alimentaie, transport); - Dezvoltarea deficient a microflorei; - Promovarea creterii; - conversie mai nalt a hranei; - distrugerea ANFS; - sinteza vitaminelor; - predigestia proteinelor. n plus, se pare c probioticele ar avea oarecare potenial n tratamentul i prevenirea bolilor coronariene i encefalopatiilor, fiind demonstrat c administrarea de probiotice poate reduce nivelul colesterolului plasmatic la pui. De asemenea s-a sugerat c probioticele pot fi eficiente n combaterea unor forme de cancer, att pe calea aciunii sistemului imunitar ct i prin inhibarea unor enzime ca - glucoronidaza, - glucozidaza i nitroreductaza, care sunt implicate n carcinogeneza intestinal. Pentru a putea fi ncadrate n categoria microorganismelor probiotice, acestea trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: - s produc substane utile organismului; - s fac parte sau s influeneze favorabil flora digestiv normal a organismului; - s regenereze i s se dezvolte ntr-un timp ct mai scurt; - s colonizeze un timp ct mai ndelungat epiteliul tractului digestiv; - s aib stabilitate ridicat i s poat fi obinut cu uurin; - ar fi de dorit ca stabilitatea microorganismelor probiotice s fie permanent adic s rmn la concentraia corespunztoare dup prima administrare; n practic dac se ntrerupe pentru o anumit perioad de timp administrarea probioticului, efectul benefic dispare. Cele mai utilizate microorganisme pentru producerea probioticelor sunt: Lactobacillus: acidophilus, bulgaricus, casei, helveticus, lactis, salivarium, plantarum Streptococcus: termophylus, faecium, fecalis
16

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

Dintre toate speciile amintite doar Streptococus termophylus i Lactobacillus bulgaricus nu fac parte dintre microorganismele tubului digestiv. Cel mai complet mod de aciune a probioticelor a fost experimentat de Sava i Batazzi care au explicat efectul favorabil al microorganismelor autohtone din tubul digestiv folosite pentru obinerea de preparate probiotice. Ei au demonstrat c aceste microorganisme particip n sens favorabil pentru animalele gazd la digestia i metabolizarea substanelor nutritive producnd i ele nsele proteine i vitamine de care animalele gazd nu ar dispune n alte condiii. Aceste microorganisme constituie o barier important mpotriva microorganismelor patogene aflate n tranzit prin tubul digestiv mpiedicnd colonizarea acestora prin ocuparea locusurilor specifice i consumnd substratul nutritiv al acestora. Microorganismele probiotice stabilizeaz pH tubului digestiv, mpiedicnd dezvoltarea germenilor patogeni, favoriznd astfel dezvoltarea microorganismelor utile. Putem conchide c reducerea numrului germenilor patogeni ca urmare a administrrii probioticelor n hran se face prin dou modaliti: - Producerea de substane cu efect antibacterian selectiv; acizii organici sau peroxidul de hidrogen care le sunt favorabile; - Competiia pentru situsuri de fixare pe pereii tubului digestiv care de regul va fi ctigat de microorganismele care se afl ntr-un numr mare. Cele mai frecvente bacterii lactice utilizate n alimentaie sunt: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bifidus, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Bacillus subtilis. Ele sunt selecionate n funcie de criteriile precedente i exercit n tubul digestiv numeroase aciuni profitabile cum ar fi aciditatea mediului (inhibnd formarea aminelor toxice), producia de substane antibiotice i inhibiia unor bacterii patogene (salmonele i colibacili).

4. Obinerea de biomas din drojdii cu rol probiotic

n prezent cea mai utilizat tulpin de drojdie sub form de produs probiotic este Saccharomyces cerevisiae. Sursa de carbon utilizat n procesul biotehnologic de obinere de biomas viabil este etanolul, deoarece este disoponibil ca materie prim pur, este acceptabil ca ingredient alimentar i este complet solubil n ap. Fiind un proces aerob, obinerea biomasei viabile din drojdii pe etanol se realizeaz n condiii aseptice, la concentraii limitative de substrat i la o rat nalt de cretere, care asigur un randament mare de bioconversie n biomas. Cercetrile farmacologice au artat c ingestia de S. cerevisiae are efect protector asupra florei microbiene intestinale, inhibnd dezvoltarea bacteriilor patogene, stimuleaz imunitatea organismului i echilibreaz flora saprofit intestinal, dup tratamentul cu antibiotice i chimioterapice. Episoadele uoare sau severe de diaree constituie principalul efect al tratamentului cu antibiotice. Forma cea mai frecvent a deranjamentelor intestinale este colita pseudomembranoas. Printre cile ecologice de control ale acestor diarei ce rezult din dezechilibrarea microflorei intestinale se numr mai multe microorganisme nepatogene care pot fi folosite pentru restabilirea echilibrului. Dintre microorganismele existente, Saccharomyces boulardii a fost cea mai studiat.(Bergogne-Brzin, 1995) Pe lng datele obinute din cercetri in vitro, experienele efectuate pe cobai (infectai cu Clostridium difficile) au confirmat potenialul lui S. boulardii n prevenirea efectelor patogene ale toxinelor A i B i n scderea numrului de colonii ale
17

