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Hemoglobina Glucosilada y Lipidos

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Describir las bases bioquímicas de los métodos para la determinación de la hemoglobina glucosilada y lípidos.

Aunque de hecho el termino glucosilada está mal empleado y el termino adecuado sería más bien hemoglobina glicada, debido a que la glucosilación es un proceso altamente regulado mientras que la glicación es un proceso espontaneo y aleatorio. (Dr. Luis Fernando López Soto, Unison, 2010) El termino hemoglobina glicada cubre una fracción de hemoglobina modificada por la unión no enzimática de diferentes azucares, los grupos amino de sus cadenas proteica, no es por tanto, una única molécula, sino una familia de moléculas. La determinación de la hemoglobina glicada se ha convertido en un test importante para la evaluación del control metabólico de los pacientes que sufren diabetes mellitus.

Definición de la Hemoglobina Glicosilada
La hemoglobina glicosilada (o glucosilada) es una heteroproteína de la sangre que resulta de la unión de la Hb con carbohidratos libres unidos a cadenas carbonadas con funciones ácidas en el carbono 3 y 4.

cetona más estable mediante una reacción espontánea (no enzimática) conocida como reordenamiento de Amadori. Si bien el 50% aproximado del resultado depende de las concentraciones de glucosa durante las últimas 4-6 semanas. Razones por las que se realiza el examen El médico puede ordenar este examen si uno tiene diabetes. denominada Hba1c por combinación del grupo NH2-terminal de la cadena β de la hemoglobina con glucosa. Los pacientes con diabetes mellitus tienden a tener grandes concentraciones de glucosa y por tanto grandes cantidades de Hba1c. En los pacientes diabéticos pueden seguirse estos cambios de concentraciones de Hba1c para seguir la efectividad del tratamiento de diabetes La Hb1c no se ve alterada por cambios agudos o recientes de las glucemias y depende de la concentración de glucosa del entorno y de la vida media de los glóbulos rojos en el organismo. no influyen en ésta los cambios bruscos en la glucemia. La función aldehído de la glucosa forma primeramente una base de Schiff con el grupo NHterminal el cual se reordena formando un enlace amino.Entiéndase hemoglobina glicosilada como una proteína conjugada de la sangre utilizada comúnmente para el estudio de diabetes mellitus y enfermedades relacionadas con niveles anormales de euglicemia. Formación de la hemoglobina glucosilada En el hematíe se forma espontáneamente una hemoglobina glucosilada. pudiendo elevarse durante la hiperglicemia prolongada hasta constituir un 12% o más de la hemoglobina total. Como la vida media de estos hematíes es aproximadamente de 90-120 días. Se usa para medir el control de la glucemia durante varios meses y puede dar un buen estimativo de qué tan bien se ha manejado la diabetes durante los últimos 2 o 3 meses. conocer como están “marcados” por la glucosa que circula junto con ellos nos indica como ha sido el control metabólico durante ese periodo de tiempo. mayor será el riesgo de desarrollar problemas como: . es decir. cuanto más alto sea el nivel de HbA1c. En general. y también la HbA1c que es más estable. Los niveles de hemoglobina glucosilada suben si se ha tenido niveles altos de glucosa en la sangre. Las concentraciones de Hba1c dependen de la concentración de glucosa en la sangre. Tipos de hemoglobina glicosilada Existe la hemoglobina glicosilada (HbA1).

 Niños normales. Diabetes mellitus mal controlada 3.2 a 4.5 a 5.  Diabéticos bien controlados. Embarazo 4.     Enfermedad ocular Cardiopatía Enfermedad renal Daño neurológico Accidente cerebro vascular Valores normales de hemoglobina glucosilada (Hba1c)  Adultos normales.  Diabéticos con control suficiente.  Diabéticos mal controlados. Personas sin bazo .8 % 1.9 % 6a8% Mayor de 8 % Valoración de resultados anormales Aparecen en pacientes altos niveles de hemoglobina glucosilada si se tiene: 1. Diabetes mellitus 2.8 a 4 % 2. 2.

