Isolasi Selektif Actinomycetes aerobic

MOUSTAFA A. EL-NAKEEB AND HUBERT A. LECHEVALIER Institute of Microbiology, Rutgers, The State University, New Brunswick, New Jersey Received for publication 3 July 1962

Abstrak EL-NAKEEB, Moustafa A. (Rutgers, The State University, New Brunswick, N.J.) DAN Hubert A. LECHEVALIER. Isolasi selektif actinomycetes aerobik. Appl. Microbiol. 11:75-77. 1963.-Komposisi suatu arginineglycerol- media garam (AGS), cocok untuk selektif isolasi actinomyeetes aerobik, diberikan. ketika tanah sampel dirawat dengan kalsium karbonat dan berlapis pada media AGS, jumlah total dan relatif lebih tinggi pelat dari actinomycetes diperoleh daripada ketika media lain dan metode yang digunakan. Actinomycetes yang berserabut, bercabang bakteri dengan jenis jamur morfologi. Mereka adalah bagian dari mikroba flora substrat alami yang paling. banyak metode telah dianjurkan untuk memfasilitasi isolasi actinomycetes dan untuk memisahkan mereka dari keluarga mereka. Sekarang tidak sulit untuk mengisolasi actinomycetes dari intim campuran dengan jamur, karena sifat fisiologis kedua kelompok mikroorganisme yang berbeda. Untuk Misalnya, antibiotik antijamur ketat, yang tidak mempengaruhi pertumbuhan actinomycetes, dapat digunakan dengan sukses. Hal ini lebih sulit untuk terpisah dari actinomycetes bakteri sejati. Namun demikian, beberapa media selektif memiliki telah diusulkan dan juga berbagai cara untuk meningkatkan Flora actinomycetic dari sampel tanah sebelum plating keluar. Tujuan dari penelitian kami ini adalah untuk membandingkan suatu arginin-gliserol-garam (AGS) media dengan lainnya saat ini media yang digunakan dan untuk membandingkan berbagai metode menganjurkan untuk isolasi selektif actinomycetes.

BAHAN DAN METODE MIedia. AGS memiliki komposisi sebagai berikut (dalam g / liter air suling): monohidroklorida arginin, 1,0; gliserol (sp gr tidak kurang dari 1,249 pada 25 C), 12,50; K2HPO4, 1,0; NaCl, 1,0; MgSO4-7H20, 0.5; Fe2 (S04) 3.6H20, 0,010; CuSO4 * 5H20, 0,001, ZnSO4 * 7H20, 0,001, MnSO4 H20,0,001, dan agar-agar, 15,0 (pH 6,9-7,1). Media berikut juga digunakan: media kitin (Lingappa dan Lockwood, 1961); dimodifikasi Benedict menengah (Porter, Wilhelm, dan Tresner, 1960); kedelai media-makan glukosa (Tsao, Leben, dan Keitt,

1960); Media agar kasa ini (Rehacek, 1959), dan Czapek ini medium agar, telur albumen menengah, glukosa-asparagin menengah, dan gliserol-asparaginate agar II (Waksman, 1961). Tanah . Tiga sampel tanah yang berbeda ( ladang jagung , gudang sapi halaman , dan hutan ) dikumpulkan , dikeringkan , diayak , dan disimpan untuk digunakan . Persiapan suspensi tanah . Tanah kering ( 1 g ) , atau yang setara , diaduk selama 5 menit dengan 100 ml steril air suling dalam Waring Jl3endor ( cawan blender sebelumnya disterilkan ) . Pengenceran supernatant disusun setelah suspensi telah didiamkan selama 30 menit . Inokulasi dan inkubasi . Selama permukaan dipadatkan piring agar-agar , sampel 0,2 - ml pengenceran yang tepat , karena ditunjukkan dalam hasil , tersebar dengan segelas steril batang . Lempeng kemudian diinkubasi pada 28 C selama 10 hari pada yang waktu jumlah diferensial dibuat . Kalsium karbonat perlakuan tanah . Tanah air-dried ( 1 g ) dicampur dalam mortar dengan 1 g kalsium karbonat ( Tsao et al . , 1960) . Campuran diinkubasi selama 10 hari pada suhu 28 C dalam tertutup terbalik steril cawan petri yang kelembaban relatif tinggi dipertahankan oleh watersaturated cakram kertas filter. Metode natrium propionat. Natrium propionat adalah ditambahkan dalam 0,4% (b / v) konsentrasi pada media AGS sebelum sterilisasi (Crook, Carpenter, dan Klens, 1950). Pengobatan fenol. Tanah kering (10 g) diaduk dalam 100 ml steril air suling selama 5 menit seperti yang dijelaskan sebelumnya. Itu suspensi dicampur dengan volume yang sama dari 1,4% (b / v) larutan fenol dalam air suling steril (Lawrence, 1956). Setelah 10 menit supernatan serial diencerka dengan air suling steril untuk memberikan 1:1, 000 pengenceran akhir. Metode sentrifugasi. Tanah-suspensi disentrifugasi selama 20 menit pada gaya sentrifugal dari sekitar 1.600 X g di bagian bawah tabung (Rehacek, 1959). Supernatant kemudian diencerkan seperti biasa dan berlapis keluar. HASIL DAN PEMBAHASAN El-Nakeeb (1961) membandingkan nilai berbagai nutrisi sebagai bahan untuk media yang akan sangat selektif untuk actinomycetes aerobik. Nilai relative berbagai sumber karbon dan nitrogen, dan juga anorganik senyawa, dibandingkan. Kombinasi senyawa dan konsentrasi nutrisi diselidiki. Percobaan dirancang untuk mengizinkan statistic evaluasi data. Media yang berkembang dari penelitian ini adalah media AGS dibahas sebelumnya. nya Komposisi ini mirip dengan modifikasi yang Lindenbein media yang disarankan oleh Benediktus dan rekan kerja (Porte et al., 1960).