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

microorganismelor patogene. n mod similar n cazurile pacienilor cu manifestri grave de diaree, au fost administrate doze de S. boulardii, care au prevenit diaree i colita pseudomembranoas, determinnd decontaminarea selectiv a tractului digestiv. (Corbon i colab., 1995) Efectele nedorite ale antibioticelor sunt legate de toxicitatea direct a anumitor produse asupra unor organe (ex. nefrotoxicitate, neurotoxicitate, hepatotoxicitate), de efectele farmacologice i metabolice (interaciunea metabolic a macrofagelor cu teofilina) i de efectele imunologice (alergii la penicilin i alte antibiotice). Printre efectele secundare ale antibioterapiei cele mai frecvente sunt accidentele digestive (prin diverse tipuri de molecule) de tipul diareelor de intensitate i gravitate variabil, care cedeaz n urma tratamentului. Unele forme mult mai severe necesit spitalizare, cum ar fi colitele pseudomembranoase asociate cu Clostridium difficile. Presiunea selectiv a antibioticelor asupra microflorei digestive (care la vrsta fiziologic formeaz un ecosistem bazat pe echilibrul florei intestinale) i asupra interaciunii mucoasei digestive cu aceast flor, rezult din mecanisme complexe, fiziologice i psihologice, ca sinteza vitaminelor, degradarea glucidelor, lipidelor i proteinelor alimentare, impactul asupra vilozitilor i rennoirea celular. In situ, flora bacterian normal (format din 1014 bacterii) exercit un efect de barier care se opune implantrii bacteriilor necomensaliste. Practic, toate familiile de antibiotice provoac, diarei de intensiti variabile, n funcie de modul de aciune i de spectrul de influen. Datorit stresului, al antibioterapiei sau al tratamentelor imunosupresoare, la pacienii cu disfuncii grave se constat anomalii profunde ale microflorei digestive. n acest context, o patologie sever asociat cu ingestia unor substane, este colita pseudomembranoas n timpul creia multiplicarea bacteriei Clostridium difficile este nsoit de producerea simultan a dou toxine o enterotoxin (A) i o citotoxin (B) responsabile de leziunile stomacale i de simptome severe. Tratamentele specifice pentru eradierea eventualilor ageni patogeni i msurile indispensabile de corecie a disfunciilor electrolitice s-au propus a se asocia cu aportul de microorganisme nepatogene pentru restabilirea cel puin parial a unui nou echilibru intestinal. Acest aspect a fost recent confirmat n cursul unei probe chimice asociind pacienilor infectai cu Clostridium difficile o antibioterapie standard. O parte din pacieni au primit antibiotice i Saccharomyces boulardii i rezultatele au fost foarte bune, iar o alt parte au primit antibiotice i placebo, iar rezultatele nu au fost satisfctoare. Asocierea cu S. boulardii a artat un risc semnificativ mai mic, de recidiv la infecia cu Clostridium difficile fa de folosirea antibioticelor. (Costex i colab., 1990) La oareci efectul antagonist exercitat de S. boulardii fa de Candida albicans a fost demonstrat prin administrarea de 5109 celule de S. boulardii. Eliminarea de C. albicans nu este total, nregistrndu-se o diminuare de 50 100 ori. Acest efect antagonist se exercit i fa de alte specii de Candida: C. crusei i C. pseudotropicalis, dar nu i fa de C. tropicalis. (Ducluzean i Bensaada, 1982) ntr-un model de colit cu Clostridium difficile, fa de oareci gnotabiotici, un tratament preventiv, oral cu S. boulardii n suspensie de 1010 celule/ml, a permis reducerea semnificativ a mortalitii provocate de infecia experimental cu Clostridium difficile. ntr-un lot tratat, (dup 10 zile de vancomicin) cu o suspensie de 5108 UFC/ml de S. boulardii, a artat o scdere semnificativ a numrului de colonii de Clostridium difficile i o diminuare a procentului de toxine B.

