CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA

DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

PIPETAS

USO Y RECOMENDACIONES

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Definición
Pipeta: Aparato volumétrico para transferir volúmenes de líquidos predeterminados. A diferencia de un dispensador, una pipeta no tiene unión fija (hidráulica) a un recipiente de reserva.

 

Pipeta neumática:
Pipeta en la que hay una capa de aire entre el émbolo y el líquido muestra

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Pipeta Monocanal: Son manuales con regulación de volumen variable o fijas, cubren por lo general el intervalo de 0.1 µl a 5.0 ml

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Pipeta multicanal:
Se utilizan principalmente para trabajar con microplacas volumétricas. Permiten reducir considerablemente las operaciones de pipeteo y aumentar por tanto el rendimiento. Requiere un manejo exactamente igual a las monocanal.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Criterios importantes de calidad de una pipeta:
La precisión, la robustez y el manejo ergonómico.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Puntas:
Son un componente del sistema tan importante como la pipeta, si son de baja calidad o no ajustan bien, la mejor pipeta no podrá dar resultados satisfactorios

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Puntas:
La hermeticidad, la forma de la punta, el centrado y lisura del orificio de la punta, así como las propiedades superficiales: humectabilidad y rugosidad superficial influyen y afectan el comportamiento de salida Las puntas de alta calidad deben estar libres de metales pesados , ser incoloras y de polipropileno Deben ser hidrofóbicas, para garantizar mejores resultados.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Puntas con filtro:
Los filtros incorporados protegen pipetas y muestras contra la contaminación por aerosoles. Se recomiendan para trabajar con material infeccioso, radiactivo o si hay necesidad de condiciones estériles.Cuando se requiere de pureza biológica, lo cual implica que las puntas estén exentas de ATP, DNA, pirógenos y ARNasa.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Almacenamiento de pipetas:
La colocación en cajones o en superficies de trabajo entraña el peligro de rayado del cono (vástago) y por tanto, de pérdida de hermeticidad de la punta. Por lo tanto deben tener un soporte adecuado.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Ajuste:
Regulación de la pipeta para que los valores real y teórico coincidan.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Ajuste:
Las manipulaciones para ajustar una pipeta varían notablemente de un fabricante a otro. El procedimiento suele estar explicado con detalle en la documentación del procedimiento. Se debe elegir una pipeta tomando en cuenta la sencillez y seguridad práctica de su ajuste.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Normatividad: Las normas ISO 9000, GLP yGLM, (Sistema de Gestión de la Calidad),exigen la comprobación periódica de los aparatos de medida volumétricos.

Recomendaciones de Calibración:
Se debe realizar cada 3 a 12 meses. La periodicidad puede adaptarse a las exigencias individuales. En caso de una frecuencia elevada o medios agresivos se debe calibrar con más frecuencia. Con una frecuencia de uso diario, se recomienda calibrar cada 3 meses
(Ref. Catálogo-

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Periodicidad de la Calibración:
Periodicidad Diario Tipo de ensayo De funcionamiento Procedimiento Hermeticidad Control visual Funcionalidad

Cada 3 meses

DIN 12650

Limpieza Funcionalidad Control gravimétrico Archivo de resultados

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Prueba de hermeticidad:
Tomar el volumen nominal máximo (agua destilada), y poner la pipeta en un soporte sin vibraciones. Durante 1 minuto no se deben formar gotas claras en la punta.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Control visual periódico:
Se debe observar durante el uso diario si hay rayas o daños en el cono de trabajo, o uniones flojas. Si aparece alguno de éstos efectos o se fuerza mucho la pipeta mecánicamente, procede efectuar una prueba de gravimetría (calibración-verificación)