. Técnicas usadas para medir niveles de hemoglobina glucosilada: Cromatografía de Intercambio iónico Este tipo de cromatografía se basa en los puntos isoeléctricos de los compuestos químicos (moléculas polares e iones). Es por ello que se habla de dos tipos de cromatografías:  Cromatografía de intercambio aniónico: Atraerá aniones a determinados pH. Pérdidas de sangre crónicas. Donde de acuerdo al pH que se trabaje cambiará la polaridad de la molécula y será atraída por resinas cargadas eléctricamente. Anemia hemolítica 2. Enfermedades renales 3. De esta manera se separan moléculas polares.  Cromatografía de intercambio catiónico: Atraerá cationes a determinado pH. eluyendo los aniones. eluyendo los cationes. como son las proteínas y en este caso la hemoglobina también es una.Aparecen en pacientes bajos niveles de hemoglobina glucosilada si se tiene: 1.

de manera reversible y selectiva. retienen a los solutos. A continuación se introduce una nueva fase móvil que desactiva el acoplamiento por alteración reversible de los sitios activos del inhibidor-ligando. del soluto (proteína) o de ambos. modelo típico empleado en esta rama. generalmente se utiliza un cambio de pH que modifica las características de los sitios activos. .Cromatografía de afinidad Cromatografía cuya base está en que la sustancia de naturaleza bioquímica denominadas ligandos de afinidad y enlazados químicamente en soportes sólidos adecuados. Sólo existe interacción específica entre este ligando y un soluto-analito (proteína) de la muestra insertada que queda retenido. Se procede a eluir los demás componentes de la muestra (Esta fase no influye en el acoplamiento). se eluye así el soluto de interés. Las separaciones se basan en el acoplamiento ¨llavecerradura¨. Fundamento: El volumen de la mezcla que se desea separar se introduce en la columna que contiene un soporte polimérico inerte que retienen a la sustancia activa enlazado covalentemente y que se conoce como ligando de afinidad.

la resina esta densamente empaquetada que para superar la resistencia que la columna ofrece al paso de líquido esta debe ser bombeada a alta presión. En la cromatografía en columna cuanto mas pequeñas sean las cuentas de resina y mas empaquetadas se encuentren mejor será la resolución de esta técnica separatista. En esta técnica en particular. . la mezcla de componente. en disolución. que se quiere identificar o separar se pasa a través de una columna densamente empaquetada con pequeñas cuentas de resina insoluble.Cromatografía liquida de Alta Resolución En la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).

Electroforesis Es un método usado por la determinación de hemoglobina glucosilada que se basa en la diferencia de las cargas de las moléculas para su separación. tales como la presencia de hemoglobina deficiente sin embargo. . las variaciones menores en condiciones de pH. fuerza iónica y temperatura en este método muestra un impacto mucho menor en el patrón de migración debido a la corrida electroforética que responde a las diferencias de cargas analizadas. De esta forma la determinación glucosilada es afectada frente a una emigración en conjunto con las fracciones de HbA o HbA1c por poseer una carga similar entre estas dos moléculas. Esta técnica tiene un patrón de interferencias.

dislipidemia o diabetes. Una vez tomada la muestra se procede a la coagulación de la sangre. El colesterol transportado por las HDL es el llamado colesterol bueno. Entre los lípidos que se pueden cuantificar de forma analítica tenemos al colesterol total. etc. Mientras que el colesterol transportado por las LDL no puede ser metabolizado y por lo cual puede sufrir una serie de cambios como oxidaciones. Para el perfil Lipidico el paciente debe estar en ayuno ya que puede ocasionar que los resultados del número de triglicéridos salgan alterados. C-LDL) que son transportados a nivel sanguíneo se pueden obtener a través de análisis estandarizados enzimáticos colorimétricos o también a través de un perfil Lipidico. En las sangre los lípidos son transportados por diversas lipoproteínas diferentes en cuanto su estructura y densidad. triglicéridos (TAG). esta puede ser inducida por un activador como es la trombina. C-HDL. C-HDL. ya que el colesterol que contiene esta lipoproteína es transportado al hígado para su metabolización y excreción por vía Biliar. .Lípidos La determinación de la cuantificación analítica de los lípidos transportados en sangre es importante para la detección y diagnóstico de diversas enfermedades metabólicas. tales como la obesidad. TAG. Estas dos últimas es el colesterol transportado tanto de las HDL. C-LDL. como de las LDL. el examen se realiza a través de la toma de muestra sanguínea. Los diferentes valores de los lípidos (Colesterol total.