18

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

Mai recent la om, n colitele pseudomembranoase provocate de Clostridium difficile, administrarea de S. boulardii n doz de 500 mg de dou ori/zi, reduce semnificativ procentul recidivelor, cu 85%. Un studiu recent demonstreaz la obolani, persistena celulelor viabile de S. boulardii n timpul tratamentului cu antibiotice ca neomicin, ampicilin, clindamicin. Procentul de S. boulardii a fost 72% la 96 de ore, dup administrare. Un alt efect al perturbrii microbiene legate de antibiotice este fenomenul de translocaie bacterian care duce la complicaii infecioase n afara sferei digestive cum ar fi pneumopatiile la pacienii din reanimare. Translocaia are loc n traumatisme abdominale, iradieri, stri de oc, chimioterapie sau la toi factorii susceptibili de modificarea permeabilitii epiteliului intestinal; cantitatea de inocul bacterian fiind de asemenea un factor favorizant (> 1012 UFC). Prevenirea translocaiei se face prin decontaminarea selectiv a tubului digestiv, utiliznd n administrarea oral, doze forte de antibiotice asociate: polimixin, colistin, acid nolidixic asociat cu aminozide i amfotericin B, cteodat i cu vancomicin. Translocaia lui C. albicans se poate produce printr-o dezvoltare a candidozei sistemice la unii pacieni imunodepresivi. Experimental, pe oareci liberi de germeni specifici, dup decontaminarea tubului digestiv timp de 4 zile (streptomicin mpreun cu penicilina G), ingestia simultan de C. albicans i S. boulardii (109 celule)/ml i respectiv 5108 UFC/ml) a redus semnificativ incidenele translocaiei dar nu i numrul de celule de C. albicans. Din contr, imunosupresia oarecilor ce au primit prednison a antrenat un numr mare de translocaii. (Berg i colab., 1993) 4.1. Tulpini de drojdii utilizate Pentru obinerea de biomas proteic viabil s-au utilizat trei tulpini de drojdii din genul Saccharomyces: - Saccharomyces cerevisiae 224 - Saccharomyces cerevisiae 225 - Saccharomyces cerevisiae 226 4.2. Medii de cultur Mediul de cultur pentru inocul i pentru faza de fermentaie conine % (W/V):KH2PO4 0,2, (NH4)2SO4 0,2, extract de porumb 0,2, MgSO47H2O 0,05, microelemente 1 ml, pH 4,5, etanol 0,3. 4.3. Echipamente i sisteme de cultivare Echipament - Inoculul s-a cultivat n baloane Erlenmeyer de 500 ml cu 100 ml mediu de cultur. Procesul de fermentaie s-a realizat ntr-un bioreactor tip LKB, la un volum util de 9l. Parametrii de cultivare au fost: temperatura 280C, agitare 600 900 rpm, aerare 0,8 1,3 l/l/min. Nivelul oxigenului dizolvat a fost monitorizat de un electrod galvanic (Pb/Ag). Concentraia de CO2 din aerul exhaustat a fost msurat cu ajutorul unui analizator IR tip Infralyt 4 (Junkalor Dessau, Germania). Fermentaia - Cultivarea celor 3 tulpini de drojdii din genul S. cerevisiae s-a realizat n sistemul de cultivare batch, dup care biomasa a fost separat din mediul de cultur prin centrifugare i supus apoi procesului de liofilizare ntr-un liofilizator tip L MIN D.
19

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

4.4. Metode analitice utilizate Biomasa uscat (DCW) a fost determinat prin centrifugarea mediului de fermentaie la 5.000 rpm timp de 30, apoi splarea celulelor cu ap distilat i uscarea acestora pn la greutate constant la 1050C. Etanolul a fost analizat gaz cromatografic. Densitatea optic (DO) a fost citit la un spectrofotometru Karl Zeiss Jena, la = 570 nm. 4.5. Parametrii de cultivare i caracteristicile biomasei liofilizate Evoluia parametrilor de cultivare n sistem batch a celor 3 tulpini de S. cerevisiae precum i rezultatele obinute sunt prezentate n Tabelul 6 i Figura 1 i 2. Tabelul 6. Parametrii de cultivare n sistem discontinuu a celor 3 tulpini de S. cerevisiae. Durat cultivare (ore) 0 4 8 12 16 20 24 Aer (l/l/m/m) 6 6 9 12 12 14 15 Agitare (rpm) 600 600 800 900 900 1000 1000 pH 4,1 4,0 4,0 4,2 4,0 4,1 4,0 Concentraie etanol (%) 0,25 0,32 0,12 0,26 0,37 0,18 0,23

Dezvoltarea biomasei de Saccharomyces cerevisiae s-a realizat prin meninerea constant a pH la valoarea 4 i concentraiei de etanol din mediul de cultur ntre 0,1 0,35%, ajungndu-se la 24 ore de cultivare la un DCW de 41,25 g/l. Odat cu creterea concentraiei de biomas, concentraia O2 dizolvat a sczut i s-a meninut la pragul de 30%, prin creterea ratei de aeraie de la 0,8 la 1,3 l/l/m/m, i a agitrii de la 600 rpm la 1000 rpm.
100 Nivelul oxigenului dizolvat % 80 60 40 20 0 0 4 8 12 Timp, ore 16 20 24 2,5 Nivelul bioxidului de carbon dizolvat % 2 1,5 1 0,5 0

Figure 1. Nivelul oxigenului dizolvat si al bioxidului de carbon pe parcursul cultivari tulpinilor Saccharomyces cerevisiae 224, 225, 226 n sistemul de fermentatie batch.
20

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

100 50

80

40 Concentratia biomasei , g/l (DCW)

Densitate optica

60

30

40

20

20

10

0 0 4 8 12 Timp, ore 16 20 24

Figura 2. Profilul fermentatiei de cultivare batch cu Saccharomyces cerevisiae 224, 225, 226.

Durata procesului de cultivare a fost de 24 de ore, obinndu-se 370 g biomas prin consumarea a 612 g etanol. Consumul specific de etanol a fost de 1,65, iar randamentul de bioconversie n biomas a fost de 60,5%. Viteza specific de cretere a celor 3 tulpini de drojdii pe tot parcursul celor 24 ore de cultivare a fost de 0,1 h-1, iar productivitatea celular a atins 5,77 gl-1h-1, cu un TD = 4,95 h. Biomasa proteic a fost separat din broth prin centrifugare i a fost supus apoi procesului de liofilizare, dup ce n prealabil s-a adugat mediu de protecie (zaharoz 10%), avnd dup procesul de liofilizare o viabilitate de 7,531016celule/g biomas. Caracteristicile fizico chimice ale biomasei liofilizate sunt prezentate n Tabelul 7. Tabelul 7. Caracterizarea analitic a biomasei liofilizate de S. cerevisiae 224, 225, 226.
Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Parametrii Aspect Culoare Miros Pierdere prin uscare (%) Rezidiu sulfatat (%) Metale grele (%) Azot total (%) Azot amoniacal (%) Protein total (% s.u.) Acizi nucleici (%) Lipide (%) Valori Biomas liofilizat, amorf Alb bej Caracteristic 4,67 4,97 Absent 6,913 0,313 43,27 2,8 6,1

Biomasa obinut n urma procesului de liofilizare i caracterizat fizico chimic i din punct de vedere al viabilitii celulelor de drojdii a fost apoi formulat ca produs probiotic sub form de capsule gelatinoase.
21