Kitin , yang secara luas didistribusikan di kedua hewan dan tanaman kerajaan , telah ditemukan membusuk dan digunakan sebagai satu-satunya Carboni dan sumber nitrogen dengan berbagai mikroorganisme . Beberapa kitin - membusuk bakteri , actinomycetes , dan jamur telah diisolasi dari berbagai tanah ( Veldkamp , 1955 ) . Baru-baru ini , media memiliki kitin telah digunakan oleh Lingappa

dan Lockwood ( 1961 ) untuk isolasi dan budidaya actinomycetes . The AGS media dibandingkan dalam serangkaian percobaan dengan media kitin . Tiga sampel tanah yang digunakan . The AGS media memberikan hasil yang lebih unggul ( Tabel 1 ) , seperti yang ditunjukkan terutama dengan selektivitas yang tinggi untuk actinomycetes . Perlu ditekankan bahwa media selektif untuk isolasi actinomycetes tidak harus menjadi satu di yang pertumbuhan mereka mewah . Hal ini cukup bahwa mereka tumbuh, baik itu meagerly , sedangkan bakteri dan jamur tidak. Sekaran diketahui bahwa actinomycetes dapat bertahan dan tumbuh untuk beberapa sejauh pada jumlah yang sangat kecil nutrisi yang mungkin ditemukan sebagai kotoran dalam beberapa zat nonnutrient seperti agar-agar. Inilah sebabnya mengapa media seperti air dan agar dapat berfungsi sebagai media selektif untuk isolasi actinomycetes . Kita tidak boleh terlalu terkejut kemudian catatan pada Tabel 1 bahwa kitin bukanlah unsur esensial dari " media chitin . " Hampir sama dihitung dari actinomycetes diperoleh baik di hadapan dan tidak adanya dari kitin . [ Setelah selesai tulisan ini , Lingappa dan Lockwood ( 1962 ) juga menunjukkan nilai air agar ] Namun , pertumbuhan koloni individu . actinomycetes lebih baik di hadapan kitin dibandingkan dalam ketiadaan . Dalam kasus AGS menengah , penghapusan dari karbon jelas dan sumber nitrogen ( gliserol dan arginin ) memberikan sekitar 50 % pengurangan G dalam dakwaan actinomycetes . Hal ini mungkin karena perawatan dengan media AGS dikembangkan . Hampir setiap kemungkinan perubahan dalam komposisi diuji dan dianalisis statistik . Mungkin , karena itu, bahwa khusus

kombinasi dan konsentrasi garam dalam media ini beracun untuk beberapa actinomycetes dalam ketiadaan karbon dan sumber nitrogen. The AGS menengah dan tanah ladang jagung digunakan untuk membandingkan nilai berbagai metode dilaporkan sebelumnya untuk membantu dalam isolasi actinomycetes (Tabel 2).

Di tangan kita, pengobatan kalsium karbonat (Tsao et al., 1960) adalah yang paling efektif, karena tidak hanya memberikan total jumlah tertinggi actinomycetes, tetapi juga jumlah relatif terendah bakteri dan jamur.

Tiga sampel tanah , oleh karena itu, menerima kalsium pengobatan karbonat dan kemudian dilapisi keluar pada AGS menengah dan pada tujuh media lain digambarkan sebagai cocok untuk isolasi dan budidaya actinomycetes . Hasil pada Tabel 3 menunjukkan bahwa media adalah AGS lebih menguntungkan untuk selektif actinomycetes dari salah satu dari tujuh media yang digunakan . Orang harus ingat bahwa studi kami adalah kuantitatif di alam . Oleh karena itu pembatasan kemungkinan kalsium Metode pengobatan karbonat , yang mungkin mendukung isolasi berulang dari jenis yang sama actinomycetes . Media AGS , bagaimanapun , mendukung isolasi berbagai jenis actinomycetes . Hal ini dapat dinilai hanya oleh karakter morfologi yang berbeda dari koloni dan pigmen diffusible dan nondiffusible diproduksi pada plating sampel tanah pada media AGS .

Media lain yang diuji tidak memberikan seperti mudah dikenali diferensiasi antara koloni actinomycetes yang dikembangkan pada mereka . Selain itu, media AGS diijinkan pertumbuhan yang memadai dari berbagai jenis actinomycetes dari koleksi budaya kita .