haya diversos factores que influyen tanto al aumento como a la disminución de estos valores.  Reactivos precipitantes LDL: Polivinil Sulfato y Polietilenglicol. la cual hidroliza los ésteres de colesterol obteniendo como resultado: colesterol más ácidos grasos libres. C-HDL y C-LDL: Para poder analizar y obtener el numero de C-HDL o de C-LDL como primer procedimiento se separa de forma selectiva la lipoproteína que se quiere precipitar (LDL o HDL) con un agente precipitante. En el cual precipitan las HDL en la solución y permanecen las LDL. No hay que descartar que al momento de los resultados de los análisis o exámenes de lípidos y lipoproteínas en el paciente. (Procedimiento Anterior). El peróxido de hidrogeno es condensado con los cromógenos p-clorofenol y 4-AP que son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja que es igual a la concentración de triglicéridos.Una vez la sangre coagulada esta se precipita a un suero el cual va a ser de ayuda para el análisis de los lípidos a nivel de la sangre. Una vez obtenido el glicerol este es fosforilado por la glicerol quinasa obteniendo glicerol 3P (No hay que olvidarse que para que la glicerol quinasa actué necesita la presencia de ATP) La reacción siguiente es la oxidación del glicerol 3P a dihidroxiacetona (DHAP) por la presencia de una glicerol fosfato oxidasa obteniendo peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrogeno es sustrato de una peroxidasa la cual se condensa j con la 4-amino fenazona formando una quinona roja. En la cual precipitan en la solución las LDL y permanecen las HDL. En los cuales podemos dividir a los pacientes en personas sedentarias o activas. La cual es igual a la concentración de colesterol.  Reactivos precipitantes HDL: Ácido fosfotungstico y magnesio. Triglicéridos: El procedimiento para la obtención de los triglicéridos se realiza a través de las siguientes reacciones en la cual deben estar presentes enzimas y sustratos: Como primer procedimiento debe haber la presencia de una lipasa la cual va a hidrolizar los triglicéridos obteniendo: Glicerol + Ácidos grasos Libres. Una vez obtenido el colesterol este es oxidado a colestenona y peróxido de hidrogeno por acción de la enzima colesterol oxidasa. cada tipo de lípido que se va a obtener necesita mecanismos diferentes para su obtención los cuales son: Colesterol total: El suero es expuesto a una enzima la cual es la colesterol esterasa (CHE). . Una vez precipitada la lipoproteína se cuantifica el colesterol presente en dicha lipoproteína.

por la disminución de la lipasa de las lipoproteínas y el aumento de la lipasa hepática. debido por el catabolismo de las lipoproteínas.Pacientes Sedentarios Durante el sedentarismo a nivel del organismo hay una disminución de la concentración de Colesterol en las HDL (C-HDL). Mientras que una relación TAG/ C-HDL. es decir mayor concentración de TAG está asociada a resistencia a la insulina. como también el aumento de la actividad enzimática de la licitin colesterol aciltransferasa. Un factor que no se de obviar es que las HDL favorecen o intervienen en el transporte reverso del colesterol. Los valores de entre 40 mg/Dl en el hombre y 20 mg/Dl en la mujer de las C-HDL se asocian con síndromes metabólicos y los valores superiores o iguales de C-LDL a 150 mg/dl son indicadores de alto riesgo de enfermedades metabólicas. . Pacientes Activos o Con régimen de ejercicios Los pacientes con un régimen de ejercicios diarios inducen al proceso inverso el aumento de la masa de lipasa de las lipoproteínas (LLP) y la disminución de la lipasa hepática favoreciendo el aumento de la concentración de C-HDL y la formación o catálisis de la HDL Naciente (preß1HDL). estos cambios favorecen tanto a la disminución del colesterol como el aumento de TAG en las HDL y la recaptura de estos por el hepatocito.

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