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

5. Studii microbiologice i farmacologice privind efectul probiotic al biomasei de Saccharomyces cerevisiae

Antibioterapia, dei rmne cea mai valoroas metod terapeutic antibacterian, conduce la tulburri digestive care sunt de fapt expresia unor modificri profunde ale microflorei normale. Astfel, n urma antibioterapiei, unele specii microbiene saprofite, constante i caracteristice pentru anumite segmente ale tractusului digestiv se reduc cantitativ sau chiar dispar, n schimb apar alte specii sau tulpini microbiene atipice, strine, patogene i nentlnite n asemenea proporii n condiii normale.Lactobacilii i enterobacteriaceele n special E. coli, sunt din acest punct de vedere nite indicativi. Antibioticele pot conduce la dezechilibre ale florei, fiind deja cunoscute efectele administrrii prelungite sau a unor doze mari pe perioade scurte astfel: - cefalosporinele conduc la reducerea cu un ordin de 2 log. pn la eliminarea total a lactobacililor din microflora normal; la fel acioneaz cloramfenicolul, neomicina singur sau asociat cu metronidazolul; - tetraciclina, ampicilina conduc la aa numita diaree de putrefacie, al crei agent patogen este tulpina Proteus, responsabil a florei de putrefacie care se dezvolt excesiv n urma terapiei cu antibiotice, n detrimentul tulpinei E. coli; - administrarea de neomicin cu metronidazol conduce att la scderea numrului de lactobacili n mod semnificativ, dar i la reducerea florei anaerobe. Pentru a elimina efectele nefaste ale antibioterapiei i a restabili echilibrul acestui ecosistem se administreaz aa numitele tulpini probiotice (bacterii, drojdii) care tranziteaz n stare vie tubul digestiv, colonizeaz temporar acest loc i prin mecanisme directe (antagonism microbian, aciune enzimatic) sau indirecte (stimularea imunitii gazdei) conduc la refacerea florei locale att ca structur ct i ca numr. Se cunoate c este dificil s implantezi o su microbian ntr-un ecosistem stabil. Reuitele n general au fost de scurt durat. Chiar dac tulpina microbian are un potenial de adeziune bun in vitro, colonizarea s-ar putea s nu aibe loc pentru c nu este suficient de competitiv pentru substratul dat, comparativ cu bacteriile indigene deja stabilite. Studiile de literatur arat c o tulpin poate fi mai uor implantat ntr-un ecosistem atunci cnd respectivul ecosistem este dezechilibrat. n cazul tratamentului cu antibiotice se produce suprimarea unei pri a florei indigene i pe fondul acestui dezechilibru, tulpina probiotic ocup pentru un timp respectiva su ecologic. 5.1. Metode i tehnici utilizate n studiile farmacologice n experimente s-au utilizat iepuri albi cu greutate 2200g 150g, aclimatizai timp de 3 zile la condiiile de vivariu, selecionai n prealabil prin eliminarea exemplarelor cu tulburri gastro intestinale. Animalele au fost repartizate n 4 loturi a cte 5 animale numerotate dup cum urmeaz: Lotul 1 martor alb, Lotul 2 martor la care s-au administrat antibiotice, Lotul 3 tratat cu probiotic, Lotul 4 tratat cu Enterol. La Lotul 1 s-a administrat ap distilat. n volum de 2,5 ml/kg animal. Loturile 2, 3 i 4 au primit o dat pe zi, un amestec format din urmtoarele antibiotice: ampicilin 25 mg/kg/zi, neomicin 50 mg/kg/zi i metronidazol 15 mg/kg/zi. Antibioticele au fost alese pe baza datelor de literatur, n dozele cunoscute pentru a produce un dismicrobism intestinal (doze maxime terapeutice) i au fost administrate n soluie apoas, prin gavaj, n volum de
22