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Calibracíon (Comprobación gravimétrica):
Por calibración de pipetas se entiende la comparación de volumen real y volumen teórico. El volumen real se determina generalmente por vía gravimétrica. Esta se debe realizar periódicamente y siempre después de cada limpieza o sustitución de componentes.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Definiciones
Valor real Valor medio para el volumen que se determina gravimétricamente para un número dado de pipeteos repetidos Valor teórico Volumen regulado en el indicador digital de la pipeta

 

 

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD
 

Calibración Determinación del valor real Exactitud (inglés:inaccuracy) Desviación cuantitativa del valor real frente al teórico Precisión (inglés:imprecisión) Desviación típica en % del valor real. También llamada desviación típica relativa (DTR), o coeficiente de variación (CV)

 

 

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Pipeteo
Existen dos tipos: Normal e Inverso Pipeteo normal: 1) Colocar la punta, regular el volumen. Presionar pulsador con el dedo pulgar hasta el primer tope. Sumergir la punta verticalmente en la muestra unos 2 ó 3mm 2) Dejar deslizar el pulsador de pipeteo continuamente hasta arriba, observando el llenado. No deben producirse turbulencias en la punta ya que hay peligro de formar aerosoles. Sacar despacio la punta del líquido

 

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

3) Para descargar el volumen mantener ligeramente inclinada la punta (10°-45°) en la pared del recipiente. Apoyar el pulgar y accionar el pulsador de pipeteo uniformemente hasta el primer tope. Esperar 1 segundo. Presionar luego ininterrumpidamente hasta el segundo tope para quitar el aire con el recorrido adicional

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Pipeteo inverso:
En el pipeteo inverso se utiliza el recorrido adicional para aspirar más volumen de líquido. Esta técnica mejora los resultados con líquidos viscosos, muy volátiles o muy humectantes 1) A diferencia de la operación normal se oprime el pulsador de pipeteo hasta el segundo tope, manteniendo la pipeta vertical.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

2) Durante la aspiración se succiona un volumen mayor que el regulado 3) Para el vertido, sólo se oprime hasta el primer tope y luego se toca la pared del recipiente con la punta. Se desecha el resto de líquido que queda en la punta.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD


Humectación de puntas:
Solo en volúmenes menores de 10 µl, o en casos que las exigencias de exactitud sean muy altas. Para tal fin, primero se toma y se devuelve el volúmen teórico 1 o 2 veces con la misma punta.Este procedimiento es indispensable en muestras difíciles (alta presión de vapor, alta viscosidad, repelencia al agua).

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Nota importante:
Normalmente en las pipetas para volumen inferior a 10 µl ya se tiene considerado a la hora del diseño y del ajuste, la película de líquido remanente, por lo cual no se debe hacer la humectación previa ni cambiar la punta entre muestra y muestra.

Temperatura de trabajo:
Temperatura ambiente de 20 a 25°C No debe variar más de ± 0.5°C Termómetro con resolución de 0.1°C

  

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Posición adecuada para el pipeteo de muestras: Siempre en posición vertical, la profundidad de inmersión recomendable, dependiendo del volumen a pipetear es la siguiente:
Volumen 1-100µl 100-1000 µl 1000-50000µl Profundidad de inmersión 2-3 mm 2-4mm 2-5mm

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Sensibilidad de la balanza :
Vol. Ensayado µl 1 10 100 1000 Sensibilidad mg 0.001 0.01 0.1 0.1 Desviación típica-mg 0.002 0.02 0.1 0.2

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Importante: Con exactitud baja se se requiere un ajuste Con precisión baja se requiere mantenimiento o reparación

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

 

Limpieza de la pipeta
Externa Se debe realizar con alcohol etílico al 70% Interna Las que se puedan autocalvear, será por un tiempo de 20 min a 121°C Se deben calibrar después de este procedimiento, al igual que si se desmontan

 

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Acerca del usuario:
Además de la calibración de la pipeta y la punta tienen importancia decisiva los conocimientos y la destreza del usuario.

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

Ejercicio de pipeteo:

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD

CENTRO NACIONAL DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACION, DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD