You are on page 1of 23

INSTRUMENTASI NB 1053/NE2153

IMMUNOKIMIA 1
Program Sains Bioperubatan Pusat Pengajian Sains Diagnostik dan Kesihatan Gunaan Fakulti Sains Kesihatan UKM

Dr Asmah Hamid

IMMUNOKIMIA
mgunakan tindak bls Ag-Ab (antigenantibodi utk mgesan, mcirikan mgetahui kuantiti sst komponen dlm darah @ cecair tubuh.

Antibodi
- protein yg bgabung secara spesifik kpd
antigen immunoglobulin,(Ig) cth:IgA, IgD, IgE, IgG & IgM
i.

bgabung dgn bhn asing/pmukaan bakteria mudahkan proses fagositosis ii. maktifkan komplemen - lisis sel bakteria iii. mneutralkan toksin yg dihasil oleh bakteria iv. myaluti partikel virus tak infektif

tindakannya adalah:

Antibodi

Antigen
- juga dikenali sbg imunogen bhn yg maruh g/bls imun - faktor yg mpengaruhi antigenisiti (keantigenan) i. Ciri kimia blh tdiri samada drp protein, CHO, glikolipid, asid nukleik & polinukleotida. ii. Saiz semakin BM, > imunogen BM > 100,000 dalton paling poten BM < 10,000 dalton - lemah

Antigen
iii. Hapten antigen yg tak lengkap (incomplete) tak blh mransang g/bls imun ttpi blh btindak dgn Ab kompaun dgn BM rendah cth, monosakarida lipid, peptid, hormon. iv. Kompleksiti sst molekul perlu darjah kompleksiti kimia ttu utk menjadi antigenik kompleksiti imunogenisiti

Antigen
v. Penentu antigenik (antigenic determinant) - bahagian Ag yg btkb dgn Abpenentu antigenik @ epitop - sst Ag blh mpy > dr 1 jenis epitop (bgtg kpd saiz & kompleksiti) - tindakan molekul Ab pd epitop adalah secara `lock & key vi. Konformasi dan accessibility - struktur tertier @ lipatan sst molekul m imunogenisiti

Antigen
-`accessibility mnentukan immunogenisiti cth: bhg molekul polisakarida yg tjulur drp bhg utama > imunopoten - bhg bcas @ residu hidrofilik > tdedah bbanding residu hidrofobik (bkait kterlarutan Ag dlm medium bair) vii. Keasingan(foreignness)

viii. Faktor genetik -keupayaan kenalpasti Ag & kekuatan g/bls imun dikawal ketat secara genetik

Antigen- Antibodi
- sampel pesakit mengandungi Ag(analit), Ab ditambah sbg reagen utk mgesan & mukur Ag - dlm kes pyakit jangkitan, penentuan serologi & ujian ab autoimunsampel pesakit adalah Ab pukuran aras Ab penting dr segi klinikal dgn mgunakan komposisi Ag yg diketahui

Antibodi sbg reagen


- dihasilkan drp binatang spt arnab @ kambing - Ab yg thasil poliklonal Ab (Ab yg mpy bbp penentu Ab)

Ab monoklonal

- thasil drp phibridan sel phasil Ab tunggal dgn sel selanjar immortal - mempunyai struktur 1 tunggal yg homogenus - mjd reagen yg diketahui spesifisiti & afinitinya - digunakan dlm: Asai pnambatan kompetitif Asai tisu utk Ag spesifik

Antigen

31 2 4

Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58

1
BA LB / c

2 B cell

3 4 1 2 3 4

m m

m
m

Spleen cells
+ Myeloma

Immunization
1 2 3 4

Cell fusion
4

x
31 2 4

Antiserum
A mixture of all Ab

Monoclonal antibodies
Pure single Ab

Monoclonal Antibody
After immunization, the mouse spleen contains B cells producing

specific antibodies.
If a single B cell was picked up and cultured, then it will produce only

one kind of antibody. But B cell can not survive well in the culture.
Each B cell produces only one kind of antibody, which binds to its

specific antigen.
Conventional antiserum is the mixture of all antibodies produced by B

cells from spleen.


If B cell is fused with myeloma, the fused cell might be cultured and

produce antibody.
Myeloma cell can be cultured in the test tube, but can not produce

useful antibody.
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called

monoclonal antibody.

Antibodi sbg reagen


-pemilihan Ab sbg reagen perlukan maklumat: a. Titer Ab (strength) - pcairan maksimum Ab yg mberikan tk bls yg blh dikesan utk sst kaedah yg spesifik cth: pcairan max : 1/6400, titer Ab: 6400 b. Afiniti -reagen Ab perlu mpy afiniti yg bg mmastikan gabungan yg kuat dgn Ag -Ab tak menambat kuat blh dipengaruhi suhu, pH & kekuatan ionikPuraian kompleks Ag-Ab

Antibodi sbg reagen


c. Spesifisiti -mrujuk kpd keupayaan Ab utk mhadkan tindakannya pd kump molekul ttu -ptg dalm imunoasai enzim(ELISA) & radioimunoasai (RIA) disbbkan reagen Ab adalah protein, maka: perlu bhati-hati spy tak blk denaturasi & degradasi cth: simpan pd suhu 4C @ -20C

Ag sebagai analit
- Ag spt protein, glikoprotein @ lipoprotein blh dikesan dgn mudah dlm cecair tubuh sekiranya mgunakan Ab reagen spesifik molekul kecil juga blh ditentukan (ukur) spt dadah

- cecair biologi yg biasa digunakan utk di analisis: serum, urin, cecair serebrospina
-Ag yg tdpt dlm cecair biologi akan malami degradasi bgtg kpd: i. Ciri ag ii. Kepekatan iii. Kerentanan (susceptibility)thdp pbagai enzim dlm cecair tubuh iv. kestabilan

Antibodi sbg reagen


- spesimen perlu disimpan & dijaga dgn baik supaya molekulnya tak berubah & blh btkb dgn Ab reagen -reaktiviti Ab dgn Ag dibandingkan dgn reaktiviti piawai - pbekal Ag rujukan/piawai WHO (piawai 1) CDC (piawai 2)

Teknik-teknik Imunokimia
1. Imunodifusi 2. Imunoelektroforesis 3. Imunofiksasi 4. Laurell (Rocket) IEF 5. Asai Aglutinasi 6. ELISA/RIA 7. Imunofluorometrik/ Kemiluminesen (Chemiluminescence)

1. Imunodifusi (Ouchterlony)
-bg mnentukan kehadiran Ag@Ab -Prinsip : libatkan pbtkan mendakan (precipitate) kompleks Ag-Ab dlm matriks gel (agar @ agaros)

-terbhgi kpd 2 jenis: i. Imunodifusi berganda (double immunodifusion) -Ag & Ab akan mresap ke arah satu sama lain -jarak difusi ditentukan oleh: # kepekatan Ag/Ab # bkadar sonsang dgn saiz molekul

1. Imunodifusi (Ouchterlony)
-ii. Imunodifusi radial (Teknik Mancini) -reaksi pmendakan blk a/b larutan antigen dimasukkan pd gel yg telah dicampur larutan Ab monospesifik -diameter gegelang bkadar terus dgn [Ag] -Sampel perlu mpy kepekatan yg sesuai - serum/plasma : perlu pencairan urin & CSF : perlu dipekatkan tak blh mpy kdg garam dan pH

1. Imunodifusi (Ouchterlony)
-limitasi : kepekatan Ag> 45g/ml molekul besar tak mudah tserap