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

2,5 ml/kg animal. Durata administrrii a fost de 5 zile dup care o parte din animalele lotului 1 i 2 au fost sacrificate, pentru evidenierea florei microbiene i s-au prelevat probe din principalele organe interne pentru examen anatomopatologic. La lotul 3, dup cele 5 zile de antibioterapie, a fost administrat preparatul liofilizat probiotic pe baz de biomas de Saccharomyces cerevisiae, n priz unic/24h, p.o. sub form de suspensie microbian realizat n ap distilat steril, cu o concentraie de 4,32109 U.F.C./volum 2 ml/animal. Durata tratamentului a fost de 4 zile. Lotul 4 a primit corespunztor, timp de 5 zile, preparatul probiotic Enterol coninnd liofilizat de Saccharomyces boulardii, p.o., ntr-o singur priz/24h, sub form de suspensie microbian realizat n ap distilat steril, cu o concentraie de 4109 U.F.C./volum 4 ml/animal. Au fost urmrite zilnic: apetitul, greutatea i semnele de diaree. Dup perioada de tratament animalele au fost sacrificate pentru evidenierea florei microbiene i n vederea examenului anatomopatologic. Pentru evidenierea florei microbiene intestinale au fost recoltate de la fiecare animal, fragmente de tub digestiv coninnd jonciunea ileo cecal de dimensiuni aproximativ egale. Prelevatele de coninut intestinal au fost fragmentate, suspendate n ap distilat steril i agitate timp de 5 10 minute pentru omogenizare. S-au realizat plecnd de la aceste suspensii omogene diluii zecimale care s permit numrarea coloniilor pe mediile de cultur agarizate. Ca medii de cultur s-au folosit: - geloz cu pH 7 7,2 pentru evidenierea florei aerobe; - geloz suplimentat cu acid tioglicocolic 0,06% (incubare n condiii special create de anaerobioz) pentru evidenierea florei anaerobe; - mediu Istrate Meittert pentru evidenierea Enterobacteriaceelor (E. coli, Proteus, Shigella); - mediu Chapman pentru evidenierea stafilococilor; - mediu Rogoza (MRS) pentru evidenierea florei lactice. n stabilirea protocolul de lucru s-a inut cont de datele de literatur privind alegerea antibioticelor, asocierea lor, doza i calea de administrare, durata administrrii. Aceste date de literatur ne-au condus la alegerea unui cocktail de antibiotice care s cuprind neomicina, ampicilina i agentul chimioterapic metronidazol. S-a urmrit provocarea experimental a unui dezechilibru al florei microbiene intestinale dup cum urmeaz: - perturbarea raportului flor aerob flor anaerob; - diminuarea florei lactice, a stafilococilor; - depresia selectiv a familiei enterobacteriaceelor. 5.2. Analiza cantitativ i calitativ a florei patogene dup tratamentul cu antibiotice i cu produsul probiotic n Tabelul 8 este prezentat analiza cantitativ i calitativ a florei microbiene dup antibioterapie. n urma terapiei intensive cu antibiotice se evideniaz urmtoarele aspecte: - raportul dintre flora aerob flora anaerob este perturbat prin reducerea considerabil a florei anaerobe la animalele tratate, fa de martor, ca urmare n special a aciunii metronidazolului; - depresia selectiv a florei intestinale n sensul diminurii florei lactice cu aproape 2 log. i scderea uoar a numrului de coci Gram pozitivi (stafilococi); - dezechilibru n snul familiei Enterobacteriaceae unde se constat o diminuare numeric cu aproape 1 log., dar mai ales o schimbare a spectrului microbian. La lotul martor, se
23

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

constat o flor microbian dominat de E. coli, iar la lotul supus antibioterapiei se evideniaz o scdere semnificativ a acestei tulpini, cu creterea excesiv a florei de putrefacie dominat de tulpina Proteus. Tabelul 8. Analiza cantitativ i calitativ a florei microbiene dup antibioterapie. Flor microbian Flor aerob Flor anaerob Flor lactic (lactobacili) Coci Gram+ (stafilococi) Enterobacteriaceae
* +++ E. coli, ++ Proteus, **+++ Proteus

Lot martor 3,1107 1107 1,32107 8,3104 1106*

Lot antibioterapie 8106 5105 5105 2,4104 5105**

La loturile 2, 3 i 4 dup 48 ore de la nceperea administrrii antibioticelor s-a constatat scderea apetitului (obiectivat prin diminuarea aportului alimentar) i apariia scaunelor decolorate. De asemenea, s-a constatat o scdere n greutate la aceste loturi n medie cu 2,1% 0,4% n a 5 a zi de antibioterapie, fa de lotul martor alb, la care greutatea corporal a crescut n medie cu 1,8% 0,2% n aceeai perioad. La 24 ore de la instaurarea tratamentului cu probiotic bazat pe biomas de Saccharomyces cerevisiae i respectiv Enterol, s-au observat: redobndirea apetitului, normalizarea scaunelor i o cretere n greutate. Greutatea a crescut n medie cu 0,44 0,17% pe zi la lotul tratat cu probiotic i cu 0,37 0,12% pe zi, la cel tratat cu Enterol. Examenul anatomopatologic, macroscopic a evideniat la lotul 2 cu administrare de antibiotice, o marcat aerocolie, limfangit mezenteric i materii fecale semilichide, decolorate. n cazul loturilor tratate cu probiotic bazat pe biomas de S. cerevisiae i respectiv Enterol, s-a constatat o aerocolie localizat n regiunea ileocecal i o discret limfangit mezenteric, neexistnd diferene semnificative ntre cele dou loturi. n Tabelul 9 este prezentat analiza cantitativ i calitativ a florei microbiene n urma administrrii de probiotice, respectiv probiotic bazat pe biomas de S. cerevisiae i probiotic Enterol, dup antibioterapie. Tabelul 9. Analiza cantitativ i calitativ a florei microbiene dup tratament cu tulpini probiotice. Flor microbian Flor lactic (lactobacili) Coci Gram + Enterobacteriaceae Lot martor 3,8410
7

Lot tratat cu probiotic bazat pe biomas de S. cerevisiae 1,5107 7,4104 3,4106**

Lot tratat cu probiotic Enterol 8106 2,2104 < 1106***

2105 4106*

* +++ E. coli, + Proteus, ** +++ E. coli, + Proteus, *** ++ E. coli, +++ Proteus

La loturile tratate cu probiotice postantibioterapie, se observ o normalizare a florei microbiene, att cantitativ ct i calitativ. La lotul tratat cu probiotic bazat pe biomas de S. cerevisiae analiza cantitativ i calitativ a florei microbiene intestinale, a evideniat urmtoarele aspecte: - recuperarea florei anaerobe la valoarea martorului; - repararea florei lactice; - revenirea la normal, att numeric ct i ca spectru a enterobacteriaceelor;
24

Studii biologice, biotehnologice i farmacologice privind utilizarea unor produse probiotice

La lotul tratat cu probiotic Enterol, se constat o redresare a florei microbiene fr a se atinge valorile normale (ale martorului), dup o perioad de tratament de 4 zile.

6. Concluzii
Probioticele pot fi definite ca microorganisme viabile, care ingerate, au efecte benefice asupra gazdei prin mbuntirea echilibrului bacteriilor la nivelul colonului. Pe piaa farmaceutic, microorganismele probiotice au fost folosite ca un adjuvant terapeutic, n aa numita metod terapeutic aliment medicament. Astfel, ele au fost utilizate pentru mbuntirea strii de sntate a animalelor, prin preparate de genul Ultra Active Yeast, Pretexin sau Bactosan, dar i n terapia uman pentru reechilibrarea florei intestinale dup antibioterapie, prin preparate ca Ultra Levure, Enterol i Bactisubtil.

Bibliografie:
1. M. VAUBELLE, E. TELLER AND M. FOCANT, 1990, Probiotics in animal nutrition, Arch. Anim. Nutr., 40, 543 567. 2. GEDEK B., 1987, Feed Mag. Int., Nov. 21. 3. RAIBAND P., RAYNAUD C., 1989, 6 - me SIMAVIP, Eds., AFMVP., 9 31. 4. CHAN R., G. REID, BRUCE A.W., CESTERTON W., 1984, Applied and Enviromental Microbiol., 48, 1159. 5. LEE A., 1980, Normal flora of intestinal surfaces, in Absorption of Microorganisms to surfaces, John Wiley, New York. 6. ANTOINE, 1989, Proprits physiologique des laits ferments vivants, In Sminairs agro-alimntaires a Louvain-Neuve. 7. BERGONE-BEREZIU, E., 1995, Impact ecologique de lantibiothrapie, La Press Medicale, 24, 145-56. 8. CORBAN C., RICHARD A., BONS B., 1994, Les colites pseudomembranaise associs a lantibiothrapie, Therapie, 49, 325-31. 9. COSTEX F., CARTHIER G. JOUVERT F., ELMER W.G., LUCS F., 1990, Prevention of Clostridium difficile induced experimental pseudomembranous calitis by Saccharomyces boulardii, J. Gen. Microbiol., 1085-9. 10. DUCLUZEAU R., BENSAADA M., 1982, Effect compar de ladministration unique on en continu de Saccharomyces boulardii sur lstablishment de diverses souches de Candida dans le tractus digestif de souris gnotoxniques, Ann. Microbiol. (I. Pasteur), 133B, 491-501.

25

A. Vamanu, O. Popa, Gh. Cmpeanu, I. F. Dumitru, Doina Dobrovolski, S. Cmpeanu, E.Vamanu, Carmen Cmpeanu

11. SURAWICZ C.M., MAC FARLAND W., ELMER G., CHINN M.D., 1989, Treatment of recurrent Clostridium difficile calitis with vancomycin and Saccharomyces boulardii, Am. J. Gastroenterol, 1285-7. 12. BERG R., BERNASCONI P., FOWLER D., GAUTREUX M., 1993, Inhibition of Candida albicans translocation from the gastrointestinal tract of mice by oral administration of Saccharomyces boulardii, J. Infect. Dis., 168, 1314-8.

26